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INTRODUCCIN

Brand-Williams et al., (1995) evaluaron la actividad de compuestos especficos o


extractos usando el radical libre estable 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH) en una
solucin metanlica. La reduccin del DPPH se monitorea por la disminucin en la
absorbencia a una longitud de onda caracterstica. En su forma de radical libre, el
DPPH absorbe a 515 nm y cuando sufre reduccin por un antioxidante, esta
absorcin desaparece. En consecuencia, la desaparicin del DPPH proporciona
un ndice para estimar la capacidad del compuesto de prueba para atrapar
radicales. El modelo que explica la actividad de un compuesto como antirradical
se ejemplifica con la siguiente ecuacin:

Donde AH es un antioxidante que acta como antirradical donando tomos de


hidrgeno, dando como resultado radicales con estructuras moleculares estables
que detendrn la reaccin en cadena, tal es el caso de los fenoles. El nuevo
radical formado (A) puede interactuar con otro radical para formar molculas
estables (DPPH-A, A-A). La reaccin entre el DPPH y un compuesto depende de
la conformacin estructural del mismo, por lo que las comparaciones cuantitativas
no siempre son apropiadas.
La prueba se basa en la reduccin del radical 2,2-difenil,1-picrilhidrazil (DPPH)
por accin de alguna sustancia antioxidante como vitamina C, vitamina E,
vitamina A, entre otros, La reduccin del DPPH se mide a 517 nm por la
disminucin del color violeta del radical, cuando este se pone en contacto con la
sustancia antioxidante. Los resultados se expresan como porcentaje de actividad
antioxidante de la sustancia tomando como base (100%) la densidad ptica del
reactivo de DPPH solo.
OBJETIVO
Analizar la actividad antioxidante de la vitamina C por el mtodo de DPPH
MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIAL.Tubos eppendorf de 1.5 mL
Gradillas
Puntas de 100 y 1000 microlitros

Tubos falcon de 15 y 50 mL
Micropipetas
Balanza
Esptula
Vortex
Espectrofotmetro
REACTIVOS.Etanol
Vitamina C
CAPE
MUESTRA.Jugos
PROCEDIMIENTOS
Procedimiento:
1.- Preparar una solucin de DPPH 300M (6.0 mg de DPPH en 50 mL de
etanol).
2.- Preparar las siguientes concentraciones de las muestras: 140, 70, 35, 17.5
g/mL en etanol.
3.- Mezclar en un tubo eppendorf de 1.5 mL 600l de DPPH 300M y 600l de
las muestras a probar. (Por triplicado). La mezcla que contenga solo DPPH y
etanol (estndar) representar el 100% de absorbancia o 0% de actividad
antioxidante.
NOTA: NO OLVIDE LOS CONTROLES EN SU EXPERIMENTO
4.-Normalizar frente a ETOH 96 %.
5.- Mezclar e incubar por 30 minutos al resguardo de la luz.
6.- Medir la Absorbancia a 517 nm contra un blanco de etanol absoluto
CALCULOS:
Absorbancia de la

muestra

Absorbancia del estndar (100)

= % de inhibicin de la muestra

100% - % de inhibicin de la muestra = % de actividad antioxidante de la


muestra

PREPARACIN DE LA MUESTRA Y PREPARACIN DE VITAMINA C

1.- Preparar un stock de 4 mg /mL de la muestra en etanol 96%. A partir de esta


solucin preparar las concentraciones de la muestra como se indica en la
siguiente tabla:

SOLUCION

2X (M)

1X (M)

Vol. de stock
3.6 mg /mL

Vol. de etanol
96%

140

70

22.2 l

3577.8 l

70

35

1800 l

1800 l

35

17.5

1800 l

1800 l

17.5

8.75

1800 l

1800 l

RESULTADOS
Nos dieron absorbancias negativas
DISCUSIN DE RESULTADOS
No nos pueden dar absorbancias negativas, el valor mnimo es cero, que indica
que no se absorbi luz, es decir, la luz incidente es igual a la transmitida; y el
valor mximo es 1, donde todo se absorbi, y nada se transmiti.

Los factores que pudieron haber afectado el valor de la absorbancia es que es


que el espectrofotmetro se encontrara mal calibrado, el blanco utilizado podra
haberse contaminado o pudio deberse a un mal manejo de la celda.
Los ligeros cambios en las absorbancias a pesar de ser negativos podran
indicar que realmente, las muestras presentaron actividad antioxidante, pero al
no ser resultados concluyentes lamentablemente no podemos afirmar nada.

Actividades
Actividades
1. Genere una revisin bibliogrfica acerca de las principales molculas con
actividad antioxidante que se han trabajado durante los aos 2000-2014
(www.pubmed.com).
Teniendo en cuenta la propiedad de los antioxidantes de inhibir o controlar las
reacciones en cadena de los radicales libres, es de esperarse que esta clase de
molculas sean constante y ampliamente estudiadas, para hacer referencia a
este hecho se revisaron dos artculos el primero publicado en el ao 2010 y el
segundo en el ao 2010, a continuacin podremos ver brevemente de qu trata
cada uno de ellos.
I)

Dietary Reference Intakes for Vitamin C, Vitamin E, Selenium, and


Carotenoids. Copyright 2000 by the National Academy of Sciences.
All rights reserved.

Este primer artculo es mejor dicho un informe centrado en los antioxidantes de


la dieta tales como la vitamina C, la vitamina E, el selenio y el -caroteno y otros
carotenoides (-caroteno, -criptoxantina, lutena, licopeno y zeaxantina), estos
pueden llegar a contrarrestar el dao oxidativo a las biomolculas, y existe la
posibilidad de que el aumento de la ingesta de estos compuestos pueden
proteger contra la enfermedad crnica. Aunque el trmino antioxidantes de la
dieta es una descripcin conveniente, estos compuestos son multifuncionales, y
algunas de las acciones observadas in vivo pueden no representar una funcin
antioxidante, a pesar de que los compuestos han sido clasificados como
nutrientes antioxidantes.
En este informe se evaluaron los antioxidantes dietarios con respecto a su papel
en la nutricin humana, sin limitar la investigacin a propiedades antioxidantes.
Informacin fue revisado con respecto a la cantidad mnima de estos nutrientes
necesarios para prevenir enfermedades de deficiencia, as como las cantidades
que podran tener un impacto en las enfermedades crnicas,
independientemente de si el efecto era un efecto antioxidante o no. Resolucin
de cualquier impacto de estos compuestos sobre la enfermedad crnica
requerir la evaluacin de los numerosos ensayos de intervencin en humanos
que todava estn en curso.

Podemos concluir de este artculo que los antioxidantes de la dieta, es


decir aquellos son asimilados por el organismo a travs de la alimentacin son
de vital importancia ya que podemos obtenerlos fcilmente y por esto mismo es
fundamental seguir estudiando sus propiedades.

II)

Phenylcoumaran
Benzylic
Ether
Reductase
Prevents
Accumulation of Compounds Formed under Oxidative Conditions
in Poplar Xylem.

2014 American Society of Plant Biologists. All rights reserved.


A continuacin el resumen del artculo original:
Phenylcoumaran benzylic ether reductase (PCBER) is one of the most abundant
proteins in poplar (Populus spp) xylem, but its biological role has remained
obscure. In this work, metabolite profiling of transgenic poplar trees
downregulated in PCBER revealed both the in vivo substrate and product of
PCBER. Based on mass spectrometry and NMR data, the substrate was
identified as a hexosylated 8-5-coupling product between sinapyl alcohol and
guaiacylglycerol, and the product was identified as its benzyl-reduced form. This
activity was confirmed in vitro using a purified recombinant PCBER expressed in
Escherichia coli. Assays performed on 20 synthetic substrate analogs revealed
the enzyme specificity. In addition, the xylem of PCBER-downregulated trees
accumulated over 2000-fold higher levels of cysteine adducts of monolignol
dimers. These compounds could be generated in vitro by simple oxidative
coupling assays involving monolignols and cysteine. Altogether, our data suggest
that the function of PCBER is to reduce phenylpropanoid dimers in planta to form
antioxidants that protect the plant against oxidative damage. In addition to
describing the catalytic activity of one of the most abundant enzymes in wood,
we provide experimental evidence for the antioxidant role of a phenylpropanoid
coupling product in planta.

Lo que consideramos ms relevante es que los datos que obtuvieron


sugieren que la funcin de PCBER es reducir dmeros fenilpropanoides en
planta para formar antioxidantes que protegen la planta contra el dao oxidativo.
Adems de describir la actividad cataltica de una de las ms abundantes
enzimas en madera, proporcionamos evidencia experimental de la funcin
antioxidante de un producto de acoplamiento fenilpropanoide in planta.
A partir del anlisis de este segundo artculo la conclusin en realidad es
bastante sencilla la investigacin que se realiza sobre cualquier antioxidante que
sea posible obtener fcilmente de la regin donde se est investigando ser de
gran importancia, dado que ser ms fcil y barato de obtener. Lo que puede
traer mltiples beneficios como el remplazo de antioxidantes de mayor precio o
difcil adquisicin.

2. Describa la de acuerdo a sus bases QUMICAS que es una molcula


antioxidante y que es un radical libre. De ejemplos con estructuras de los
mismos.
Antioxidante
Gracias a que son molculas que tienden a ceder fcilmente electrones, estas
pueden estabilizar a los radicales libres, los antioxidantes al ser oxidados por los
radicales ambos se estabilizan, se convierten en sustancias inocuas y detienen
las reacciones en cadena de los radicales, es por esto que podemos decir que
los antioxidantes son molculas que inhiben la accin destructiva de los
radicales libres, siendo capaces de retrasar o inhibir de forma significativa la
oxidacin.
.Los antioxidantes pueden actuar por distintos mecanismos y a distintos niveles
de la cadena de oxidacin:
Disminuyendo la cantidad de oxgeno.
Previniendo el inicio de reacciones en cadena mediante la
inactivacin de radicales libres (OH*).
Por unin de
iones metlicos.
Por
descomposicin de
perxidos
a
productos
no
radicales.
Interfiriendo
en las reacciones en cadena (ej. fenoles).
Reparacin del dao (ej. reparacin del ADN).
Por varios mecanismos de accin.

Radical libre
Los radicales libres (especies reactivas de oxigeno), son tomos, por lo
general de oxgeno, de una gran inestabilidad, reactividad y actividad biolgica
que actan como oxidantes.
La inestabilidad de los radicales libres se debe a que han perdido uno de sus
electrones e intentan reponerlo tomndolo de otros tomos, buscando
estabilizarse robndole un electrn a molculas estables cercanas.
La molcula agredida se oxida deja de cumplir su funcin y se transforma en
un nuevo radical libre. Se desata una reaccin en cadena donde cada nuevo
radical libre roba un electrn a otra molcula, pudiendo daar las clulas.

CONCLUSIN

Los resultados no fueron los esperados, debido a que las absorbancias nos dieron
negativas.
BIBLIOGRAFA
http://jupiter.utm.mx/~tesis_dig/10150.pdf

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