Agroindustrial

Science

Escuela de Ingeniera
Agroindustrial
Universidad Nacional de Trujillo

Agroin
groind Sci
Sci 5 (1)
(2015)
15)

Validacin de la metodologa analtica para determinar la

cuantificacin de taninos en la pepa de palta (Persea americana Miller
var. Hass) por cromatografa lquida de alta presin
Validation of the analytical methodology to determine the quantification of
tannins in the avocado (Persea americana Miller var. Hass) pit for liquid
chromatography of high
a,

Vctor Augusto Castro Zavaleta *; No Idelfonso Costilla Snchez

a Departamento Ingeniera Agroindustrial, Universidad Nacional del Santa. Chimbote

Per. b Facultad de Ingeniera Qumica, Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo Per.
* Autor para correspondencia: torvik44@hotmail.com (V. Castro).

Recibido 3 Febrero 2015; Aceptado 9 abril 2015

RESUMEN
En el presente trabajo de investigacin intitulado Validacin de una metodologa analtica para determinar
Taninos (Catequina) en pepa de palta (Persea americana Miller var. Hass) por cromatografa liquida de
alta resolucin (HPLC), tiene por objetivo validar una metodologa por HPLC para determinar la
concentracin de estos analitos, haciendo uso de un cromatgrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se
utiliz un detector UV-Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm
de dimetro interior; como fase mvil se emple una solucin A (metanol) y una solucin B (cido
actico glacial al 0.1%), con un tiempo de recorrido de 15 minutos, en una gradiente isocrtica de 15% de
A y 85% de B; leyndose a una longitud de onda de 210 nm, con una velocidad de flujo de 1 mL/min, se
inyect una muestra de 10 L, a una temperatura de 35 C. Encontrndose que los parmetros evaluados:
linealidad, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, precisin del mtodo y exactitud, estn dentro de
los valores aceptados para una validacin.
Palabras clave: Validacin, Taninos (Catequina), HPLC.

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Para determinar

la linealidad del
mtodo, se evaluaron 6 soluciones
estndares comprendidas entre 1 y 25
g/mL de Catequina emplendose un
cromatgrafo Agilent 1100 con arreglo
de diodos, se utiliz un detector UVVisible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud
y 4,6 mm de dimetro interior; como
fase mvil se emple una solucin A
(metanol) y una solucin B (cido
actico glacial al 0,1%), con un tiempo
de recorrido de 15 minutos, en una
gradiente isocrtica de 15% de A y 85%
de B (Hutabarat et al., 1998); leyndose
a una longitud de onda de 210 nm, con
una velocidad de flujo de 1 mL/min., se
inyect una muestra de 10 L, a una
temperatura de 35 C.
Se prepararon soluciones estndares de
Catequina menores a 1 g/mL, hasta
encontrar la concentracin, a la cual en
el cromatograma aparezca un pico en el
tiempo de retencin caracterstico
del analito (Cala et al., 2011), pero
que no sea cuantificable por el equipo,
usando:
L.C.= (10/3) L.D.
Dnde
L.C.:
Lmite
de
cuantificacin;
L.D.: Limite de deteccin.
Para determinar la precisin del
mtodo, se evalu mediante nueve
determina- ciones con tres niveles de
concen- tracin.
Se
prepararon
muestras de 8
g/mL, 10 g/mL y 12 g/mL de
Catequina por triplicado, y se
analizaron mediante un cromatgrafo
Agilent 1100 con arreglo de diodos, se
utiliz un detector UV-Visible con una
columna Octadecilsilano (C18) de 150
mm de longitud y 4,6 mm de dimetro
interior; como
fase
mvil
se
emple una solucin A (metanol) y
una solucin B (cido actico glacial
al 0,1%), con un tiempo de recorrido
de 15 minutos, en una gradiente
isocrtica de 15% de A y
85% de B; leyndose a una longitud
de onda de 210 nm, con una velocidad
de

2. Materiales y mtodos
Material de estudio: se utiliz un
estndar de Taninos (catequina) en el
tegumento y muestras de pepa de palta
hass.
Material de vidrio: fiolas de 25, 50, 100,
500 y 1000 mL, matraces Erlenmeyer
de 250 y 500 m, pipetas graduadas de 1,
2, 5 y 10 m, probetas de 25 y 100 m,
vasos de precipitacin de 50, 100, 500 y
1000 m, viales mbar de 1,5 mL.
Reactivos: cido actico glacial, agua
destilada, agua ultra pura, catequina y
metanol grado HPLC (Griffith y
Collison, 2001).
Equipos: balanza Analtica Sartorius
2942, Sensibilidad 0,0001g, cromatgrafo Agilent 1100 series, filtro de
vaco SANAILAB, micropipeta 1001000 uL, micropipeta 20-200 uL y
sistema de purificacin para obtener
agua ultra pura: Modelo: EASY PURE,
marca: Barnsted.
Las muestras de pepa de palta fueron
adquiridas en el centro de acopio
(mercado mayorista de Trujillo,
proveniente de la sierra del departamento de La Libertad).
Se prepar una solucin madre de
Catequina de 1 mg/mL, de la cual se
tom 10, 50, 100, 150, 200 y 250 L y
se les adicion a cada una de ellas en
fiolas de 10 mL, llevndose a su
respectivo aforo con agua ultrapura. De
la cual se obtuvieron soluciones de 1, 5,
10, 15, 20 y 25 g/mL respectivamente.
Se pes 0,5 g de polvo de tegumento de
la pepa de palta y se le coloc en un
tubo de ensayo, se le agreg 4 mL de
agua ultra pura y se llev al ultrasonido
por 15 minutos, luego se centrifugo a
3500 rpm por un lapso de 10 minutos,
se tom 2 mL del sobrenadante y se
filtr haciendo uso de filtros jeringa de
celulosa regenerada de 25 mm de
dimetro y 0,2 m de poro; colocndose
en viales mbar de 1,5 mL.

V. Castro y N. Costilla / Agroind Sci 5 (1)

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spectrometry. J Chromatogr A 913: 397
413.
flujo de 1 mL/min, se inyect una
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muestra de 10 L, a una temperatura de
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