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Thierry Douki es bioqumico del Comisariado de la Energa Atmica

de Francia (CEA) y dirige el Laboratorio de Lesiones de los cidos


Nucleicos en Grenoble, donde Jean-Luc Ravanat trabaja tambin
como bioqumico del CEA. Dimitra Markovitsi es fotoqumica
del CNRS y dirige el Laboratorio Francis Perrin en el CEA de Saclay.
velyne Sage es biloga del CNRS en el Laboratorio de Biologa
de las Radiaciones, en el Instituto Curie de Orsay.

BIOQUMIC A

El ADN
bajo el efecto
del sol
Los mecanismos fotoqumicos que alteran el ADN
de las clulas cutneas durante la exposicin solar
aumentan el riesgo de cncer de piel

Thierry Douki, Jean-Luc Ravanat, Dimitra Markovitsi y velyne Sage


Se descubrieron entonces los efectos perniciosos de la exposicin prolongada al sol y el peligro de las quemaduras solares.
En efecto, los rayos ultravioleta del sol provocan cncer de piel.
Se cambi la formulacin de las cremas solares (que surgieron
[d[bZ[Y[d_eZ['/(&fWhWYedl[hj_hbWi[d[YWY[ibjheiYedtra los rayos ultravioleta B, ya que se crea que solo esta pequea parte del espectro solar resultaba perjudicial para la piel.
Pero mediante qu mecanismos?
Desde el decenio de los sesenta del siglo se han venido
estudiando los efectos de los rayos ultravioleta sobre el ADN (el
portador de la informacin gentica) de las clulas cutneas. Se

EN SNTESIS

Las radiaciones ultravioleta del sol


provocan lesiones en el ADN que
pueden dar lugar a mutaciones genticas.

Hasta ahora, se crea que los rayos


ultravioleta B eran los ms perjudiciales, al desencadenar reacciones
qumicas entre las bases del ADN.

36 INVESTIGACIN Y CIENCIA, agosto 2012

Sin embargo, aunque son menos


absorbidos por el ADN, los rayos
ultravioleta A provocan lesiones
similares.

La identificacin de estos daos


o fotoproductos en el ADN ayuda
a comprender mejor la aparicin
de mutaciones y del cncer de piel.

JULIA FRAUD, POUR LA SCIENCE


bronceada se practica en Europa desde principios
del siglo . Hasta el siglo , la tez plida constitua una prueba de pertenencia a la aristocracia; las
clases obrera y campesina, que desempeaban su
actividad al aire libre, presentaban la tez bronceada. Ms tarde,
la revolucin industrial conllev la reclusin de los obreros en
las fbricas, lejos del sol, mientras que las clases sociales acomodadas redescubran el turismo de balneario. En 1936, con la
aparicin de las vacaciones pagadas, la piel bronceada se convirti en un fenmeno de moda.

Los rayos ultravioleta A, B y C del sol alteran las bases del


ADN. Los ultravioleta C (UVC) son los ms energticos y los
ms absorbidos por el ADN, pero la atmsfera los refleja por
completo: no consiguen llegar a la Tierra. Tan solo un pequeo porcentaje de los ultravioleta B (UVB) y alrededor del 30
por ciento de los ultravioleta A (UVA) atraviesan la atmsfera, de manera que la radiacin que incide sobre la superficie
terrestre est compuesta por un 95 por ciento de UVA y un 5
por ciento de UVB. Aunque ambos resultan menos perjudiciales para el ADN de las clulas cutneas que los UVC, desencadenan reacciones qumicas que generan fotoproductos. Adems, los UVA favorecen la formacin de radicales libres. Estas
molculas (fotoproductos y radicales libres) pueden provocar
mutaciones e incluso cncer.

Rayos ultravioleta C

2DmD`
solar

Rayos ultravioleta B
yyDm

Rayos ultravioleta A
yyDm

Rayos ultravioleta B
Dm

Rayos ultravioleta A
Dm

Ncleo
Fotoproducto
ADN
Unin entre
mUDy
Radicales libres
Esqueleto del ADN

Base

Clula cutnea
daada

Agosto 2012, InvestigacionyCiencia.es 37

LA POBLACIN EXPUESTA AL SOL

En 2008, un estudio sociolgico de la Seguridad Social y del Instituto Nacional de la Salud y la Investigacin Mdica de Francia
demostraba que, si bien la mayora de la poblacin reconoca los
riesgos asociados a la exposicin solar, su comportamiento en
bWifbWoWideh[[`WXWjWbYh[[dY_W0c[deiZ[bWj[hY[hWfWhj[i[
protega y la mayora tomaba el sol durante las horas del da de
mayor irradiacin. No sorprende por tanto que, en Europa, el
nmero de casos de cncer de piel aumente entre un cinco y un
siete por ciento anual y que, en Francia, se diagnostiquen al ao
90.000 nuevos casos y fallezcan 1300 personas. Cmo provocan
cncer las radiaciones ultravioleta?
El ADN posee una estructura qumica compleja que le perc_j[h[fb_YWhi[[bc[dj[ojhWZkY_hi[[dfhej[dWi$;ij|\ehcWdo por bases nitrogenadas o nucleotdicas (adenina, citosina,
guanina y timina) unidas a un esqueleto de azcares y fosfatos. Y se compone de dos hebras enrolladas en forma de doble
hlice. Sin embargo, numerosos agentes qumicos o fsicos pueden daar las bases o el esqueleto. A veces, tales daos se traZkY[d[dckjWY_ed[i"[iZ[Y_h"[dceZ_YWY_ed[iZ[bW_d\ehcWcin gentica. Las clulas afectadas pueden empezar a multipli-

carse de forma incontrolada, la primera etapa de los mecanismos


que dan lugar al cncer.
La radiacin ultravioleta tiene, por consiguiente, la capacidad de alterar el ADN. La presencia de esos rayos en la luz solar contribuye en gran medida a los problemas que esta ocasiona en la salud pblica. Causan la mayora de los tumores cutneos: los carcinomas y los melanomas. Los segundos, los
menos frecuentes (menos del diez por ciento de los tumores
cutneos), despiertan especial preocupacin por dos motivos:
por un lado, las clulas del melanoma se propagan fcilmente
y forman metstasis; por otro, todava no existe ningn tratamiento contra ellos.
Desde hace tiempo se estudian los daos de la radiacin uljhWl_eb[jWieXh[[b7:D1beifh_c[heijhWXW`eiZWjWdZ[dWb[i
de los aos cincuenta. Se sabe que por efecto de la radiacin,
las bases del ADN reaccionan y forman fotoproductos, pero todava no se conocen todas las etapas del proceso.
Los rayos ultravioleta del sol estn constituidos por fotones con una amplia gama de energa. Los ultravioleta C (UVC),
que presentan las menores longitudes de onda (entre 200 y
280 nanmetros), son los ms energticos y los que el ADN abiehX[YedcWoeh[YWY_W$BeiKL8[djh[(.&o)(&dWdc[tros) y los UVA (entre 320 y 400 nanmetros) poseen menos
energa que los UVC. Pero la capa de ozono de la atmsfera impide el paso de los UVC emitidos por el sol, de una gran mayora de los UVB y de dos terceras partes de los UVA. La luz sobWhgk[WbYWdpWbWikf[hY_[j[hh[ijh[Yedj_[d["fehjWdje"kd
95 por ciento de radiacin UVA y un cinco por ciento de UVB,
porcentajes que varan en funcin de la hora del da, la latitud
y la altitud.
FOTONES QUE ALTERAN EL ADN

38 INVESTIGACIN Y CIENCIA, agosto 2012

0y`DmyDDmD`mDmmyy`y
(en Wm2nm1)

y`yymyDU`Dmy %
(en M1`1)

La longitud de onda de la radiacin incidente determina la naturaleza de los daos causados en el ADN y, por tanto, las coni[Yk[dY_WiX_eb]_YWi$DejeZWibWiceZ_YWY_ed[iZ[b7:Dh[sultan perjudiciales y no todas son eliminadas por los sistemas
Y[bkbWh[iZ[h[fWhWY_dZ[b][decWYedbWc_icW[YWY_W$
Adems, el ADN presenta un mximo de absorcin en la regin de los rayos UVC (a 257 nanmetros), absorcin
100
104
que disminuye en los UVB y que se
vuelve an ms dbil en los UVA. Los
UVC son, pues, los ms absorbidos,
1
3
10
10
Wkdgk[jWcX_dbeic|ih[[`WZeifeh
la atmsfera hacia el espacio. Por el
contrario, los UVA son los menos ab2
10
102
sorbidos, pero los que mejor atraviesan
la atmsfera y, en consecuencia, los ms
abundantes. Ahora bien, al ser absor103
101
bidos por el ADN, los UVB desencadenan reacciones fotoqumicas entre las
4
bases. Por su parte, los UVA provocan
10
Ultravioleta C
Ultravioleta B
Ultravioleta A
10
la oxidacin del ADN por medio de me240
280
320
360
400
canismos indirectos.
Longitud de onda (en nanmetros)
En 2003, nuestros equipos del Comisariado de la Energa Atmica (CEA)
La doble hebra de ADN absorbe, sobre todo, los rayos ultravioleta C. Esta absorcin (azul) en Grenoble y del Instituto Curie dees menor en los ultravioleta B y muy dbil en los ultravioleta A. Sin embargo, la luz solar mostraron que, adems de daar el
que incide sobre la superficie de la Tierra, desprovista de ultravioleta C, contiene un 5 por ADN mediante mecanismos de oxidaciento de ultravioleta B y un 95 por ciento de ultravioleta A (blanco). Por tanto, aunque es- cin, los UVA provocaban alteraciones
tos ltimos sean absorbidos en menor medida por el ADN, desencadenan ciertas reaccio- semejantes a las de los UVB. Obtuvimos esos resultados en cultivos celulanes qumicas.

POUR LA SCIENCE

descubri que los rayos ultravioleta B (UVB) creaban enlaces


entre determinados tomos de la molcula de ADN, mientras
que los ultravioleta A (UVA) actuaban de forma indirecta, al alterar diversos componentes celulares. El efecto de los ltimos
se asociaba sobre todo al envejecimiento de la piel. Por lo tanto, los UVB, aunque menos abundantes en la radiacin solar
que incide sobre la piel, parecan los ms peligrosos.
DeeXijWdj["Z[iZ[dWb[iZ[bWZYWZWZ[beidel[djWi[h[conoce tambin el impacto de los UVA: no solo representan una
parte importante del espectro de la radiacin solar que alcanza la piel sino que, adems, se ha visto que pueden provocar tumores en animales de laboratorio. Asimismo, en fecha ms reciente hemos demostrado que en el ADN generan el mismo tipo
de enlaces qumicos que los UVB, alteraciones que pueden dar
lugar a mutaciones genticas, e incluso cncer.

R E AC C I O N E S F O T O Q U M I C A S
res y, en 2006, en colaboracin con el Instituto de Inl[ij_]WY_dF_[hh[<WXh["beiYedhcWcei[dbWf_[b
humana.
Para comprender por qu las radiaciones ultravioleta causan mutaciones, los fotoqumicos estudian
el modo en que la absorcin de un fotn daa el ADN.
La absorcin de la radiacin ultravioleta por el ADN desencadena una serie
Las bases de la molcula absorben los fotones ultrade mecanismos que preceden a la aparicin de daos o fotoproductos. Para
l_eb[jW"beiYkWb[iceZ_YWdbW[ijhkYjkhW[b[Yjhd_caracterizar estas etapas intermedias, que permiten comprender la formaYWZ[bei|jeceibWYed]khWY_dZ[bei[b[Yjhed[i
cin de las lesiones, se utiliza la espectroscopa con resolucin temporal.
alrededor del ncleo). Como consecuencia, el ADN
Durante un perodo de tiempo muy corto se excita el ADN por medio
adquiere un estado excitado, con una energa supede un lser ultravioleta (a). Una parte de la energa absorbida por el ADN
rior a la de su estado habitual. Sus constituyentes
se disipa en el entorno en forma de calor (b). Otra parte es transferida a las
pueden entonces reaccionar entre s.
bases, que pasan de un estado excitado a otro. Una pequea fraccin de
Mientras que los primeros trabajos realizados
xx %x`Dlxxx`xxb), mientras que otra fraccin,
durante los aos sesenta se centraron en las bases
todava ms pequea, sufre una serie de reacciones qumicas que dan lugar
del ADN aisladas, hoy se estudian los estados excia fotoproductos (c).
tados de la doble hebra de ADN. Tales avances han
Por tanto, durante perodos de tiempo muy breves, que pueden durar
sido posibles gracias, por un lado, a la potencia de
entre unos cien femtosegundos y algunos nanosegundos, se pueden deteclos ordenadores para realizar clculos complejos y,
tar seales cuyas propiedades dependen de las especies qumicas generapor otro, a la espectroscopa con resolucin tempolDDDxD"Dlxx``lxx`x`Dral, una tcnica que proporciona informacin sociona informacin sobre la energa de los distintos estados excitados y sobre
bre la vida media de las especies qumicas intermesu vida media. Incluso es posible calcular el tiempo que dura la presencia
dias que se forman antes de la aparicin de un fotode algunas especies intermedias que no emiten fotones.
producto.
Se ha determinado as que el tiempo que separa la absorcin de un fotn
En primer lugar, hemos examinado el modo en
de la aparicin de un fotoproducto depende de la estructura qumica de
que una doble hlice de ADN absorbe los rayos UVA.
este ltimo.
Hemos desarrollado en el laboratorio un modelo de
ADN formado por 20 pares de bases adenina-timina:
Energa
%yyDmy`Dm
la molcula resultante presenta una absorcin dbil,
pero relevante, de los UVA. Sin embargo, una mezcla de esas bases aisladas no absorbe tales longitua
b
c
des de onda. Los resultados demuestran que, al contrario de lo que se pensaba, las reacciones fotoqumicas del ADN no solo son provocadas por los
ultravioleta C y B, sino tambin por los A.
2DmD`
Gracias a la espectroscopa con resolucin temultravioleta
poral, hemos demostrado despus que los estados
2yD``
excitados originados por la absorcin de los UVA
`D
Z_[h[dZ[beigk[][d[hWdbeiKL8obeiKL90i[
trata de estados de transferencia de carga. En esa
Calor y`y`D
Yed]khWY_d[b[Yjhd_YW"Y_[hjWiXWi[ifh[i[djWd
carga positiva y otras negativa, de manera que pueden reaccionar entre s.
Qu sucede con la energa de la radiacin absor %yyDm
bida por el ADN? Una parte importante se disipa en
mDyD
forma de calor en el entorno del ADN. Otra se reparm`
te entre las bases, que pasan de un estado excitado
a otro. En el laboratorio, hemos demostrado que esa
transferencia de energa comienza menos de 100 femtosegun- la absorcin de un fotn de radiacin UVC y la formacin de un
dos (100 u 1015 segundos) despus de la absorcin. Una dimi- fotoproducto depende en gran medida de la estructura qumica
nuta fraccin del ADN excitado emite entonces una radiacin de este ltimo. Los dmeros de timina (fotoproductos formados
Z[keh[iY[dY_W$OejhW\hWYY_dWdc|if[gk[W[nf[h_c[d- por la unin de dos timinas) del tipo del ciclobutano aparecen
en menos de un picosegundo (1012 segundos), mientras que los
ta reacciones qumicas.
fotoproductos del tipo (6-4) (denominacin que procede de la
posicin de los tomos que reaccionan en la molcula), lo hacen
FUSIN DE BASES
En la actualidad, visualizar en tiempo real la aparicin de un en cuatro milisegundos, ya que en la reaccin interviene un profotoproducto en una doble hlice de ADN sigue constituyendo ducto intermedio.
Entre 1960 y 1990, se estudi la estructura de los fotoproun reto. La probabilidad de que el ADN reaccione es muy pequea. Sin embargo, se estn realizando progresos mediante el es- ductos derivados de esos estados excitados. La mayor parte de
tudio de una hebra sencilla formada solo por timinas, que pre- los experimentos se llevaron a cabo con fragmentos cortos de
senta una reactividad muy superior a la de una doble hlice. ADN, fciles de obtener en gran cantidad, que fueron expuesTambin hemos aprendido que el tiempo que transcurre entre tos a fuertes dosis de rayos UVB. Tambin se demostr que solo

JULIA FRAUD, POUR LA SCIENCE

El ADN excitado
y sus fotoproductos

Agosto 2012, InvestigacionyCiencia.es 39

dos de las cuatro bases del ADN se ven afectadas: la timina y la


DE LA LESIN A LA MUTACIN
citosina, pertenecientes a la familia de las pirimidinas. Cuando Qu ocurre cuando el ADN es alterado y forma fotoproductos?
estas se hallan adyacentes en una hebra de ADN se generan en- Una cadena de acontecimientos, estudiada tanto en sistemas
tre ellas nuevos enlaces covalentes (uniones qumicas fuertes), sencillos como en la piel humana, ha permitido explicar el efeclo que da lugar a fotoproductos dimricos.
to biolgico de la radiacin ultravioleta y muchas de las caracPor qu las pirimidinas son las nicas que reaccionan cuan- tersticas de los tumores cutneos.
do se encuentran excitadas? Estas presentan un enlace doble
Para empezar, se demostr que los fotoproductos podan
entre dos tomos de carbono. En 1958, el equipo holands de R. desencadenar la apoptosis celular, una muerte programada
Beukers y W. Berends describi el primer producto resultante que evita la divisin de las clulas que presentan alteraciones
de la redistribucin de los dobles enlaces de dos timinas. Una en el genoma.
de esas estructuras, que contiene un anillo de cuatro tomos,
Por otro lado, desde el decenio de los setenta del siglo se
es un dmero del tipo del ciclobutano. Tras ese descubrimiento ha venido comprobando, en estudios realizados en cultivos cei[_Z[dj_YWhedejhei\ejefheZkYjeioi[fkieZ[cWd_[ijegk[ lulares, que las mutaciones del ADN provocadas por las radiaentre dos citosinas, o entre una timina y una citosina, se pro- ciones ultravioleta conllevan la formacin de dmeros timinaduca el mismo tipo de reacciones.
citosina o citosina-citosina. A comienzos de la dcada de los noEn el ADN se generan, por tanto, un gran nmero de foto- venta, Douglas Brash, de la Facultad de Medicina de Yale, y sus
productos. Para detectarlos, se han desarrollado mtodos bio- colaboradores descubrieron esas mismas mutaciones en el gen
qumicos, como la fabricacin de anticuerpos de conejo que re- de la protena p53, lo que reforzaba el inters por el efecto de
conocen los fotoproductos, y de qumica analtica, que permite los rayos ultravioleta, ya que en la mayora de los tumores cuseparar los fotoproductos del ADN mediante tcnicas cromato- tneos se producen tales mutaciones.
]h|YWi$=hWY_WiW[ieiWlWdY[ifk[Z[YkWdj_YWhi[bW\ehcWMs tarde se determin el modo en que la alteracin del ADN
cin de distintos fotoproductos.
daba lugar a la aparicin de mutaciones. Mediante la sntesis
Se ha observado que, bajo los efectos de los rayos ultravio- de fragmentos de ADN que contenan lesiones conocidas, se deleta, las secuencias timina-timina y timina-citosina reaccionan mostr que las polimerasas, las enzimas que replican el ADN,
ms que las parejas citosina-timina y cijei_dW#Y_jei_dW$7Z[c|iZ[_dk_h[dbW
CONSECUENCIAS
[YWY_WZ[bWh[WYY_d"bWi[Yk[dY_WW\[Yta tambin a la proporcin entre dmeros del tipo del ciclobutano y fotoproductos de tipo (6-4). Esta relacin entre los
Bajo los efectos de la radiacin ultravioleta, las bases de ADN sufren una serie de reacciones
distintos fotoproductos es igual en el
qumicas. En una de ellas, la timina forma dos enlaces con la citosina y genera un producto
ADN puro en disolucin y en las clulas
del tipo del ciclobutano (a). En el interior de una clula, el ADN daado de este modo puede
cutneas aisladas: una vez que el fotn
seguir tres vas. A menudo, el fotoproducto desencadena la muerte de la clula y, en conse^Wi_ZeWXiehX_Ze"[b[djehdeceZ_YW
cuencia, l mismo resulta eliminado junto con la clula (b). Con menor frecuencia, provoca
poco la fotoqumica del ADN. En cambio,
una mutacin (c): reacciona con una molcula de agua, de manera que el anillo de la citosina
el rendimiento de las reacciones en la
en el fotoproducto se convierte en un derivado del uracilo, una base de estructura similar a
piel resulta menor que en las clulas cula de la timina. Si la clula se divide, este ADN es replicado por enzimas que no reconocen la
tneas aisladas debido a la pigmentacin
citosina (porque se ha transformado en uracilo) y la toman por una timina: sintetizan, por
del tejido. En efecto, la melanina, un biotanto, una hebra mutada en la que una timina sustituye a la citosina original. Sin embargo,
polmero que absorbe las radiaciones ulen las clulas existen sistemas de reparacin (d). Una enzima reconoce el fotoproducto y otras
travioleta, ejerce un efecto protector: las
separan las dos hebras del ADN: se elimina la regin lesionada, de manera que otras enzipieles bronceadas, ms ricas en melanimas puedan sintetizar una nueva hebra inalterada.
na, resisten mejor los rayos del sol.
2DmD`
7Z[c|iZ[bW[YWY_W[dbW\ehcWY_d
ultravioleta
de fotoproductos, se han determinado
m`
otras caractersticas de los daos causados en el ADN. En primer lugar, se sabe
que los fotoproductos de la citosina son
Citosina
b
bastante inestables: al reaccionar con una
Timina
molcula de agua se convierten en derivados del uracilo, una base del ARN, el
otro cido nucleico presente en las cluc
a
las. En segundo lugar, que aparecen heterogeneidades en la localizacin de los
fotoproductos a lo largo de un gen: cierd
tas regiones reaccionan ms que otras y,
por tanto, presentan mayor cantidad de
ADN
fotoproductos. Sin duda, este tipo de va-

Qu le ocurre al ADN daado?

riaciones se deben a efectos estructurales.


O^Woejhei\WYjeh[igk[ceZ_YWdbWh[WYtividad local, como la presencia de protedWi`WZWiieXh[[b7:D$

40 INVESTIGACIN Y CIENCIA, agosto 2012

%mDDm

JULIA FRAUD, POUR LA SCIENCE

cometan errores cuando lean la informacin gentica en los


lugares donde se hallaban los fotoproductos.
Cada vez que se divide una clula, su ADN se replica. Normalmente, las enzimas de la replicacin copian una hebra
de ADN asociando a cada base de la cadena molde una base
complementaria en la segunda cadena: a cada timina se le vincula una adenina, y a cada citosina, una guanina (y a la inversa). Ahora bien, las polimerasas pueden ser engaadas por
las citosinas que se han convertido en uracilo en los fotoproductos. En efecto, el uracilo se parece mucho a la timina (pero
no a la citosina), de manera que durante la sntesis las enzimas
incorporan una adenina en la hebra complementaria, en lugar
de una guanina.
Como consecuencia, se observan las siguientes mutaciones: cambios de las secuencias timina-citosina en timina-timina, y de las secuencias citosina-citosina en timina-timina. Raramente se encuentran mutaciones en las secuencias timinatimina ya que, en cualquier caso, las dos timinas de un dmero se hallan asociadas a dos adeninas, estn o no unidas entre
s. Adems, si se crean clulas y ratones transgnicos en los que
se pueden eliminar uno u otro tipo de fotoproductos, se ha demostrado que los responsables de tales mutaciones son, sobre
todo, los dmeros del tipo del ciclobutano, no los fotoproductos de tipo (6-4).

Los rayos UVB resultan por tanto perjudiciales para las


clulas (en realidad, hasta ahora, la mayora de los estudios
realizados han tenido lugar con los UVB). Sin embargo, todos los seres vivos disponen de sistemas de reparacin del
ADN. Estos eliminan los fotoproductos y restablecen la secuencia original del ADN.
En los humanos, una serie de protenas se encarga de reparar los dmeros en varias etapas. En primer lugar, se localiza el
fotoproducto gracias a la deformacin que provoca este en la
estructura del ADN. A continuacin, otras protenas cortan la
hebra de ADN daada a ambos lados del fotoproducto y dejan
[d[bbWkdWXh[Y^W$Fehd"kdWibj_cWifhej[dWih[Yedij_jkyen la hebra al replicar la regin de ADN que se sita enfrente.
Los defectos genticos que inactivan las protenas de ese mecanismo de reparacin hacen multiplicar por 1000 el riesgo de
cncer en los nios afectados por el sndrome xerodermia pigmentosa, en quienes la exposicin solar resulta muy peligrosa.
Lo que constituye una prueba ms del papel de los fotoproductos dimricos en los tumores cutneos.
OXIDACIN DEL ADN POR LOS UVA

A pesar de que los rayos UVA son absorbidos por el ADN en menor grado que los UVB, tambin pueden provocar daos en la
molcula, e incluso mutaciones. Hace unos treinta aos se pro-

DESTRUCCIN DEL ADN

Timina

MUTACIN DEL ADN

$D`

Agua

2y`D`my %
7D`

3ymy %DyDm

REPARACIN DEL ADN


`myDyUDmDDmD
2y``ymym`

3yDD`myDyUDmy %

Agosto 2012, InvestigacionyCiencia.es 41

puso una explicacin para ello, la fotosensibilizacin, que supone la intervencin de mecanismos indirectos.
En ese proceso los fotones no son absorbidos por el ADN,
sino por otros constituyentes celulares, como vitaminas o cofactores enzimticos. Al interaccionar con un fotn, la molcula
fotosensibilizadora pasa a un estado excitado; esta puede
reaccionar con molculas adyacentes y desencadenar procesos
de oxidacin, fenmeno conocido como estrs oxidativo. En las
reacciones de oxidacin intervienen derivados deletreos del
oxgeno. La molcula excitada suele transferir su energa al oxgeno molecular (O2) que, a su vez, adquiere un estado excitado
denominado oxgeno singlete. Este reacciona fcilmente con
compuestos ricos en electrones. Se ha observado que, en el ADN,
el oxgeno singlete afecta sobre todo a la guanina. Y en 2004,
demostramos que la reaccin del oxgeno singlete con el ADN
daba lugar a 8-oxo-7,8-dihidroguanina (8-xoGua).
Un segundo mecanismo de fotosensibilizacin se produce por
la accin de los radicales libres, en especial del radical hidroxilo, que posee la capacidad de oxidar las cuatro bases y rompe la
cadena de ADN al degradar los azcares. Una ltima va, menos
frecuente, consiste en la oxidacin directa del ADN, que tiene
lugar cuando la molcula fotosensibilizadora le arranca un electrn; una vez ms, ello afecta sobre todo a la guanina.
:[dk[le"bWijYd_YWiYhecWje]h|YWioX_egkc_YWif[h#
miten visualizar los daos del ADN en las clulas expuestas a

los UVA. La oxidacin de la guanina en 8-oxoGua representa el


acontecimiento ms frecuente. Tambin se observan rupturas
en la cadena, pero con una probabilidad dos o tres veces menor. Las otras tres bases resultan menos daadas que la guanidW$7Z[c|i"i[^Wfk[ijeZ[cWd_[ijegk[bW\ehcWY_djhWdsitoria del oxgeno singlete y la produccin de 8-oxoGua suponen un 80 por ciento del estrs oxidativo provocado por una
irradiacin con UVA.
La presencia de 8-oxoGua en el ADN da lugar a la mutacin
de un par de bases guanina-citosina en timina-adenina. Sin
[cXWh]e"[n_ij[kdWh[fWhWY_d[YWpZ[bW.#ene=kW$;bWhi[nal enzimtico que evita la acumulacin de 8-oxoGua es distinto del que se encarga de reparar los dmeros. La clave reside en la ADN-glicosilasa, una enzima que corta los enlaces
N-glicosdicos que unen un azcar con una base. Tambin elic_dWbWXWi[ceZ_YWZWZ[b7:D"oejhWi[dp_cWij[hc_dWdbW
reparacin del ADN mediante la incorporacin de una guanina inalterada.
FORMACIN DE FOTOPRODUCTOS

Pero el efecto de los rayos UVA no se limita al estrs oxidativo,


como se haba credo durante mucho tiempo. Uno de los fotoproductos dimricos asociados a los UVB, los dmeros del tipo
del ciclobutano, forman parte de los daos causados por los
UVA en el ADN. Un experimento realizado con bacterias y al-

EFECTOS EN LA PIEL

Con 90.000 nuevos casos cada ao en Francia, los tumores de piel son los ms frecuentes. Representan una tercera parte de todos
los casos de cncer y el doble de los de
mama. Los rayos solares seran responsables de la mayora de los casos. Tal asocia`xlxDxDUxDx
los tumores se localizaban en las regiones
del cuerpo ms expuestas al sol. Por otro
lado, los datos epidemiolgicos demuestran
un aumento de la frecuencia de este cncer
con la irradiacin recibida por los individuos,
especialmente aquellos que trabajan al aire
libre. Esta tendencia resulta inquietante:
desde hace 30 aos se ha producido un
ascenso del nmero de casos de cncer de
piel en los pases industrializados. Ello se
debe al aumento de la exposicin al sol con
xx`xD
De hecho, tras estos datos se esconden
numerosas patologas. Los tumores cutneos surgen a partir de las clulas de la capa
superior de la piel, la epidermis, sobre las
que incide la mayora de la radiacin. Los
queratinocitos representan el 90 por ciento
de las clulas epidrmicas. Sintetizan la queDDjDxDUDxUxx
agua que protege e impermeabiliza la piel.
Tales clulas se ven alteradas en la mayor
parte de los tumores, como en los carcino-

42 INVESTIGACIN Y CIENCIA, agosto 2012

mas basocelulares, que afectan a los queratinocitos ms profundos de la epidermis, en


su capa basal. Los carcinomas basocelulares son los ms frecuentes (ms del 80 por
ciento de los tumores cutneos). Se localizan fcilmente, se extirpan mediante ciruga y no dan lugar a metstasis.

D`Dy`yD

Melanoma

Menos frecuentes, los carcinomas espinocelulares (que se desarrollan en los queratinocitos de la capa espinosa, localizada
por debajo de la capa basal de la epidermis)
revisten mayor gravedad, ya que a veces originan metstasis. En los melanocitos, las
clulas epidrmicas que sintetizan la melanina y contribuyen al bronceado de la piel,
se origina un tipo de cncer ms infrecuente
pero muy grave: el melanoma. Estos tumores producen numerosas metstasis en el
organismo, incluso durante las primeras etapas de su desarrollo.
Adems, hoy en da no existe ningn tratamiento eficaz contra los melanomas y
la mortalidad causada por ellos es elevada.
Sin embargo, en junio de 2011, el equipo
de Corinne Bertolotto, del Instituto Nacional de la Salud y de la Investigacin Mdica (INSERM) de Niza, demostr por qu los
melanomas suelen ser tan resistentes a la
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medicamentos. Estas molculas atacan determinadas formas mutadas de las protenas
responsables del crecimiento incontrolado
de las clulas en los melanomas. Solo surtiran efecto en los pacientes que portan las
mutaciones pero, en la mitad de los casos,
dan lugar a una disminucin importante y
rpida del nmero de clulas tumorales.

BOB CRAIG, CDC (carcinoma); MONA SARAIYA, CDC; CARL WASHINGTON,


FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD EMORY (melanoma)

Los tumores cutneos

T C N I CA S A NA L T I CA S

Visualizar las lesiones


de ADN
Al absorber los rayos ultravioleta, el ADN puede romperse u oxidarse y sufrir daos: sus bases se fusionan y forman fotoproductos. Se han desarrollado numerosas estrategias para observar
estas lesiones.
La ms frecuente se basa en la utilizacin de anticuerpos
(molculas del sistema inmunitario) que reconocen los fotoproductos: se inyecta el ADN irradiado y, por tanto, daado en
conejos, de manera que su sistema inmunitario produce anticuerpos dirigidos contra las lesiones del ADN que no reconoce.
A continuacin, se extraen los anticuerpos de la sangre de los
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o menor intensidad sobre el ADN de las clulas, en funcin de
la cantidad de fotoproductos. De esta forma se visualizan los
daos en las quemaduras de la piel.
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se trata el ADN para que pueda ser cortado en los lugares que
contienen lesiones. A continuacin, mediante cromatografa se
visualizan los fragmentos separados en un gel. Acoplando esta
estrategia con la tcnica de PCR (reaccin en cadena de la polimerasa), que replica los fragmentos de ADN un nmero muy
elevado de veces, se determina la posicin de los fotoproductos
en un gen.
"DDy``Dxx`D`D`DD`xDDxnes despus de haberlas separado del ADN. Para ello, se acopla un aparato de cromatografa lquida con un espectrmetro
de masas (fotografajlxlx`D`DjxDj
todos los dmeros y una decena de productos de oxidacin.

en todos los tipos celulares. Adems, al contrario de lo que sucede con los UVB, la piel protege poco contra la formacin de
dmeros asociada a los UVA, ya que la melanina absorbe menos
estos rayos.
El ADN de las clulas expuestas a rayos UVA presenta por
tanto una fotoqumica singular: la absorcin de esos fotones
por el cido nucleico, aunque dbil, genera numerosos fotoproductos. La distinta naturaleza de los daos causados por los
UVA y los UVB se debera as a la diferencia entre los estados
excitados iniciales del ADN.
LAS CREMAS SOLARES

Los resultados expuestos poseen una especial relevancia. Aungk[bW\ehcWY_dZ[Zc[heifehbeiKL7h[ikbj[c[dei[Y_[dte que la derivada de los UVB, la predominancia de los primeros en la luz solar que nos alcanza hace pensar que una fraccin
nada despreciable de los fotoproductos mutagnicos proviene
de esa regin del espectro. Los datos subrayan tambin las propiedades genotxicas de los UVA, que pueden originar mutaciones e incluso cncer.
El riesgo cancergeno de los UVA y su importante contribucin al envejecimiento cutneo han llevado a los legisladores a
imponer en las cremas solares que se comercializan una fotoproteccin contra esa regin del espectro solar. La comprensin
del poder cancergeno de los UVA ha dado lugar a otro cambio:
el Centro Internacional de Investigaciones sobre el Cncer ha
incluido en la lista de agentes cancergenos los equipos de bronY[WZeWhj_Y_WbYedKL7$;b?dij_jkjeDWY_edWbZ[b9|dY[h[d
<hWdY_Wh[jec[iWYbWi_YWY_dofkXb_Y[d(&'&kd_d\ehc[
sobre esa cuestin.
Los trabajos realizados en los ltimos treinta aos han arrojado una nueva luz sobre el papel de los daos del ADN en la
aparicin del cncer de piel. Los resultados han permitido comprender mejor la reaccin de las clulas ante los rayos ultravioleta y perfeccionar las estrategias de proteccin contra este agente mutagnico presente en la radiacin solar.
Sin embargo, an quedan abiertas numerosas cuestiones relacionadas con la formacin de tales lesiones. As, los fotoproductos funcionaran como sensores que desencadenaran el
bronceado y conferiran mayor proteccin a la piel (aunque todava no se sabe cmo). Su presencia tambin estara relacionada con la modulacin de las defensas inmunitarias y con la
aparicin de las quemaduras solares. Tras la primera descripcin de los dmeros de timina, hace ya medio siglo, los daos
causados en el ADN por las radiaciones ultravioleta todava meh[Y[dbWWj[dY_dZ[Y_[djYeiZ[jeZWibWiZ_iY_fb_dWi$

JAMES GATHANY; CDC/SUSAN M C CLURE

Pour la Science

gunos datos dispersos ya haban apuntado en ese sentido; pero


nuestros equipos lo corroboraron a mediados del decenio de
2000 al demostrar que los UVA daban lugar a una mayor frecuencia de dmeros que de productos de oxidacin.
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los dmeros de pirimidina intervienen en la aparicin de mutaciones en clulas humanas expuestas a rayos UVA. Nuestros
equipos han demostrado tambin que la proporcin de los dil[hiei\ejefheZkYjeiZ_ch_YeiZ_[h[Z[bWeXj[d_ZWYedbei
UVB: no se observan fotoproductos de tipo (6-4) y se forman
muy pocos dmeros de citosina; la gran mayora corresponde a
dmeros de timina, y los dmeros timina-citosina representan
apenas el diez por ciento del total. Estas proporciones aparecen

PA R A S A B E R M S

3yyymDymmDDy`yD% myyymUy`yDD
D`Dym% yDyy J.-L. Ravanat et al. en Biological Chemistry, vol. 385,
pgs. 17-20, 2004.
`UDymymyDyymD% yyD
yym7< DmD S. Mouret et al. en Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, vol. 103, pgs. 13.765-13.770, 2006.
7< m`ym``UDymymy% iDmy``y`Dy`D
nism? S. Mouret et al. en Organic & Biomolecular Chemistry, vol. 8, pgs. 1706-1711, 2010.

DyDyD`yy`yyDmD``UDymyDm`ym
DU7< DmDU% A. Banyasz et al. en Journal of the American Chemical
Society, vol. 133, pgs. 5163-5165, 2011.

Agosto 2012, InvestigacionyCiencia.es 43