FORMACIN DE LA IMAGEN A TRAVS DEL MICROSCOPIO FOTNICO.

Los microscopios fotnicos compuestos que se emplean actualmente tienen sus

antecesores en los instrumentos pticos desarrollados, en el periodo comprendido entre
1590 y 1610, por Hans y Zacaras Janssen; quienes mediante el tallado cuidadoso de
lentes biconvexas construyeron los primeros microscopios compuestos
La imagen total del microscopio fotnico se forma mediante las imgenes que
generan sucesivamente el objetivo y el ocular. Para que se forme una imagen del objeto
observado es indispensable que por lo menos dos rayos luminosos que inciden en el
objeto iluminen una porcin del mismo.
Un punto iluminado del objeto trasmite dos rayos luminosos: uno, orientado
paralelamente al eje principal, se refracta al atravesar la lente del objetivo, en tanto que
el otro se traslada en direccin oblicua hacia el centro ptico de la lente y la atraviesa
sin refractarse. En el lugar donde los dos rayos luminosos se interceptan se formar la
imagen del punto iluminado. Si del objeto se trasmiten dos rayos luminosos por cada
punto que lo constituyen igual nmero de puntos luminosos formarn la imagen. Con la
diferencia que la imagen ser ampliada n nmero de veces correspondiente al aumento
propio que posea el objetivo. Esta imagen es de mayor tamao, real e invertida.
Los otros rayos luminosos que llegan a la lente frontal del objetivo y que no
iluminan ningn punto del objeto, al atravesar la lente, le confieren al campo
microscpico una iluminacin uniforme. A este tipo de iluminacin se denomina de
campo claro.
La imagen generada por el objetivo es captada posteriormente por la lente de
campo del ocular y la ampla el nmero de veces del aumento que aquel posee. La
imagen formada por el ocular ser de mayor tamao, derecha con relacin a la imagen
formada por el objetivo y virtual.

La imagen total formada por ambas lentes ser:

aumentada de tamao, invertida y virtual con relacin al objeto.

Preparacin de
muestras.

Identificar cada
reactivo o muestra
con marcador
indeleble.

Bajar la platina
completamente y
girar el revlver
hasta el objetivo de
10x.

Enfocar la muestra
empleando el tornillo
macromtrico para
acercar la
preparacin al
objetivo.

Conectar a la energa
elctrica y encender
la lmpara del
microscopio.

Colocar y sujetar la
preparacin sobre la
platina.

Observar a travs del

ocular y girar
lentamente el tornillo
macromtrico hasta
enfocar la muestra.
Utilizar el tornillo
micromtrico para
obtener un enfoque
fino.

Sin bajar la platina,

girar el revlver para
pasar al objetivo de
40x y realizar un
enfoque fino girando
el tornillo
micromtrico.

Una vez que ha

logrado enfocar a
40x, sin bajar la
platina, colocar una
pequea gota de
aceite de inmersin,
la cual deber hacer
contacto con el
objetivo de 100x.

Al finalizar la
observacin limpiar
con papel seda el
objetivo de 100x.

Enfocar la muestra
girando slo el
tornillo micromtrico.

1.- Mencione brevemente cmo funciona? y los principales usos de los microscopios
de: a) campo claro, b) campo obscuro, c) contraste de fases, d) fluorescencia e)
confocal, f) electrnico (barrido y transmisin), g) fuerza atmica.
Microscopa de campo brillante: el material se observa sin coloracin. La luz pasa
directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente coloreados. Para formar
una imagen a partir de un corte histolgico usa luz visible, por esto la muestra debe ser
lo bastante fina como para que los haces de luz puedan atravesarla. Tambin se usan
mtodos de tincin, segn las necesidades, con el fin de aumentar los detalles en la
imagen
El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco
concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la
zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las
porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos
minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo.
Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y
sin manchas, invisibles con iluminacin normal
Microscopa en contraste de fase se usa principalmente para aumentar el contraste
entre las partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal para especmenes
delgados, o clulas aisladas. El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono
hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio
de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que
contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca
un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminacin provoca
variaciones minsculas en el ndice de refraccin de un espcimen transparente,
hacindolo visible. Este tipo de microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos
vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina.
Microscopa de fluorescencia usa una sustancia natural en las clulas o un colorante
fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la
energa absorbida como rayas luminosas: esto se conoce como fluorescencia. La luz

fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del

colorante. El microscopio que incorpora una lmpara especial, que acta emitiendo una
luz excitadora de los fluorocromos, con los que se tien las muestras a observar, y que
posee adems un filtro especial, que permite el paso de la luz emitida por el
fluorocromo.
Un

microscopio

confocal

es

un

microscopio

capaz

de

obtener

imgenes

tridimensionales de la clula. Se basa en un principio similar al de un microscopio de

fluorescencia, pero se utilizan dos diafragmas confocales (uno antes de la muestra y
otro despus) capaces de enfocar la iluminacin en un nico punto de la muestra. Se
utiliza un lser como fuente luminosa, y con l se va barriendo la muestra por todo su
volumen, plano a plano, creando muchas imgenes bidimensionales que un ordenador
interpreta, generando finalmente una imagen tridimensional del objeto.
2.- Defina poder de resolucin as como los factores que lo condicionan.
El poder de resolucin est determinado en parte por la longitud de onda de la radiacin
empleada para iluminar el espcimen y es inversamente proporcional a la misma, es
decir, a menor longitud de onda, mayor poder de resolucin.
3.- Describa mediante un esquema.las partes que componen un microscopio ptico de
campo claro.
Mecanismo ptico del microscopio de campo blanco. El lente que se encuentra ms
cercano al espcimen se denomina objetivo, tiene una distancia focal corta y, forma una
imagen real y aumentada que es el objeto del segundo sistema de lentes denominado
ocular. El condensador tiene la funcin de condensar la luz sobre el espcimen
4.- Mencione por qu es necesario el aceite de inmersin cuando se realizan enfoques
con el objetivo 100x?
El aceite tiene mayor ndice de refraccin que el aire. Si se utiliza aceite entre el
objetivo y la muestra, la imagen se resolver mejor y permitir el empleo de un mayor

aumento. Para que exista una imagen clara, los lentes deben estar dispuestos de una
manera precisa para que no produzcan efectos de difraccin ptica.
5.- Describa la tcnica correcta para preparar y enfocar un frotis bacteriano.
1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio.
2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad
del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la
mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede
bastante

extendida

para

facilitar

su

secado.

Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los

dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin
bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el
porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no
calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse.
4. Pasar cinco veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar
el porta entre los pases.
Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser
observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el
proceso de tincin.
5. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que
indique el protocolo de cada tincin concreta. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. En
ocasiones el colorante tie slo en caliente, por lo que el tiempo que dure su
actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del
mechero para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de que no
llegue a hervir ya que se producira la destruccin de las clulas.

6. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza
inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de
manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l,
pues podra arrastrar parte del frotis consigo. Eliminar la mxima cantidad de agua
de los portaobjetos.
6.- Mencione los cuidados que se deben tener con el manejo y uso del microscopio.
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en
posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no
sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda
2. Hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen
las lentes
3. No tocar nunca las lentes
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina cuando no se est usando el
microscopio
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda
en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos
recomendable).
7.- Cules son las principales diferencias entre clulas procariotas y eucariotas?
Incluya su diferencia en tamao.
Bsicamente la envoltura nuclear de ello se derivan caractersticas propias como la
manera en que se dispone la informacin gentica. As como la compartimentacin de
sus orgnulos membranosos internos.
8.- De un ejemplo de microorganismos intermedios entre virus y bacterias y entre
bacterias y hongos.
Las arqueas o arqueobacterias son un grupo de microorganismos unicelulares que al
igual que las bacterias, son de morfologa procariota (sin ncleo ni, en general,
orgnulos membranosos internos), pero que son fundamentalmente diferentes a stas,
de tal manera que conforman su propio dominio o reino.

Los microorganismos eucariotas como: los protozoos (hetertrofos y sin pared celular),
las algas microscpicas (auttrofos y con pared celular de celulosa) y los hongos
microscpicos (hetertrofos y con pared celular de quitina).
9.- Describa las caractersticas por las cuales un virus no est incluido en ningn
dominio o reino. Con qu tipo de microscopio se podra observar un virus y porqu?
Los virus son sistemas biolgicos que presentan incluso tamaos ultramicroscpicos
(los ms pequeos y los de tamaos medianos solo se pueden observar mediante
microscopio electrnico), los cuales pueden causar infecciones y solo se reproducen en
clulas husped. Los virus fuera de clulas husped estn en forma inactiva. Los virus
constan de una cubierta protectora proteica o cpside que rodea el material gentico.
Su forma puede ser espiral, esfrica o como clulas pequeas, de tamao entre 10 y
300 nm. Al tener un tamao menor que las bacterias, pueden pasar filtros que permiten
la retencin de las mismas.
Al contrario que las bacterias y los protozoos parsitos, los virus contienen un solo tipo
de cido nucleico (ARN o ADN). No se pueden reproducir por s solos, sino que
necesitan de la maquinaria metablica de la clula husped para asegurar que su
informacin gentica pasa a la siguiente generacin.
Al contrario que las bacterias, los virus no estn presentes en el ser humano de manera
natural (excepto como un elemento viral endgeno). Cuando las personas quedan
afectadas por un virus, estos generalmente se eliminan del cuerpo humano mediante
secreciones.
10.- Describa para qu se usa el azul de metileno y cmo se une a las clulas?
Es un colorante bsico para tincin en combinacin eosina-azul de metileno segn
Wright para microscopia entre otras aplicaciones. Este colorante tiene carga positiva y
se une a compuestos cargados negativamente, estos compuestos se llaman basfilos,
por tener afinidad con colorantes bsicos. Por lo cual el azul de metileno va a
reaccionar con la membrana celular tindola de azul