Para qu sirve la tincin gran?

La tincin de Gram, tambin conocida como coloracin de Gram, es una

tcnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios
microbiolgicos de las bacterias. Fue diseada por Christian Gram, un
cientfico dans, en el ao 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba
con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para as
poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba result todo un xito y pronto se
convirti en una tcnica muy til no solo para el estudio de las bacterias, sino
tambin para poder identificarlas rpidamente en una infeccin y seleccionar
el antibitico ms adecuado para tratarla.
Qu precauciones debe tomar en la preparacin del frotis?
REALIZACIN DEL FROTIS
1.- Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio.
Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de
siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una
mnima gota de agua, que resulta suficiente.
2.- Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea
cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua.
Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin
homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado.
3.- Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin
acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha
precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas pueden
deformarse o romperse.
FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS
4.- Por calor: Pasar cinco veces el portaobjetos por la llama durante unos
segundos. Dejar enfriar la porta entre los pases.
5.- Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden
ser observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es
continuar con el proceso de tincin.
TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO
6.- Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo
que indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5
minutos.
7.- Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se
realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte

superior de manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido
directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo.
8.- Secar el porta: en ningn caso se debe frotar el porta. Observar la
preparacin al microscopio llegando hasta el mximo aumento. Si se quiere
montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersin.
MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN
Se anotar en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparacin, la
fecha y, en su caso, el nombre del alumno.
9.- Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones
mantenindolos un mnimo de 5 minutos en cada bao. La serie de alcoholes
puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los reactivos, pero el
objetivo es que la preparacin quede totalmente deshidratada. Alcohol de 70,
Alcohol de 95, Acetona pura, Acetona-xilol (1:1) y Xilol.
10.- Montar la preparacin. Emplear blsamo de Canad, euparal o algn
medio de montaje sinttico. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm.