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INGENIERA BIOQUMICA
SPTIMO SEMESTRE
Practica # 4 y 5
ANLISIS DEL DETERIORO DE LOS ALIMENTOS
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA CAPACIDAD DE RETENCIN DE
AGUA Y pH EN CARNE DE RES, CERDO, POLLO Y PESCADO
REQUERIMIENTOS
Muestra
Reactivos
Leche
Obtenida del da
Obtenida 3 das antes
Carne
Caliente
Refrigerada
Madura
Dudosa
Huevo
Temperatura ambiente
Refrigerado
Miel
Fresca
Madurada
Materiales
Medios
de
cultivo:
coliformes, cuenta total,
hongos y levaduras.
Resarzurina
Fenoftalena al 1 %.
Cajas Petri
Pipetas
Buretas
Horno
Licuadora
Vasos de precipitado
Estufa de incubacin
Potencimetro
Tubos de ensayo
Bao de agua controlada o estufa
incubadora
Gradilla
Centrfuga
Parrilla con agitacin
Solucin de hidrxido de
sodio 0.05 N
Solucin
de
cido
clorhdrico 0.05 N
MATERIALES
REACTIVOS
300 g c/una
Carne de Res
NaCl 0.6M
Carne de cerdo
Pollo
Pescado
LECHE
PROCEDIMIENTO
Se requiere una muestra de leche que sea de ordea del da y ordea de 3 das antes
como mximo.
Prueba de la resarzurina.
Mtodo indirecto para la determinacin de la calidad microbiolgica de leche fresca. sta
basado en la medida del tiempo de decoloracin, causado por la cantidad de
microorganismo presentes en una leche. El consumo de oxigeno disminuir su potencial
de oxigeno del medio pasando la resarzurina de su forma oxidada (violeta) a la reducida
(incolora).
1. Con una pipeta estril tomar 10 ml. de la muestra y colocar en un tubo de ensaye
estril.
2. Agregar 1 ml. de resarzurina y tapar.
3. Invertir la muestra para mezclar e incubar en el Bao Mara o en la estufa de
incubacin por una hora
4. Observar la muestras y clasificarlas de acuerdo a la siguiente tabla
COLOR DE LA MUESTRA
CALIDAD
Violeta
Buena
Violeta- Rosado
Aceptable
Rosa
Regular
Decolorada
Mala
Determinacin de Acidez
En esta prueba se determina la cantidad de cido lctico en la leche, debido al
desdoblamiento de la lactosa en cido lctico por accin de las bacterias cido-lcticas y
se determina por titulacin directa con hidrxido de sodio de concentracin 0.1 N.
Para conocer el punto en el que la neutralizacin tiene efecto se usa como indicador la
fenoftalena al 1 % que es incolora en pH menor a 8.6 y cuando llega a ste se torna de
un color rosa.
Procedimiento:
Para realizar la prueba se pone en un vaso de precipitado 9 ml de muestra de leche a la
cual se le aaden 4 o 5 gotas de fenoftalena al 1%, titular con hidrxido de sodio 0.1 N
hasta la aparicin de un color rosa bien definido.
Clculos:
Acidez (g/l cido lctico)= V x N x 90/ P.A
Donde:
V = ml de hidrxido de sodio 0.1 N gastados en la titulacin de la muestra
N = Normalidad del hidrxido de sodio
90 = Mili equivalente del cido lctico
P.A = Volumen de la muestra en ml.
ANLISIS MICROBIOLGICOS
RECUENTO DE MICROORGANISMOS (Mesoflicos y Coliformes)
PROCEDIMIENTO
1. A partir de diluciones decimales, depositar, con pipeta estril, 1 ml de cada dilucin
en otras tantas placas de petri estriles de 90 mm de dimetro. (Anexo I)
2. Aadir a cada placa unos 15 ml de agar segn sea el caso a 45C.
3. Mezclar sobre la mesa de trabajo, realizando movimientos circulares, evitando que
el medio impregne la placa. Dejar solidificar el agar de las placas sobre superficie
horizontal. Cuando se ha solidificado perfectamente, se invierten las placas y se
introducen en la estufa, evitando que se apilen en exceso y que entren en contacto
con las paredes.
4. Incubar a 35-37C durante un periodo de 48 horas para mesoflicos.
5. Incubar a 35-37C durante un periodo de 24 horas para coliformes.
6. Incubar a 28C durante un perodo de 3 a 5 das para hongos y levaduras
7. Transcurrido el tiempo de incubacin, se cuentan las colonias en aquellas placas
que muestren entre 30 y 300 colonias aisladas. Las colonias contadas se van
marcando para evitar contarlas de nuevo. El nmero total de colonias contadas se
multiplicaran por el factor de dilucin de la placa elegida, dando como resultado el
recuento total de grmenes por gramo o miligramos de la muestra analizada.
CARNE
Grado de frescura en diferentes tipos de carne mediante la utilizacin de algunas
propiedades tales como extracto de volumen liberado y pH.
Determinacin sensorial.
Se toman 10 gramos de carne y por medio del olfato trate de distinguir el olor de la
misma. A veces es posible detectar olores amoniacales, a cido sulfhdrico, etc... Entre
muestra y muestra deje transcurrir 3-5 minutos.
Los alumnos se desempearn como un panel de catadores no entrenado, donde
evaluarn la apariencia, el color, y olor de cada muestra y su preferencia visual.
Evaluacin del olor de la carne.
Denominacin
Caractersticas
Clasificacin
Fresco
Bueno
**
Ligeramente desagradable
***
Desagradable
****
INTERPRETACION DE RESULTADOS
Las pruebas sensoriales an con jueces entrenados son subjetivas y por lo tanto tienen
sus limitaciones. Dependen mucho de cmo, cuando, quien y donde se juzga. A pesar de
ello, pueden servir para identificar las carnes que no estn aptas para el consumo
humano.
Determinacin de pH.
Con ayuda del electrodo especfico para carnes, medir el pH de las muestras y reportar.
Determinacin del Extracto de Volumen Liberado.
1. Tomar 10 gr. de muestra, envolverlas en papel aluminio y colocarlas en la estufa a
30C durante una hora.
2. Sacar de la estufa y atemperar la muestra, homogenizar con 100 ml de agua
destilada a 30C. y licuar por 2 min.
3. Filtrar el homogenizado en un embudo con papel filtro y recolectar durante 20 min.
En una probeta graduada.
4. Cuantificar el filtrado y catalogar al tipo de carne basndose en la siguiente tabla.
ml recolectados
Interpretacin
40-70
>30
La descomposicin ha iniciado.
Total descomposicin.
Microbiologa en carne.
Seguir el protocolo indicado para leches, antes de proceder a hacer las diluciones se
deber moler la carne.
HUEVOS
Clasificar los huevos en grado A, B y C, en base a la Tabla mostrada en el anexo 2.
MIEL
Determinacin de Humedad
Pesar crisol a peso constante, agregar 10 g de muestra y colocar en la estufa a 60C por
horas, pesar la muestra y sacarla de la estufa hasta que tenga peso constante.
Determinacin de Cenizas
En una cpsula de porcelana calcinada hasta peso constante ( 0,0003 g del peso de la
cpsula), pesar de 5 a 10 g de miel, carbonizar la muestra evitando prdidas por
formacin de espuma y derrames. Una vez que la muestra haya sido carbonizada y no
presente espuma, calcinar en una mufla a 600 C hasta peso constante.
% slidos de cenizas = Peso de ceniza/ Peso de la muestra x 1000
Donde:
Peso de cenizas se obtiene por diferencia, es decir entre el crisol con cenizas crisol a
peso constante.
NOTA: Esta determinacin se realiza con el objetivo de verificar que no existan metales
pesados en la muestra.
Determinacin de Acidez
1. En un vaso de precipitado de 250 ml pesar 10 g de miel, agregar 75 ml de agua
destilada libre de dixido de carbono, disolver con agitacin utilizando un agitador
magntico.
2. Introducir los electrodos del potencimetro en la solucin preparada de miel y anotar
la lectura.
3. Titular con hidrxido de sodio 0,05 N, aadindolo a una velocidad aproximada de 5,0
ml/minuto deteniendo la adicin cuando el pH sea de 8,5 inmediatamente agregar
10,0 ml de hidrxido de sodio 0,05 N y titular por retroceso con cido clorhdrico 0,05
N hasta alcanzar el pH de 8,3. Hacer un testigo con 75 ml de agua destilada libre de
dixido de carbono.
Los datos se expresan en miliequivalentes de cido por kilogramo de miel (meq/kg)
Acidez Libre = (ml de hidrxido de sodio 0,05 N de la muestra) - (ml de hidrxido de sodio
del blanco) x 10(g de muestra).
4. Medir el pH con el potencimetro y reportar.
5. Grados Brix: Colocar la muestra en el refractmetro y se observa a contraluz para
tomar la lectura directamente.
Microbiologa en miel.
Repetir el proceso marcado en leche, pero como muestra tenemos la miel y determinar
adems la cuenta de hongos y levaduras. El lmite para bacterias no patgenas ser de
1000 UFC/g, mientras que para hongos y levaduras de menos de 100 UFC/g.
Realiza la determinacin de CRA de las carnes de diferentes especies animales, tales
como res, cerdo, pollo y pescado.
Capacidad de retencin de agua (CRA) en carne fresca
Aadir 8 ml de cloruro de sodio (NaCl) 0.6 M a 5 gramos de carne molida e incubar las
muestras tratadas a 5C durante 30 minutos. Al trmino del perodo de incubacin, las
muestras se centrifugan a 3 600 rpm por 15 minutos y se determina la CRA No. 1
midiendo el volumen del sobrenadante (solucin de agua y NaCl) y la CRA No. 2 pesando
el pellet (precipitado de carne) formado en el fondo del tubo de centrfuga.
Evaluacin del pH
Se pesan 5 g de muestra (carne cruda); se aade 25 ml de agua destilada; se licua; y se
coloca en un vaso de precipitado de 100 ml. Luego se introduce en la muestra diluida el
electrodo combinado y se toma directamente la lectura del pH.
Capacidad de retencin de agua en carne descongelada (CRAd)
Se descongelan por 24 horas los cortes, se obtienen los pesos del corte congelado y
descongelado. La CRAd se determina como prdida de peso por descongelamiento, con
la siguiente frmula:
CRAd = Peso congelado (g) Peso descongelado (g) x 100
Peso congelado (g)
Parte B
Parte A
Muestra
Color
Calidad
Capacidad de retencin de agua
Fresca
Decolorada
Mala
en carne cocida (CRAc)
Fresca
decolorada
Mala
Vieja
Violeta
Buena
Se realizan cortes de 2.5 cm de
Vieja
Violeta
Buena
largo x 1.5 cm de ancho
Fresca
Violeta
Buena
aproximadamente de la zona ms
Fresca
Violeta
Buena
ancha de los cortes, las que fueron
Vieja
Violeta-rosado
Aceptable
Vieja
Violeta
Buena
cocidas a diferentes temperaturas:
77, 82 y 87C respectivamente. Se pesan los cortes crudos y cocidos y se determina la
CRAc como prdida de peso por coccin, con la siguiente frmula:
CRAc= Peso cruda (g) Peso cocida (g)x 100
Peso cruda (g)
RESULTADOS:
Leche
Tabla 1. Datos de prueba de resarzurina para observar la calidad de la leche.
Parte B Parte A
CF
CE
HL
Dilucin
-3
-5
-3
-5
-3
-5
Leche vieja
---
51
35
Leche fresca
15
111
Leche vieja
150
50
Leche fresca
0
0
I
I
0
0
Tabla
Conteo microbiolgico en muestras de leche en dilucin -1 y -2 (Nota
I=incontable)
Muestra
Media de acidez
Leche vieja
1.3950.00405a
Leche fresca
1.7550.00405b
Leche vieja
1.7550.19845c
Anlisis
de
varianza
de un
factor
RESUMEN
Grupos
Leche vieja
parte A
Leche
fresca parte
Cuenta
Suma
Promedio
Varianz
a
2.79
1.395 0.00405
3.51
1.755 0.00405
2.
Leche fresca
1.6650.19845d
A
Leche vieja
parte B
Leche
fresca parte
B
3.51
1.755 0.19845
3.33
1.665 0.19845
Color
Olor
Textura
Ml de agua
liberados
pH ANOVA
Muestra 1 Parte A
**
****
****
91.5
5.55+-0.1473a
Muestra 2 Parte A
**
**
92.5
9.68+-1.40182b
Muestra 3 Parte A
92
5.7533+-0.1556c
Muestra
1 Parte
ANLISIS
DE B
**
**
85
6.0333+-0.105039d
***
****
**
72
5.8266+-0.0321f
VARIANZA
Muestra 2 Parte B
Origen de
Suma de
Muestra
las3 Parte B cuadrad **
variaciones
Entre
grupos
Dentro de
los grupos
Total
Carne
os
Grados
de *
libertad
Promedio de
** los
90
cuadrados
0.17415
0.57333
0.05805
33
0.405
0.10125
0.57915
Probabilid
g
5.67+-0.0458
ad
0.662145
11
Valor
crtico
para F
6.59138
22
Microbiologa Parte A
Dilucion
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
CF
-3
I
40
-
-1
47
3
-5
I
I
CE
-3
50
140
42
-1
I
I
-5
3
10
19
HL
-3
89
I
I
-1
I
I
-5
46
I
I
Microbiologa Parte B
CF
Disolucin
DUDOSA
FRESCA
REFRIGERA
DA
CE
-1
26
0
16
-2
9
0
0
ANLISIS DE VARIANZA
Origen de las
Suma de
variaciones
cuadrad
os
Entre grupos
Dentro de los
grupos
Total
38.67897
78
4.05
42.72897
78
HL
-1
-2
I
35
162
Grados
de
libertad
5
12
-1
I
18
20
Promedi
o de los
cuadrad
os
7.735795
56
0.3375
-2
I
32
12
213
22.92087
57
Probabilid
ad
9.3637E06
17
Huevo
Parte A
Partes
analizadas
Anlisis de huevo
REFRIGERACIN
T0 AMBIENTE
1
2
3
1
2
Valor
crtico
para F
3.105875
24
del huevo
Cascara y
cutcula
Clara de
huevo
Yema de
huevo
Germen
Olor y sabor
peso
Cmara de
aire
Clasificacin
final (huevo
de tipo)
A
Median
o
A
A
Grande
A
Grande
A
Mediano
A
Grande
A
Mediano
Parte B
Partes
analizadas
del huevo
Cascara y
cutcula
Clara de
huevo
Yema de
huevo
Germen
Olor y sabor
peso
Cmara de
aire
Anlisis de huevo
REFRIGERACIN
T0 AMBIENTE
1
2
3
1
2
A
A
64.9
Grande
5 mm A
A
A
59.9
Mediano
4 mm A
C
C
63.1
Mediano
3 mm A
B
A
78.3
XL
7 mm B
C
C
59.4
Mediano
5 mm A
C
C
56.8
Mediano
6 mm B
Clasificacin
final (huevo
de tipo)
Miel
Parte A
%
Humedad
Peso
hmedo
1.07g
%Acidez
PH i
1.06497
1g
Peso Seco
4.4
4.3
4.4
3.75 ml
3.3 ml
4.4 ml
4 ml
Parte B
Acidez
Ph inicial: 4.7 a 26.3C
Titulacin hasta pH 8.5= 4.4ml + 10 ml = 14.4 ml gastados (se llego hasta pH
9.7)
Titulacin en retroceso con HCl hasta pH 8.3= 5.2 ml gastados
Acidez libre = (ml de hidrxido de sodio 0.05N de la muestra) ( ml de
hidrxido de sodio del blanco) x 10(g de muestra)
Acidez libre = (14.4ml)- (ml blanco) x 10g
pH= 4.6
Brix
83.1 a 24.8 C
82.2 a 25.1C
Microbiologa
Dilucion
CF
CE
HL
1 a 100
76
1 a 1000
Cuenta
Suma
Promedio
Columna 1
13.3
Columna 2
14
Varianza
0.00333
4.43333333
333
0.00333
4.66666667
333
ANLISIS DE
VARIANZA
Origen de Suma de Grados Promedio de
las
cuadrad
de
los
variaciones
os
libertad
cuadrados
Entre
0.08166
grupos
667
1 0.08166667
Dentro de
0.01333
los grupos
333
4 0.00333333
Total
0.095
Probabili
F
dad
0.00776
24.5
26
Valor
crtico
para F
7.70864
742
pH
CRA No 1
CRA No 2
Res
Pollo
Pescado
Cerdo
6.8
6.6
6.7
5.5
5.4 ml
4.2ml
4.8 ml
5.1ml
4.8gr
4.1gr
5.3gr
5.7g
DISCUSIN
Porcentaje de
retencin de
agua
52%
76%
64%
58%
En los bovinos el poder de retencin de agua disminuye con la edad siendo menor el
porcentaje de jugo exprimible en la carne de ternera que en la de vaca. En ovino, en
animales de mayor edad hay una menor CRA. (http://www.uco.es/)
CONCLUSION:
Se lograron evaluar diversos parmetros mediante los cuales se puede conocer el
grado de deterioro de algunos alimentos de origen vegetal, asi como sus propiedades
organolpticas en sus diferentes etapas de desarrollo.
BIBLIOGRAFA:
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/15-deterioro
%20de%20alimentos.htm visto por ultima vez el 23 de septiembre de 2015.