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CIENCIA Y
TECNOLOGA
CENTRO DE CIENCIAS
MEDIOAMBIENTALES (CCMA)
CSIC
Laboratorio de Genotoxicologa y
Mutagnesis Ambiental
EVALUACIN DE
MUTAGENICIDAD
Y GENOTOXICIDAD
scar Herrero Felipe
Eduardo de la Pea de Torres
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
www.csic.es
EVALUACIN DE LA MUTAGENICIDAD/GENOTOXICIDAD
scar Herrero Felipe y Eduardo de la Pea de Torres
Centro de Ciencias Medioambientales CSIC. C/ Serrano 115 dpdo. 28006 Madrid
ESQUEMA
1. DEFINICIONES
- TOXICOLOGA
- GENOTOXICOLOGA
MUTAGNESIS
CARCINOGNESIS
TERATOGNESIS
2. EVALUACIN MUTAGNICA
- NIVEL BSICO
- NIVEL 1
- NIVEL 2
ESQUEMA
1. DEFINICIONES
- TOXICOLOGA
- GENOTOXICOLOGA
MUTAGNESIS
CARCINOGNESIS
TERATOGNESIS
2. EVALUACIN MUTAGNICA
- NIVEL BSICO
- NIVEL 1
- NIVEL 2
DEFINICIONES (1/4)
TOXICOLOGA:
Ciencia que estudia las sustancias qumicas y los agentes
fsicos en cuanto son capaces de producir alteraciones
patolgicas en los seres vivos, a la par que estudia los
mecanismos de produccin de dichas alteraciones y los
medios para contrarrestarlas, as como los procedimientos
para detectar, identificar y cuantificar tales agentes y
evaluar su grado de toxicidad. (Repetto, 1981 y 1997)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
DEFINICIONES (2/4)
GENOTOXICOLOGA:
Disciplina de la investigacin toxicolgica cuyo objetivo
principal es salvaguardar lo mximo posible la reserva
gentica humana de la accin de las distintas sustancias
genotxicas, incluyndose en esta categora todas aquellas
que tengan efectos mutagnicos, carcinognicos y/o
teratognicos. (Vamparys et al., 1996)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
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DEFINICIONES (3/4)
MUTAGNESIS:
Induccin de cambios hereditarios (mutaciones) en el genotipo de
una clula como consecuencia de alteraciones o prdida de genes o
cromosomas (o parte de ellos).
CARCINOGNESIS:
Induccin por agentes qumicos, fsicos o biolgicos, de una
transformacin maligna e incontrolada de clulas, dando como
resultado la formacin de un tumor.
TERATOGNESIS:
Induccin de malformaciones estructurales en embriones o fetos.
(Vettorazzi, 2001)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
DEFINICIONES (4/4)
MUTAGNESIS, TERATOGNESIS Y CARCINOGNESIS
(Modificado de Wilson, 1972)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
DEFINICIONES (4/4)
MUTAGNESIS, TERATOGNESIS Y CARCINOGNESIS
(Modificado de Wilson, 1972)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ESQUEMA
1. DEFINICIONES
- TOXICOLOGA
- GENOTOXICOLOGA
MUTAGNESIS
CARCINOGNESIS
TERATOGNESIS
2. EVALUACIN MUTAGNICA
- NIVEL BSICO
- NIVEL 1
- NIVEL 2
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
Nivel 1
Nivel 2
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
Nivel 1
Nivel 2
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
Nivel 1
Nivel 2
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
Nivel 1
Nivel 2
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ESQUEMA
1. DEFINICIONES
- TOXICOLOGA
- GENOTOXICOLOGA
MUTAGNESIS
CARCINOGNESIS
TERATOGNESIS
2. EVALUACIN MUTAGNICA
- NIVEL BSICO
- NIVEL 1
- NIVEL 2
CLASIFICACIN (1/7)
Los criterios utilizados aparecen especificados en el
Anexo VI del Real Decreto 363/1995.
Se establecen tres categoras:
- Primera: sustancias que, se sabe, son mutagnicas
para el hombre.
- Segunda: sustancias que pueden considerarse
como mutagnicas para el hombre.
- Tercera: sustancias cuyos posibles efectos
mutagnicos en el hombre son preocupantes.
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
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CLASIFICACIN (2/7)
CATEGORA PRIMERA (R.D. 363/1995, Anexo VI)
CLASIFICACIN (2/7)
CATEGORA PRIMERA (R.D. 363/1995, Anexo VI)
CLASIFICACIN (3/7)
CATEGORA SEGUNDA (R.D. 363/1995, Anexo VI)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
CLASIFICACIN (3/7)
CATEGORA SEGUNDA (R.D. 363/1995, Anexo VI)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
CLASIFICACIN (4/7)
CATEGORA TERCERA (R.D. 363/1995, Anexo VI)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
CLASIFICACIN (4/7)
CATEGORA TERCERA (R.D. 363/1995, Anexo VI)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
CLASIFICACIN (5/7)
En resumen:
Las sustancias se clasifican como mutgenas con respecto a las malformaciones
gnicas heredadas. No obstante, los resultados que implican la clasificacin de
un producto en la tercera categora constituyen una advertencia de la posible
existencia de carcinognesis.
De hecho, los datos de genotoxicidad son tenidos en cuenta a la hora de clasificar
un producto qumico como carcingeno, considerndose como pruebas
complementarias.
En caso de duda, los resultados de los ensayos de genotoxicidad in vivo e in vitro
contribuirn a la inclusin de la sustancia en la segunda categora de
carcingenos (2A-carcingenos probables; 2B-carcingenos posibles), si son
positivos, o en la tercera (sustancias posiblemente no carcingenas), si son
negativos.
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
CLASIFICACIN (6/7)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
(Tarancn, 2001)
CLASIFICACIN (7/7)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
(Tarancn, 2001)
ESQUEMA
1. DEFINICIONES
- TOXICOLOGA
- GENOTOXICOLOGA
MUTAGNESIS
CARCINOGNESIS
TERATOGNESIS
2. EVALUACIN MUTAGNICA
- NIVEL BSICO
- NIVEL 1
- NIVEL 2
http://ecvam.jrc.it/index.htm
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
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http://tox.umh.es/rema/index.html
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
Sobre REMA
Actividades
Novedades
Inicios / Documentos
Comisin / Entidades
Jornadas
Congresos / etc.
ECVAM
Comisin Europea / Links
http://tox.umh.es/aetox/grupos/GTEMA/index.html
Sobre GTEMA
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
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ESQUEMA
1. DEFINICIONES
- TOXICOLOGA
- GENOTOXICOLOGA
MUTAGNESIS
CARCINOGNESIS
TERATOGNESIS
2. EVALUACIN MUTAGNICA
- NIVEL BSICO
- NIVEL 1
- NIVEL 2
ENSAYOS (1/16)
- TEST DE AMES -
ENSAYOS (2/16)
- TEST DE AMES -
ENSAYOS (3/16)
- TEST DE AMES -
ENSAYOS (4/16)
- TEST DE AMES -
G A G -
G G G -
C T C -
C C C -
Leucina
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
Prolina
Para detectar mutgenos que causan
sustitucin de pares de bases G-C
ENSAYOS (5/16)
- TEST DE AMES -
Esquema
del
mtodo
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (5/16)
- TEST DE AMES -
Esquema
del
mtodo
Espontnea
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (5/16)
- TEST DE AMES -
Esquema
del
mtodo
Producto
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (5/16)
- TEST DE AMES -
Esquema
del
mtodo
Disolvente
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (5/16)
- TEST DE AMES -
Esquema
del
mtodo
Mutgeno
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (6/16)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
- TEST DE AMES -
ENSAYOS (7/16)
- TEST DE AMES -
TA98
Control Nutrient Broth
TA100
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (8/16)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
- TEST DE AMES -
Cultivos de noche
ENSAYOS (9/16)
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
- TEST DE AMES -
Campana de flujo
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
Estufa a 37C
TA100
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
A.- R. Espontnea
B.- R. Mutgeno
C.- Toxicidad
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
1191
1200
1034
1000
800
600
264
400
200
93
91
R.E.
R.S.
100
99
C1
C2
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
MMS
C3
C4
1191
1200
1034
1000
800
600
264
400
200
93
91
R.E.
R.S.
100
99
C1
C2
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
MMS
Mutagnico
C3
C4
1191
20
93
R.E.
18
91
R.S.
128
R.M.
1034
100
29
C1
TA98
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
30
99
C2
TA100
264
67
C3
174
C4
1191
20
93
R.E.
18
91
R.S.
128
R.M.
1034
100
29
C1
TA98
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
30
99
C2
TA100
Mutagnico
264
67
C3
174
C4
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
NDICES
3,35 M1
Mutagnico muy dbil
8,7 M3
Mutagnico
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
NDICES
NDICES
3,35 M1
Mutagnico muy dbil
2,83 M1
Mutagnico muy dbil
11,11 M4
Mutagnico alto
8,7 M3
Mutagnico
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (1/10) - TEST DE A. cepa - Pelar, decapar y lavar bulbos para eliminacin de restos qumicos.
- Excitar mediante una muesca el meristemo radicular.
- Cultivar Allium cepa en cabina a 25 0.5C y en oscuridad.
- Oxigenar el agua mediante burbujeo de 10-20 ml/min.
- Controlar crecimiento radicular e ndices tras 24-48 horas.
- Tincin de Feulgen.
- Calcular ndices Mittico y de Fases a las 48h. de
tratamiento (72-96 horas totales de ensayo).
- Calcular la Inhibicin del Crecimiento Radicular a las 72h. de
tratamiento (96-120 horas totales de ensayo).
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (4/10) - TEST DE A. cepa Fotografas cedidas por la Dra. M.J. Hazen
(Lab A-110) Dpto. de Biologa de la U.A.M.
Control
Muestra
0h.
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
72h.
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
7,3
6,75
6
4,25
2,3
11
00
cm
2/
l
22
00
cm
2/
l
2/
l
11
0c
m
2/
l
1c
m
2/
l
0,
5c
m
2/
l
0,
1c
m
Ag
u
1,05
100
71,25
80
46,88
60
40
20
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
8,75
15,63
25
0
0,1cm2/l
0,5cm2/l
1cm2/l
11,40
10,90
10,00
7,80
8,00
ndice 0h
6,00
2,93
4,00
ndice 48h
2,00
0,00
0,1cm2/l
0,5cm2/l
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
74%
28%
0,1cm2/l
0,5cm2/l
ENSAYOS (7/10) - TEST DE A. cepa Fotografa cedida por la Dra. M.J. Hazen (Lab A-110) Dpto. de Biologa de la U.A.M.
Control
Clulas tras 24h.
de crecimiento
en agua filtrada
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (8/10) - TEST DE A. cepa Fotografas cedidas por la Dra. M.J. Hazen (Lab A-110) Dpto. de Biologa de la U.A.M.
Tincin con orcena
Tincin de Feulgen
C-Metafases
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (9/10) - TEST DE A. cepa Fotografas cedidas por la Dra. M.J. Hazen (Lab A-110) Dpto. de Biologa de la U.A.M.
Rotura y Microncleos
La rotura indica efecto clastognico y
los microncleos efecto clastognico y/o aneuploida
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
ENSAYOS (10/10) - TEST DE A. cepa Fotografa cedida por la Dra. M.J. Hazen (Lab A-110) Dpto. de Biologa de la U.A.M.
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
MINISTERIO DE
CIENCIA Y
TECNOLOGA
CENTRO DE CIENCIAS
MEDIOAMBIENTALES (CCMA)
CSIC
Laboratorio de Genotoxicologa y
Mutagnesis Ambiental
EVALUACIN DE
MUTAGENICIDAD
Y GENOTOXICIDAD
scar Herrero Felipe
Eduardo de la Pea de Torres
TOXICOLOGA
AMBIENTAL:
SEGURIDAD
QUMICA
22-25 Marzo 04
oscar.herrero@ccma.csic.es