Observacin de clulas sanguneas

Introduccin
En la sangre se encuentran los leucocitos o glbulos blancos que son las clulas mviles del sistema
inmunitario. Todos ellos difieren en cuanto a su funcin y morfologa. Los leucocitos no desempean sus
funciones cuando se encuentran en sangre, sino cuando abandonan sta y entran a los tejidos linfoides o
a las zonas donde hay inflamacin intensa. En este sentido, la sangre es un medio de transporte, que le
permite a las clulas sanguneas recircular entre los diferentes tejidos del cuerpo. Normalmente en sangre
se encuentran cinco tipos de leucocitos: monocitos, linfocitos, neutrfilos, eosinfilos y basfilos. Adems
de estas clulas, se encuentran presentes las plaquetas, que son fragmentos citoplasmticos de los
megacariocitos que se asientan en la mdula sea.
Los leucocitos se estudian en preparaciones coloreadas por dos razones: a fin de determinar la apariencia
normal o anormal de las clulas y sus porcentajes relativos en el diagnstico de ciertas enfermedades. El
recuento de eritrocitos y leucocitos es uno de los mtodos de rutina
Objetivos:
Adiestrarse en la preparacin y tincin de frotis sanguneo
Describir la morfologa de los diferentes tipos de clulas sanguneas observadas en el microscopio
ptico.
Materiales:
Microscopio
Portaobjetos
Mechero de alcohol
Lanceta estril
Cubeta de tincin
Frasco lavador
Alcohol absoluto
Hematoxilina
Eosina
Tcnica del frotis de sangre
Las clulas de la sangre se estudian comnmente en el laboratorio mediante preparaciones denominadas
frotis sanguneo o extendido sanguneo. Para ello se prepara una fina pelcula de clulas sanguneas
sobre un portaobjeto a fin de obtener una capa delgada de clulas. Despus de colorear las preparaciones
se observa su morfologa al microscopio ptico.

Figura 1. Esquema de la disposicin de los portaobjetos para realizar el extendido sanguneo

PROCEDIMIENTO
1) Lave muy bien tres portaobjetos. Si es necesario lmpielos con etanol utilizando un trozo de gasa.
2) Ubique el sitio de toma de la muestra en la parte lateral del dedo medio o anular de la mano
izquierda donde es menos sensible que en la punta.
3) Limpie el sitio donde se tomar la muestra de sangre,
utilizando una gasa empapada con etanol y luego squelo
con gasa.
4) Con una lanceta con un movimiento firme y rpido realizar
una puncin en el dedo.
5) Limpie la primera gota de sangre con gasa.
6) Con la mano derecha tome un portaobjeto y sostngalo por
los bordes. Con la mano izquierda presione el dedo y deje
fluir una gota pequea de sangre (2mm de dimetro).
Coloque una gota de sangre sobre el portaobjeto en el centro
Figura 2: toma de muestra sangunea
de uno de los extremos de la lmina.
7) Coloque un segundo portaobjeto apoyado sobre el otro por delante de la gota de sangre en ngulo
de 45, y se hace retroceder hasta que el borde coincida con la gota, que se extender por
capilaridad por todo el borde. Antes de que la sangre se extienda por los extremos del porta, se
hace deslizar por el porta hacia delante con movimiento firme y rpido, elevando la mano derecha
antes de que el porta que se desliza llegue al final. Mientras mayor sea el ngulo que forman las
dos lminas, mayor ser el espesor de la capa de clulas. (ver Figura 1)
8) Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de alcohol absoluto
(etanol) y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin.
9) Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecacin del
colorante agregando ms lquido.
10) Lavar la preparacin con agua destilada y aadir unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto.
11) Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.
12) Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero.
13) Observar al microscopio a 40x; 100x y 1000x (solo utilizar el aceite de inmersin para el aumento
de 1000x)

Observacin microscpica
Al microscopio se vern las siguientes clulas:
Eritrocitos (Glbulos rojos):
Los Glbulos rojos son las clulas que contienen en su interior la
hemoglobina. Son los principales portadores de oxgeno a las clulas y
tejidos del cuerpo. Tiene forma bicncava para adaptarse a una mayor
superficie de intercambio de oxgeno por dixido de carbono en los
tejidos. En los mamferos, no poseen ncleo.
Plaquetas:
Las plaquetas son clulas de la sangre producidas por los megacariocitos
en la mdula sea mediante el proceso de fragmentacin citoplasmtica,
circulan por la sangre y tienen un papel muy importante en la
coagulacin. Son los componentes celulares ms pequeos de la sangre.

Leucocitos (Glbulos Blancos):

Neutrfilos:
Clulas de 7-9 um con granulacin menos evidente que la de los
eosinfilos, presentan ncleos polilobulados, contienen protenas de
propiedades bactericidas (fagocitan y destruyen clulas bacterianas).
Tambin denominados polimorfonucleares, de ncleo arrionado,
formando cuatro o cinco lbulos; reciben por ello, el nombre de
polimorfonucleares.
Eosinfilos:
Su nivel aumenta en las infestaciones por parsitos, en reacciones alrgicas,
en el asma y en alguna patologa del miocardio. Tienen el Ncleo bilobulado
y granulacin de tamao medio, con fuerte apetencia por la eosina. Ncleo
bilobulado y granulacin de tamao medio y fuerte apetencia por la eosina

Basfilos:
Los grnulos de los basfilos son gruesos pero escasos. Son clulas de unas 10
micras de dimetro y su ncleo tiene una forma que recuerda a un 5. Se originan
en el mismo lugar que el resto de los granulocitos, y son los menos numerosos, ya
que constituyen slo el 0,5% del total. Tienen una activa participacin en la
respuesta alrgica a travs de la liberacin de histamina y otras sustancias
qumicas.

Linfocitos:
Los linfocitos son las clulas responsables de las respuestas inmunitarias. Se
dividen en dos grandes grupos, linfocitos B y linfocitos T, segn que estos
progenitores linfoides maduren en la mdula sea (B) o en el timo (T),
respectivamente. No existe diferencia morfolgica, observable a Microscopio
ptico, entre ambos tipos de linfocitos. Son los glbulos blancos ms
pequeos, con ncleo que ocupa casi la totalidad del volumen celular y no
presentan granulacin especfica.
Monocitos:
Al igual que otros glbulos blancos, los monocitos se originan en la mdula sea
y luego entran en el flujo sanguneo. En unas horas, emigran a los tejidos donde
se convierten en macrfagos, y constituyen las clulas defensivas (fagocitos). Son
de mayor tamao que los linfocitos con ncleo redondo o arrionado.