Thirty-eight laboratories indicated their interest to participate in this study, representing

regulatory agencies, commercial production facilities, private analytical laboratories, and

food research institutes. Prior to commencement of the study, each collaborator received a
detailed procedure to allow familiarization with the technique and an opportunity to
communicate any difficulties.
Tiga puluh delapan laboratorium berpartisipasi dalam penelitian ini, mewakili lembaga
regulator, fasilitas produksi komersial, laboratorium analitis swasta, dan lembaga penelitian
makanan.
Eight homogenous samples were selected and distributed as blind duplicates (16 coded
unknowns in total) containing vitamin K1 concentrations of between 2 and 150 mg/100 g
total solids. These consisted of one unfortified goat milk powder, one unfortified liquid
ultrahigh temperature (UHT) milk, and 6 infant formula powders. Of the latter, one was soyabased, one was the NIST SRM 1846, and the remaining 4 were based on casein/whey-protein
modified bovine milk of varying composition. The formulas were fully vitaminized, and
bovine milkfat was wholly or partially replaced with vegetable oils. Samples containing
natural levels of vitamin K1 were identified because they required a dilution variation during
work-up.
Delapan sampel homogen dipilih dan didistribusikan sebagai blind duplicate, mengandung
vitamin K1 dengan konsentrasi antara 2 dan 150 mg/100 g total solid. Terdiri dari satu bubuk
susu kambing yang difortifikasi, susu one unfortified liquid ultrahigh temperature (UHT),
dan 6 bubuk formula bayi. Yang kedua, adalah soya-based, yang lainnya adalah SRM NIST
1846, dan 4 sisanya didasarkan pada kasein / whey protein susu sapi yang dimodifikasi
dengan berbagai komposisi. Formulanya divitaminasi, dan lemak susu sapi (bovine milkfat)
diganti dengan minyak nabati. Sampel yang mengandung kadar alami vitamin K 1
diidentifikasi karena mereka membutuhkan variasi pengenceran.
Previous studies had demonstrated stability of vitamin K in milk powders, conditional on
appropriate storage conditions (cool, dry, and dark) and completion of the analysis within the
recommended time (6 months). Samples were dispatched by airmail, in multi-laminated
sealed sachets (powders), or tetrapak cartons (liquids), along with an N2 flushed amber vial
containing ca 150 mg USP grade phylloquinone to facilitate consistent between laboratory
calibration. However, participants were permitted to use their own vitamin K standard, if
preferred.
Penelitian sebelumnya telah menunjukkan stabilitas vitamin K dalam bubuk susu, tergantung
pada kondisi penyimpanan yang sesuai (sejuk, kering, dan gelap) dan penyelesaian analisis
dalam waktu yang disarankan (6 bulan). Sampel dikirim dengan pos udara, dalam multidilaminasi disegel sachet (bubuk), atau karton tetrapak (cairan), bersama dengan N2
memerah kuning botol berisi ca 150 mg phylloquinone USP kelas untuk memfasilitasi
konsisten antara laboratorium kalibrasi. Namun, peserta diizinkan untuk menggunakan
mereka sendiri vitamin K standar, jika disukai.
Upon completion of the analyses, each collaborator reported results on an as-is basis
accompanied by calibration regression parameters and a description of any method
deviations. The Associate Referees (ARs) evaluated submitted chromatograms and
calculations and corresponded with participants where clarification was necessary.

Setelah menyelesaikan analisis, para kolaborator melaporkan hasil secara "apa adanya"
disertai dengan parameter regresi kalibrasi dan deskripsi dari setiap penyimpangan metode.
The Associate Referees (ARS) mengevaluasi kromatogram dan perhitungan dan
berkorespondensi dengan peserta karena klarifikasi yang diperlukan.
999.15 Determination of Vitamin K in Milk and
Infant Formulas by Liquid Chromatography
First Action 1999
Application
Total vitamin K1 (phylloquinone) in infant formula and milk (fluid, ready-to-feed, and
powdered). Applicable to samples containing > 1 mg vitamin K1/100 g solids.
aplikasi
Jumlah vitamin K1 (phylloquinone) dalam susu formula dan susu (cairan, siap saji, dan
bubuk). Berlaku untuk sampel yang mengandung > 1 mg vitamin K1/100 g solid.
Caution: Observe standard precautions with hexane and dichloromethane and avoid
inhalation of solvent vapor. Rigorous anhydrous LC eluent conditions are required and
avoidance of skin contact with zinc dust is advocated.
Perhatian: Amati tindakan pencegahan standar dengan heksan dan diklorometana dan
menghindari menghirup uap pelarut. Ketat anhidrat LC kondisi eluen yang diperlukan dan
menghindari kontak kulit dengan debu seng dianjurkan.
Method Performance
See Table 999.15 for method performance data.
A. Principle
Following enzymatic digestion of fat and precipitation of fatty acids, vitamin K is extracted
with hexane. LC coupled with post-column reduction and fluorescence detection completes
the analysis, with quantitation by the external standard technique. Phylloquinone geometric
isomers are quantitated either as a single unresolved peak with a C18, or may be estimated
selectively with a C30 column (ktrans<kcis), under the reversed-phase conditions used.
A. Prinsip
Setelah pencernaan enzimatik lemak dan persipitasi dari asam lemak, vitamin K diekstraksi
dengan heksana. LC ditambah dengan post-column reduction dan deteksi fluoresensi, dengan
kuantisasi dengan teknik standar eksternal. Phylloquinone isomer geometrik yang kuantitatif
menilai baik sebagai puncak terselesaikan tunggal dengan C18, atau dapat diperkirakan
selektif dengan kolom C30 (k trans <k cis ), di bawah fase terbalik kondisi yang
digunakan.
Note: Menaquinone-4 (MK-4) will also be present in milk and infant formulas incorporating
milk fat, whereas 2,3-dihydrophylloquinone may be present at appreciable levels in infant
formulas containing hydrogenated soya or canola oils. If required, both may be estimated
against appropriate standards. The order of elution is MK-4 < K1 < 2,3-dihydroK1
(relative retention times ~ 0.6, 1.0, and 1.2, respectively).

Catatan: menaquinone-4 (MK-4) juga akan hadir dalam susu formula bayi dan
menggabungkan lemak susu, sedangkan 2 , 3 -dihydrophylloquinone dapat hadir pada
tingkat yang cukup dalam formula bayi yang mengandung kedelai terhidrogenasi atau
minyak canola. Jika diperlukan, baik dapat diperkirakan terhadap standar yang sesuai. Urutan
elusi adalah MK-4 <K1 <2 , 3 -dihydroK1 (waktu retensi relatif ~ 0,6, 1,0, dan 1,2,
masing-masing).
B. Apparatus
(a) HPLC system.Manual or automated isocratic system incorporating a fluorescence
detector (8ex 243 nm, 8em 430 nm) exhibiting a Raman spectra signal:noise specification of
>200:1 (water). BecauseUVdetection is insensitive to vitamin K at the concentrations
achieved in the protocol, configuration with single-mode fluorescence detection only is
recommended to minimize extra-column band-broadening. For multi-detector LCs, configure
with the fluorescence detector in the first position. Ensure the absence of leaks.
B.
Aparatur
(a) HPLC sistem isokratik system.-Manual atau otomatis menggabungkan detektor
fluoresensi (243 nm 8EX, 8em 430 nm) menunjukkan sinyal spektrum Raman: noise
spesifikasi> 200:1 (air). BecauseUVdetection tidak sensitif terhadap vitamin K pada
konsentrasi dicapai dalam protokol, konfigurasi dengan single-mode deteksi fluoresensi
hanya dianjurkan untuk meminimalkan ekstra-kolom band-memperluas. Untuk multi-detektor
LC, mengkonfigurasi dengan detektor fluoresensi di posisi pertama. Memastikan tidak
adanya kebocoran.
(b) Column.Any C18 column (monomeric or polymeric) containing 5 mm spherical
particle silica with $10% carbonloading, preceded by a guard column of similar packing.
(b) Column.-Setiap kolom C18 (monomer atau polimer) yang mengandung silika 5 mm
partikel bola dengan $ 10% carbonloading, diawali dengan kolom penjaga kemasan serupa.
(c) Post-column reductor.20 4 mm stainless steel post-column assembly configured
between analytical column and fluorescence detector, Part No. WAT084550 (Waters, Milford,
MA), or equivalent. Alternative devices, such as an empty (3050 mm) LC column can be
used.
(c) Pasca-kolom reductor.-20 '4 mm baja perakitan pasca-kolom stainless dikonfigurasi antara
kolom analitis dan detektor fluoresensi, Bagian No WAT084550 (Waters, Milford, MA), atau
setara. Perangkat alternatif, seperti kolom (30-50 mm) kosong LC dapat digunakan.
(d) Spectrophotometer.UV/Vis spectrophotometer, digital readout to 0.001 au.
(e) Water bath.37 1C.
(f) Centrifuge.Fixed or swing-arm rotor.
(g) Mechanical shaker.Orbital or wrist-action.
(h) Vortex mixer.
(i) pH meter.Accurate to 0.01 pH, with calibration buffers.
(j) Test tubes.200 24mmwith ground-glass stoppers.
(k) Vials.Amber-tinted glass vials (1.8 and 8.0 mL), with teflon sealed caps.
(l) Volumetric flasks.Low-actinic volumetric flasks (100.0 mL).
C. Reagents
Use AR grade reagents unless otherwise stated.

(a) Water.Purified to >16 MS resistivity.

(b) Nitrogen.Cylinder nitrogen (low oxygen content).
(c) Lipase.From Candida rugosa, ca 1000 units/mg (Type VII, Sigma L-1754, St. Louis,
MO). Other sources of lipase may be used from Pseudomonas and Rhizopus species. Ensure
that the correct activity of enzyme is used.
(d) Monobasic potassium phosphate (KH2PO4).
(e) Potassium hydroxide solution (40% w/v).Dissolve
40 g potassium hydroxide, (j), in water, and fill to 100 mL.
(f) Phosphate buffer (0.8M).Weigh 54.0 g KH2PO4,
(d), and dissolve in 350 mL water. Adjust pH to 7.98.0 with
potassium hydroxide solution (40%; e), and fill to 500 mL.
(g) Ethanol.
(h) Methanol (LC grade).
(i) Reagent alcohol.Mix ethanol, (g),methanol, (h;
95 + 5, v/v).
(j) Potassium hydroxide.
(k) Zinc chloride.
(l) Sodium acetate (anhydrous).
(m) Acetic acid (glacial).
(n) Potassium carbonate (anhydrous).
(o) Zinc powder.<60 mm, e.g., Merck (Poole, Dorset,
UK) 108774 and BDH 102964L.
(p) Hexane (LC grade).
(q) Dichloromethane (LC grade).
(r) Isopropanol (LC grade).
(s) Mobile phase.To dichloromethane, (q),methanol, (h; 100 + 900, v/v), add 5 mL
methanol containing zinc chloride (1.37 g; k), anhydrous sodium acetate (0.41 g; l), and
glacial acetic acid (0.30 g;m). Filter through 0.45 mmand degas.
) Handphone phase.-Untuk diklorometan, (q),-metanol, (h, 100 + 900, v / v), tambahkan 5
mL metanol yang mengandung seng klorida (1,37 g; k), natrium asetat anhidrat (0,41 g; l) ,
dan asam asetat glasial (0.30 g, m). Menyaring melalui 0,45 mmand degas
(t) Zinc post-column reductor .Dry-pack the 20 4mm assembly with zinc powder, (o).
Minimize voids by sequentially adding small amounts with frequent gentle tapping. If using
longer columns, this process must be performed with extra care. Re-prepare the reductor
column before each analytical schedule.
Zinc pasca-kolom reduktor.-Kering-pak 20 '4 perakitan mm dengan bubuk seng, (o).
Minimalkan void dengan berurutan menambahkan jumlah kecil dengan penyadapan lembut
sering. Jika menggunakan kolom lagi, proses ini harus dilakukan dengan ekstra hati-hati. Resiapkan kolom reduktor sebelum setiap jadwal analitis.
(u) Vitamin K1 (phylloquinone).USP grade (Serva 38360 or equivalent). All operations
must be conducted under low incandescent light conditions and in low-actinic volumetric
flasks.
Vitamin K1 (phylloquinone)-USP. Kelas (Serva 38.360 atau setara). Semua operasi harus
dilakukan di bawah kondisi cahaya rendah pijar dan rendah actinic labu volumetrik.

(1) Stock (ca 1.0 mg/mL).Dissolve ~100 mg (weighed accurately) in isopropanol (100.0
mL; r; warming at ~30C and standing will aid complete dissolution). Store under nitrogen,
(b), at 10C for up to 6 months.
Saham (ca 1,0 mg / mL)-Larutkan. ~ 100 mg (ditimbang secara akurat) di isopropanol (100,0
mL; r, pemanasan pada ~ 30 C dan berdiri akan membantu pembubaran lengkap). Toko di
bawah nitrogen, (b), pada suhu -10 C hingga 6 bulan.
(2) Intermediate I (ca 50 mg/mL).Dilute 5.0 mL stock with methanol to 100.0 mL and store
under nitrogen at 10C for up to 1 month.
Menengah I (ca 50 mg / mL)-Encerkan. 5.0 mL saham dengan metanol 100,0 mL dan toko di
bawah nitrogen pada -10 C sampai 1 bulan.
(3) Intermediate II (ca 2.5 mg/mL).Dilute 5.0 mL Intermediate I with methanol to 100.0
mL. Prepare daily.
Menengah II (ca 2,5 mg / mL)-Encerkan. 5,0 mL Menengah I dengan metanol 100,0 mL.
Siapkan hari.
(4) Working standards (ca 6.25, 12.50, 18.75, 25.00, and 31.25 ng/mL).Dilute 0.25, 0.50,
0.75, 1.00, and 1.25 mL, respectively, Intermediate II with methanol,
(h), to 100.0 mL. Prepare daily and calculate accurate concentrations as described below.
Accurate concentrations for the working standards are calculated after estimation of
phylloquinone purity from the absorbance (248 nm) of a solution prepared by evaporating
5.00 mL Intermediate I under nitrogen flow, and re-dissolving in 25.0 mL hexane (E1% =
419): Theoretical Abs248 =
W
100
0,75, 1,00, dan 1,25 mL, masing-masing, Menengah II dengan metanol,
(h), sampai 100,0 mL. Siapkan harian dan menghitung konsentrasi akurat seperti yang
dijelaskan di bawah ini. Konsentrasi yang akurat untuk standar kerja dihitung setelah estimasi
kemurnian phylloquinone dari absorbansi (248 nm) dari solusi yang disiapkan oleh
penguapan 5,00 mL Menengah I dibawah aliran nitrogen, dan re-dilarutkan dalam 25,0 mL
heksana (E1% = 419): Teoritis Abs248 = W 100
5
100
5
25
419 100
where W = weight of phylloquinone in stock standard (g).
Purity factor (PF) =
measured Abs
theoretical Abs
248
248
K1 in Intermediate II (mg/mL) =
PF
W
100
5
100
5
10

100
6
Accurate vitamin K1 concentrations in the 5 working standards
(ng/mL) are then calculated by multiplying this value by
2.5, 5.0, 7.5, 10.0, and 12.5, respectively.
D. Procedure
Perform all steps of assay under incandescent lighting in the absence of direct sunlight.
Lakukan semua langkah assay bawah lampu pijar dengan tidak adanya sinar matahari
langsung.
(a) Preparation of test sample.(1) Digestion.Weigh 1.0 g powder or 10.0 g liquid into
test tube. Include both reagent blank and quality control sample in each analytical schedule.
Dissolve powder in ca 15 mL warm water (<40C) with vortex (for liquids, add 5 mL warm
water). Add 5.0 mL phosphate buffer to each sample and mix. Add 1.0 g lipase powder and
vortex. Stopper securely and shake until well dispersed (3060 s). Incubate at 37 2C for
120 min. Shake each tube for 15 s at 20 min intervals. Cool to ambient temperature by
standing in water. Add 10 mL reagent alcohol and mix. Add 1.0 g potassium carbonate and
mix. (2) Extraction.(Note: Take precautions to prevent concentration of extracts through
uncontrolled solvent evaporation.) Add 30.0 mL hexane, stopper, and shake vigorously for
$10 min using mechanical shaker. Let stand in the dark, preferably refrigerated, until layers
separate. If this is slow (>10 min) or in complete, then centrifuge at ca 1000 rpm (ca 200 g)
for 10 min (decant portion of supernatant into smaller centrifuge tube if necessary). Transfer
1.00 mL (fortified samples) or 5.00 mL (nonfortified samples) of upper hexane phase into a
vial. Evaporate under nitrogen flow to dryness. (Note: Larger extract volumes may be
required, with the option of rotary evaporation, dependent on sensitivity of fluorescence
detector.) These dried extracts may be held for 35 days in the dark at <0C under nitrogen
prior to LC analysis. Re-dissolve residue in methanol (1.00 mL). Seal vial and vortex. If
using an autosampler, use a low volume vial (or insert) to minimize evaporation into
headspace.
Persiapan sampel uji - (1) Digestion.-Timbang 1,0 g bubuk atau cair 10,0 g dalam tabung
reaksi.. Sertakan baik kosong reagen dan sampel kontrol kualitas di setiap jadwal analitis.
Larutkan bubuk di ca 15 mL air hangat (<40 C) dengan vortex (untuk cairan, tambahkan 5
mL air hangat). Tambahkan 5.0 mL buffer fosfat untuk setiap sampel dan campuran.
Tambahkan 1,0 g bubuk lipase dan vortex. Stopper aman dan kocok sampai baik bubar (3060 s). Menetaskan pada 37 2 C selama 120 menit. Kocok setiap tabung selama 15 s pada
20 menit interval. Dinginkan sampai suhu kamar dengan berdiri di dalam air. Tambahkan 10
mL alkohol reagen dan campuran. Tambahkan 1,0 g kalium karbonat dan campuran. (2)
Ekstraksi - (Catatan:. Ambillah tindakan pencegahan untuk mencegah konsentrasi ekstrak
melalui penguapan pelarut yang tidak terkontrol). Tambahkan 30,0 mL heksana, stopper, dan
kocok kuat selama min $ 10 dengan menggunakan shaker mekanis. Diamkan dalam gelap,
sebaiknya didinginkan, sampai lapisan yang terpisah. Jika ini lambat (> 10 menit) atau
lengkap, kemudian disentrifus pada 1000 rpm ca (ca 200 g) selama 10 menit (bagian tuang
dari supernatan ke dalam tabung centrifuge kecil jika perlu). Mentransfer 1,00 mL (sampel
diperkaya) atau 5,00 mL (sampel nonfortified) fase heksana atas ke vial. Menguap di bawah
aliran nitrogen sampai kering. (Catatan: volume ekstrak yang lebih besar mungkin
diperlukan, dengan pilihan penguapan rotary, tergantung pada sensitivitas detektor
fluoresensi.) Ini ekstrak kering dapat berlangsung selama 3-5 hari dalam gelap di <0 C di
bawah nitrogen sebelum LC analisis . Re-melarutkan residu dalam metanol (1,00 mL). Seal

botol dan vortex. Jika menggunakan autosampler, gunakan botol volume rendah (atau
menyisipkan) untuk meminimalkan penguapan ke headspace.
(b) HPLC determination.(1) Set-up.Prior to connection of post-column zinc reductor
assembly, establish stable operating LC conditions over ~30 min through equilibration of
column with mobile phase (~1 mL/min) and set fluorescence detector to 8ex 243 nm and 8em
430 nm (gain and sensitivity will be detector-dependent). Install zinc reductor assembly
between analytical column and detector and equilibrate system for a further 3060 min,
ensuring absence of leaks (anhydrous LC eluent conditions are required to minimize loss of
reducing potential of zinc). Do not recycle mobile phase. Inject a standard (2050 mL) and
set flow rate to elute phylloquinone between 8 and 15 min, typically 1.01.5 mL/min
(retention may also be manipulated by modification of dichloromethane content in eluent
between 8 and 12%). Allow total run time of ~5 min beyond elution of K1. (2) Calibration
and analyses.Inject methanol (standard blank) and confirm absence of chromatographic
activity at kfor phylloquinone. Inject lowest level working standard and ensure repeatable
response, with signal:noise $10. Inject each working standard and ensure linear response.
Sequentially inject reagent blank and sample extracts and include a working standard after
every 46 samples to monitor system stability. When sample schedule is complete, flush
system with methanol. Store analytical column in methanol when not in use. Dismantle and
empty post-column assembly, soak in HCl (5M) to clean frits, and rinse thoroughly with
water and methanol. Dry thoroughly before re-packing with zinc.
Penentuan HPLC -. (1) Set-up.-Sebelum koneksi pasca-kolom perakitan reduktor seng,
membangun operasi kondisi stabil LC selama ~ 30 menit melalui ekuilibrasi kolom dengan
fase gerak (~ 1 mL / menit) dan mengatur detektor fluoresensi untuk 8EX 243 nm dan 430
nm 8em (gain dan sensitivitas akan detektor-dependent). Instal perakitan reduktor seng antara
kolom analitis dan detektor dan menyeimbangkan sistem untuk min 30-60 lanjut, memastikan
tidak adanya kebocoran (anhidrat LC kondisi eluen yang diperlukan untuk meminimalkan
kerugian
mengurangi potensi seng). Jangan mendaur ulang fase gerak. Menyuntikkan standar (20-50
mL) dan mengatur laju alir untuk mengelusi phylloquinone antara 8 dan 15 menit, biasanya
1,0-1,5 mL / menit (retensi juga dapat dimanipulasi oleh modifikasi konten diklorometana
dalam eluen antara 8 dan 12%). Berikan waktu menjalankan total ~ 5 menit di luar elusi K1.
(2) Kalibrasi dan analyses.-Inject metanol (kosong standar) dan mengkonfirmasi adanya
aktivitas kromatografi pada k untuk phylloquinone. Inject standar tingkat terendah bekerja
dan memastikan respon berulang, dengan sinyal: noise $ 10. Suntikkan setiap standar kerja
dan memastikan respon linier. Berurutan menyuntikkan kosong reagen dan ekstrak sampel
dan termasuk standar kerja setelah setiap 4-6 sampel untuk memantau stabilitas sistem.
Ketika jadwal sampel selesai, sistem flush dengan metanol. Simpan kolom analitis dalam
metanol saat tidak digunakan. Membongkar dan kosong pasca-kolom perakitan, rendam
dalam HCl (5M) untuk membersihkan frits, dan bilas sampai bersih dengan air dan metanol.
Kering benar sebelum kembali kemasan dengan seng.
(c) Calculation.Construct 5-level calibration using either peak area or height and calculate
slope (S) by linear regression with forced zero. Calculate vitamin K1 (cis- and trans-) content
in samples as follows:
Calculation.-Bina 5-tingkat kalibrasi baik menggunakan luas puncak atau tinggi dan
menghitung kemiringan (S) dengan regresi linier dengan nol paksa. Hitung vitamin K1 (cisdan trans-) konten dalam sampel sebagai berikut
Vitamin K1 (mg/100 g) =
A
S

30
V
100
Wt
1
1000
whereAsam = peak area (or height) of phylloquinone in sample extract; Wt = weight of
sample (g);V= volume, 1.0 mL (fortified) or 5.0 mL (nonfortified); S = slope of calibration
graph. The calibration/calculations may be achieved through data processing within the
instrument or off-line.

whereAsam = puncak daerah (atau tinggi) dari phylloquinone dalam ekstrak sampel, Wt =
berat sampel (g); V = volume, 1,0 mL (difortifikasi) atau 5,0 mL (nonfortified), S =
kemiringan grafik kalibrasi. Kalibrasi / perhitungan dapat dicapai melalui pengolahan data
dalam instrumen atau off-line.

Collaborators Comments
Several collaborators commented on the relatively poor solubility of phylloquinone in
methanol during preparation of the stock standard. This was confirmed as a legitimate
criticism and the method was modified by substituting isopropanol at this step in the
procedure.
Beberapa kolaborator mengomentari kelarutan relatif miskin phylloquinone dalam metanol
selama persiapan dari standar saham. Hal ini telah dikonfirmasi sebagai kritik yang sah dan
metode ini dimodifikasi dengan menggantikan isopropanol pada langkah ini dalam prosedur.
Several collaborators assumed that on-line data interpolation was based on a forced-zero
calibration regression. This is not always the case for automated PC-controlled LC systems
(as confirmed by ARs). It is therefore important to verify with off-line proprietary software
that appropriate data reduction is followed. Twenty-five of the collaborators used area
integration; the remaining 9 used peak height.
Beberapa kolaborator diasumsikan bahwa on-line data interpolasi didasarkan pada regresi
kalibrasi paksa-nol. Hal ini tidak selalu terjadi untuk otomatis PC-dikendalikan sistem LC
(seperti ditegaskan oleh ARS). Oleh karena itu penting untuk memverifikasi dengan off-line
perangkat lunak berpemilik yang sesuai reduksi data diikuti. Dua puluh lima dari kolaborator
menggunakan integrasi wilayah, ketinggian 9 puncak tersisa digunakan.
Several dimensions of post-column zinc reductor column were applied, suggesting that this
parameter is not critical. One participant failed on 2 separate occasions to achieve reasonable
chromatographic response, which was directly attributable to the zinc used. The AR sent a
quantity of recommended material and the subsequent analysis was successful. A few

collaborators communicated initial problems related to the packing technique of the zinc
reductor and its equilibration, which were solved by instruction from the ARs.
Beberapa dimensi pasca-kolom kolom reduktor seng yang diterapkan, menunjukkan bahwa
parameter ini tidak begitu penting. Salah satu peserta gagal pada 2 kesempatan terpisah untuk
mencapai respon kromatografi wajar, yang secara langsung disebabkan oleh seng yang
digunakan. AR mengirimkan sejumlah bahan direkomendasikan dan analisis selanjutnya
berhasil. Sebuah kolaborator Beberapa dikomunikasikan masalah awal yang terkait dengan
teknik kemasan dari reduktor seng dan equilibrium, yang diselesaikan dengan instruksi dari
ARS.
There was a wide range of detector signal:noise between all participants, this variable being a
function of detector specifications and age. Both filter and dual monochromator detectors
were variously used. In 2 instances, there was significant uncertainty in the quantitative
estimation of the lowest calibration standards and samples and reintegration was necessary
with manual intervention to correctly establish a reasonable baseline.
Ada berbagai sinyal detektor: kebisingan antara semua peserta, variabel ini menjadi fungsi
dari spesifikasi detektor dan usia. Detektor monokromator Kedua filter dan ganda yang
digunakan berbagai. Pada 2 kasus, ada ketidakpastian yang signifikan dalam perkiraan
kuantitatif dari standar kalibrasi terendah dan sampel dan reintegrasi diperlukan dengan
intervensi manual untuk benar membangun dasar yang masuk akal
Two participants suggested incorporation of an internal standard, although the external
calibration procedure, as described, has proven successful, given the minimal manipulations
inherent in the protocol
Dua peserta menyarankan penggabungan standar internal, meskipun prosedur kalibrasi
eksternal, seperti yang dijelaskan, telah terbukti berhasil, mengingat manipulasi minimal
melekat dalam protokol
A few laboratories used an alternative lipase source (e.g., Pseudomonas fluorescens vs
Candida rugosa) without problems.
Sebuah beberapa laboratorium menggunakan sumber
Pseudomonas fluorescens vs C.rugosa) tanpa masalah

lipase

alternatif

(misalnya,

Method Deviations
Because the interlaboratory study is a test of the method, adherence to the specified protocol
is a prerequisite. When methodological deviations are reported by collaborators, the ARs
must judge the degree to which they may compromise the integrity of the study, although
method ruggedness is arguably a tangible benefit.
Karena studi antar laboratorium adalah uji metode, kepatuhan terhadap protokol tertentu
merupakan prasyarat. Ketika penyimpangan metodologis dilaporkan oleh kolaborator, para
ARS harus menilai sejauh mana mereka dapat mengganggu integritas penelitian, meskipun
kekasaran Metode ini bisa dibilang manfaat yang nyata.
Several deviations of varying degree were reported in this study. One collaborator substituted
isopropanol for methanol for all standards and sample extracts. Three laboratories used a
narrow-bore column (3 mm), which emphasized the importance of minimizing extra-column

band spreading. Only 2 participants used other than 5 mm particle size LC columns. Three
laboratories used a mixture of zinc and C18 phase, evidently to avoid agglomeration, and also
selected glass as reductor column material.
Beberapa penyimpangan dari berbagai gelar yang dilaporkan dalam penelitian ini. Salah satu
kolaborator diganti isopropanol untuk metanol untuk semua standar dan ekstrak sampel. Tiga
laboratorium menggunakan kolom sempit-bore (3 mm), yang menekankan pentingnya
meminimalkan extra-kolom band yang menyebar. Hanya 2 peserta digunakan selain 5 mm
partikel ukuran kolom LC. Tiga laboratorium menggunakan campuran fase seng dan C18,
jelas untuk menghindari aglomerasi, dan juga dipilih kaca sebagai bahan reduktor kolom
Several laboratories adjusted sample weights and recovered volumes of hexane extract at
variance from the prescribed method protocol, either to compensate for relative detector
insensitivity, or to accommodate available laboratory glassware. However, only one
represented a major protocol deviation through processing the entire 30 mL hexane extract,
hence significantly exceeding the calibration range. One other participant erroneously diluted
the ZnCl2 elecrolyte solu tion 200. Nevertheless, both submitted comparable results,
suggesting that these factors are noncritical, and neither were removed from the data set
beberapa laboratorium disesuaikan bobot sampel dan volume pulih dari ekstrak heksana pada
varians dari protokol metode prosedur, baik untuk mengimbangi ketidakpekaan relatif
detektor, atau untuk mengakomodasi gelas laboratorium yang tersedia. Namun, hanya satu
mewakili penyimpangan protokol utama melalui pengolahan ekstrak heksana 30 seluruh mL,
maka secara signifikan melebihi rentang kalibrasi. Satu peserta lain keliru diencerkan dengan
ZnCl2 elecrolyte tion solusi 200 '. Namun demikian, keduanya mengajukan hasil yang
sebanding, menunjukkan bahwa faktor-faktor tersebut nonkritis, dan tidak dikeluarkan dari
kumpulan data
One collaborator (laboratory 38) evaluated and implemented the polymeric C30 (YMC Inc.,
Wilmington, NC) in preference to a C18 column. This facilitated the separation of cis and
trans phylloquinone isomers (R > 1.5), which for this study were aggregated when reporting
Salah satu kolaborator (laboratorium 38) dievaluasi dan menerapkan C30 polimer (YMC Inc,
Wilmington, NC) dalam preferensi untuk kolom C18. Ini memfasilitasi pemisahan cis dan
trans phylloquinone isomer (R> 1,5), yang untuk studi ini dikumpulkan ketika melaporkan