La separacin mediante cromatografa sobre papel de los pigmentos

fotosintticos en general y de los de la espinaca en particular, frecuentemente

es explicada en base a sus diferencias de solubilidad. Esta incorreccin, junto a
la percepcin de una metodologa considerada como una autntica y pura
particin entre dos fases lquidas inmiscibles, pone de manifiesto la necesidad
de analizar y esclarecer el complejo entramado conceptual que subyace tras la
aparente sencillez de esta clsica prctica de laboratorio.
Los cloroplastos de las plantas contienen siempre varios pigmentos: clorofila a,
clorofila b algunas xantofilas y carotinas. Todos esos pigmentos son insolubles
en agua pero se disuelven fcilmente en algunos solventes orgnicos, como
ciertos alcoholes, acetona, benzol, cloroformo, ter, etc.
Las xantofilas tiene un color amarillento u ocre, las carotinas son
principalmente anaranjadas, la clorofila a es verde azulada y la clorofila b
amarillenta. Existen varias plantas que contiene solamente clorofila a, como las
algas azules, las ditomeas, las algas rojas y pardas, y tambin una arquidea
saprofita. Sin embargo, muchas de las algas mencionadas contienen plastidios
pigmentos adicinales, tales como otras clorofilas (c, d, e), fucoxantina
(amarillo pardo), ficoeritrina (rojizo) y ficocianino (azulado) que comunican sus
respectivos colores a las algas.
Cuando los cloroplatos pierden parte de su contenido de clorofilas predominan
pigmentos amarillentos, causando un cambio de coloracin, tal como ocurre
durante la maduracin de muchos frutos o con las hojas al envejecer, al
transformarse los cloroplastos en cromoplastos. Lo mismo ocurre cuando se
coloca una planta verde durante algn tiempo en la obscuridad lo que
comprueba que, con algunas excepciones, la luz es esencial en la formacin y
el mantenimiento de la clorofila en las plantas.
Los carotenoides (carotinas y xantofilas) solamente absorben en la parte
verde-azul y violeta del espectro visible, mientras que las clorofilas tiene dos
mximo de absorcin, una parte roja y otro en la parte azul (clorofila a
aproximadamente 660 m y 430 m; clorofila b 645 m y 445 m). Estas
ltimas muestran fluorescencia marcada emitiendo un rojo intenso.
La fluorescencia se debe a la reemisin de luz, para lo cual se utiliza energa
electromagntica de onda ms corta, que es transformada en luz de mayor
longitud de onda pero de menor energa.
Las clorofilas son poco estables en vitro, especialmente bajo iluminacin
intensa. El tomo central, el magnesio, es fcilmente reemplazado tanto por
hidrogeno, dando lugar a las feofitinas respectivas, pigmentos de color pardoolivo, como tambin por cobre, lo que imparte un color verde azulado muy
estable.

Al iluminar un extracto alcohlico crudo de pigmentos con un haz de luz fuerte

se nota claramente la fluorescencia. La cromatografa sobre papel de extracto
alcohlico permite reconocer fcilmente la presencia de pigmentos
amarillentos y verdes. Las carotinas migran con igual velocidad del solvente
mientras las clorofilas se quedan atrs. Utilizando las pequeas diferencias con
respecto a la solubilidad en solventes orgnicos diferentes contenidos de agua,
se trato de separar los pigmentos. La molcula intacta tanto la de clorofila a
como la de la b, es insoluble en agua, pero al saponificarla (hidrolizar el ester)
en clorofilina, alcohol metlico y fitol (tambin un alcohol), los dos grupos
carboxil de la clorofilina permiten la disolucin del agua. Tambin se demostr
la facilidad de la sustitucin del tomo central por hidrogeno y cobre
Mller, Ludwig E. (1964). Manual de laboratorio de fisiologa vegetal. Instituto
Interamericano de Ciencias Agrcolas de la O. E. A. Editorial Servicio de
Intercambio Cientfico (SIC). Turrialba, Costa Rica.