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MANUAL DE MICROBIOLOGIA
CLNICA PARA O CONTROLE
DE INFECO RELACIONADA
ASSISTNCIA SADE
Mdulo 8: Deteco e identificao dos
fungos de importncia mdica
Redao:
Anglica Zaninelli Schreiber Universidade de Campinas (UNICAMP)-SP
Carlos Emilio Levy Universidade de Campinas (UNICAMP)-SP
Claudia Maria Leite Maffei Universidade de So Paulo(USP)-SP
Marcia de Souza Carvalho Melhem Instituto Adolfo Lutz (IAL)-SP
Coordenao Tcnica:
Ana Clara Ribeiro Bello dos Santos Anvisa
Carlos Emlio Levy Universidade de Campinas-SP
Ficha Catalogrfica
Brasil. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
Manual de Microbiologia Clnica para o Controle de Infeco Relacionada Assistncia Sade. Mdulo
8: Deteco e identificao de fungos de importncia mdica /Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia: Anvisa, 2013.
47p..: il.9 volumes
ISBN
1. Infeco Hospitalar Controle. 2. Infeco em Servios de Sade. 3. Microbiologia Clnica. 4. Vigilncia
Sanitria em Servios de Sade. 5. Resistncia microbiana. I. Ttulo.
Sumrio
Apresentao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
Captulo 1: Deteco e Identificao dos Fungos de Importncia Mdica. . . . . . . . . . . . 7
1.1 Introduo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
1.1.1 Fungos e infeco hospitalar. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
1.2 Coleta, transporte e armazenamento de amostras. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
1.2.1 Recomendaes gerais de coleta e transporte de amostras. . . . . . . . . . . . . . . . 12
1.3 Processamento de amostras. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
1.3.1 Exame microscpico de amostras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
1.3.2 Exame microscpico direto com hidrxido de potssio (KOH) a 20%. . . . . . . 17
1.3.3 Exame microscpico direto com tinta nanquim (tinta da China) . . . . . . . . . . . 17
1.3.4 Exame microscpico com colorao pelo mtodo de Gram. . . . . . . . . . . . . . . . 18
1.3.5 Exame microscpico com colorao pantica (Giemsa, Leishman
ou Wright). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
1.3.6 Cultura de amostras biolgicas para isolamento de fungos. . . . . . . . . . . . . . . . 20
1.3.7 Meios de cultura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
1.3.8 Procedimentos para cultura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
1.4 Identificao de fungos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
1.4.1 Identificao de leveduras (morfolgica e bioqumica). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
1.4.2 Prova do tubo germinativo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
1.4.3 Cultivo em lmina para prova de filamentao e produo de
clamidsporo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
1.4.4 Prova da urease. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
1.4.5 Prova de assimilao de fontes de carbono e nitrognio ou
auxanograma. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
1.4.6 Fermentao de acares ou zimograma . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
1.4.7 Mtodos comerciais para identificao de leveduras. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
1.4.8 Identificao de fungos filamentosos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
1.4.9 Tcnica de microcultivo para fungos filamentosos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
1.4.10 Identificao de fungos dimrficos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
1.5 Descrio das principais micoses observadas no Brasil. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
1.5.1 Micoses superficiais. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
1.5.2 Micoses subcutneas e profundas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
1.5.3 Micoses oportunistas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
1.6 Corantes e meios de cultura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
Corante Azul de lactofenol-algodo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
1.7 Glossrio. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
1.8 Referncias . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Apresentao
A resistncia microbiana um grave problema mundial, estando associada ao aumento do
tempo de internao, dos custos do tratamento e das taxas de morbidade e mortalidade dos
pacientes. O uso indiscriminado e incorreto dos antimicrobianos na comunidade e no ambiente hospitalar reconhecidamente um importante fator de risco para o aparecimento e a
disseminao da resistncia microbiana.
Nesse contexto, insere-se o Laboratrio de Microbiologia, que tem como objetivo no apenas apontar o responsvel por um determinado estado infeccioso, mas tambm indicar,
atravs do monitoramento de populaes microbianas, qual o perfil dos micro-organismos
que esto interagindo com o organismo humano, possibilitando a indicao de tratamentos mais adequados. Para o desempenho satisfatrio dessa funo, fundamental que os
laboratrios de microbiologia possuam estrutura capaz de estabelecer informaes sobre
a melhor amostra biolgica, reconhecer a microbiota e os contaminantes, identificar micro-organismos associados infeco ou com propsitos epidemiolgicos, obter resultados
rpidos em casos de emergncia, realizar o transporte rpido das amostras e manter uma
educao contnua em relao aos aspectos da infeco relacionada assistncia sade.
Tendo em vista esses aspectos e considerando que a microbiologia um campo muito dinmico, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria Anvisa, em cooperao com a Organizao Pan-Americana da Sade OPAS, prope a terceira reviso do Manual de Procedimentos
Bsicos em Microbiologia Clnica para o Controle de Infeco Relacionada Assistncia
Sade, buscando atualizar informaes nos temas considerados essenciais e contando com
um seleto e conceituado corpo editorial. O manual composto por nove mdulos, a saber:
Mdulo 1 Biossegurana e manuteno de equipamentos em laboratrio de microbiologia clnica; Mdulo 2 Controle externo da qualidade; Mdulo 3 Principais Sndromes Infecciosas; Mdulo 4 Procedimentos laboratoriais: da requisio do exame anlise microbiolgica e laudo final; Mdulo 5 Tecnologias em Servios de Sade: descrio dos meios
de cultura empregados nos exames microbiolgicos; Mdulo 6 Deteco e identificao
de bactrias de importncia mdica; Mdulo 7 Deteco e identificao de micobactrias
de importncia mdica; Mdulo 8 Deteco e identificao de fungos de importncia mdica e Mdulo 9 Infeces virais.
A Anvisa e a OPAS esperam com essa publicao contribuir para que os laboratrios de microbiologia possam assimilar e alcanar novos nveis de complexidade laboratorial, atendendo s
exigncias e caractersticas prprias de cada unidade hospitalar, alm de subsidiar a adoo
de procedimentos bsicos padronizados nesses servios.
OPAS/OMS Anvisa/MS 5
Captulo 1:
Deteco e Identificao dos Fungos de Importncia Mdica
Coordenao do Captulo
Carlos Emilio Levy
Mdico - Prof. Dr. do Departamento de Patologia Clinica
Fac. Cincias Mdicas da UNICAMP
Diviso de Patologia Clnica - Setor de Bacteriologia - Hospital das Clnicas da UNICAMP
1.1 Introduo
1.1.1
OPORTUNISTAS
Superficiais
Candidases
Dermatomicoses
Invasivas
- Candidemia
- Criptococose
- Aspergilose
- Fusariose
- Zigomicoses
-Outras hialohifomicoses
- Feohifomicoses
8 OPAS/OMS Anvisa/MS
O gnero Candida , sem dvida, o mais importante, mas existem outras leveduras no ambiente hospitalar, tanto em vegetais, ar atmosfrico e gua
quanto na pele e no trato gastrointestinal dos pacientes e funcionrios, que
podem causar quadros infecciosos. Os principais gneros so Pichia spp
(Hansenula spp), Rhodotorula spp e Trichosporon spp.
OPAS/OMS Anvisa/MS 9
10 OPAS/OMS Anvisa/MS
nero Cryptococcus. Assim, a identificao de leveduras realizada, principalmente, por caractersticas fisiolgicas.
Os fungos filamentosos possuem como elemento constituinte bsico a hifa,
que pode ser septada ou no septada (cenoctica), hialina (hifomicetos) ou
demcea (feo-hifomicetos). A partir da hifa formam-se esporos, para propagao das espcies. Na grande maioria dos fungos, os esporos podem ser
chamados de condios, pois nascem diretamente delas ou sobre estruturas
ligadas a elas.
Esses conceitos fundamentais representam a base para a identificao de
um fungo, pois a classificao de filamentosos feita, em geral, pela associao de caractersticas morfolgicas macroscpicas (cor, aspecto, textura da
colnia, produo de pigmento difusvel no meio, etc.), microscpicas (forma e cor da hifa, presena ou no de septos, tipo e arranjo de esporos, etc.) e
de velocidade de crescimento (lenta, moderada ou rpida).
1.2.1
12 OPAS/OMS Anvisa/MS
Recomendaes adicionais:
Sempre que possvel, coletar amostras antes do incio da terapia especfica e, particularmente, para leses cutneas de pele e unhas, orientar
o paciente para evitar uso de medicao tpica por 4 a 5 dias antes da
coleta de escamas.
A requisio mdica que acompanha a amostra deve conter, sempre que
possvel, as hipteses diagnsticas que auxiliaro o micologista na escolha da colorao e do meio de cultura mais adequado para o isolamento
do agente etiolgico suspeitado.
Em pacientes imunodeprimidos ou muito debilitados o estudo de um
mesmo tipo de amostra biolgica, coletada em 2 ou 3 dias consecutivos,
importante para a interpretao correta de resultados positivos para
OPAS/OMS Anvisa/MS 13
Procedimento de coleta
Escarro
Aspirado gstrico
Aspirado traqueal e
secreo obtida por
broncoscopia
Sangue e aspirado de
medula ssea
Lquor
Urina
Fezes
Fazer lavagem prvia da regio anal com gua e sabo, coletar pores de
fezes em recipiente estril com tampa ou swab anal, mergulhar o swab em
salina estril e enviar o tubo ao laboratrio.
Secreo de conduto
auditivo externo
14 OPAS/OMS Anvisa/MS
Material Clnico
Procedimento de coleta
Coletar com swab estril o material de leso de mucosa jugal, papilas linguais
ou regio tonsilar. Mergulhar o swab umedecido em salina estril e enviar o
tubo ao laboratrio.
Secreo vaginal
Lquidos corporais
(pleural, asctico,
pericrdico e sinovial)
Pus e material de
abscesso
Pele e pelos
Unhas
Fazer limpeza prvia das unhas escovando com gua e sabo. Cortar com
tesoura e desprezar a parte descolada da unha e, com lmina de bisturi,
raspar as reas mais profundas e pulverulentas. Colocar esse material entre
lminas e ved-las com fita adesiva.
Pelos, cabelos, escamas de unha e pele devem ser aliquotadas para exame microscpico direto e cultura, pois para exame so clarificadas com soluo aquosa
de KOH a 20% e, para cultura, no podem sofrer nenhum tratamento prvio, sendo
por isso, inoculadas diretamente na superfcie do meio de cultura.
Lquor, secrees e fludos corporais como lquido pleural, asctico, sinovial, pericrdico, aspirado transtraqueal, lavado gstrico e broncoalveolar (BAL) devem
ser concentrados por centrifugao (1500 a 2000 rpm por 10 minutos). Os materiais coletados com swabs devem ser eludos em soluo salina e tambm devem
OPAS/OMS Anvisa/MS 15
ser centrifugados. O sedimento obtido o material adequado para o exame microscpico e semeadura em meios de cultura.
Para urina, recomendvel que uma alquota (ala calibrada) seja semeada, por
esgotamento, sobre o meio de cultura distribudo em placa de Petri, para exame
quantitativo, pela contagem de unidades formadoras de colnias (UFC). A outra
alquota deve ser centrifugada (1500 a 2000 rpm por 10 minutos) e o sedimento
ser utilizado para exame microscpico e nova semeadura em tubo (cultura qualitativa).
Escarro pode ser digerido com enzima (v/v) N-acetil-L-cisteina (250 mg de enzima
dissolvidas em 1 L de soluo-tampo citrato ou soluo fisiolgica), que fluidifica
e facilita a manipulao da amostra e formao de sedimento aps centrifugao. Porm, no foi comprovado que esse tratamento melhore a recuperao de
fungos da amostra sendo, portanto, opcional. Pode-se utilizar, como alternativa,
para digesto da amostra, soluo de KOH 20%. A poro purulenta da amostra
prefervel e pores liquefeitas no so adequadas para isolamento do agente. A poro da amostra tratada com KOH, porm, s pode ser usada para exame
microscpico, pois a potassa destri, aps algumas horas, as estruturas do fungo,
inviabilizando seu isolamento em meio de cultura. Nesse caso, outra poro da
amostra deve ser centrifugada e o sedimento usado para cultura.
Tecidos obtidos por bipsia requerem fragmentao, com o auxlio de um bisturi
estril ou macerao (gnglio) com pistilo em almofariz; pode ser feito dentro de
uma placa de Petri estril. Esse procedimento visa aumentar a rea de superfcie e
expor o microrganismo ligado ao tecido, ao maior contato com o meio de cultura.
Sangue e aspirado de medula ssea no necessitam preparao, sendo que o
exame microscpico tem baixa sensibilidade e, portanto, a cultura importante
para identificao do agente. Para cultura, as amostras so semeadas imediatamente, aps a coleta, em frascos contendo meio de cultura. O meio pode ser bifsico (15 ml de gar inclinado sob 50 ml de caldo) composto de infuso de crebro-corao (meio BHI) ou Sabouraud. Meios contendo saponina para lise e posterior centrifugao da amostra so indicados. Na prtica, frascos para hemocultura
bacteriolgica (simples ou automatizada) proporcionam isolamento adequado de
fungos, desde que respeitados os perodos necessrios ao seu desenvolvimento.
Para fungos dimrficos, de crescimento lento (>15 d), muitos autores consideram
o mtodo de lise-centrifugao o mais sensvel. Sangue e medula ssea no devem ser coletados em seringas contendo EDTA, pois essa substncia se combina
com elementos da parede dos fungos, diminuindo a sensibilidade do exame. Um
dos procedimentos recomendados a inoculao de 5 a 6 ml da amostra no frasco
com meio bifsico sendo uma parte para 10 partes do meio lquido, que deve ser
ento incubado temperatura de 30C.
16 OPAS/OMS Anvisa/MS
1.3.1
1.3.2
1.3.3
OPAS/OMS Anvisa/MS 17
Figura 2
Cryptococcus sp: leveduras em brotamento rodeadas de halo transparente (cpsula polissacardica), sobre fundo negro formado pela tinta nanquim
1.3.4
1.3.5
18 OPAS/OMS Anvisa/MS
Aspecto Morfolgico
Interpretao
Pelos
a. Dermatfitos
Unhas, escamas de
pele
a. Dermatfitos
b. Leveduras e pseudo-hifas
b. Candida spp
c. Malassezia sp
Lquor
a. Levedura capsulada(2)
a. Cryptococcus sp
Secreo vaginal
a. Levedura e pseudo-hifa
a. Candida spp
Secrees (trato
respiratrio, nasal, oral,
naso-faringe)
b. Levedura capsulada(2)
b. Cryptococcus sp
c. Levedura e pseudo-hifa(1,3)
c. Candida spp
d. Leveduras globosas ou
multiformes, de parede espessa,
incluses citoplasmticas, com
mltiplos brotamentos(1)
d. Paracoccidioides brasiliensis
a. Zigomicetos
d. Cromomicetos (agentes de
cromomicose)
e. Levedura e pseudohifa(1,2)
e. Candida spp
f. Levedura capsulada(2)
f. Cryptococcus sp
g. Paracoccidioides brasiliensis
h. Sporothrix schenckii
i. Leveduras pequenas em
macrfagos(4)
i. Histoplasma capsulatum
Tecidos, pus e
aspirados (subcutneo,
ganglionar, cerebral,
pulmonar, mucosa ou
outro)
(1,3)
OPAS/OMS Anvisa/MS 19
Amostra Biolgica
Fludos oculares
Aspecto Morfolgico
Interpretao
b. Leveduras e pseudohifas(1,3)
b. Candida spp
a. Fungos filamentosos(5)
b. Levedura capsulada(2)
b. Cryptococcus sp
c. Leveduras em brotamento(3,4)
c. Leveduras(6)
d. Leveduras pequenas em
macrfagos(4)
d. Histoplasma capsulatum
1.3.6
1.3.7
Meios de cultura
O meio de cultura pode ser selecionado segundo tipo de amostra e agente
etiolgico, conforme a suspeita clnica. De acordo com os aspectos observados ao exame microscpico da amostra, pode-se ainda redirecionar o procedimento para isolamento do agente. Recomenda-se sempre 2 tubos de
meio para semeadura da amostra biolgica, os quais devero ser incubados
temperatura de 30C, usada atualmente para todos os tipos de amostras.
Quando a hiptese diagnstica apontar para um fungo dimrfico, incubar
um dos tubos a 35O C.
Para isolamento de fungos a partir de qualquer tipo de amostra, devem ser
utilizados meios no seletivos, que permitam crescimento de fungos patognicos e bolores de crescimento rpido (< de 7dias). Esses fungos, apesar
de serem contaminantes de meio ambiente, podem ser agentes de micoses
em pacientes suscetveis, ou seja, so potencialmente oportunistas.
O meio bsico em laboratrio de micologia o gar Sabouraud dextrose
(ASD), chamado simplesmente, gar Sabouraud. O ASD o meio mais utilizado, por ser relativamente barato e permitir o crescimento de todos os fun-
20 OPAS/OMS Anvisa/MS
22 OPAS/OMS Anvisa/MS
Quadro 4 Procedimentos laboratoriais para exame direto e isolamento de fungos, segundo amostra biolgica
Amostra Biolgica
Processamento
Exame Microscpico
Meio de Cultura*
Secreo respiratria
- Fluidificao
recomendada
- Centrifugao
- Uso do sedimento
- a fresco
- KOH a 20%
- Giensa
- Tinta naquim
- ASD
- BHI
Lquor
- Centrifugao
- Uso do sedimento
- Tinta naquim
- Gram
- ASD
Urina**
- Centrifugao
- Uso do sedimento
- a fresco
- Gram
- ASD
Fluidos corporais
(pleural, asctico,
sinovial, pericrdico,
gstrico, brnquico)
- Centrifugao
- Uso do sedimento
- KOH 20%
- Giemsa
- ASD
- BHI
Pus e secrees de
abscessos
- Nenhum
- KOH 20%
- Giemsa
- ASD
- BHI
Swab embebido
em salina (mucosa
oral, nasal, vaginal,
anal, olhos, conduto
auditivo)
- Centrifugao
- Uso do sedimento
- Gram
- ASD
- Nenhum
- KOH 20%
- ASD
Tecidos e peas
- Fragmentao ou
macerao
- Imprint em lmina
- KOH a 20%
- Giensa
- Tinta naquim
- ASD
- BHI
- Semeadura em
meio de cultura
- Esfregao ou
distenso em
lmina
- Giemsa
- BHI bifsico ou
lquido
- ASD bifsico ou
lquido
OPAS/OMS Anvisa/MS 23
Dimrficos.
Fungos isolados mais de uma vez do mesmo tipo de amostra biolgica coletada
em diferentes dias e procedentes do mesmo paciente.
Isolados de ponta de cateter (alimentao parenteral, infuses venosas, etc.).
O profissional de laboratrio deve tentar identificar todas as culturas positivas relevantes e emitir o resultado mais acurado possvel. Muitas vezes, o exame microscpico direto da cultura suficiente para direcionar as medidas de controle da infeco,
outras vezes somente a identificao do fungo pode orientar adequadamente a conduta clnica.
A identificao dos fungos, de modo ideal, deve contemplar o gnero e a espcie; porm, muitas vezes, em especial para os fungos filamentosos, isso no possvel pelo
grau de dificuldade e complexidade desses microrganismos. Nesses casos, a identi-
24 OPAS/OMS Anvisa/MS
ficao do grupo de fungos pode ser suficiente para o diagnstico da micose, por
exemplo, zigomicetos, feo-hifomicetos, dermatfitos, leveduras, etc.
1.4.1
Cultivo em lmina
Negativo
Candida albicans
Hifas
Artroporadas
Somente blasrocondios
no-artrosporadas
+ blastocondios
Prova da Urease
Candida sp
com blastocondios
sem blastocondios
Trichosporon sp
Geotrichum sp
Positiva
Associar cor da colnia
Rhodotorula sp
Negativa
Branca Bege
Associar pesquisa de cpsula
Positiva
Negativa
Cryptococcus sp
Auxanograma e
Zimograma
C. tropicafis
C. parapsifosis
C. krusei
C. guilliermondii
C. glabrata
C. neoformans
Geotrichum
Trichosporon
Rhodotorula sp
Saccharomyces
Hifa
Ar
Ur
Sa
Ma
La
Ce
Tr
Ra
Assimilao
NO2
GI
Sa
Ma
La
Fermentao
Ra
Tg = tubo germinativo, Ar = artrsporo, UR = urease, Sa = sacarose, Ma = matose, La = lactose, Ce = celubiose, T = trealose, Ra = rafinose, X = xifose, I = inositol,
NO2 = nitrato, GI = glicose, + = pos, - = neg, V= varivel
Tg
C. albicans
Levedura
Cultivo em
lmina
Tr
OPAS/OMS Anvisa/MS 27
1.4.2
Figura 4
1.4.3
28 OPAS/OMS Anvisa/MS
1.4.4
Prova da urease
Semear uma alada da levedura na superfcie do meio de urease (gar
uria de Christensen).
Incubar a temperatura de 37C.
A mudana da cor do meio para rosa bispo em 24 horas indica reao positiva.
1.4.5
OPAS/OMS Anvisa/MS 29
1.4.6
1.4.7
1.4.8
30 OPAS/OMS Anvisa/MS
como o dos fungos demcios, pode ser necessrio tambm uso de provas
bioqumicas.
A morfologia microscpica mais bem visualizada com a tcnica de microcultivo que preserva a disposio original dos esporos sobre as hifas e mantm ntegras certas estruturas formadoras de esporos, por exemplo: os esporngios que so rgos de reproduo de zigomicetos.
1.4.9
Figura 6
OPAS/OMS Anvisa/MS 31
Figura 7
Micoses superficiais
Dermatofitoses (tineas)
So infeces fngicas limitadas s camadas superficiais queratinizadas da
pele, pelos e unhas, popularmente conhecida como epinge ou frieira, dependendo da localizao das leses que so extremamente pruriginosas. Em
imunodeprimidos podem acometer tecidos subcutneos.
32 OPAS/OMS Anvisa/MS
Figura 8
Exame da amostra com KOH a 20% revela hifas regulares, hialinas, septadas, refrigentes, frequentemente artrosporadas.
Cultura: material deve ser semeado em ASD, com auxlio de uma ala
em L, de forma a ficar em perfeito contato com o meio de cultura. As
colnias de dermatfitos geralmente crescem a partir do 10 dia de
incubao temperatura ambiente e os fungos so identificados pela
sua morfologia macroscpica e microscpica. No Brasil, os dermatfitos mais frequentes so T. rubrum e T.mentagrophytes e M. canis.
1.5.2
Microscopia em cultura de Sporothrix schenckii cultivado temperatura ambiente (A) e a 37oC (B)
Paracoccidioidomicose
Doena granulomatosa crnica que pode acometer pele, mucosas, linfonodos, sistema respiratrio, trato gastrointestinal, adrenais, fgado, bao e SNC.
Apresenta grande variabilidade de manifestaes clnicas, desde formas
localizadas at formas disseminadas de mau prognstico, na dependncia
da resposta imune do hospedeiro. Existe tambm a paracoccidioidomicoseinfeco, em que o indivduo no apresenta sinais e sintomas mas demonstra por testes intradrmicos positivos que entrou anteriormente em contato
com o fungo. Apresenta muitas semelhanas com a tuberculose.
34 OPAS/OMS Anvisa/MS
sulcos centrais, composta de hifas hialinas finas, septadas e fragmentadas em esporos multiformes. As colnias incubadas entre 30C a 35C
so de cor creme, pregueadas e enrugadas, cuja microscopia revela as
formas caractersticas leveduriformes que permitem a identificao do
agente.
Figura 10 Microscopia em cultura de Paracoccidioides spp cultivado temperatura ambiente (A) e a 37oC (B)
Histoplasmose
Doena que acomete primariamente o sistema retculo-endotelial. A infeco pode ser localizada ou generalizada. A histoplasmose primria afeta o
sistema respiratrio e a histoplasmose progressiva atinge fgado, bao, linfonodos, mucosas, mdula ssea, etc. Em indivduos hgidos, a infeco tem
bom prognstico, porm atualmente importante infeco oportunista associada a Aids, nos quais ocorre a forma grave e disseminada.
1.5.3
Micoses oportunistas
Candidase
Candidiase uma doena com manifestaes clnicas variadas. As infeces
aguda e crnica mostram leses na boca, faringe, pele, unhas, sistema broncopulmonar, intestinal e perianal. Ocasionalmente, endocardite, meningite,
fungemia ou infeces em outras localizaes podem ser observadas.
Agentes etiolgicos: Candida albicans e outras espcies, que esto frequentemente envolvidas em casos de micoses oportunistas em pacientes
debilitados. So os principais agentes etiolgicos de infeces hospitalares. As espcies de Candida podem ser isoladas de vrios locais do corpo
humano, como microbiota normal de cavidade oral, mucosa vaginal, regio perianal e trato gastrointestinal.
Ocorrncia: universal, incluindo as formas graves que ocorrem sob fatores predisponentes para desenvolvimento da doena, tais como: desnutrio, obesidade, diabetes, gravidez, antibioticoterapia, quimioterapia e
uso de corticosterides, manipulao endovenosa inadequada, neoplasias e outras doenas debilitantes.
36 OPAS/OMS Anvisa/MS
Procedimento laboratorial:
Amostra: (depender da sintomatologia clnica) fragmentos de pele e
unhas; raspados da mucosa oral, vaginal ou anal; secreo do trato respiratrio, sangue, lquor, urina e fezes.
Exame de fragmentos de pele e unhas devem ser feitos com soluo
de KOH 20%. Secreo do trato respiratrio ou material de mucosa
podem ser examinados pela colorao de Gram. A levedura aparece
como clulas arredondadas, com brotamentos com ou sem hifas. Pequenas clulas podem ter dimetro de 2-6m, mas formas maiores so
tambm observadas.
Cultura: o crescimento rpido (24-72 horas) entre 25C e 37C. O aparecimento ocorre em torno de 3 a 4 dias, com formao de colnias
com colorao branca bege.
Criptococose
A criptococose uma infeco subaguda ou crnica que envolve primariamente os pulmes, com tropismo pelo sistema nervoso central (meninges),
podendo atingir pele e outros tecidos.
Aspergilose
A aspergilose pode se apresentar em indivduos imunocompetentes, como
leses localizadas em unhas, ps, canal auditivo, olhos e forma bronco-pulmonar alrgica. Em pacientes imunocomprometidos, tende forma dissemiOPAS/OMS Anvisa/MS 37
Fusariose
Hialo-hifomicose com quadros clnicos os mais variados, incluindo processos
generalizados em pacientes com neoplasias. Destaca-se atualmente sua importncia como agente de ceratites e onicomicoses.
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Agentes etiolgicos: as espcies de Fusarium mais frequentemente relatadas em casos de infeces humanas so Fusarium solani, F. oxysporum, F.
chamydosporum e F. verticillioides (F. moniliforme).
Ocorrncia: Fusarium spp so ubquos e raramente causam infeco em
indivduos sadios, no entanto, as infeces disseminadas so, na maioria,
relatadas em locais de clima quente.
Procedimento laboratorial:
Amostra: dependente da localizao da leso, bipsia ou raspado de
pele, crnea, fragmento de unha ou, em casos de suspeita de disseminao, sangue.
Cultura: colnia inicialmente branca e coberta por um miclio areo
plumoso que ao maturar produz um pigmento de cor lavanda a vermelho prpura na superfcie e no reverso. Apresentam hifas hialinas,
septadas, microcondios de 2 a 3 mm de dimetro, e macrocondios
com forma de banana ou de foice pela observao em microscopia
ptica.
Zigomicose
Infeco geralmente subaguda de evoluo rpida que acomete indivduos
debilitados, transplantados, diabticos descompensados ou ainda com Aids.
Pode acometer seios paranasais, tecido subcutneo, pulmo e vasos sanguneos, causando embolia no SNC e trombose. A micose em indivduos imunodeficientes , em geral, fatal se o diagnstico no for rpido e o tratamento
especfico no for prontamente estabelecido.
Agentes etiolgicos: fungos da classe dos Zigomicetos, compreendendo os gneros Mucor, Rhizopus, Absidia, entre outros.
Ocorrncia: distribuio universal.
Procedimento laboratorial:
Amostra: secreo de sinus nasal ou tecidos obtidos por bipsia de
seios paranasais ou leses subcutneas.
OPAS/OMS Anvisa/MS 39
Exame com KOH a 20% revela hifas hialinas e largas (6-50m), cuja caracterstica principal a ausncia de septos, que caracterizam as hifas
cenocticas desse grupo de fungos.
Cultura: fungos de crescimento rpido (< 72 h) a 25C em ASD, com
hifas ereas abundantes. A identificao feita pela microscopia da
colnia que evidencia hifas cenocticas e esporos contidos dentro de
estruturas fechadas denominadas esporngios.
As localizaes topogrficas mais frequentes, relacionadas aos agentes fngicos esto resumidas na Tabela 1.
40 OPAS/OMS Anvisa/MS
Trato gastrointestinal
Mucosas
Naso-faringe
Trato urinrio
Fgado e Bao
Aspergillus
sp
Olhos
x
S. schenckii
Lquor
P. brasiliensis
Ouvidos
Pelo
Crebro
Pele e Unha
Medula ssea
Osso
Sangue
H.
capsulatum
x
Dermatfitos
Trato respiratrio
Tabela 1
Candida
sp
C. neoforman Zigomicetos
OPAS/OMS Anvisa/MS 41
Preparo:
Dissolver os componentes na gua destilada.
Acertar o pH em 5,6.
Aquecer at a completa dissoluo.
Distribuir cerca de 10 ml por tubo.
Esterilizar em autoclave a 120C por 15 minutos.
gar sabouraud-dextrose com cloranfenicol
Dissolver 100 mg de cloranfenicol em 10 ml de lcool 95C.
Adicionar em 1 litro de ASD antes da esterilizao.
gar-sabouraud-dextrose com cloranfenicol e cicloheximida
(Meios comerciais mycosel, micobiotic gar ou meio seletivo para fungos)
Diluir separadamente 400 mg de cicloheximida (Actidione) em 10 ml de
acetona.
Diluir 50 mg de cloranfenicol em 10 ml de lcool 95C.
Misturar as solues e adicionar em 1 litro de ASD antes da esterilizao.
pH= 7,0
Brain heart infusion gar com cloranfenicol (bhi)
Dissolver 50 mg de cloranfenicol em 10 ml de lcool 95C.
Adicionar em 1 litro de BHI preparado de acordo com as instrues do
fabricante, antes da esterilizao.
gar fub
Composio:
Fub . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20 g
gar. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 g
Tween 80. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 ml
Preparo:
Adicionar o fub em 250 ml de gua e ferver at borbulhar. Filtrar o fub
em gaze dobrada em quatro. Dissolver o gar em 250 ml de gua. Restaurar o volume da infuso de fub para 250 ml com gua quente, juntar as
suspenses, ajustar o pH para 6,6 6,8 e adicionar o Tween 80. Distribuir
volumes de 5 ml em tubos e esterilizar em autoclave a 120C por 15 minutos.
OPAS/OMS Anvisa/MS 43
1.7 Glossrio
1.8 Referncias
1. HOOG, G.S, GUARRO, J., FIGUERAS, M.J. and GENE, J. Atlas of Clinical Fungi, 2a Ed., CBS,
Utrecht, Holanda, 2000.
2. KANE, J., SUMMERBELL, R., SIGLER, L., KRAJDEN, S. and LAND, G. Laboratory handbook of
Dermatophytes: a Clinical Guide and Laboratory Manual of Dermatophytes and Other
Filamentous Fungi from kin, Hair and Nails, Star Publishing Co., Belmont, Ca, 1997.
3. KURTZMAN, C.P. and FELL, J.W. (coord.) The Yeasts A taxonomic study, Elsevier Science
B.V., Amsterdam, Holanda, 1998.
4. KWON-CHUNG, K.J. and BENNETT, J. E. Medical Mycology, 1992.
5. LACAZ C.S., Porto, E., MARTINS, J.E.C., HEINS-VACCARI, E.M. and MELO, N.T. Tratado de
Micologia Mdica, 9a ed., Sarvier, So Paulo, 2002.
44 OPAS/OMS Anvisa/MS
6. LACAZ, C. da S., PORTO, E., HEINS-VACCARI, E.M. and MELO, N.T. Guia Para Identificao de
Fungos Actinomicetos e Algas de interesse mdico, 8 ed., ed. Sarvier, So Paulo, 1998.
7. LARONE, D.H. Medically Important Fungi: A guide to Identification, 3 ed., Washington,
DC., 2000.
8. MAZA, Pezzlo and Baron Atlas de Diagnstico em Microbiologia, ed. Artmed, Porto
Alegre, 1999.
9. MENDES-GIANNINI, M.J. and MELHEM, M.S.C. FUNGOS In: FERREIRA, A.W. and VILA,
S.L.M. Diagnstico Laboratorial das Principais Doenas Infecciosas e Auto-Imunes, 2ed.,
Guanabara-Koogan, Rio de Janeiro, 2001.
10. MIDLEY, G., CLAYTON, Y.M. and HAY, R.J. Diagnstico em cores. Micologia Mdica, Ed.
Manole Ltda., So Paulo, 1998.
11. MINAMI, P.S. Micologia: Mtodos Laboratoriais de Diagnstico das Micoses, Ed. Manole
Ltda, So Paulo, 2003.
12. RIPPON, J.W. Medical Mycology: The pathogenic fungi and the pathogenic
actinomycetes, 2 ed., W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1982.
13. SIDRIM, J.J.C. and MOREIRA, J.L.B. Fundamentos clnicos e laboratoriais da micologia
mdica. Guanabara-Koogan, Rio de Janeiro, 1999.
14. VON NOWAKONSKY, A., SILVA, C.R.N. and MELHEM, M.S.C. Fungos e Aids: diagnstico
de infeces oportunistas, ed. Ministrio da Sade, Coordenao Nacional de Doenas
Sexualmente Transmissveis e Aids, Srie Telelab no22, 2001.
15. ZAITZ, C., CAMPBELL, I., MARQUES, S.A., RUIZ, L.R.B. and SOUZA, V.M. Compndio de
Micologia Mdica, ed. Medsi, Rio de Janeiro, 1998.
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Figura 1:
Figura 2:
Figura 3:
Figura 4:
Figura 5:
Figura 6:
Figura 7:
Figura 8:
Figura 9:
Figura 10:
Figura 11:
Figura 12:
Figura 13:
Figura 14:
Figura 15:
Figura 16:
Figura 17:
Figura 18:
Figura 19:
Figura 20:
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