Procedimento Operacional Padro Biossegurana

a servio da vida.

www.biotecnica.ind.br

Procedimento Operacional Padro Biossegurana

ndice
Introduo

Definies

Treinamentos / Informaes

Vigilncia mdica e de sade

Normas de vigilncia sanitria de funcionrios que tm contato com

microorganismos da classe de risco 2

EPIs de uso obrigatrio

Cuidados gerais durante procedimentos em laboratrios

Nvel de biossegurana 2 NB2

Recebimento / Transporte

Transporte seguro de amostras e materiais infecciosos

Documentao e embalagem

Recebimento de material potencialmente infectante

Higienizao de superfcies e equipamentos

Procedimentos usuais de desinfeco

lcool a 70% (etanol ou isoproplico)

Hipoclorito de sdio 1%

Processo de esterilizao: Autoclavao

Descarte

Condutas em derramamentos e acidentes laboratoriais com material potencialmente

infectante

Acidentes ocupacionais

Vias de infeces

Procedimento ps exposio a materiais biolgicos

Avaliao do risco de exposio em caso de acidentes

a servio da vida.

www.biotecnica.ind.br

Introduo

Materiais biolgicos manuseados em laboratrios so, quase sempre, fontes de

contaminaes. As Boas Prticas em Laboratrio, seguindo as regras da Biossegurana
devem ser adotadas para minimizar a ocorrncia de eventuais acidentes, contaminaes
ambientais e do corpo tcnico operacional.
De acordo com os critrios de patogenicidade os microrganismos podem ser
classificados com base no seu potencial patognico, para o homem e para os animais, a
saber:
Classe de risco 2- (risco individual moderado e risco limitado para a comunidade)
patgeno capaz de causar doena ao homem ou aos animais, mas que no consiste
em srio risco a quem manipula, comunidade, aos seres vivos e ao meio ambiente
quando manipulado em condies de conteno.
Classe de risco 3- (elevado risco individual e risco limitado para a comunidade) patgeno que geralmente causa doenas graves ao homem ou aos animais e pode
representar srio risco a quem o manipula.
Os laboratrios, de um modo geral, podem ser classificados no nvel 2 de
biossegurana, mas trabalhamos com materiais biolgicos que podem conter
microrganismos classificados nos nveis 3, e por esta razo necessitamos de
procedimentos adequados para o trabalho no laboratrio.
As exposies laboratoriais podem causar contaminaes, mas a existncia de
medidas eficazes de tratamento e preveno limita os riscos.
2

Definies

Aerossis: Gotas de lquido dispersas no ar.

Amostras biolgicas para diagnstico: so materiais de origem humana ou animal para
anlise (como excrementos, secrees, sangue e derivados, tecidos e lquidos orgnicos)
com fins diagnstico.
Anti-sptico: Agente qumico ou fsico utilizado para desinfeco de tecido vivo, capaz de
destruir ou inibir o crescimento de micro-organismos na rea aplicada.
Descontaminao: Destruio ou remoo (total ou parcial) de microorganismos dos
artigos e superfcies.
Desinfeco: Destruio ou inibio do crescimento de microorganismos patgenos no
esporulados ou em estado vegetativo, de superfcies.
EPIs: Equipamento de proteo individual.
Esterilizao: Processo de destruio de todos os microorganismos, incluindo os esporos.
Limpeza: Processo de remoo de sujidade.
Sanitizao: Processo destinado reduo da maioria das bactrias patognicas
presentes.

a servio da vida.

www.biotecnica.ind.br

Substncias infectantes: so apresentaes que contm microrganismos viveis (tais

como bactrias, vrus, riquetsias, parasitas, fungos ou microrganismos recombinante,
hbrido ou mutante) sabidamente capazes de provocar doena ao homem ou animais.
3

Treinamentos/Informaes

Funcionrios e pessoas que tm acesso a rea laboratorial esto sujeitos exposio

ocasional e acidental a microorganismos que pertencem a grupos de risco mais elevados,
portanto, se faz necessria a adoo de planos e normas de segurana, na preveno de
acidentes e minimizao de exposies.
3.1

Vigilncia mdica e de sade

So objetivos da vigilncia mdica e de sade do pessoal que trabalha em reas

de risco por exposio a agentes biolgicos:
prevenir o aparecimento de doenas profissionais em indivduos saudveis, atravs
de exames regulares;
programar, orientar e verificar a realizao de imunizaes ativas ou passivas para
preveno e minimizao de risco de infeco, quando houver ;
providenciar o diagnstico precoce dos casos de infeco ocupacional;
avaliar a eficcia de equipamentos e de medidas de proteo e preveno.
3.2

Normas de vigilncia sanitria de funcionrios

que tm contato com microrganismos da
classe de risco 2

obrigatria a realizao de exames de sade clnico e

laboratorial pradmissionais.
recomendada a coleta de amostra sorolgica para anlise comparativa
imediatamente aps a exposio.
necessrio manter registro de casos de doenas e faltas.
O funcionrio e/ou seu mdico tm a responsabilidade de informar a empresa
sobre todas as faltas decorrentes por doenas.
Mulheres em idade frtil precisam ser informadas sobre os riscos de exposio
profissional a microrganismos patgenos. Informar o responsvel pelo laboratrio,
imediatamente quando estiver gestante e/ou amamentando, para tomada de medidas
preventivas contra possveis infeces por exposio desnecessria (que coloquem
em risco a sade da me e da criana). Medidas preventivas a serem tomadas para a
proteo do feto variam de acordo com os patgenos aos quais a gestante est
exposta.

EPIs de uso obrigatrio

Nas reas restritas obrigatrio o uso de:
Mscaras e culos: na realizao de procedimentos em que haja
possibilidade de
respingos de sangue ou outros fluidos corpreos, nas mucosas da boca, nariz e olhos.
Luvas, aventais de manga longa;
Calados fechados de boa aderncia ao solo.

Cuidados gerais durante procedimentos em laboratrios

Ter a mxima ateno durante a realizao dos procedimentos.
proibida a pipetagem com a boca.
Nestas reas proibido comer, beber, fumar, guardar alimentos ou aplicar produtos
cosmticos.
proibido levar quaisquer materiais a boca e lngua.
Manter as reas de trabalho limpa, organizada e livre de materiais que no so
usados durante a atividade em execuo.
As superfcies de trabalho precisam ser desinfetadas aps qualquer derramamento
de material potencialmente perigoso, bem como ao final do expediente.
obrigatrio lavar as mos antes e aps cada manuseio de material qumico e
biolgico, bem como antes de sarem do laboratrio e reas de produo.
Todos os processos tcnicos devem ser realizados de forma a reduzir ao mnimo o
perigo de formao de aerossis ou de gotculas. Quando houver tcnicas de maiores
riscos de formao destes, conduzir o procedimento em capela.
Durante o trabalho no laboratrio, a equipe usar aventais prprios, de uso restrito
nestas reas. As roupas contaminadas precisam ser desinfetadas com tcnica
adequada.
A indumentria para proteo dentro do laboratrio no pode ser guardada no
mesmo armrio com objetos e vesturio pessoais.
Os culos de segurana e os protetores de face (visores), assim como outros
dispositivos de proteo, devem ser usados sempre que forem indicados para a
proteo de olhos e face contra os salpicos ou contra o impacto de objetos.
Nas reas de servio onde h risco de exposio a agentes infectantes e qumicos,
somente ser permitida a entrada de pessoas devidamente alertadas sobre os
eventuais perigos e que preencham determinadas condies (vacinaes, por ex.).
Durante o trabalho, as portas destas reas permanecero fechadas. O acesso de
crianas e animais proibido.
Manter programa de controle de artrpodes e roedores.
Luvas adequadas ao trabalho sero usadas em todas as atividades que possam
resultar em contato direto com material biolgico e qumico. Depois de usadas, as
luvas sero removidas em condies asspticas e descartadas em lixo para plsticos
classe 1. Em seguida, lavar as mos.
Todo lixo classe 1 segue para autoclavao para posterior descarte.
Todo e qualquer derramamento de material, acidente,
exposio efetiva ou
possvel a materiais infecciosos precisam ser levados imediatamente ao conhecimento
do responsvel pelo laboratrio.
As reas de trabalho e armazenamento precisam ser adequadas para acesso a
materiais de modo a evitar o congestionamento de mobilirio, equipamentos e objetos.
proibida a colocao de vasos de plantas ornamentais nestes ambientes.
Todo e qualquer agente desinfetante e anti-sptico utilizado precisa ser registrado
na ANVISA e conferido quanto data de validade.

5.1

Nvel de Biossegurana 2 NB2:

reas de manuseio de materiais biolgicos so classificadas em Nvel de

Biossegurana 2, onde h necessidade de algumas providncias preventivas saber:
Portas de acesso reas onde ocorra manuseio de
material potencialmente
infectante precisam ter Sinalizaes com Risco Biolgico - rea Restrita.

 O acesso ao laboratrio deve ser limitado ou restrito de acordo com a definio do

responsvel, quando estiver sendo realizado experimento ou procedimentos que
acarretem em risco de exposio.
As superfcies de trabalho devem ser descontaminadas ao menos uma vez ao dia
ou sempre que ocorrer derramamento de material potencialmente infectante.
Todo resduo lquido ou slido contaminado deve ser descontaminado ou inativado
antes de ser descartado, assim como todo material ou equipamento que esteve em
contato com agente contaminante.
Deve-se utilizar dispositivo mecnico para pipetagem, pois imprprio e arriscado
pipetar com a boca.
Pessoal do laboratrio e reas produtivas, que impliquem em risco de
contaminao, precisam ter treinamento tcnico especfico no manejo de agentes
patognicos e ser supervisionados por profissionais de competncia tcnica.
Procedimentos nos quais exista possibilidade de formao de aerossis infecciosos
devem ser conduzidos em cabines de segurana biolgica ou outro equipamento de
conteno fsica.
O responsvel tem o dever de limitar o acesso ao laboratrio. Cabe a ele a
responsabilidade de avaliar cada situao de risco e autorizar quem poder ter acesso s
reas de acesso restrito.
Todo o lixo do laboratrio deve ser adequadamente descontaminado ou inativado.
Uma autoclave precisa estar disponvel para descontaminao no interior
ou
prximo s reas de risco de modo a permitir a descontaminao de material biolgico
previamente de descarte de material classe 1.

Recebimento/Transporte
6.1

Transporte Seguro de Amostras e

Materiais Infecciosos

proibida a remessa de substncias de potencial infectante no identificveis ou

no marcadas como tais. Tal procedimento pode acarretar perigo para os o servio de
transporte, e a quem recebe a remessa.
O responsvel pela remessa precisa ser treinado, de forma a garantir o manuseio
dentro das normas de biossegurana, bem como acondicionar e identificar o material
evitando eventuais acidentes.
6.2

Documentao e embalagem

A documentao que acompanha as remessas de amostras biolgicas

potencialmente infectante devem conter: informaes de origem, destino, cuidados de
manuseio, alerta de risco e procedimento de emergncia em caso de acidente.
A embalagem de transporte precisa ser impermevel, conter material absorvente
envolvendo o recipiente em contato direto com a amostra, envolto em saco plstico.
6.3

Recebimento de material
potencialmente infectante

O responsvel pelo recebimento de tais materiais precisa ser treinado quanto

procedimentos de biossegurana.

O recipiente de transporte somente deve ser aberto para conferncia e manuseio de

seu contedo em ambiente laboratorial, por profissional paramentado.
Verificar ocorrncia de possvel vazamento e/ou quebra, para realizao de
procedimento de descontaminao e desprezo.
7

Higienizao de Superfcies e Equipamentos:

O qu?
Quando
Chuveiros e semanalmente
lava-olhos

Com o que?
gua e sabo
gua corrente

lcool 70%
Aparelhos

Semanalmente

Pano
ou
descartvel;

Aps exposio

material gua e sabo;

biolgico
lcool a 70%.
Autoclave
Banho-maria

Semanalmente
Semanalmente

Centrfugas

Aps utilizao lcool a 70%

Aps
contaminao
com
material
biolgico

Estufa

Mensalmente
gua e sabo;
Aps
lcool a 70%.
contaminao
com
material
biolgico

Cabine

de Diariamente

gua e Sabo
gua e sabo;
lcool a 70%.

gua e sabo;

Como
Limpeza;
Ligar o sistema e deixar gua
limpa correndo por 3 minutos

Passar sobre a superfcie e

deixar soluo em contato por
15 minutos
papel Remover a contaminao;
Limpeza;
Passar sobre a superfcie e
deixar soluo em contato por
15 minutos, depois secar com
papel absorvente seco
Limpeza mecnica
Retirar a gua;
Limpeza;
Passar sobre a superfcie e
deixar soluo em contato por
15 minutos, depois secar com
papel absorvente seco
Passar sobre a superfcie e
deixar soluo em contato por
15 minutos, depois secar com
papel absorvente seco

Limpeza;
Passar sobre a superfcie e
deixar soluo em contato por
15 minutos, depois secar com
papel absorvente seco
Limpeza mecnica;

Fluxo laminar

Antes e aps o
uso

lcool a 70%.

Passar sobre a superfcie e

deixar soluo em contato por
15 minutos, depois secar com
papel absorvente seco
Filtro de ar Mensalmente
Retirar o filtro;
gua e sabo;
condicionado
Limpeza;
Soluo de hipoclorito Deixar de molho em soluo
1%
por 30 minutos, enxaguar,
fazer leve compresso para
remover excesso de gua
Recolocar o filtro.
Freezer
Mensalmente
gua e sabo
Transferir o contedo para
outro freezer;
Degelar;
Limpeza.
Geladeiras
Mensalmente
gua e sabo
Transferir o contedo para
outro freezer;
Degelar;
Limpeza.
Bancadas
Diariamente ou Pano
ou
papel Remover a contaminao;
aps
descartvel;
Passar sobre a superfcie e
contaminao
deixar soluo em contato por
com
material lcool a 70%.
15 minutos, depois secar com
biolgico
papel absorvente seco
Paredes
Trimestralmente gua e sabo.
Limpeza.
Pias
Diariamente
gua e sabo.
Limpeza.
Pisos
Pano
ou
papel;
Remover a contaminao;
Diariamente ou
aps
gua e sabo;
Limpeza;
contaminao
com
material Soluo de hipoclorito Passar pano embebido na
1%
soluo e aguardar 30 minutos
biolgico
para secagem com pano seco
Lixeiras
Semanalmente gua e sabo;
Limpeza;
Soluo de hipoclorito Deixar de molho em soluo
por
30
minutos,
5%
enxaguar,secar com material
absorvente.
7.1

Procedimentos usuais de desinfeco:

7.1.1 lcool a 70%(etanol ou isoproplico):

O lcool a 70% (v/v) um dos desinfetantes mais empregados no laboratrio.
*Utilizao: para desinfeco da pele, bancada e equipamentos.
*Procedimento: Aps a limpeza com gua e sabo deve-se esfregar um pano ou algodo
embedido com a soluo de lcool a 70%.
*Tempo de inativao: deixar a superfcie a ser descontaminada em contato com a
soluo por no mnimo 15 minutos.

*Preparo do lcool a 70% (v/v):

Etanol a 95 (p/v).........................................................73,7ml
gua destilada q.s.p.....................................................100 ml
7.1.2 Hipoclorito de sdio 1%:
*Utilizao: descontaminao de pisos, vidrarias, inativao qumica de material biolgico.
*Procedimento: Aps a limpeza com gua e sabo deve-se passar pano ou material
absorvente com a soluo de hipoclorito 5% no piso, ou submergir vidraria em soluo,
garantindo que a soluo esteja em contato com toda parede do objeto a ser
descontaminado.
Ateno, para descontaminao de resduos lquidos e semi-slidos, colocar hipoclorito
concentrado na proporo de 1 para 19 partes do resduo em descontaminao.
*Tempo de inativao: deixar em contato a superfcie a ser descontaminada por no
mnimo 30 minutos.
7.2

Procedimento usual de esterilizao

7.2.1 Autoclavao
Procedimento de inativao com calor mido alta presso.
*Utilizao: descontaminao de utenslios laboratoriais, bem como descontaminao de
material para descarte.
*Procedimento: 121C, 1 atm (vide instruo operacional do equipamento).
*Tempo de inativao: mnimo de 15 minutos.
8

Descarte

Materiais que estiveram em contato com amostras potencialmente infectantes devem

ser descontaminados antes de sarem da rea de trabalho onde foram manipulados.
Todo material prfuro-cortante, mesmo que estril, deve ser desprezado em
recipientes resistentes perfurao com tampa.
Todos materiais e amostras contaminados precisam ser desinfetados, antes de serem
descartados ou limpos para uso posterior. Devem ser colocados em sacos plsticos
prova de vazamento e identificados, antes de serem autoclados. Esses sacos devem ser
mantidos em vasilhames de paredes rgidas, lavveis e identificados, colocados em rea
restrita.
9

Condutas em derramamentos e acidentes laboratoriais com material

potencialmente infectante

Em caso de derramamento de material biolgico, o local precisa ser imediatamente

identificado com alerta de RISCO e isolado;
Cobrir a rea de derramamento completamente com material absorvente e aplicar
soluo de hipoclorito concentrado. Aps 30(trinta) minutos, deve ser iniciado o
procedimento de limpeza. Utilize material absorvente descartvel (toalhas de papel,
compressas de gaze, panos de limpeza) para absorver o derramamento. Se o volume

derramado for grande, pode ser usado material absorvente granulado para absorver o
lquido;
Use luvas (resistentes), avental e proteo facial, proteger os
calados com
material impermevel e descartvel;
Se o derramamento contiver vidro quebrado ou outros objetos, esses devem ser
descartados sem contato manual direto. Podem ser usadas folhas rgidas de carto ou
ps de lixo plsticas, dotadas de dispositivo para impulsionar os detritos em um recipiente
para os recolher; ou usar pinas. Estas devero ser descartadas juntamente com os
objetos num recipiente apropriado para material com risco biolgico e prova de
perfuraes;
Se houver a possibilidade de formao de gotas,ex: quebra dentro da centrfuga, o
equipamento deve permanecer fechado durante pelo menos meio hora a fim de permitir
que as gotas assentem, antes de se iniciar a descontaminao;
Absorver a maior parte do lquido antes da limpeza;
Enxge o local do derramamento com gua a fim de remover produtos qumicos
nocivos ou odores.
Seque o local do derramamento para prevenir escorreges.
Todo material descartvel utilizado na descontaminao precisa ser esterilizado
antes de ser descartado.
10 Acidentes ocupacionais
10.1 Vias de Infeces:
Via area: Inalao de aerossis com solues ou partculas infectantes que podem se
formar durante a remoo de tampas de tubos de ensaio ou frascos, em pipetagem
rpida, por centrifugao de tubos destampados e/ou por aquecimento rpido.
Oral: Geralmente ocorre por pipetagem com a boca ou o ato de levar a mo ou objetos
contaminados boca.
Inoculao direta: Picadas acidentais de agulhas, lancetas, cacos de vidro,arranhes ou
cortes podem ser facilmente contaminados por contato com amostras biolgicas
infectantes.
Mucosas: Contato direto ou indireto de agente infectante com as mucosas da boca e
olhos.
10.2 Procedimento ps exposio a materiais
biolgicos
Comunicar imediatamente um representante da comisso de Biossegurana ou
responsvel pela clula.
Aplicar soluo anti-sptica sobre a regio exposta ao agente potencialmente
infectante percutnea ou cutnea (PVPI, lcool iodado ou lcool 70%) e na mucosa
oral (clorexidina a 4%), deixando em contato por um tempo mnimo de 15 minutos;
Nas exposies de mucosas e olhos, deve-se lavar exaustivamente com gua ou
soluo fisiolgica;
Ateno: a utilizao de solues irritantes como ter, hipoclorito de sdio ou
glutaraldedo so contra-indicados.

10.3 Avaliao do Risco de Exposio em caso de

acidentes:
Cabe ao responsvel e/ou Comisso de Biossegurana avaliar e classificar a
cada caso de acidente ocorrido em particular o grau de risco e medidas a serem tomadas,
com base em informaes tcnicas cientficas e relato dos envolvidos.
Para a tomada de decises, preciso reunir a maior quantidade de informaes
possveis, como:
Definio do tipo de material biolgico envolvido;
Gravidade e tipo da exposio;
Identificao ou no do paciente-fonte e de sua condio sorolgica anti-HIV,
hepatites, dentre outros;
Os acidentes mais graves, geralmente,so os que envolvem:
a) Maior volume de sangue: Leses profundas provocadas por material perfuro-cortante,
com presena de sangue visvel no instrumento, acidentes com agulhas previamente
utilizadas na veia ou artria do paciente e acidentes com agulhas de grosso calibre;
b) Maior inoculo viral: representado por pacientes-fonte com infeco pelo HIV/aids em
estgios avanados da doena ou com infeco aguda pelo HIV. So situaes que
apresentam viremias elevadas.
Esquematicamente, os aspectos iniciais da exposio e riscos so avaliados a
partir das informaes levantadas:
Tipo de exposio
Percutnea
Mucosa
Pele no-ntegra
Mordedura humana
Tipo e quantidade do material biolgico (lquido, tecidos)
Sangue
Material biolgico contendo sangue
Lquidos e tecidos potencialmente infectantes (smen, secreo vaginal, lquor, lq
sinovial, lq pleural, lq peritoneal, lq pericrdico, lq amnitico)
Contato direto com material contendo vrus em grande quantidade
Situao infeccioso da fonte
Presena de HBsAg
Presena de anti-VHC
Presena de anti-HIV
Susceptibilidade do profissional exposto
Situao quanto vacina contra hepatite B e resposta vacinal
Situao infeco HIV / HBV / HCV
Fonte: CDC, 2001.

Elaborao: Comisso de Biossegurana BioTcnica:

Adelaine Frana de A. Lorin Agda Andrade Baby Maria Ferreira Roscelli Sette
Silva Maiolini Shauma Gustavon
Farmacuticas Bioqunicas

Referncias Bibliogrficas

Biossegurana em laboratrio biomdicos e de microbiologia / Ministrio da Sade,

Secretaria de Vigilncia em Sade, Departamento de Vigilncia Epidemiolgica.
2 ed. Braslia: Ministrio da Sade, 2004.

MACHADO, C.M. Rotinas de limpeza, Laboratrio de Virologia do IMISP FMUSP,

SP, 2001.

Manual de Biossegurana dos Ambulatrios da Faculdade de Odontologia da

PUCRS. Comisso de biossegurana, Porto Alegra, 2006.

Ministrio da Sade. Coordenao de controle de infeco

Processamento de Artigos e Superfcies em Estabelecimento de Sade 2 ed.

Braslia, 1994

SOUZA, M.M. Biossegurana no laboratrio clnico. Ed. Eventos, RJ, 1998