MTODOS ESPECTROSCPICOS DE ANLISIS

1. INTRODUCCIN
Para la determinacin de un analito hay mtodos clsicos y mtodos
instrumentales. Estos ltimos tienen unas ventajas sobre los primeros:
1.) Permiten realizar anlisis difciles o imposibles por los otros mtodos
con una elevada selectividad y sensibilidad. Adems, mientras en los
mtodos clsicos solo podemos determinar un analito por anlisis, en
los

instrumentales podemos determinar simultneamente

varios

analitos en un anlisis.
2.) Suelen ser ms rpidos y baratos que los clsicos. Es fcil la
automatizacin de estos mtodos instrumentales.
3.) Los instrumentos analticos pueden conectarse a ordenadores, lo que
permite un ptimo control del instrumento y manejo de datos.
4.) Desarrollo de instrumentos inteligentes.
A partir de ahora solo vamos a hablar de mtodos instrumentales.
Estos mtodos tienen ciertas desventajas:
1.) Requieren ser manejados por tcnicos expertos.
2.) Es necesario una calibracin previa del equipo. Esta calibracin previa
se hace a base de mtodos qumicos, por lo cual la exactitud del
mtodo instrumental depende de la exactitud del mtodo qumico
empleado.
3.) Esta calibracin suele ser cara.

Existe una gran cantidad de tcnicas instrumentales. Estas pueden

clasificarse en:

Espectroscpicas

Electroqumicas

Cromatogrficas

Acopladas o conjuntadas

Diversas

2. DEFINICIN

Los mtodos espectroscpicos son un amplio grupo de mtodos analticos

que se basan en las interacciones de la radiacin electromagntica con la
materia.

La radiacin electromagntica es un tipo de energa que toma varias

formas, de las cuales las ms fcilmente reconocibles son la luz y el calor
radiante. Sus manifestaciones ms difcilmente reconocibles incluyen los rayos
gamma y los rayos X, as como la radiacin ultravioleta, de microondas y de
radiofrecuencia.

Actualmente el uso de mtodos espectroscpicos est generalizado,

debido a su rapidez, a la gran gama de instrumentacin disponible y sus
grandes posibilidades de automatizacin. En muchos casos es posible la
resolucin de un problema analtico sin necesidad de recurrir a mtodos de otro
tipo.

3. PROPIEDADES DE LA RADIACIN ELECTROMAGNTICA

Muchas de las propiedades de la radiacin electromagntica se explican

adecuadamente con un modelo clsico de onda sinusoidal, que utiliza
parmetros como longitud de onda, la frecuencia, la velocidad y la amplitud. A
diferencia de otros fenmenos ondulatorios, como el sonido, la radiacin
electromagntica, no necesita un medio de apoyo para transmitirse y, por tanto,
se propaga fcilmente a travs del vaco.

Figura. Representacin de la radiacin electromagntica como una onda sinusoidal

Para caracterizar una onda pueden usarse los siguientes parmetros

ondulatorios:
Longitud de onda, : es la distancia entre mximos o mnimos sucesivos.
Se expresa en cualquier unidad de longitud, siendo las ms frecuentes el
metro, centmetro, angstrom, nanometro y micrometro.
1 angstrom (A) = 10-10 metros
1 nanometro (nm) = 10-9 metros
1 micrometro (mm) = 10-6 metros
Frecuencia, : es el nmero de ciclos por unidad de tiempo; por ejemplo,
veces que pasa por un determinado punto en 1 segundo. La unidad de
frecuencia es el segundo recproco, s-1 o hertz (Hz).

La relacin entre los parmetros mencionados es:

c
= -----

siendo c la velocidad de propagacin, que en el vaco es de 2,9979 x 10 10

cm/s.

El modelo ondulatorio falla al intentar explicar fenmenos asociados con la

absorcin o la emisin de energa radiante. Para comprender estos procesos,
hay que acudir a un modelo corpuscular en el que la radiacin
electromagntica

se

contempla

como

flujo

de

partculas

energticas

denominados fotones, en los que la energa de un fotn es proporcional a la

frecuencia de la radiacin. Este doble punto de vista de la radiacin como
partcula y como onda no es mutuamente excluyente, sino complementario. De
hecho, la dualidad onda-corpsculo se aplica al comportamiento de haces de
electrones, protones y otras partculas elementales, y se racionaliza
completamente por medio de la mecnica ondulatoria.

La energa del fotn es proporcional a la frecuencia de la radiacin

(relacin de Einstein-Planck):

hc
E = h = ---- = hc

donde h la constante de Planck (6,63 x 10-34 J . s).

La relacin anterior indica que la energa de un fotn de radiacin

monocromtica ideal (una sola frecuencia) depende nicamente de su longitud
de onda o de su frecuencia, de forma que un haz de radiacin puede ser ms o
menos intenso en funcin de la cantidad de fotones por unidad de rea, pero la
energa del fotn es siempre la misma para una determinada frecuencia.

En la siguiente figura se muestran las regiones ms importantes del espectro electromagntico. Es necesario tener en cuenta que las zonas de
separacin entre regiones no estn establecidas de modo rgido, y al pasar de
una regin a otra no existen discontinuidades en las propiedades de la
radiacin.

Figura. Espectro electromagntico

4. CLASIFICACIN DE LOS MTODOS PTICOS

Los mtodos pticos se dividen en:

1.) Mtodos pticos espectroscpicos: son aquellos en los que existe
intercambio de energa entre la radiacin electromagntica y la materia.
Estos son debidos a transiciones entre distintos niveles energticos.
Son los mtodos ms utilizados.
2.) Mtodos pticos no espectroscpicos: se basan en una interaccin
entre radiacin electromagntica y la materia que produce como
resultado un cambio en la direccin o en las propiedades fsicas de la
radiacin electromagntica. En estos mtodos los mecanismos de
interaccin

son

la

reflexin,

refraccin,

difraccin,

dispersin,

interferencias, polarizacin o la dispersin refractiva.

Espectroscpicos

Nivel molecular: UV-Visible, IR, microondas

Absorcin
Nivel atmico: absorcin atmica, rayos X

Nivel molecular: fluorimetra, fosforimetra, quimioluminiscencia

Emisin
Nivel atmico: Emisin atmica, ICP, fluorescencia de rayos X

No espectroscpicos

Dispersin: turbidimetra, nefelometra

Refraccin: refractometra, interferometra
Difraccin: rayos X
Rotacin ptica: polarimetra

Los mtodos de absorcin han sido, hasta el momento, los de uso ms

generalizado. Se basan en la absorcin selectiva de radiacin por la misma
especie a determinar o por un producto de transformacin de dicha especie. En
los mtodos de absorcin molecular las transiciones se producen entre niveles
electrnicos, vibracionales y rotacionales, por absorcin de radiacin
ultravioleta, visible, infrarroja y de microondas.

El espectro en las regiones visible y ultravioleta est constituido por

bandas representativas de un gran nmero de transiciones. Como, con la
instrumentacin ordinaria, la resolucin de las diferentes bandas no puede
tener lugar las aplicaciones cualitativas de estas tcnicas son bastante
limitadas. Sin embargo, la sensibilidad es relativamente alta, caracterstica
adecuada para aplicaciones cuantitativas.

La absorcin de energa correspondiente al infrarrojo produce cambios en

la energa de vibracin y rotacin de los enlaces en las molculas. Como los
distintos grupos funcionales estn constituidos por configuraciones atmicas
definidas, la absorcin de los diferentes grupos tiene lugar a longitudes de onda
caractersticas. De aqu, la valiosa informacin cualitativa y estructural que se
obtiene con este tipo de espectros. El taln de Aquiles de esta tcnica es su
aspecto cuantitativo, pues la sensibilidad es relativamente pequea, salvo para
ciertos grupos qumicos, tales como hidrxido e isocianato que presentan
fuertes absorciones.

Uno de los progresos ms notables que ha experimentado la espectrofotometra infrarroja en poca reciente ha sido el empleo del sistema de
transformadas de Fourier, modalidad con la que se mejoran caractersticas en

cuanto a rapidez, precisin y posibilidad de automatizacin.

La absorcin de radiacin a nivel atmico origina transiciones entre niveles

externos o entre niveles internos de los tomos, segn que la radiacin
absorbida sea ultravioleta-visible y de rayos X respectivamente.

La mayor utilidad de la espectroscopia de absorcin de rayos X se

presenta en el estudio de espesores de materiales, pues en el terreno
puramente analtico las aplicaciones son escasas, debido fundamentalmente a
su baja sensibilidad.

El fundamento fsico-qumico de la espectrofotometra de absorcin

atmica reside en el hecho de que cuando una radiacin de una determinada
longitud de onda se pone en contacto con tomos en fase de vapor, stos
absorben radiaciones energticas correspondientes a sus lneas de resonancia,
pasando a estados excitados en cantidad proporcional a su concentracin. La
atomizacin se produce con frecuencia en una llama o con mtodos
electrotrmicos y la radiacin incidente se origina en las llamadas lmparas de
ctodo hueco, que estn construidas utilizando el mismo elemento a
determinar.

La tcnica se caracteriza por su sencillez, rapidez y selectividad. Por otra

parte, el instrumental necesario suele ser bastante asequible desde el punto de
vista econmico y la cantidad de muestra necesaria para una determinacin es
muy pequea.

Los mtodos de emisin son menos utilizados que los de absorcin y en

el esquema anterior se indican algunos. En ellos se utiliza la radiacin
electromagntica emitida por la materia, independientemente de las causas
que originan dicha emisin.

Se produce luminiscencia cuando una especie molecular, que ha adquirido un estado electrnico y vibracional excitado mediante una radiacin
externa (fotoluminiscencia) o como consecuencia de una reaccin qumica

(quimioluminiscencia), pierde el exceso de energa vibracional mediante

colisiones y a continuacin vuelve al estado fundamental, emitiendo radiacin
ultravioleta o visible. La caracterstica ms importante de estas tcnicas desde
el punto de vista analtico es su gran sensibilidad.

La fotoluminiscencia puede dividirse en dos tipos, fluorimetra y

fosforimetra. De todas las tcnicas luminiscentes, la ms importante, sin duda,
es la fluorimetra, modernamente se ha desarrollado una modalidad muy
prometedora como fluorimetra de lser (con la que es posible el anlisis de
compuestos fluorescentes a niveles de partes por trilln). En cuanto a la
fosforimetra, puede indicarse que en los ltimos tiempos se ha apreciado un
notable incremento en su utilizacin, debido a mejoras que permiten trabajar a
temperatura ambiente.

La quimioluminiscencia no es una tcnica de empleo masivo, si bien se

ofrecen cada vez mejores posibilidades en el anlisis de trazas y en
inmunoensayos.

En la espectrometra de emisin, la excitacin de la muestra se lleva a

cabo mediante un arco o una chspa elctrica. Generalmente la energa
necesaria para la excitacin es tan alta que las especies moleculares se
disocian, con lo cual se emiten espectros atmicos o inicos caractersticos.
Obviamente, estas tcnicas no sern de utilidad para la determinacin del
estado de combinacin qumica de los elementos.

La excitacin por arco o chispa presenta ventajas e inconvenientes, lo cual

delimita sus campos de aplicacin. As, el arco proporciona una energa mayor
lo que hace que sea ms sensible, aunque su reproducibilidad es peor que la
de la chispa, de donde se infiere que en anlisis cualitativo se prefiera el arco y
en anlisis cuantitativo la chispa.

Cuando se utiliza una llama como fuente de excitacin, la tcnica se

denomina fotometra de llama. Debido a que la llama es menos energtica
que el arco o la chispa, la fotometra de llama limita su campo de aplicacin a

unos pocos elementos; los ms fcilmente excitables, como alcalinos y

alcalinotrreos.

La utilizacin de un plasma como fuente de excitacin, ICP, presenta

indudables ventajas relacionadas con su alta sensibilidad, gran intervalo de
linealidad y buena selectividad.

La fluorescencia atmica es una tcnica relativamente reciente y se

puede considerar relacionada con la espectrofotometra de absorcin atmica,
pues en lugar de medir la absorcin por tomos formados en la llama, se mide
la emisin de resonancia o fluorescencia de resonancia que tiene lugar en
todas direcciones despus de la absorcin. Su principal ventaja frente a la
absorcin atmica radica en que la sensibilidad es directamente proporcional a
la intensidad de la fuente luminosa fenmeno que no ocurre en absorcin
atmica.

La fluorescencia de rayos X consiste en generar rayos X en una muestra

usando otros rayos X (primarios, ms energticos) para su excitacin. Los
rayos X emitidos (secundarios) son caractersticos de la muestra excitada. El
mtodo es, para el anlisis cualitativo y cuantitativo ms importante que todos
los dems mtodos de rayos X. El anlisis cualitativo se basa en la
identificacin de las radiaciones fluorescentes producidas y el cuantitativo en la
medida de su intensidad, con ayuda de la correspondiente curva de calibrado.
El mtodo es rpido, de buena sensibilidad y bastante exactitud, si bien, las
mayores ventajas son su especificidad y simplicidad.

La turbidimetra y la nefelometra son tcnicas analticas basadas en la

dispersin de la luz por partculas en suspensin en el seno de una disolucin.
Como consecuencia de la interaccin entre la radiacin y las partculas, el
sistema no se eleva a un nivel energticamente excitado, sino que la radiacin
incidente induce un dipolo elctrico oscilante, que acta como una nueva
fuente emisora de radiacin.

Pueden realizarse dos tipos de medidas. Si la dispersin es lo suficientemente grande como para originar una disminucin apreciable en la
intensidad de la radiacin incidente, puede observarse el rayo transmitido en el
mismo

sentido que el incidente,

denominndose

turbidimetra a

la

correspondiente tcnica analtica. Si se trabaja con una suspensin que, o es

muy diluida, o est constituida por partculas relativamente pequeas, la
relacin entre la intensidad de radiacin transmitida e incidente ser
prcticamente la unidad, por lo que no podr realizarse la medicin como en el
caso anterior. Deber medirse la intensidad de radiacin en un cierto ngulo
con respeto al haz incidente, operando normalmente con un ngulo de 90 o.
Esta tcnica analtica recibe el nombre de nefelometra, y se caracteriza por su
mayor sensibilidad respecto a la turbidimetra.

La tcnica basada en la determinacin del ndice de refraccin es la

refractometra. Entre las ventajas que presenta esta tcnica cabe citar su
carcter no destructivo, empleo de pequeas cantidades de muestra y
mediciones rpidas y sencillas.

Cuando se miden diferencias entre el ndice de refraccin de la muestra y

el de una sustancia patrn se tiene la interferometra, un poco ms compleja
que la refractometra, pero con la ventaja de proporcionar mayor precisin.

La difraccin de rayos X es el mtodo de ms utilidad para estudiar

estructuras cristalinas de slidos. Cuando se hace incidir un haz monocromtico de rayos X sobre una muestra cristalina se obtiene un espectro de
rayos X difractados caractersticos y la disposicin de sus lneas o crculos
puede usarse con fines analticos.

Como se mencion al comienzo de este captulo, la radiacin electromagntica puede resolverse en dos componentes que estn polarizados en
planos perpendiculares entre si. Por otra parte, un cierto nmero de sustancias
giran el plano de vibracin de una radiacin polarizada, y la magnitud de la
rotacin debida a una sustancia determinada depende de su concentracin.
Estas sustancias se caracterizan por su asimetra molecular o cristalina, y se

dice que son pticamente activas. La medida de la actividad ptica de una

sustancia constituye la base de la polarimetra. Esta tcnica proporciona un
mtodo de anlisis no destructivo, si bien est reservada exclusivamente a
compuestos orgnicos y organometlicos pticamente activos.

5. ESPECTROS DE ABSORCIN Y EMISIN

Los procesos de absorcin y emisin puede representarse de modo

sencillo:
x + h x*
x* x + Q (calor)

La primera reaccin engloba todos los procesos de absorcin de

importancia. La segunda representa la emisin posterior de la energa
absorbida, generalmente debida a la colisin con otros tomos o molculas. En
general esta disipacin no se considera cuando se estudian procesos de
absorcin debido a que la cantidad de calor liberado es generalmente
despreciable. Sin embargo su consideracin es importante para comprender su
espectro de absorcin y para distinguirlo del de fluorescencia y el de otros
espectros.

Para que una radiacin electromagntica sea absorbida por la materia

deben cumplirse:

Debe haber una interaccin entre el campo elctrico de la

radiacin electromagntica y alguna carga elctrica de la
sustancia.

La energa de la radiacin incidente a de ser exactamente

igual a la diferencia de energas entre el estado
fundamental y uno de los estados excitados de la especie
absorbente.

Figura. Diagrama de los niveles de energa de una molcula

Los espectros de emisin se deben a un proceso que es exactamente el

inverso a la absorcin:
x* x + h

de manera que la sustancia pasa de un estado exaltado de elevada energa a

uno de baja energa produciendo una emisin que puede ser:

Resonancia: fenmeno poco frecuente que tiene lugar

cuando un tomo o molcula que ha absorbido una determinada radiacin
vuelve al estado fundamental emitiendo radiacin de la misma frecuencia que
la absorbida. Este tipo de emisin se da casi exclusivamente en sistemas con
tomos aislados en los cuales no existe posibilidad de choques con otra
sustancia antes de la emisin.

Fluorescencia y Fosforescencia: son reemisiones de radiacin de

longitudes de onda superior, es decir, de menor energa que la radiacin
absorbida. Esto es debido a que parte de la radiacin absorbida se pierde
generalmente por desactivacin vibracional antes de la emisin.

En la fluorescencia el tiempo transcurrido entre la absorcin y emisin de

radiacin oscila entre 10-4 y 10-8 segundos, de modo que la reemisin parece
instantnea y cesa cuando se elimina la fuente de radiacin.

En la fosforescencia el tiempo transcurrido entre la absorcin y la

emisin es mucho mayor, variando entre 10-4 y 10 segundos o ms.

6. LEY DE ABSORCIN DE LA RADIACIN

Al interaccionar la radiacin electromagntica con la materia se produce

absorcin si la frecuencia de la radiacin es tal que su energa coincide con la
necesaria para que el sistema pase al nivel de mayor energa y permitido.

La ley fundamental que rigen el comportamiento de la radiacin incidente

absorbida al pasar a travs de una muestra dada se denomina LEY DE BEER,
donde se establece la relacin entre la interaccin de la radiacin con la
concentracin de la muestra.

Beer encontr que un aumento de la concentracin del soluto

absorbente produce el mismo efecto que un aumento proporcional en la
distancia que recorre el haz a travs de la muestra.

A=abc
donde A es la absorbancia, a una constante, b es el espesor de la cubeta y c la
concentracin.

La Ley de Beer es fundamental en los mtodos pticos de anlisis, ya

que nos permite calcular la concentracin de una sustancia a partir de la
medida de la radiacin absorbida por una disolucin de la misma.

La Ley de Beer es la base de anlisis cuantitativo, ya que pone de

manifiesto que la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin
de un soluto. Para aplicar la Ley de Beer es necesario seleccionar la longitud
de onda ptima.

Limitaciones de la Ley de Beer

Esta Ley se cumple con soluciones diluidas (< 0.01 M), ya que en
soluciones de mayor concentracin, cada molcula afecta a la distribucin de
carga de la molcula vecina; interaccin que altera la capacidad de absorcin
de las especies.
Desviaciones de la Ley de Beer

Vamos a considerar tres tipos de errores:

Errores qumicos

Errores instrumentales

Errores personales
Errores Qumicos

Efecto del disolvente:

El efecto que produce el cambio de disolucin en un soluto no puede
predecirse de manera general aunque a menudo origina corrimientos
espectrales, ensanchamientos de bandas y desviaciones de la Ley de Beer.

Efectos debidos a sistemas en equilibrio:

Se producen desviaciones de la Ley de Beer cuando un analito se disocia,
asocia o reacciona con le disolvente para originar un producto con un espectro
de absorcin diferente.

Efectos debidos a impurezas en el agua destilada o de los reactivos as

como sustancias interferentes en la muestra.

Errores Instrumentales

Desviaciones debidas al uso de radiacin no monocromtica.

El cumplimiento estricto de la ley de Beer solo tiene lugar cuando se

utiliza una radiacin monocromtica (radiacin de una sola longitud de onda).
Sin embargo, en la prctica no es posible utilizar radiacin monocromtica, ya
que los dispositivos instrumentales aslan una banda ms o menos simtrica de
longitudes de onda en torno al valor deseado.

Desviaciones debidas a la presencia de radiacin parsita.

Se conoce como radiacin parsita a toda radiacin extraa que llega
al detector, pero que no proviene de la muestra. Puede producirse por la
presencia de polvo, defectos en el sistema ptico (ralladuras, etc.). Aunque
esta radiacin parsita existe siempre sus efectos son ms importantes a
valores elevados de absorbancia tal como se puede demostrar en la ecuacin:

De esta forma, los errores instrumentales llevan siempre a desviaciones

negativas de la Ley de Beer.
Errores Personales

Se pueden producir un gran nmero de estos errores destacando:

Cuidado de las cubetas de absorcin: deben de estar limpias y sin

huellas. Si trabajamos en el ultravioleta, hay que limpiarlas con cido
ntrico concentrado, o bien con agua regia. No se limpiara con cido
sulfrico concentrado o caliente, porque podra atacar a la cubeta.

Control de Temperatura: en la mayor parte de las medidas cuantitativas

de absorcin se realizan a temperatura ambiente. Pero si el soluto
absorbente interviene en una reaccin de equilibrio, el control de la
temperatura puede ser crtico y por ello en algunos casos debe de
controlarse. En general, un aumento de la temperatura, lleva consigo un
desplazamiento de los mximos de absorcin (o de las bandas de
absorcin) a longitudes de onda mayores en regiones del Ultra Violeta y
del visible, ocurriendo lo contrario en el infrarrojo.

7. INSTRUMENTACIN EN LA ESPECTROSCOPA PTICA

Existen dos tipos de instrumentacin para medidas de absorcin UV:

Los fotmetros, son instrumentos sencillos que permiten medir la

intensidad de radiacin, ya que van provistos de filtros para seleccionar un
rango estrecho de longitudes de onda, y como detectores, usan fototubos.

Los espectrofotmetros, son instrumentos ms o menos sofisticados

que usan monocromadores para seleccionar estas bandas estrechas de
longitud de onda. El monocromador permite una variacin continua al
seleccionar las longitudes de onda, y tambin permite realizar un barrido en
una zona amplia de longitud de onda. Como detectores usan fototubos o tubos
multiplicadores.

Filtros
- Fotmetros
Fototubos

Monocromadores
- Espectrofotmetros
Fototubos o tubos multiplicadores

Componentes bsicos de los fotmetros y espectrofotmetros

Fuentes de energa (lmpara)

Selectores de longitud de onda (filtros, monocromadores)

Cubetas

Detector

Procesador de seales

Figura. Esquema de los componentes de un espectrofotmetro

La muestra la colocamos entre el seleccionador de longitud de onda y el

detector.

Fuente de energa

Una fuente de radiacin debe generar un haz de radiacin con potencia

suficiente para que se detecte y se mida con facilidad; y debe ser estable a lo
largo del tiempo.

Pueden ser:

1. Continuas: emiten radiacin cuya intensidad vara slo en funcin de la

longitud de onda. La lmpara ms usada es la de filamento de
Wolframio, que es una fuente trmica que emite en el visible. Otras son
las lmparas de argn y de deuterio, que se usan en el ultravioleta. En
todos los casos, se hace pasar una corriente de electrones a travs de
un gas y las colisiones entre ellos provocan la excitacin electrnica,
vibracional y rotacional.
2. De Lneas: emiten un nmero limitado de bandas de radiacin, cada una
de las cuales abarca un intervalo muy reducido de longitudes de onda.
Usadas en absorcin y fluorescencia atmica. La ms usada es la
lmpara de ctodo hueco
3. Lseres: producen radiacin de alta intensidad y estrechas anchuras de
banda para cualquier longitud de onda seleccionada. Funciona como un
oscilador; es decir, la radiacin producida por el lser se le hace pasar
muchas veces por un medio activo gracias a la accin de un par de
espejos. Esto provoca que la seal emitida est muy amplificada.
Pueden ser: slidos (rub con cromo, neodimio con aluminio e itrio),
gases (helio, nen, argn, criptn, xenn) o de colorantes orgnicos.

Selectores de longitud de onda

Para conseguir medidas de absorbancia exactas, selectivas y sensibles,

es importante poder seleccionar una banda estrecha de del amplio espectro
que proporciona la fuente de radiacin. El ancho de banda es una medida
inversamente proporcional a la calidad del dispositivo, siendo la resolucin
mejor cuanto ms estrecho es el ancho de banda.

Tipos:
1. Filtros: se fabrican para una slo longitud de onda. Bsicamente,
se utilizan dos clases de filtros:

Filtros de absorcin

Filtros de interferencia

Los filtros de absorcin, se basan en la absorcin selectiva de que no

interesan y generalmente, son de vidrio, en el cual se ha dispersado o disuelto
un pigmento adecuado que permite esta absorcin selectiva. Estos filtros slo
operan en el V.
Los filtros de interferencia, se basan en el fenmeno de interferencia
ptica, es decir, una parte de la radiacin que llega es absorbida y otra, se
refleja. Proporciona anchuras de banda ms estrechas que los de absorcin y
transmitancias de tipo mayores. Estos filtros operan en el UV, Visible e IR.

2. Un Monocromador

es un dispositivo que genera un haz de

radiacin de gran pureza espectral (anchura de banda estrecha.

Trabajan de forma continua y en un amplio intervalo de longitud
de ondas; es decir, realizan barridos espectrales.

Hay dos tipos de monocromador:

Monocromador tipo prisma.

Monocromador tipo red.

Los elementos esenciales de un monocromador, son una rendija de

entrada (determinando el haz de radiacin policromtica entrante), un elemento
dispersante (que puede ser un prisma o una red de difraccin) y una rendija de
salida.

Figura. Tipos de monocromadores

El prisma o red, dispersa la radiacin policromtica en las que la

componen, y la rendija de salida transmite la correspondiente al mximo de
intensidad junto a una banda de a ambos lados. Las de redes son ms
baratas y separan mejor la longitud de onda que las de prisma.

Las caractersticas de un monocromador son:

1. Pureza espectral: el haz de salida puede estar contaminado por

radiaciones

parsitas.

Para

minimizar

esto

se

recubre

internamente con pintura negra mate y se sella para que no entre

el polvo.
2. Poseer una buena dispersin.
3. Alto poder de resolucin, es decir, que sea capaz de separar
longitudes de ondas adyacentes

4. Alta potencia de salida para que llegue al detector la mayor

energa radiante
5. Cuanto ms estrecha sea la apertura de la rendija, mayor
resolucin pero menos potencia de salida. La situacin de
compromiso se denomina Anchura de banda efectiva.

Cubetas

Son recipiente porta muestras que tienen paredes paralelas y

rectangulares, y se fabrican en diversos materiales, de manera que, permitan el
paso de luz pero no absorban radiacin. Por ello, en el UV utilizamos cubetas
de cuarzo y en el Visible usamos las de plstico o vidrios de silicato. Las hay de
diferente recorrido ptico, pero lo normal es de 1 cm de paso de luz.

Detectores

Son elementos que convierten la radiacin en un flujo de electrones y

posteriormente, en una corriente o voltaje en el circuito de lectura. El detector
ideal debera tener un amplio intervalo de con una elevada sensibilidad, una
relacin seal ruido grande, un tiempo de respuesta rpido, mnima seal de
salida en ausencia de iluminacin, as como tener una respuesta constante.

Los tres tipos de detectores usados en el UV / V son:

Clulas fotovoltaicas

Fototubos (Tubos fotoemisores)

Tubos fotomultiplicadores

La caracterstica comn a todos estos detectores es que tienen una

superficie activa capaz de absorber radiacin, de manera que, la energa
absorbida causa la emisin de electrones y el desarrollo de una fotocorriente.

Clulas fotovoltaicas, en ellas, la energa radiante genera una corriente en la

interfase entre una capa semiconductora y un metal, y se usan fundamentalmente
en el Visible. Consisten en un electrodo plano (nodo) de un metal (Cu, Fe o Al) en

el que se deposita un material semiconductor como es el Selenio, y despus se

recubre por una fina pelcula de Ag o Au. Esto sirve como electrodo colector.
Cuando al Se llega una corriente o una radiacin, se produce la excitacin de
electrodos de la interfase Se Ag (o Se Au), los cuales pasan al electrodo
colector (Ag). Los electrodos liberados migran a travs del circuito hacia el metal,
resultando una corriente de electrodos proporcional al nmero de fotones que
inciden sobre el semiconductor.

Entre las desventajas estn:

Es difcil amplificar la seal de salida, debido a la pequea resistencia

interna de la clula; por esto se usan en fotmetros de filtro.

Manifiestan fatiga (sobre una radiacin continuada, la respuesta no siempre

es constante)

Figura. Esquema de una clula fotovoltaica

Fototubos o tubos fotoemisores, consisten en un ctodo semicilndrico (capa de

metal recubierta de otra capa de xido alcalino) que es sensible a la luz, y un
nodo que es un alumbre metlico. Ambos estn encerrados hermticamente en
un recipiente cilndrico con vaco. Cuando la radiacin llega al ctodo, ste emite
electrones que son atrados hacia el nodo, el cual a travs del circuito los
devuelve al ctodo. Esta corriente fotovoltaica producida, causa una cada de
potencial a lo largo de la resistencia que es proporcional a la intensidad de
corriente.

Figura. Esquema de un fototubo

La seal del fototubo es aproximadamente unas diez veces menor a la de las

clulas fotovoltaicas, pero debido a la posibilidad de amplificar la seal de estos,
stos resultan ms sensibles que las primeras. La sensibilidad del fototubo
depende de la naturaleza de la sustancia que recubre el ctodo y puede variarse
utilizando diferentes metales alcalinos o variando el mtodo de recubrimiento.

Tubos fotomultiplicadores, son una combinacin de un ctodo fotoemisivo y una

cadena interna de dnodos fotomultiplicadores de electrones. Cuando la radiacin
llega al ctodo de composicin similar a la de los fototubos, provoca la emisin de
electrones (electrones primarios), de manera anloga a la de un fototubo, pero en
este caso, los electrones son acelerados, por la aplicacin de un potencial positivo
hacia una segunda superficie sensible, de forma que al incidir cada electrn
primario es capaz de producir la emisin de 4 5 electrones secundarios. Estos
electrones son acelerados de nuevo hacia otra superficie sensible que se
encuentra a un potencial posiblemente superior, de forma que el nmero de
electrones emitidos vuelve a multiplicarse por 4 5. Este proceso se puede repetir
tantas veces como queramos, pero en general los aparatos no llevan ms de 10
12 dnodos. La seal de salida puede a su vez amplificarse. Por tanto, es el
detector ms sensible en el UV V.

Figura. Esquema de un tubo fotomultiplicador

Procesador de seales

En general, es un dispositivo electrnico que amplifica la seal elctrica

del detector; as mismo, permite eliminar componentes indeseados. Puede
tambin alterar la seal de la corriente, cambiarla de fase, filtrarla. Tambin
puede realizar operaciones matemticas con la seal como diferenciales,
derivadas, integral...

8. Control de Espectrofotmetros: calibracin y verificacin

En el caso de la espectrofotometra se pueden realizar dos tipos de

mediciones dependiendo del anlisis solicitado:

Medida directa de absorbancia: en este caso el equipo se puede

considerar que trabaja como cualquiera que mide una magnitud fsica.
Un ejemplo es la medicin del poder colorante del azafrn.

Medida de concentraciones: en este caso lo que medimos es una

magnitud fsica (respuesta-absorbancia) con respecto a las entradas de
concentraciones qumicas que hacemos en el equipo (calibracin
instrumental).

Esta tcnica es una de las ms utilizadas para el anlisis cuantitativo.

Las caractersticas ms importantes de estos mtodos espectrofotomtricos
son:

Tienen una amplia aplicabilidad tanto a sistemas orgnicos como

inorgnicos.

Sensibilidades en torno a 10-4 10-5 M, pudiendo en algunos casos

llegar a 10-7M.

Tienen de moderada a alta selectividad.

Tienen una buena precisin.

Tienen una fcil y adecuada adquisicin de datos.

Son mtodos relativamente baratos.

Las aplicaciones de las medidas de absorcin al anlisis cuantitativo,

son muy numerosas.

Anlisis de especies absorbentes: los componentes que contienen

grupos cromforos, son susceptibles de esta determinacin (alquenos,
alquilos,

cetonas).

As

mismo,

se

pueden

determinar

tambin

componentes inorgnicos como nitratos, nitrito, ozono, iones de los

metales de transicin, yodo, etc.

Anlisis

de

especies

no

absorbentes:

numerosos

reactivos

reaccionan selectivamente con especies no absorbentes originando

productos fuertemente absorbentes en esta regin. El uso de tales
reactivos exige que la reaccin de formacin de los compuestos sea
completa.

Ejemplo de agentes complejantes para la determinacin de especies

inorgnicas:
SCN Fe3+, Mo6+
H2O2 Ti4+, V5+, Cr3+

Ejemplo de agentes formadores de complejos:

0 fenantrolina
Dimetilglioxima

Fe3+
Ni2+

Dimetilditiocarbonato Cu2+
Para la determinacin de estas especies en anlisis cuantitativo, el
procedimiento operatorio que llevamos a cabo es:

- Seleccin de la longitud de onda donde vamos a realizar medidas de

absorbancia. Las longitudes de onda sern las correspondientes a mximos de
absorcin del compuesto, ya que aqu se alcanza una mayor sensibilidad:

En estas zonas de los mximos tenemos un intervalo de donde la

absorbancia no se modifica demasiado, por lo que las fluctuaciones a la hora
de la medida no crean muchos errores.
-

Conocer las variables que afectan a la absorbancia natural del

disolvente, pH de la disolucin, temperatura, [electrolitos] y la
presencia de sustancias interferentes.

Los efectos de todas estas variables se deben de conocer, y las

condiciones para el anlisis se eligen de manera que la absorbancia no este
afectada por variaciones incontroladas de estos parmetros.
-

Medida de la muestra: hay que tener en cuenta la limpieza y

manipulacin de las cubetas.

-

Determina la relacin entre absorbancia y concentracin. Una vez

seleccionadas las condiciones realizamos la Calibracin usando patrones de

concentraciones conocidas, y que abarquen el intervalo de concentraciones
esperado en las muestras problema:

Y (A)
Y = mx + b
m

b
X (c)

Cuando hay interferencias en la matriz de la muestra es necesario

aplicar el mtodo de adicin de patrn ( adicin estndar) lo cual por
extrapolacin:

*
C

Tambin hemos de considerar que, como cualquier equipo instrumental,

los espectrofotmetros sufren desgastes con el tiempo, lo que viene a llamarse
deriva. Por ello, debemos realizar la Verificacin del equipo para comprobar
que el espectrofotmetro se encuentra dentro de las especificaciones y es til
para obtener los resultados buscados.

En este caso, podemos definir las siguientes operaciones a efectuar:

1. Longitud de onda: se verifica al menos cinco veces los mximos de

absorbancia obtenidos, para una disolucin o filtro de holmio. Se usa el
holmio ya que proporciona picos estrechos a 254, 287, 361 y 563 nm.
Se deben establecer criterios de exactitud (obtenida-referencia) y precisin
(repetitividad) a partir de las especificaciones del equipo o de otras
documentaciones existentes (revistas cientficas, plan nacional de
calidad,). Un ejemplo de criterio sera: exactitud menor a 1 nm y
precisin menor a 1 nm.
2. Absorbancias: para ello se pueden realizar 3 medidas obteniendo las
medias y desviaciones estndar

al usar filtros calibrados NBS.

Tambin se puede usar para verificar las absorbancias una disolucin

de 50 mg/l de dicromato potsico disuelto en 0.01 N de cido sulfrico.

Longitud de onda Absorbancia

235 nm

0.626

257 nm

0.727

313 nm

0.244

350 nm

0.536

En ambos casos se puede usar como criterio de exactitud 0.005 A y de

precisin 0.002 A, en la diferencia de absorbancia obtenida y la de referencia.

3. Cubetas: constituyen un elemento fundamental, ya que sus variaciones

en construccin, limpieza y posicionamiento son fuente fundamental de
las desviaciones. Para ello, separamos dos cubetas de referencia que
sern consideradas como nuestros patrones, y realizamos una
verificacin consistente en:

Introducir agua destilada en cubeta patrn y en cubeta a

verificar. Medir dos veces la absorbancia.

Intercambiar las cubetas y medir la absorbancia dos veces en

aquellos equipos de doble haz.

Obtener diferencias entre las absorbancias.

Comprobar frente

a criterio: las diferencias no pueden ser

superiores al 1.5% o a 0.006 unidades de absorbancia.