CULTIVO DE CHLAMYDOMONAS

El presente trabajo tiene como objetivo dar a conocer los aspectos generales del cultivo de
Chlamydomonas reinharditti. Se proporciona informacin sobre las caractersticas
biolgicas de la especie, condiciones de cultivo, anlisis del alga, usos y produccin
mundial.
La especie Chlamydomonas reinhardtii (DANGEARD, 1899) es una micro alga, se
encuentra dentro de la clasificacin Chlorophyceae (algas verdes), en el grupo de las
Chlamydomonadales. Habita principalmente en estanques naturales de agua dulce o
salobre, en todo tipo de suelos, en las chimeneas termales submarinas e incluso bajo la capa
de hielo antrtica, que al ser inducida a desarrollarse en condiciones anaerobias rompen la
molcula de agua en oxgeno e hidrgeno, aprovechando para su respiracin al oxgeno y
liberando al gas hidrgeno al medio de cultivo. Tambin pueden crecer en la oscuridad
total, con una fuente de carbono alternativa, tal como acetato, es de naturaleza adaptable.
Cuenta con un sistema fotosinttico similar al de las plantas y tienen la capacidad de
producir hidrgeno usando el dixido de carbono, la luz del sol como fuente de energa, y
el agua como donante de electrn, sin embargo tambin influyen diversos parmetros tales
como, el desarrollo microalgal, el cual est estrechamente relacionado con la intensidad de
luz y la temperatura.
Chlamydomonas es un gran gnero de flagelados unicelulares, mviles. Las clulas tienen
una pared glicoprotena y dos flagelos iguales.
El ncleo est encerrado en un cloroplasto en forma de copa, que tiene un nico pirenoide
donde se forma el almidn de los productos fotosintticos. Presenta dos pequeas vacuolas
contrctiles, que tienen una funcin excretora, se encuentran cerca de los flagelos.
Tambin hay un punto rojo pigmento que es sensible a la luz, lo que permite a la clula a
nadar hacia la luz. Hay una gran variacin en la reproduccin de las diferentes especies del
gnero, y estudios recientes sugieren que varios gneros estn involucrados.
Hay dos tipos de ciclo dentro de la historia de vida: uno asexual y sexual. Por lo general, la
reproduccin asexual es por fisin (divisin en fragmentos de fisin como nuclear), el
protoplasto dividir para formar 4-8 zoosporas similares a la de los padres. En el ciclo
sexual, la privacin comn nitrogenada induce a las clulas para formar isogametos, que se
fusionan en parejas, formando un zigoto; el zigoto con una dotacin cromosmica (2n), este
pierde sus flagelos y forma una pared gruesa que es resistente a condiciones adversas;

cuando las condiciones son ms favorables el zigoto sufre meiosis para formar 4 zoosporas
haploides.
En un medio de cultivo esta puede crecer en un medio sencillo de sales inorgnicas,
utilizando la luz para proporcionar energa.
Es capaz de desarrollarse mixotrficamente; es decir, de forma auttrofa (puede producir su
propio alimento) o hetertrofa (obtiene su alimento de fuentes externas)
La toxicidad de estas es debida a la liberacin de algunos cidos grasos, presentan elevadas
productividades lipdicas que
son deseables para la
Clasificacin cientfica
produccin de biodiesel.
Reino:
Protista
Divisin:

Chlorophyta

Clase:

Chlorophyceae

Orden:

Volvocales

Familia:

Chlamydomonadaceae

Gnero:

Chlamydomonas

Especie:

Chlamydomona reinhardtii
.DANGEAR.(1899)

(Chlamydomona reinhardtii)

MEDIO DE CULTIVO
Los medios ms utilizados para el desarrollo microalgal, se encuentra el medio Sueoka
(Hight Salt Mdium) rico en sales de NH4 Cl, CaCl2 y MgSO4, tambin se encuentra el
medio TAP (Tris-Acetate-Phosphate) rico en fosfato, siendo este el ms recomendado por
diferentes bibliografas consultadas.
MTODO DE CULTIVO

Experimentalmente se lleva a cabo el proceso para el cultivo de Chlamydomonas de la

siguiente manera:
Las mejores condiciones de crecimiento en este estudio para las microalgas C. reinhardtii
son en medio de cultivo Sueoka, iluminancia de 160 Em-2s-2 y temperatura indistinta
entre 22 y 35C. Estos resultados son considerados en el diseo de un biorreactor para los
cultivos.
El equipo de trabajo ha estado estudiando algas unicelulares fotosintticas
(Chlamydomonas reinhardtii). Las algas han desarrollado dos tipos de fotosntesis, una de
las cuales produce hidrgeno en ambientes bajos en sulfuro. Este gas hidrgeno podra ser
cosechado desde un biorreactor, donde se concentre una gran cantidad de algas en cubas
selladas que generen hidrgeno cada vez que son baadas por la luz solar.
Pero los investigadores han encontrado algunos obstculos para continuar: el mayor
problema es que el alga es ineficiente capturando la luz solar, ya que un 90% de la luz que
capturan se emite hacia fuera en forma de calor o de fluorescencia. Hankamer y sus colegas
reportan que han interferido el ARN (cido ribonucleico) de las algas, para introducir una
modificacin que permita a las algas atrapar eficientemente la luz solar. Esto es interesante,
por cuanto ha logrado silenciar los genes responsables de la produccin de luz y emisin de
calor, abocando toda el alga a la produccin eficiente
de hidrgeno.
Las nuevas algas intervenidas genticamente slo
ocupan la luz que necesitan y no la malgastan
transformndola en calor o fluorescencia. Y como las
nuevas cepas slo ocupan unas pocas protenas en la
produccin de luz, el color que desprenden es ms
claro que el verde natural de su especie, lo que
tambin ayudar para que la luz penetre ms
profundamente al biorreactor.
Los investigadores aseguran que, adems, las algas intervenidas son ms resistentes a los
daos de la luz que las cepas naturales. Esto es importante porque con la misma cantidad de
luz, las algas pueden sobrevivir por ms tiempo y reproducirse ms, lo que con toda
seguridad generar ms produccin de hidrgeno.

Hankamer y sus colegas han patentado esta nueva cepa de la alga, y el siguiente paso es
incrementar la eficiencia en la captura de la luz: "tenemos que hacer ms eficiente el
proceso para hacerlo econmicamente viable" declara Hankamer.

DISEO DE UN FOTOBIORREACTOR
Existen diversos factores que influyen ampliamente en el cultivo de microalgas y
determinan el diseo del reactor a emplear. La baja densidad celular origina varios
inconvenientes, incluyendo baja productividad, fcil contaminacin, costosa recuperacin
del producto de medios diluidos y dificultad para el control de la temperatura en los
sistemas de cultivo cerrados.
Estos inconvenientes estimularon el desarrollo de fotobiorreactores construidos con
materiales transparentes como vidrio y policarbonato, entre otros materiales. Los primeros
FBR fueron propuestos por Gudin y Chaumont (1983), Pirt y col., (1983), y Torzillo y col.,
(1986). En la ltima dcada los foto birreactores tubulares y de placas planas han recibido
mucha atencin ya que permiten establecer cultivos de alta densidad celular, tres o ms
veces en comparacin con los sistemas convencionales. Enseguida se enlistan las
principales ventajas que ofrecen este tipo de cultivo de microalgas:
1. Facilidad para cosechar la biomasa.
2. Mantenimiento del cultivo sin contaminacin.
3. Mejor control de las condiciones de cultivo.
4. Menor inversin de capital en el fotobiorreactor.
Este ltimo factor es un elemento importante en el costo de produccin de productos
derivados de microalgas. Actualmente existen diversos tipos de fotobiorreactores
disponibles, entre los cuales se encuentran las columnas de burbujeo, los reactores airlift y
los tanques agitados, as como los de tipo tubular y cnico. Los FBR son generalmente
categorizados de acuerdo a su estructura y su produccin de biomasa, de los cuales los
tubulares, los de superficie plana (flat panel) y las columnas verticales son los ms
comunes.
Los fotobiorreactores de tipo tubular son el diseo ms sustentable para cultivos en
sistemas cerrados tienen un gran rea de iluminacin con una buena tasa de produccin de
biomasa y son relativamente econmicos puesto que son construidos en vidrio o plstico
(Pulz, 2001; Ugwu y col., 2008). El diseo de tipo flat-plate son generalmente construidos
con materiales transparentes con la finalidad de maximizar el empleo de la luz solar. Este
tipo de reactores permite una buena inmovilizacin de las micro algas y una sustentable

utilizacin de la energa, adems de un fcil mantenimiento y limpieza (Reyna-Velarde y

col., 2010). Los diseos de tipo columna vertical son compactos, econmicos y fciles de
operar, lo que los hace factibles al escalamiento (Ugwu y col., 2008). Otro diseo de
fotobiorreactores que cuenta con una amplia superficie de iluminacin es el denominado
flat-panel o fotobiorreactor de superficie plana, este tipo de diseo permite una mejor
trayectoria incidente de la luz en el cultivo facilitando los ciclos de luz-oscuridad,
aumentando la produccin de biomasa y otros compuestos en las micro algas, (Degen y
col., 2001).
Mezclado
Un correcto mezclado favorece el intercambio gaseoso, evita la sedimentacin celular, la
formacin de gradientes de las condiciones ambientales y de la concentracin de
nutrimentos; pero su funcin principal es permitir que todas las clulas puedan acceder a las
zonas iluminadas en un fotobiorreactor
Recomendaciones para el diseo de un FBR
Para el diseo de un fotobiorreactor en el que se desee una ptima produccin de biomasa
es necesario tomar en cuenta los siguientes aspectos, (Tsoglin y col., 1996):
1. La trayectoria de la luz debe ser pequea (no mayor a 2.5 cm).
2. Mantener una alta densidad celular (> 8 a 15 gramos de biomasa por litro de cultivo).
3. Evitar inhibicin del crecimiento por acumulacin de O2
PRODUCCIN ANUAL
La superficie necesaria para su cultivo es mucho menor: empleando aceite de colza se
producen alrededor de 1190 L biodiesel/ha de cultivo, mientras que en el caso de las algas
se pueden obtener hasta 12000 L/ha.
Se busca la factibilidad tcnica y econmica de la instalacin de una planta productora de
aceite de micro algas capaz de producir 100.000 toneladas de aceite anuales para la
produccin de biodiesel.

ANLISIS DEL ALGA

El gnero Chlamydomonas se consolido como un microorganismo modelo para el estudio
de diferentes aspectos biolgicos debido a su fcil cultivo, inocuidad, y la posibilidad de
desarrollarse autotrficamente o heterotrficamente.

-Producen lpidos especficos, hidrocarburos y otros aceites complejos (cidos grasos libres
o unidos al glicerol y sus derivados), lo que la hace ideal para la produccin de biodiesel,
combustibles alternos que sustituyen a los hidrocarburos como el petrleo.Las ventajas del
empleo de algas para la obtencin de biodiesel son principalmente las siguientes:
No compite en el mercado de productos de alimentacin.
La produccin no es estacional por dependencia con las cosechas.
El consumo de agua es menor
Eliminacin del empleo de herbicidas y pesticidas.
Su alta velocidad de crecimiento en comparacin con los cultivos tradicionales: la
productividad por unidad de superficie es entre 20 y 40 veces mayor en el caso de las algas.
Los principales problemas tcnicos de la obtencin de biodiesel a partir de microalgas
radican en la dificultad de la extraccin de los lpidos de las clulas. Estos procedimientos
son complejos y estn todava en fase de desarrollo. Los principales problemas econmicos
derivan por consecuente del alto precio de la tecnologa necesaria, as como del hecho que
compiten con precios de carburantes relativamente bajos.
-Se han realizado ensayos de seleccin e ingeniera gentica, en general en la especie
Chlamydomona reinhardtii para la produccin de pptidos nuevos, que sean funcional y
estructuralmente nuevos a su contraparte nativa. Debido a su rpida multiplicacin y a su
fcil manipulacin en un cultivo, el genoma presente en su cloroplasto que presenta un
arreglo en la expresin de sus genes, estos se organizan en operones y son coexpresados
para producir RNAs mensajeros policistronicos, lo que permite la transcripcin, estabilidad
y procesamiento del RNA. Generando copias de genes codificadas. (Lpez, 2014)
USOS
A nivel industrial, existe infraestructura desarrollada para explotar a estos organismos con
el fin de obtener diversos compuestos de inters biotecnolgico, por ejemplo pigmentos
como el beta-caroteno, con utilidad en la industria alimenticia y cosmtica, y los cidos
grasos, empleados en la industria alimentaria y de los biocombustibles.
Protenas recombinantes.
Recientemente, las microalgas verdes, y en particular la especie Chlamydomonas
reinhardtii, han surgido como una alternativa nueva y atractiva para la produccin de
protenas recombinantes, debido principalmente a su cultivo fcil y econmico, su gran
capacidad para acumular biomasa y a que son generalmente consideradas como inocuas
para el ser humano.

Las protenas recombinantes de uso mdico se pueden dividir en tres clases: anticuerpos
monoclonales, antgenos para vacunas y protenas teraputicas. Estas tres clases de
protenas han sido producidas de manera exitosa en el cloroplasto de plantas superiores, con
rendimientos que van del 6 al 16 por ciento. Recientemente ha surgido un inters especial
en la produccin de protenas recombinantes de inters mdico en el cloroplasto de
Chlamydomona reinhardtii, en el que ya se han producido varias de estas protenas. Con
respecto a protenas recombinantes de inters mdico a nivel nuclear en esta microalga,
slo se conoce la produccin de la protena eritropoyetina humana, con un rendimiento
aproximado de 100 microgramos por litro de cultivo. Cabe sealar que el mecanismo de
insercin del transgen en el ncleo se da al azar, lo que incrementa la posibilidad de
silenciamiento gnico, a diferencia del cloroplasto, donde la insercin se da de manera
dirigida en un sitio preciso mediante un proceso de recombinacin homloga. (Lpez,
2014)
Las microalgas presentan varias caractersticas ventajosas respecto a los sistemas
convencionales de produccin de protenas recombinantes, que las hacen muy atractivas
como birreactores: tiempo corto de produccin, bajo riesgo de patogenicidad (no se
conocen patgenos o toxinas que pudieran causar contaminacin en el producto final, como
en el caso de bacterias y clulas de mamferos), y se ha demostrado su capacidad para
sintetizar protenas complejas de origen humano.
Anticuerpos monoclonales.
En Chlamydomonas reinhardtii se ha logrado la produccin de anticuerpos monoclonales;
como ejemplo de ello tenemos el trabajo realizado por Mayfield y colaboradores (2003),
donde se logr exitosamente la produccin del anticuerpo monoclonal denominado HSV8lsc, el cual presenta actividad contra la glicoprotena D del virus del herpes simple.
En este trabajo se demostr la capacidad del cloroplasto de esta micro-alga para formar
correctamente puentes disulfuro en el interior de la estructura proteica, que son de gran
relevancia para la produccin de protenas recombinantes de origen eucarionte.
Tran y colaboradores (2009) lograron ensamblar el anticuerpo monoclonal 83K7C
(derivado de la IgG1 humana), que tendra aplicacin contra el ntrax, y que demostr una
actividad similar a los anticuerpos obtenidos en mamferos. Estos mismos autores
produjeron tres anticuerpos monoclonales ms en el cloroplasto de Chlamydomonas.
reinhardtii, confirmando su capacidad como biorreactor para producir este tipo de
anticuerpos, semejantes a aquellos producidos en otros sistemas eucariontes.
Toxicologa.

Las algas unicelulares pueden actuar como biosensores para mejorar el diseo de
nanomateriales. El alga Chlamydomonas reinhardtii es un detector de la toxicidad de las
nano partculas de plata. Las nano partculas de plata son uno de los nano materiales ms
usados: poseen propiedades bactericidas que las hacen muy tiles en la fabricacin de
muchos productos de consumo, desde textiles hasta material quirrgico y suplementos
alimentarios. Pero en la escala nanomtrica las pruebas toxicolgicas habituales pueden no
ser suficientes.
Agricultura
La microalga Chlamydomona renhartii tiene la capacidad de absorber el Nitrgeno
Amoniacal generado en la digestin de residuos orgnicos provenientes del sector
agroalimentario. Esta alga puede crecer en los citados lquidos y asimilar el amonio, lo que
evita que este gas se volatilice en forma de amonaco (NH3) y contamine la atmsfera.
La biomasa de microalgas obtenida en este procedimiento puede servir como materia
prima para la produccin de biogs o ser utilizada como alimento animal, composta o
fertilizante, adems de ser una fuente extraordinaria de lutena que es un poderoso
antioxidante y se utiliza como aditivo en alimentos.
El proceso de descomposicin de residuos agroalimentarios en condiciones de ausencia de
oxgeno produce efluentes que presentan un alto contenido de Nitrgeno Amoniacal,
concretamente entre 2 y 5 gramos por litro. Este residuo se genera de forma importante en
explotaciones ganaderas y plantas de biogs, entre otras instalaciones. Por tanto, resulta
fundamental encontrar mtodos adecuados para su gestin y evitar que el amonaco se
volatilice o que vaya a parar a los acuferos y aguas superficiales.

Vacunas
Se ha conseguido modificar cierta alga para producir candidatos potenciales para una
vacuna que prevendra la transmisin del parasito que causa la malaria ( o paludismo), un
logro que podra sentar bases para el desarrollo de una estrategia eficaz y barata de proteger
a millones de personas contra una de las enfermedades infecciosas graves ms comunes en
el mundo. Los experimentos iniciales de prueba de concepto sugieren que una vacuna
derivada de esa alga sera capaz de impedir la transmisin de la malaria.

Combustibles

Los cientficos han avanzado en la comprensin de la biologa de las Chlamydomonas

reinhardtii hasta convertirla en un prometedor mtodo para producir hidrgeno, un
combustible que podra sustituir a los derivados del petrleo.
CONCLUSIN
Chlamydomonas reinhardtii ha demostrado ser un organismo muy verstil que puede ser
usado tanto en estudios de ciencia bsica como en diversas aplicaciones biotecnolgicas, y
que es una alternativa muy atractiva para la produccin de diversos productos de uso diario
como es el biocombustibles, cosmticos, para uso farmacutico, recombinacin de
protenas etc. Presentan diversas propiedades qumicas y fsicas que permiten que esta
especie sea un medio factible para su produccin en laboratorios, lo que ha permitido la
realizacin de diversos estudios.
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