ESTUDIANTE: RUBEN LLANCARI GONZALES

ASIGNATURA: BIOLOGA GENERAL

FACULTAD DE EDUCACIN Y CIENCIAS HUMANAS
APLICACIN DE LA GENETICA EN LA BIOLOGA

1) Ingeniera Gentica - Produccin intencionada de nuevos genes y

alteracin de genomas, mediante la sustitucin o adicin de material
gentico nuevo. La ingeniera gentica es un campo de la ciencia que se
dedica a investigar la posibilidad de recombinar artificialmente genes o
grupos de genes para producir nuevas combinaciones que no aparecen
biolgicamente. Por ejemplo, es posible aislar genes que especifican dos
protenas diferentes a partir de dos especies distintas de organismos, y
unirlos entre s para dar lugar a una nueva combinacin. Los ADNs
resultantes,

llamados

recombinantes,

son

instrumentos

extraordinariamente tiles en la investigacin gentica. Tambin pueden

tener una utilidad prctica, con aplicaciones importantes en medicina y
agricultura. La complejidad de los genomas eucariticos hace que el
estudio de un gen y de su expresin sea muy difcil. Las tcnicas de
recombinacin permiten actualmente el estudio de un gen aislado y
amplificado mediante su trasplante a un sistema bacteriano.
Las posibilidades de conseguir un beneficio prctico son numerosas. Por
ejemplo, la insercin en bacterias de un gen sinttico que codifica la
hormona somatostatina induce a aquellas a la produccin de la hormona,
es decir, que el gen sinttico se puede replicar, transcribir y traducir por
el husped. Adems, las tcnicas recombinantes pueden ser adaptadas
para la sntesis de vacuna: (la vacuna de la hepatitis B est siendo
obtenida

por

ingeniera

gentica,

introduciendo

en

levaduras

el

fragmento de ADN que codifica para las protenas de la superficie viral).

De la misma manera, el gen que codifica la proinsulina humana se ha
recombinado adecuadamente y se ha hecho reproducir en E. coli. El
resultado es que la bacteria produce proinsulina. Actualmente, se estn
consiguiendo muchos logros en ingeniera gentica. La potencialidad de
las tecnologas de ADN recombinante para obtener beneficios es enorme.
2) Aislamiento de genes y preparacin de ADN complementario - El
aislamiento de genes especficos de cromosomas eucariticos es un
proceso muy difcil y lento, para el cual se conocen dos mtodos
principales:

Mtodo

forzado

(shotgun)

complementario (ADNc) a partir del ARNm del gen.

obtencin

de

ADN

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3) Mtodo forzado (shotgun) - De aislamiento de genes y preparacin de
ADN complementario: el ADN celular se trata con una enzima de
restriccin de las que producen extremos escalonados. Despus los
fragmentos de ADN resultantes se unen en los plsmidos de E. coli
abiertos con la misma endonucleasa de restriccin. El ADNc se inserta en
un plsmido o en un vector viral.
Si el ADNc ha de incorporarse a un plsmido, se le debe proveer de
"colas" o extremos cohesivos apropiados. Eso se consigue aadiendo a
los extremos 3' opuestos de las dos hebras del ADN doble, una serie de
residuos desoxirribonucleotdicos repetidos de la misma clase, por
ejemplo residuos A, gracias a una transferasa terminal.
Seguidamente, el plsmido experimenta una apertura en un solo punto,
dando lugar a su forma lineal, por accin de una endonucleasa de
restriccin que produce extremos nivelados. Luego, se aaden colas de
poli T a los extremos 3' del plsmido lineal, complementarias de las colas
del ADNc .Se mezclan el plsmido lineal y el ADNc y se deja que se
apareen. Entre los productos obtenidos se encuentra un plsmido circular
agrandado que contiene el nuevo gen. A continuacin se forman los
enlaces covalentes por adicin de ADN ligasa.
4) Transformacin.- Esta etapa consiste en introducir la molcula de ADN
recombinante (el inserto y el vector unidos) en una clula hospedadora,
donde puede ser replicado; por ejemplo, la insercin de plsmidos en el
cromforo de E. coli. Los plsmidos recombinados se mezclan con las
bacterias. La colonia o clon de bacterias de E. coli que adquiere el
plsmido recombinado se deja crecer durante muchas generaciones a
gran escala, lo que incrementa el nmero de plsmidos recombinados. De
esta forma se ha realizado un clonado de un determinado gen, es decir, la
formacin de muchas copias idnticas que se replican a partir de un solo
gen introducido en una clula husped. El ADN recombinado, portador de
genes procedentes de dos especies distintas, se denomina ADN
quimrico. Las bacterias que poseen el nuevo gen son capaces de
expresarlo en forma de protenas que son vertidas al medio de cultivo, de
donde se pueden recuperar sin dificultad para su uso.
5) Bibliotecas de ADN.- Los procesos de clonaje molecular y aislamiento
de estos fragmentos se inician con la construccin de una biblioteca de
ADN o un banco de ADN. stas estn formadas por todas las molculas
de plsmidos o fagos recombinantes originados al unir un ADN a un

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vector. Las bibliotecas deben cumplir la

caracterstica

de

poder

introducirse en clulas donde cada recombinante pueda replicarse en

vivo.
Existen varios tipos de bibliotecas en funcin de la naturaleza de las
molculas utilizadas y del tipo de estudio cientfico que se quiera realizar.
As por ejemplo, las bibliotecas del ADN del genoma se construyen
mediante el clonaje de todo el ADN del genoma de un organismo.
Las bibliotecas de ADNc son un tipo de bibliotecas de ADN, muy utilizadas
para el estudio de genes eucariticos que codifican protenas. Adems,
son ms sencillas y ventajosas que las bibliotecas genmicas, ya que se
obtienen de ARNm maduros y, por tanto, no contienen intrones ni
secuencias que flanquean a los genes. ste es un dato importante, al
tener en cuenta que los hospedadores procariticos, como las bacterias,
carecen de una maquinaria para el procesamiento del ARN. Los clones de
ADNc permiten el estudio de las distintas poblaciones de molculas de
ARNm que se encuentran en diferentes tipos celulares. Las bibliotecas de
ADN deben ser grandes para ser tiles, y la probabilidad de encontrar una
secuencia determinada de un genoma depende de varios factores, entre
ellos el tamao de los insertos, el tamao del genoma y la abundancia del
ARNm que interese.
6) Aplicaciones de la ingeniera gentica. - Actualmente, se presta
mucha atencin a los posibles usos prcticos del ADN recombinado. En
general, existe entre la poblacin un cierto "miedo" a los experimentos
genticos. Pero hay que decir que el clonado de genes y su expresin en
forma de productos proteicos por clulas de E. coli o de levaduras hace
posible la produccin comercial de muchas protenas de utilidad prctica
que, de otro modo, son muy difciles de obtener en abundancia. Los
genes de algunas protenas necesarias en medicina han sido clonados. La
insulina, que se obtena a partir de pncreas de cerdo, se puede hoy
obtener de cultivos bacterianos que contienen el gen humano clonado,
con lo cual proporcionan una insulina con la misma secuencia de
aminocidos que la humana, cosa que no ocurra con la insulina porcina.
La insulina obtenida en E. Coli se utiliza actualmente en el tratamiento de
la diabetes mellitus. Igualmente ocurre con la hormona de crecimiento
(somatotropina) que se administra a pacientes que padecen enanismo.
Los
interferones, agentes antivirales naturales y
potenciales
anticancergenos, pueden aislarse a partir de leucocitos de la sangre,

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pero el rendimiento es de tan solo 1 microgramo por litro, y por ello son
productos muy caros. Los genes de los interferones pueden ser clonados
y expresados en bacterias, que crecen con facilidad y producen interfern
en grandes cantidades. Tambin podran producirse en gran cantidad
varias protenas de utilidad en agricultura. La incorporacin de los genes
de las enzimas y de otras protenas, que participan en la fijacin de
nitrgeno en los genomas de las plantas de cultivo que normalmente no
fijan el elemento, podra tener un xito mundial absoluto.
7) Modificacin gentica en bacterias. - Las bacterias son capaces de
adaptarse a cambios de temperatura, presin o nutrientes del medio,
gracias al desarrollo de nuevos procesos metablicos y productos gnicos
que les confieren resistencia para vivir en esas condiciones. Estos
cambios suelen producirse en los plsmidos bacterianos, los cuales se
pueden aislar e introducir en otras bacterias que asimilarn estas nuevas
propiedades.
Mediante la ingeniera gentica y la utilizacin de plsmidos bacterianos,
los cientficos pueden construir nuevas bacterias para un determinado fin.
Es el caso de los trabajos realizados por Ken Timmis y sus colaboradores,
en los que mediante la utilizacin de tcnicas de recombinacin del ADN,
han conseguido combinar las enzimas claves de cinco rutas distintas de
degradacin

de

pertenecientes

compuestos
a

tres

contaminantes

bacterias

diferentes

del

medio

ambiente,

(Pseudomonas

putida,

Pseudomonas sp. B13 y Alcaligenes eutrophus), para originar una nueva

bacteria desarrollada sobre mezclas letales de ciertos compuestos
(Clorobencenos, tolueno, clorofenoles y xileno). La ruta metablica
resultante es estable y regulada en respuesta a la presencia de ciertos
compuestos aromticos.
8) Modificacin gentica en plantas. - Las plantas han sido siempre
objeto de estudio, con el fin de mejorar sus caractersticas y obtener
cultivos

que

permitan

una

mejora

en

la

alimentacin

en

la

ornamentacin.
Uno de los grandes avances en la biologa molecular de las plantas se ha
conseguido

mediante

la

utilizacin

de

un

plsmido

bacteriano

perteneciente a la bacteria del suelo Agrobacterium tumefaciens. El

plsmido Ti, as denominado, puede transformar una gran variedad de
plantas. El ADN transformante del plsmido Ti se llama T-ADN y puede
subclonarse en un vector compatible con la bacteria E. coli, dando lugar a

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la formacin de vectores transbordadores planta-E. coli. Los vectores
transbordadores son plsmidos vectores que pueden transformarse tanto
en clulas procariticas como eucariticas.
En este caso, el plsmido recombinante pueden transformar clulas de A.
tumefaciens y, cuando la bacteria infecta a una planta, transfiere el TDNA, que se inserta en el genoma de la clula y por tanto puede ser
expresado por la maquinaria gentica de dicha clula. Aunque la
insercin solo haya tenido lugar en una clula, el gen puede heredarse
gracias a que muchas plantas pueden regenerarse a partir de tejidos
diferenciados, que pueden haber sido infectados. Estos organismos donde
se produce la integracin estable de genes extraos se denominan
organismos transgnicos. La tecnologa del clonaje del T-ADN es utilizada
para conseguir cultivos con mayores ventajas nutritivas, as como para
transmitir al genoma de muchas plantas genes implicados en la
resistencia a herbicidas, con la ventaja de que no se producen daos en
el medio ambiente. La investigacin est principalmente dirigida a la
posible introduccin de genes extraos de plantas resistentes o de origen
bacteriano, cuya expresin origine protenas capaces de catabolizar dicho
herbicida. Actualmente, tambin se investiga la posibilidad de que
plantas no leguminosas, como el trigo y el maz, realicen la fijacin
bacteriana del nitrgeno, fenmeno de gran importancia para la
produccin de alimentos.
9) Modificacin gentica en animales. - La manipulacin gentica y las
tcnicas de clonaje molecular constituyen procesos y herramientas muy
utilizados en la investigacin bsica, como demuestran los siguientes
estudios:
La introduccin de un gen humano o de ratn en la mosca del vinagre
(Drosophila

melanogaster)

permitira

demostrar

que

los

procesos

genticos que controlan el desarrollo embrionario de las diferentes

especies son muy similares; las formas corporales de todos los animales
se definen por mecanismos casi idnticos, y estos mecanismos estn
dirigidos por un grupo de genes relacionados entre s, genes HOM en
invertebrados y genes Hox en vertebrados. Tericamente, la sustitucin
de un gen HOM de una mosca por su homlogo Hox permitira que ste
se expresara cuando y donde lo hubiera hecho el gen HOM; sin embargo,
la tcnica actual no nos permite manipular genes enteros, por lo que solo
se han utilizado secuencias de ADN de Hox unidas a elementos

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reguladores inducibles por calor. Con este experimento se ha conseguido
que todas las clulas de una mosca en desarrollo expresaran una protena
Hox. Adems, una de esas protenas es la HOXD4 humana y se sabe que
el gen que la codifica tiene un homeodominio semejante al de la protena
Deformded de la mosca. Cuando el gen Deformed de Drosophila se
expresa fuera de sus lmites normales provoca anomalas ceflicas, y
sorprendentemente, la expresin de la protena humana en las clulas de
la mosca en desarrollo causa las mismas deformidades; aunque este
resultado puede ser debido a que la protena humana active la expresin
del gen Deformed en la mosca, siendo ste uno de los efectos de la
propia protena Deformed.
10)
Terapia gnica. - Otra lnea de investigacin muy interesante en la
biologa de mamferos es la llevada a cabo por una nueva tcnica que
permite crear ratones portadores de mutaciones controladas de cualquier
gen conocido. El proceso mediante el cual se introducen cambios
especficos en la secuencia de nucletidos de un gen se denomina
sustitucin dirigida de genes (gene targeting), y con ella se pretende
conseguir informacin sobre las etapas del desarrollo embrionario
humano,

la

constitucin

de

nuestro

sistema

inmunitario,

el

funcionamiento del cerebro y la forma en que ciertos defectos gnicos se

traducen en enfermedad.
Existen ms de 5.000 enfermedades humanas, entre ellas el cncer,
atribuidas a defectos genticos; la identificacin de los genes y las
mutaciones responsables de esas enfermedades permitira conseguir las
mismas mutaciones en ratones (por sustitucin dirigida de genes). Esto
permitira estudiar con ms claridad los procesos que ocurren entre el
funcionamiento anmalo de un gen y la manifestacin de la enfermedad.
El mejor conocimiento de la patologa molecular de la enfermedad
ofrecer la posibilidad de elaborar terapias ms eficaces, sobre todo las
dirigidas a corregir defectos. Actualmente, la terapia consiste en la
insercin aleatoria de genes sanos en los cromosomas, pero stos no
funcionan con la misma eficacia que los que ocupan su lugar correcto en
el cromosoma.
11)
Diseo de frmacos por ingeniera gentica. - Mediante la
tecnologa del ADN recombinante se producen actualmente grandes
cantidades de productos gnicos teraputicos a partir de genes clonados,
tales

como

insulina,

interferones,

interleuquinas

hormonas

del

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crecimiento. Adems, gracias a los procedimientos de clonaje, expresin
y purificacin, se trata de identificar la protena clave en un proceso
patolgico, aislarla en grandes cantidades, determinar su estructura
tridimensional mediante cristalografa de rayos X, y finalmente disear
molculas que inhiban su funcin. Actualmente, los frmacos que se
utilizan son poco selectivos y actan por igual en todas las especies, con
lo cual resultan txicos para el agente patgeno pero tambin para el
hospedador. Uno de los principales objetivos de la biotecnologa es el
desarrollo

de

frmacos,

cuya

accin

sea

ms

selectiva

sobre

determinadas especies. (Vase biotecnologa). Uno de estos casos es la

enfermedad del SIDA, en la que se investiga para desarrollar frmacos
selectivos contra el virus que la produce. Actualmente,

se han

identificado dos protenas claves propias del virus: una proteasa y una
transcriptasa inversa; mediante ingeniera gentica se consigue una
elevada produccin de estas protenas en E. coli, y se est investigando
profundamente estas protenas para obtener frmacos ms efectivos y
especficos, con la ayuda de mtodos cristalogrficos y de diseos de
frmacos que funcionen como potentes inhibidores.
12)
Proyecto Genoma Humano. - Es un proyecto coordinado por
numerosas instituciones, que se inici en 1990 con el fin de obtener el
genoma humano completo. El genoma humano ser, en un futuro,
cartografiado y totalmente secuenciado, de forma que se clonar y se
construir un mapa de cada cromosoma humano. Mediante el empleo de
endonucleasas de restriccin se cortan los clones y se obtienen los mapas
de clones contiguos. Los datos obtenidos acerca del tamao de los
fragmentos de restriccin de cada clon se introducen en un ordenador,
que compara esos tamaos en todos los clones analizados y determina
qu clones presentan sitios de restriccin comunes, por lo que dichos
clones pueden ordenarse segn este criterio. Los mapas que se obtengan
sern de gran valor en investigaciones acerca de la organizacin gnica y
cromosmica, as como en la identificacin de genes implicados en
ciertas enfermedades genticas. La correlacin de estos mapas con datos
de secuencias obtenidas por otros estudios permitira la secuenciacin de
todo el genoma humano. Para que este enorme proyecto obtenga buenos
resultados es necesario que se investigue en el desarrollo de nuevos
vectores de clonaje y en la tecnologa necesaria para analizar un gran

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nmero de clones. De hecho, ya se han obtenido mapas de los
cromosomas que pertenecen a organismos ms sencillos, como E. coli y
el moho limoso Dictyostelium. Sin embargo, en los humanos las tcnicas
de secuenciacin automtica deben perfeccionarse, pues el nmero de
pares de bases de que consta nuestro genoma es de 3.3 x 109.