CROMATOGRAFA DE ADSORCIN

Para la tcnica de cromatografa de adsorcin en columna se emplean columnas

verticales de vidrio cerrada en su parte inferior con una llave que permita la
regulacin del flujo de la fase mvil. Las columnas se rellenan con un adsorbente,
como almina o gel deslice (fase estacionaria), mojado con el disolvente que se
vaya a emplear en el proceso cromatogrfico. En la parte superior de la columna
se pone la disolucin de la mezcla a separar y a continuacin un depsito que
contenga el eluyente (fase mvil) que se va a utilizar en la separacin. Se abre la
llave inferior de manera que el eluyente comience a bajar por la columna. En este
proceso, los componentes de la mezcla son adsorbidos por la fase estacionaria
con diferente intensidad, de manera que el proceso de adsorcin-desorcin hace
que unos componentes avancen ms rpidamente que otros. El lquido que sale
por la parte inferior de la columna se recoge de manera fraccionada. Si los
componentes de la mezcla avanzan a muy diferente velocidad se podrn obtener
fracciones cromatogrficas constituidas por un solo componente
En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en
base a la afinidad de las molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil. Si
una molcula A tiene ms afinidad por la fase estacionaria que la B, B bajar ms
rpido que A. Existen muchos tipos de cromatografa de columna. En el laboratorio
se usan tres tipos de ellas.
Filtracin en gel: En esta las molculas son separadas por su tamao.
Intercambio inico: Se usa para purificar protenas. Separa molculas en base a
su carga inica.
Fase inversa: Esta es una cromatografa de interaccin en la que la fase
estacionaria, con molculas hidrofbicas, interacta con molculas hidrofbicas en
la muestra.

B.- PREPARACIN DE LA COLUMNA:

1. Colocar un tapn de lana de vidrio o algodn en el extremo de la columna
2.Empacar cuidadosamente el azcar glass, aadiendo esta con un embudo,
cuidando de no forzar el empaque. La columna debe quedar de20cm
aproximadamente

C.- CORRIMIENTO DE LA MUESTRA:

1. La muestra se suspende con 0.5 ml de ter de petrleo

2. Usando la solucin suave. Introducir cuidadosamente la solucin de la muestra
en la columna con una pipeta, y permitir que se forme una estrecha zona inicia.
3. La muestra que se adhiere a la parte superior e inferior del tubo, se puede lavar
con un poco de ter de petrleo. No dejar secar.

4. Desarrollar con N-propanol al 0.5% en ter de petrleo

5. Se puede acelerar el desarrollo aplicando una succin de 0.5 atm. Un flujo de 1
ml/ min, da buena separacin.
Al realizar la cromatografa de adsorcin en el que el
medio fuera la almina (fase estacionaria) y eleluyente la
mezcla de N-propanol en ter dietlico, de manera que el
eluyente comienza a bajar por la columna y los
componentes de la mezcla son adsorbidos por la fase
estacionaria con diferente intensidad, de manera que el
proceso de adsorcin-desorcin hace que unos
componentes avancen ms rpidamente que otros.
Aparecen en este proceso varias bandas de diferentes
colores que pueden estar ms o menos alejados de la
disolucin de N-propanol en ter de petrleo segn la
mayor o menor solubilidad de los pigmentos endicha
disolucin. Estas bandas pueden tener diferente grosor,
dependiendo de la abundancia del pigmento en la
disolucin. Las que tengan ms afinidad por el disolvente
bajan ms rpido que los otros pigmentos.