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CARBOHIDRATOS
Curso : Biotecnologa
METABOLISMO DE LOS
CARBOHIDRATOS:
3.1Introduccin.
111
3.2La
gluclisis
.111
3.3Pentosa
fosfato
va.
116
3.4El
ciclo
del
cido
ctrico
121
3.5Electrn
transporteylafosforilacinoxidativa
126
Referencias
y
lecturas
adicionales.140
3.1 INTRODUCCION
En este captulo se refiere a la utilizacin de monosacridos como
reservas de energa en las plantas. Aunque una gran pltora de
sustratos tales como protenas y lpidos pueden ser oxidado en las
plantas, la respiracin tiende a ser dominado por oxidacin de
hidratos de carbono a travs de la va glucoltica y el cido
tricarboxlico Ciclo (TCA). Hidratos de carbono se convierte en
piruvato y malato por dos vas principales, glicolisis y la pentosa
fosfato oxidativo va. Las funciones principales de la pentosa fosfato
va, por ejemplo, para generar NADH para utilizar en reacciones
biosintticas y para proporcionar ribosa 5-fosfato para la sntesis de
nucletidos y erythrose- 4-fosfato para la sntesis de cido shikmico
Se discuten derivados. Tambin nos referimos a la regulacin de la va
pentosa fosfato y interconversiones entre la va glucoltica. Los lpidos
se establecen reservas de almacenamiento en las plantas. Durante la
germinacin, los lpidos se convierte en azcar cido graso / 3oxidacin,
el
ciclo
del
glioxilato
y
gluconeognesis.
La
gluconeognesis y su regulacin se discuten en este captulo. En
condiciones aerobias, el piruvato se oxida an ms al CO2 por el ciclo
de generacin de TCA equivalentes NADH / FADH2. Su regulacin y se
discuten los papeles fisiolgicos. Tanto NADH y FADH2 se oxidan por
O2 en el mitocondrial cadena de transporte de electrones que est
acoplado a Fosforilacin del ADP. La configuracin estructural de la
3.2.1 LA VA
El material de partida para la gluclisis es la glucosa-6- fosfato, que
est disponible en la fosforilacin de glucosa, catalizada por una
hexoquinasa.Esta reaccin requiere una molcula de ATP y el catin
de metal divalente Mg ^ "^, que forma un complejo con ATP antes de
que participa en la reaccin. La fosforilacin de la glucosa en la
posicin 6 es esencialmente irreversible, y el cambio en el estndar
de energa libre AG es
- 1 6. 7 k J m o l -1 .La glucosa-6-fosfato
tambin est disponible para el planta de la isomrica de glucosa-1fosfato,que se produce ya sea por la hidrlisis de sacarosa (Captulo
4) o como uno de los productos de desglose de almidn. La
interconversin de glucosa 1-fosfato a la 6-fosfato es catalizada por
3.3.2 EL CAMINO
Hay dossecuencias de reaccinprimaria enesteva(Fig.3.3), una
faseoxidativa(fase1) a partir de glucosa-6-fosfato aribulosa-5-fosfato y
una faseno oxidativa(fase2) deribulose-5-fosfato a un fosfatode
hexosayunatriosafosfato.
El primer pasoes la oxidacin deglucosa-6-fosfatode(5-glucono-l, 5lactona-6-fosfato
yes catalizadapor la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa conla
reduccin
simultnea
deNADP+.
Esta
reaccinconAG':0.42kjmol~^Eslibrementereversible.la enzima
Figura 3.3.Lava
hexoquinasa,(2)
isoformanoreaccionan
de
forma
cruzadacon
su
respectivaisoformas.Hidrlisisnoenzimtica
degluconolactone-6fosfato puede ocurrir espontneamente. Sin embargo,formacin
degluconato-6-fosfato
tomacolocaren
elsiguiente
paso.
Estasegundaetapa est catalizadaporlactonasagluconato-6-fosfato, el
cual requiereMg^ "^ y la reaccinesirreversible(AG ': -.
209kJmorMrendimientogluconato-6-fosfato (Esquema13). El siguiente
pasode
esta
vaes
lairreversible
descarboxilacinoxidativa degluconato-6-fosfato aribulosa-5-fosfato
de liberacin deCO2w ^ITHla reduccinconcomitante deNADP"^yes
catalizadaporgluconato-6-fosfato deshidrogenasa.
Las
siguientes
fosfato-3-epimerasa.
La ribosafosfato isomerasaha sido purificada a partir de brotesde
alfalfay los cloroplastosde las hojasde espinaca y pareceexistir
comodmeros, trmeroso tetrmeros con pesosmoleculares en el
intervalo 40 a 228kDay un valor de0,5-5,0mM durante ribosa-5fosfato.
Las
clulas
vegetalescontienen
tpicamente
citoslicayisoformasplastidic. Slolimitado cantidad de datosest
disponible parala ribulosa-5- epimerasafosfato.
La siguiente secuencia de reacciones est catalizada por
unatranscetolasa y una transaldolasa. La transcetolasatransfiere una
unidad
de
dos
carbonos
a
partir
de
una
sustrato cetosa a un aldehdo mientras transaldo-lase transfiere una
glyceraldehyde- de tres carbonosUnidad 3-fosfato. Las reacciones
enzimticas que forman oromper los enlaces carbono-carbono, tales
como los presentesen transaldolasa y transcetolasa reacciones por lo
estabilidad
de
acetato,
que
en
la forma del ster coenzima A es el de partidamaterial. Se trata como
el primer paso, la vinculacinde acetato de (C2) a oxalacetato (C4)
para
dar
elQ
citrato
cido
tricarboxlico.
Dos
enzymecatalyzedreordenamientos luego se llevan a cabo a
producir a su vez de dos cidos a-ceto, oxalosuccinatey acetoglutarato (G5), ambos de los cuales sondescarboxila fcilmente a
su vez, con la prdida deCO2. El producto, un cido C4, succinato,
entoncesse
somete
a
regeneracin
en
tres
pasos
(deshidrogenacin,hidratacin
y
deshidrogenacin)
aproducir
oxaloacetato para completar el ciclo. Comoel ciclo de gira, la energa
se libera en forma deNADH, FADH2 y ATP.
Antes de discutir la enzimologa del ciclo enms detalle, es necesario
mencionar la reaccinque comprende la oxidacin de piruvato a
acetilcoenzima A, ya que esto proporciona un enlace directoentre la
gluclisis y el ciclo del cido ctrico. Esto esunproceso de tres pasos
complejo, que implica dos portadorasmolculas, pirofosfato de
tiamina
(TPP)
y
lipoico,
que
tambin
est
presente
comoladihidroderivado, dihydroUpoate(DHL). Por lo tanto,la oxidacin
depiruvatoa
acetilcoenzima
Aes
catalizada porun complejo
enzimtico,
piruvato
deshidrogenasa,
y
ocurrecomo
demostracin^nenEsquema19:
Figura3.4El
cidoctrico
ciclo.Lasenzimas
(nmeros
en
crculos)se
muestran
en
laFig.
3.5.
Los
sitios
deNADHy
LiberacinFADH2se muestran
con
flechas.
energa
es9.4kJmol~^Esto entonceses comoacetilcoenzima Ase suministra
alciclo del cido ctricoa travs dela gluclisis. Sin embargo,acetil
coenzimaA
es
tambin disponiblea la clulacomo el producto dela/Espiral3oxidacin, es decir, ladegradacin oxidativade los cidos grasos. La
fuentede
la
acetilcoenzimaA
para
el ciclo del cidoctricoentoncesvariar de vez entiempodentro de la
planta,
dependiendo
de
lo
metablicaprocesosestn
en
funcionamientoen cualquier momento.
3.4.2 LASENZIMAS DEL CICLO
Los ocho enzimas del ciclo del cido ctrico, y el reacciones que catalizan, se muestran
irrFig. 3.5. laprimera enzima, la citrato sintasa, controla la condensacin
del precursor, acetil coenzima A, conoxaloacetato; al mismo tiempo el ster coenzima
Agrupo se hidroliza y coenzima A se libera enla mdium. Esta reaccin tiene una gran
negativocambio en la energa libre estndar (Fig. 3.5) de manera que laformacin de
citrato es esencialmente irreversible.Citrato sintasa no es completamente sustrato
especfica y aceptar monofluoroacetato^ CHiFCO, como la coenzima A ster, en lugar
de acetil coenzima A. Fluoroacetato es una forma naturalse producen toxina, presentar
en particular en la planta
los
seres humanos es de 2-5 mg por kg de peso corporal.
Fluorocitratoproducida
a
partir
de
la
reaccin
de
fluoroacetilocoenzima A y oxaloacetato no en s es txico,pero es un
potente inhibidor de la enzima de la siguienteel ciclo, aconitasa. Por lo
tanto, los efectos fatales defluoroacetato en humanos o animales de
granja que ingiereneste material se deben a la inhibicin del cicloen
el paso de la aconitasa. La plantadebe proteger su ciclo TCA del
fluoroacetatoque produce, por compartimentacin.El siguiente
enzima, aconitasa, reorganiza citratoa isocitrato, a travs de una
deshidratacin a ds-aconitato,y una hidratacin posterior de este
transitoriaintermedio
a
isocitrato.
La
aconitasa
es
una
estereoespecficaenzima, que cataliza la eliminacin dew ^ ater para
dar un ds-cido y la adicin deagua para dar? / 7r ^ o-Ds-isocitrato.
El siguiente enzima del ciclo, isocitratodeshidrogenasa, cataliza la
descarboxilacin oxidativade isocitrato a un-cetoglutarato (o 2oxoglutarato) utilizando NAD "^ como oxidante. La reaccinexige que
los iones metlicos Mg ^ "^ o Mn ^" ^ ysuministra energa a la
3.4.3 REGULACIN
Se ha sugeridoqueel ciclo del cidoctrico enplantasest regulada
porel
volumen
de
negociosde
la
enzima,
portransportemetabolitodesde
dentro
ydesde
fuera
la membrana mitocondrial, porADP: relaciones deATPopor el
pH(Wiskitch,
1980).
Hasta
qu
puntoestos
diferentesfactoresestninvolucradosanno estdel todo claro. Sin
embargo,se sabe quemuchas de las enzimasdeel cicloest
reguladopor variosmetabolitos, comose indica en laFig. 3.6.
Puntosobviosde
la
regulacin
sonel suministro deacetil coenzima Aa partir deladescarboxilacin
delpiruvato,y la inhibicin delaenzimapiruvatodeshidrogenasaporsu
extremoproductos,acetilcoenzimaA
yNADH.Variosenzimasse
ven
fuertemente afectadospor los niveles deAMP, ADP oATP presente, por
ejemplo,citrato sintasaya-cetoglutarato deshidrogenasa.Por lo tanto,
estas
enzimas(Fig.3.6) pueden ser especialmenteimportanteen el control delflujo
de carbonoa travs del ciclo. Tambin se puedesealar quealgunos de los
intermediosen el cicloson capacesdela inhibicin deciertas enzimas, por
ejemplo,oxaloacetatoinhibe
lasuccinatodeshidrogenasa.Finalmente,
esevidenteque
el
citratoejerceindirectamenteunregulador
efecto sobrela gluclisis(seccin 3.2) y por tanto lacantidad depiruvatoque
se
suministra
alciclo.Muchomstrabajo,
sin
embargo,
todava
senecesitabadeterminar con precisin cmoesta funcinmetablicaclavede
la
degradacin
delos
hidratos
de
carbonose
controla
de
plantas.
3.4.4.FUNCIONES
de
membrana.
Los
protones fluyen nuevamente dentro de la matriz a lo largo de
variosvas, pero sobre todo a travs de la ATPsynthesizingcomplejo
incrustado
en
la
membrana
durante la sntesis de ATP. La caracterstica central de esteproceso de
la fosforilacin oxidativa es lageneracin de gradiente de protones y
su
acompaamiento
potencial de membrana.
3.5.1 TRANSPORTE DE ELECTRONES
La secuencia de eventosque medianel flujo deelectrones deNADH
oFADH2alO2va
citocromo oxidasa(la va de cianuroy minsculas)parece ser
similarenambosanimales
ymitocondriasde
plantas.Algunas
diferenciasimportantesentre
las
mitocondriasde
animales
y
plantashansidoobservadas
ystosse
discutenenmayor
profundidadms adelante en estecaptulo.Ahora essuficiente parael
estadosimplemente queestas diferencias sonla presencia enplantas
de(1)
la
oxidacinrespiratoria-enlazada
de
NADHexterna,(2)
uncianuroyantimicinaAinsensitivealternativavade
transporte
de
electrones,
(3)
unasegundadeshidrogenasaNADPHque
oxidaexternaNADPHproducidoprincipalmente
de
laoxidativova
pentosa
fosfatoy(4)
unaoxidacin-rotenona
insensiblede
NADHinterna(distinto
delcomplejo
I).
Los principales componentes dela cadena respiratoriaestn
dispuestosen unidadesmulti-protena como se muestra enFig./, Se
hace
referenciade
otro
modo
comolaNADHcomplejodeshidrogenasaoNADH-ubiquinona
(UQ)
oxidorreductasa;
se
hace
referenciade
otro
modo
comosuccinatoreductasaocomplejosuccinatodeshidrogenasa-UQ;///,
Se
hace
referenciade
otro
modo
comoelcitocromo
complejo oUQH2-citocromo reductasa; ZV, referido de otro modo
comoelcitocromo
complejooxidasa.
Los complejos anteriormente mencionados son hidrfobosen
naturaleza. Sin embargo, el componente de citocromoentre el
complejo III y IV es una soluble en agua-protena perifrica en el
exterior de la mitocondrialmembrana.El primer complejo de la cadena
respiratoria (Fig. 3.8) es la NADH deshidrogenasa interno que es
responsable de la oxidacin de NADH yreduccin de ubiquinona
(tambin conocido como coenzimaQ, la CoQ, UQ). NADH puede
derivarse defuentes tales como ciclo de TCA, la oxidacin de
piruvatopor piruvato deshidrogenasa u oxidacin de glicina
representacinesquemtica
dela
distribucin
de
participan
enoxidacin
de
succinato
en
presencia
de
artificialaceptores de electrones. Los electrones se transfieren
desdeFADH2 a travs de SI, S2 y S3 a la ubiquinona.Succinato + UQ
fumarato + UQH2Complejo II est estrechamente regulada y existe
como unaforma inactiva se estabiliz en una estequiometra 1: 1
porunin con oxaloacetato. La incubacin con cualquieraATP o
ubiquinol activa la enzima. Cuanto ms grandesubcomplex contiene
el sitio de unin inhibidor(Se une oxaloacetato) y el sitio activo
cataltico(Para la deshidrogenacin reversible de succinato).La
transferencia de electrones de ubiquinol acitocromo ocurre a travs
de la cual el complejo IIIcomplejo o ubiquinolcytochrome tambin se
denominaoxidorreductasa. Este complejo puedeser comparado con el
plastoquinol-plastocianinaoxidorreductasa, o cyt complejo de
tilacoides(Vase el captulo 2). Complejo III contiene trespolipptidos
con los grupos redox: cyt ^ i,y una protena de hierro-azufre conocido
como el Rieskeprotena. Esta protena tiene un clster 2Fe-2S
adjuntoal polipptido a travs de la quelacin de uno a dos
Fecistenas y el otro Fe a dos histidina
cobreasociados
acitocromo
oxidasaen
el
complejoIV;
Fe2S2=Rieskecentro deprotenashierro-azufre; UQ=ubiquinona. DeAnderson
&Beardall(1991), con el permiso.
3.5.2 OXIDACINDEENDGENO
La membrana mitocondrial interna planta tiene una NADH
deshidrogenasa externa que est separado de la deshidrogenasa del
complejo I o interna NADH deshidrogenasa. A diferencia de los
mamferos mitocondrias, la oxidacin de NADH endgeno por NADH
deshidrogenasas internos en las plantas es solamente parcialmente
inhibido
por
la
rotenona.
Esto
es
porque hay dos NADH deshidrogenasas separadas en la superficie
interna de la mitocondrial interna membrana y slo uno de estos (Del
complejo I) es sensible a la rotenona. La enzima-rotenona insensible
es distinta de complejo I y tiene una X ^ de 80 / iM para NADH como
comparado con el 8 / IM para la rotenona y minsculas enzima. El
inhibidor de la enzima sensible se refiere como el "primer sitio de
acoplamiento
'porque
el
reversible
flujo de electrones de NADH a ubiquinona es acoplado a la generacin
de
H
"^
electroqumica
gradiente (y el potencial de membrana que acompaa a) travs de la
membrana mitocondrial interna. Ella se ha sugerido que la rotenona-
insensible
actividad simplemente representa una segunda reduccin UQ sitio
para el complejo I y no una deshidrogenasa adicional. Esta nocin
tiene
soporte
experimental
y un modelo del complejo I se present en que hay un sitio de unin a
NADH-y
dos
sitios para la reduccin de UQ, slo uno de los cuales es insensibles a
la rotenona. La existencia de una intermedio comn sugerir que su
nivel de reduccin puede influir en el sitio de unin a NADH.
Un kilometro alto para NADH de la rotenona y minsculas
enzima puede ser debido a las restricciones de acceso (oimpedimento
estrico) de UC a un rotenona y minsculassitio. Estos aspectos
siguen
siendo
discutible.
La enzima-rotenona insensible no est involucradoen la translocacin
de protones de la matriz en elIM espacio interior, por lo tanto, no se
acopla
a
la
cambio
en
H
"^
gradiente
electroqumico
y
asociados
potencial
de
membrana.
Esta
enzima
puede
ser
involucrado con la va de electrones cianuro resistente.Se ha sugerido
que la rotenoneinsensitiveasistencias deshidrogenasa del volumen de
negocios delos intermediarios del ciclo del cido ctrico con alto
citoslicaCociente ATP / ADP. Esta va est regulada por
laconcentracin de NADH real (alta en elmatriz mitocondrial y no la
proporcin de NADH /NAD "^. A diferencia de la NADH
deshidrogenasa externo,esta enzima no se ve afectada por EGTA o Ca
^ "^.La importancia fisiolgica de esta enzima espoco comprendido.
Sin embargo, es posible que enel caso de la inhibicin del complejo I,
que lo hardetener la translocacin de protones, la enzima se
asegurarcontinuacin
de
la
transferencia
de
electrones.
La posibilidad de la presencia de otra NADPdependentenzimas se ha
sugerido
en
el
matriz
de
mitocondrial,
por
ejemplo,
glutatin
reductasa, isocitrato deshidrogenasa y malatodeshidrogenasa. Esto
pone de relieve una ms importantepapel de NADP (H) en
mitocondrial
respiracin
de
las
plantas
que se haba previsto anteriormente.
3.5.4 OXIDACINDEEXGENO NAD (P) H
Las mitocondriasde las plantas superiores, en contraste conlas
mitocondrias de mamferos, catalizan una oxidacin rpida H exgeno
de
NAD
(P)
en
ausencia
de
aadido NADH citocromo externa se oxida por una deshidrogenasa
NADH
externo
ubicado
en
la superficie exterior de la mitocondrial interna membrana y dona
electrones
directamente
a
complejo de 111 + ubiquinona (sin pasar por el complejo I y el primer
sitio de H "^ translocacin). Este va se inhibe por la antimicina A, es
insensible
Los eventosde
laoxidacin
de
unubiquinolenel ladoPde la
membranamitocondrial internaen
condicionesde
uninen
la
queelsitio
dequinonaen
elladoNesinicialmenteya
seavacanteu
ocupada
poruna
molcula
deubiquinona, (b) los eventos de transferencia de electronesque
siguen eloxidacin de unsegundoubiquinolen el ladoPde la
membranacuando elQnest ocupado por unradicalubisemiquinona.
Tenga en cuenta queel sitioQntambinse ha denominadoel
sitioQioQc(c
indica
ellado
citoplsmicode
la
membranaencomplejoscitocromobacterianas) en diversos sistemas
yel
sitioQpes
tambin
conocido
comoelQooQ^sitio.Lossitiosinhibitorios
de
laaccin
demyxothiazolyantimicinatambin
se
muestranpor
las
flechasonduladas.DesdeNichollsyFergusson(1992),
con
permiso,esquema
delcicloQ(c)
Unsimplifica.Sitiosinhibidorasde
accin:1, antimicina; 2, myxothiazol; 3, 5- - undecilo-6-hidroxi-4,7diobenzothiazol (UHDBT).
C)
se
utiliza
para
convertir
ApH en voltios, las unidades de los otros dos trminos. Cambio de
energa libre (AG ') puede estar relacionado con gradiente
electroqumico:
AG 7F = wA / iH + donde es la constante de Faraday, n es el nmero deprotones
bombeados por sitio de fosforilacin yes el gradiente electroqumico de protones. Lala
bomba de protones, ATP sintasa, que se encuentra en el interiormembrana de las
mitocondrias transfiere la energa deel gradiente electroqumico de protones en
elformacin de ATP (ver seccin 3.5.9).
3.5.8
INHIBIDORES
YDESACOPLADORESDELA
CADENADE
TRANSPORTE DE ELECTRONESY LA FOSFORILACINOXIDATIVA
ms
especfica
quepermitanel
movimientode
protonesvoluntadtambindisipar
elH^gradiente electroqumicocausandodesacoplamiento.
Figura3.14sintasade
ATP
enlas
mitocondrias,
(a)
Fiobservcomo
esferasenla
membranamitocondrial
interna(en
micrografas
electrnicasmanchadasnegativos),
(b)
de
detergentea
extraerFIFQATPsintasa, (c) Vista lateral de laATPsintasa,que muestralas
posiciones delas subunidades. (d) Vista superiorde la parteinalmbricade la
sintasa.
Un
par
desubunidadesyuna(designada
se
asocia
consubunidadesmasa central), la induccin deasimetra, (c ydse derivan
demicrografas electrnicasque utilizan tcnicasde reconstruccin de
imgenes.). DeHarris(1995), con el permiso.
Tabla
3.1.
El componente Fo de FIFQ-ATP sintasa,incrustado en la membrana,
tiene tres subunidades:una subunidad-A sin una funcin o estructura
conocida,
una subunidad-b que es responsable de vincular a FQFi, y una
subunidad-c, que es hidrofbico ycree que est implicada en la
translocacin
de
protones
a internet gratuita (en (la nomenclatura de las subunidades
es diferente para cloroplasto ATP sintasa, consulteTabla 3.1). El sitio
de DCCD vinculante reside ensubunidad-c. DCCD es un inhibidor de la
sntesis de ATP.Se requiere que todos tres subunidades para crear un
protncanal en la bicapa lipdica de la membrana; unaestequiometra
aproximada
es
ab2Cio_i2DCCD
o
oligomicina bloquea el canal de protones FQ. SolubleFi-ATPasa es
insensible a estos inhibidores.Aunque el componente aislado Fi
hidrolizaATP rpidamente, tanto Fi y FQ son necesarios para
ADPfosforilacin.
DCCD
es
generalmente
eficaz
en
ambas membranas bacterianas y tilacoides perooligomicina inhibe
FIFQ-ATP sintasa (ATPasa)
el paso
de
protones a
travs
est
de FQ no
claro. Es