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HOJAS DE FRIJOL
INTRODUCCION:
La deteccin de deficiencias nutrimentales de un cultivo se da por lo general mediante
un anlisis qumico; sin embargo, la dinmica del ciclo de vida en la mayora de los
casos es muy rpida, por lo que el tiempo se convierte en un inconveniente al momento
de hacer diagnsticos en el estado nutrimental del cultivo, Paralelamente existe tambin
el inconveniente en la expresin de los sntomas visuales de las deficiencias de
micronutrientes como el hierro y el manganeso, los cuales pueden llegar a ser
confundidos, o bien la relacin entre estos dos elementos, la cual, en caso de estar en
desbalance puede provocar efectos en la asimilacin o acumulacin de acuerdo a la
proporcin de cada uno.
Una herramienta no necesariamente explorada en su totalidad, es el uso de los anlisis
de imgenes digitales para determinar un estatus nutrimental en algn cultivo o bien
cuantificar daos causados por insectos. El anlisis de color ha jugado un papel
importante en el uso de esta herramienta, sin embargo, tambin existe el anlisis textural
que en algunos casos ha servido para identificar, por ejemplo, malezas en un cultivo.
MATERIALES Y METODOS:
5.1 Establecimiento del experimento
5.1.1 Siembra En un invernadero en Texcoco, Mxico, se sembraron 120 semillas de
frijol (Phaseolus vulgaris L.) cv. Cacahuate en charolas de 60 cavidades utilizando
como sustrato perlita (Agrolita), el cual es considerado inerte y estril, depositando
una semilla por cavidad. El proceso se inici humedeciendo la perlita y posteriormente
se taparon las charolas con una cubierta plstica hasta el momento de la emergencia,
con la finalidad de conservar la humedad. Una vez que la radcula fue visible se retir la
cubierta y se llevaron a cabo riegos diarios; durante todo el proceso se utiliz
nicamente agua destilada tipo II, la cual es de grado analtico y en la que se han
eliminado las impurezas e iones mediante la destilacin. Esto con la finalidad de evitar
en lo posible la interferencia con los micronutrimentos evaluados se eliminaron tambin
los cotiledones a los siete dds.
5.1.2 Transplante
El transplante se llev a cabo 24 dds (das despus de la siembra) en vasos de
poliestireno expandido de 1 L de capacidad. Se tom como referencia el sistema de raz
flotante; la fertilizacin se hizo en el riego de acuerdo a los ocho tratamientos con las
variaciones indicadas en el Cuadro 1, en funcin del micronutriente a estudiar mediante
la tcnica del elemento faltante. Cada tratamiento a su vez tuvo diez repeticiones. La
solucin nutritiva referencia fue la solucin Steiner. Se us agua destilada tipo II para
preparar la solucin nutritiva. Estas soluciones fueron ajustadas a un pH de 6.3 y CE de
2.0 dS m-1 y fueron suministradas una vez que las hojas cotiledonares estaban
expandidas; previamente las plantas fueron regadas nicamente con agua destilada.
Figura 1. Apreciacin visual del estado fenolgico del cultivo previo y en el momento
del transplante 24 das despus de la siembra (dds) y con los cotiledones ya eliminados.
Figura 2. Vista general del establecimiento del cultivo en los vasos de poliestireno.
Lab. El croma (C) se calcul con la ecuacin (a2+b2)1/2, mientras que el matiz (H) se
calcul a partir del arcotangente de la relacin a/b (McGuire, 1992), donde a y b son dos
canales del espacio de color CIE-Lab.
Se sigui la metodologa de Haralick et al. (1973) que consisti en obtener la matriz de
co-ocurrencia de frecuencias relativas Pij de pares de pixeles vecinos en una imagen
digital, uno teniendo nivel de tono i y otro j, separados por = (r = 1, = 0, 45, 90,
135) en la submuestra, donde r es la distancia en pixeles y el ngulo. = (r) denota un
vector en las coordenadas polares de la imagen. Los Pij por ngulo se promediaron para
generar una matriz de co-ocurrencia promedio, que fue registrada en una hoja de clculo
y donde n es el nmero de tonos de grises.
En cuanto al anlisis textural, se determinaron cuatro caractersticas:
a. Segundo Momento Angular (SMA). Llamada tambin uniformidad, es una medida
local de la homogeneidad y es la caracterstica opuesta a la entropa. Es un estadstico
de segundo orden en el dominio espacial. Valores altos son indicadores de uniformidad
en los pixeles (Jensen, 1996). Esta caracterstica textural fue calculada usando la
frmula:
Para llevar a cabo el anlisis textural, la imagen que se tiene originalmente es a color,
por lo que podra estar compuesta de alrededor de 16 millones de colores
aproximadamente que se originan de la multiplicacin de las tres capas del espacio de
color RGB (28*28*28). As entonces, cada canal est compuesto de 256 posibilidades
de color. Al convertir dicha 20 imagen de color a escala de grises, se toma una sola de
esas capas y por lo tanto, las posibilidades de color se reducen a solo 256 (28).
Posteriormente se llega a una etapa llamada quantizacin, en la cual aun hay una
reduccin ms en las posibilidades de color. Para el caso del experimento se toman
arbitrariamente 16 posibilidades, lo que significa que todos los colores de la imagen que
se siten en las posibilidades de color del 1 al 16 tomarn el mismo valor, mientras que
los pixeles que se siten en los valores del 17 al 32 tomarn un segundo valor y as
sucesivamente. Siguiente a esta etapa se analiza cada uno de los pxeles de la imagen en
cuanto a la variacin con respecto al pixel vecino en cuatro direcciones: horizontal,
vertical, diagonal izquierdo y diagonal derecho con lo que se va conformando un arreglo
matricial basado en las frecuencias de ocurrencia de cada tono con respecto a las cuatro
direcciones mencionadas. Finalmente se promedian las frecuencias de las cuatro
direcciones y se obtiene un valor, el cual ser usado para determinar los valores
texturales de la imagen analizada. Posteriormente, para la generacin del modelo, los
datos se introdujeron en el programa NeuroShell Classifier Release 2.2 de AI Trilogy
(Ward Systems Group, Inc.), mismo que realiz la clasificacin.
5.2.3 Entrenamiento de datos
Se entrenaron tres grupos de datos de ocho (100 % de Fe y Mn; 200 % Fe, 100 % Mn;
50 % Fe, 100 % Mn; 0 % Fe, 100 % Mn; 0 % Fe, 0 % Mn; 100 % Fe, 0 % Mn; 100 %
Fe, 50 % Mn y 100 % Fe, 200 % Mn), seis (100 % de Fe y Mn; 50 % Fe, 100 % Mn; 0
% Fe, 100 % Mn; 0 % Fe, 0 % Mn; 100 % Fe, 0 % Mn y 100 % Fe, 50 % Mn) y cuatro
(100 % de Fe y Mn; 0 % Fe, 100 % Mn; 0 % Fe, 0 % Mn y 100 % Fe, 0 % Mn)
tratamientos o clases con 315, 234 y 160 submuestras respectivamente. En esta etapa
del proceso se probaron 21 diferentes combinaciones de 12 variables: cinco de ellas
relacionadas al color (R, G, B, C, H, CIEL, CIEa y CIEb) y cuatro pertenecientes al
anlisis textural (SMA, EN, IN y HoL). Como variables de salida se consideraron los
ocho, seis o cuatro tratamientos establecidos. Los clasificadores se entrenaron de 3 a 12
variables de entrada independientes arriba mencionadas y un nmero mximo de 150
neuronas en la capa interna. Se desecharon aquellas combinaciones en las cuales el
porcentaje de ajuste de datos fue inferior al 85%, mientras que las que superaron dicho
porcentaje se emplearon en la validacin de los datos. En la Figura 5 puede observarse
la hoja de frijol digitalizada previa a la obtencin de las submuestras, las cuales se
ejemplifican en la Figura 6.
Figura 5. Cuarta hoja de frijol var. Cacahuate recientemente madura de los tratamientos:
(a) 100 % de Fe y Mn, (b) 200 % Fe y 100 % Mn, (c) 50 % Fe y 100 % Mn, (d) 0 % Fe
y 100 % Mn, (e) 0 % Fe y 0 % Mn, (f) 100 % Fe y 0 % Mn, (g) 100 % Fe y 50 % Mn,
(h) 100 % Fe y 200 % Mn, colectadas a los 63 dds en septiembre 2012 de plantas
cultivadas en semihidropona
(g) 100 % Fe y 50 % Mn, (h) 100 % Fe y 200 % Mn, colectadas a los 63 dds en
septiembre 2012 de plantas cultivadas en semi-hidropona.
consider la evaporacin del cido ntrico y que se reflej en la reduccin del volumen
de la muestra.
Figura 7. (a) Destruccin de la materia orgnica y aparicin de humos pardos; (b) Vista
superior del tubo Follin Wu conteniendo la muestra; (c) Aparicin de los humos
blancos, indicando una destruccin total de la materia orgnica; (d) Muestra recin
sacada del bloque disgestor.
Posteriormente se agitaron las muestras en los mismos tubos y se afor hasta llegar a un
volumen de 25 mL utilizando agua desionizada. Dichas muestras fueron ledas en el
espectrofotmetro de absorcin atmica AAS 220 a una longitud de onda de 213 nm
para Fe y 525 nm para Mn.
5.3.2 Extraccin de hierro soluble
Para la determinacin especfica de Fe2+, la tcnica usada se bas en el mtodo
propuesto por Oserkowksy (1933). Se tomaron 0.1 g del material vegetal previamente
molido y se colocaron en tubos para centrfuga de polipropileno de 50 mL (Nalgene)
con rosca; se agregaron 15 mL de HCl 1N y se colocaron en un oscilador por un periodo
de tiempo de 4 horas. Posteriormente las muestras se centrifugaron durante 30 minutos
a una velocidad de 3000 rpm. Finalmente, utilizando matraces de aforo de 25 mL, las
muestras fueron filtradas vaciando nicamente la fase superior utilizando papel filtro del
nmero 1 (Whatman). El aforo se hizo utilizando agua desionizada. Las muestras
fueron ledas en el espectrofotmetro de absorcin atmica leyendo a 213 nm.
tomado en cuenta por razones evidentes. La combinacin con las mejores caractersticas
fue el Clasificador 1 (Cuadro 4). En el Cuadro 5 se muestra el resultado del clasificador.
En el Cuadro 5 se observa que el Tratamiento 1 (100% Fe y Mn) aparece clasificado
correctamente en un 100 % a diferencia del resto de los tratamientos o clases de salida,
los cuales fueron clasificados correctamente con un porcentaje de 75 %. El Tratamiento
4 (0% Fe, 100 % Mn) por ejemplo, fue clasificado en algunos casos como Tratamiento
5 (0% Fe y 37 0% Mn), as como Tratamiento 6 (100% Fe, 0% Mn), lo cual podra ser
explicado debido a que estos dos ltimos tratamientos comparten la deficiencia total ya
sea de Fe o Mn con el tratamiento que est siendo clasificado.
Cuadro 5. Estadsticas del arreglo matricial (tabla de contingencia) para la combinacin
de variables R, G, B, L, a, b, C, H, SMA, EN, IN y HoL usando cuatro clases de salida
o tratamientos (100 % de Fe y Mn; 0 % Fe, 100 % Mn; 0 % Fe, 0 % Mn; 100 % Fe, 0 %
Mn y 100 % Fe, 0 % Mn).