PREDIO ESTRUTURAL DA PROTENA Poliphenol

oxidase DE EUTERPE OLERACEA (AAIZEIRO)

B.A.S de SOUZA1, F.B.S de SOUZA1, N.A.N. de ALENCAR2, C.N. ALVES2 e D. do
S.B. BRASIL1
1
2

Universidade Federal do Par, Laboratrio de Informtica

Universidade Federal do Par, Laboratrio de Planejamento e Desenvolvimento de

Frmacos
E-mail para contato: davibb@ufpa.br
RESUMO A palmeira Euterpe oleracea (Mart.), conhecida popularmente
como aaizeiro apresenta produtos de elevado potencial econmico, com
destaque para o palmito e o suco extrado do fruto. A palmeira de aa nativa
da Amrica do Sul e produz uma fruta pequena, preto-roxo comestvel que
tornou-se um alimento funcional muito popular, devido o seu potencial
antioxidante. A protena Polifenol oxidase uma das enzimas mais bem
estudadas em frutas e vegetais porm pouco se sabe a respeito de sua funo
fisiolgica nas plantas. Estudos evidenciam que P. oxidase fornece algum
grau de proteo contra patgenos e insetos, outros estudos demonstram que
a protena pode estar envolvida na sntese de pigmentos vegetais e lignanas.
A atividade cataltica de P. oxidase tem significativa importncia em termos
econmicos e nutricionais em relao qualidade de vrios tipos de frutas e
hortalias, pelo fato de resultar na alterao de cor, sabor e textura, alm da
perda do valor nutritivo. A enzima catalisa a converso de monofenis a odifenois e dihidrofenois a o-quinonas, que so compostos altamente reativos
e que formam polmeros, tais reaes so acompanhadas por um
escurecimento conspcuo do tecido, afetando o aspecto visual de frutas,
legumes e produtos associados, diminuindo o seu apelo ao consumidor. A
homologia da protena Poliphenol oxidase de Euterpe oleracea (aaizeiro) foi
realizada utilizando o servidor SWISS MODEL atravs do qual pde-se
propor a estrutura da protena-alvo (target) partindo de sua sequncia
primria obtida por MAZZAFERA et al. (2005) e de estruturas homlogas
tridimensionais. O segundo passo foi determinar os moldes (templates) que
estivessem diretamente relacionados ao alvo atravs de uma maior identidade
e similaridade entre eles, esse alinhamento foi realizado no servidor PDB
(Protein Data Bank), obteve-se como melhor molde a protena Poliphenol
oxidase de Vitis vinifera com 38% de identidade.

1. INTRODUO
A palmeira Euterpe oleracea (Mart.), conhecida popularmente como aaizeiro
apresenta produtos de elevado potencial econmico, com destaque para o palmito e o suco

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extrado do fruto (NASCIMENTO et al., 2010). A palmeira alcana em torno de 15 a

20m de altura e 12 a 18cm de dimetro e tem preferncia por terrenos alagados e reas
midas, por isso encontrada frequentemente s margens dos rios. A rvore tem
ocorrncia na Amrica do Sul, especificamente na regio Norte do Brasil, nos Estados do
Par, Amazonas, Maranho e Amap, e estende-se para as Guianas e Venezuela
(LORENZI et al., 1996; SOUZA et al., 1996; UDANI et al., 2011).
Seu fruto conhecido popularmente como aa pequeno, com uma colorao
preto-roxo comestvel e tornou-se um alimento funcional muito popular, devido ao seu
potencial antioxidante (UDANI et al., 2011; OLIVEIRA et al., 2000). Apresenta formato
arredondado e pesa cerca de dois gramas, sendo 17% dele comestvel (polpa com casca),
o restante corresponde ao caroo contendo a semente oleaginosa. Os frutos tem a sua
melhor poca de colheita entre agosto e dezembro, quando apresentam melhor qualidade
organolptica (ROGEZ, 2000).
A polpa de seus frutos contm elevados teores de compostos fenlicos conhecidos
por inibirem a peroxidao lipdica e as lipoxigenases in vitro, atravs da capacidade em
sequestrar radicais livres, assim como hidroxlicos, superxidos e peroxlicos, os quais
reconhecidamente promovem o estresse oxidativo celular (LEONTOWICZ et al., 2007;
OKONOGI, et al., 2007; TACHAKITTIRUNGROD et al., 2007). Estudos indicam que
tais compostos esto associados com aes anticarcinognicas (inibio de clon,
esfago, pulmo, fgado, mama e pele), anti-inflamatrias, anti-hepatotxica, antiviral,
antialrgica, antitrombtica (MAZZA & GIRARD, 1998).
No Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento da Embrapa Amaznia Oriental de
2009 estudou-se a cultivar de aaizeiro BRS Par selecionada para as condies de terra
firme, com bons nveis de produtividade de frutos, obteve-se, comparando com a
Instruo Normativa n 1 (BRASIL, 2000), expressivos teores de protenas e lipdios para
a polpa e elevado teor de compostos fenlicos com expressiva atividade antioxidante
(COHEN et al., 2009).
A semente do aaizeiro corresponde ao fruto desprovido de epicarpo e mesocarpo
com eixo embrionrio diminuto e abundante tecido endospermtico, de morfologia
esfrica e representa 73% da massa do fruto completo (Villachica et al., 1996).
A polpa do aa em sua composio fitoqumica caracterizada por elevada
concentrao de antocianinas que so da classe dos flavonides, compostos contendo
hidroxilas fenlicas, sendo a cianidina-3-glicosdeo e a cianidina-3-rutinosdeo os
principais constituintes (SCHAUSS et al., 2006a; KAHKONEN & HEINONEN, 2003;
RAHMAN et al., 2006).
Elevado teor de cidos graxos insaturados foi encontrado na polpa de aa, em
especial os cidos oleico e linoleico, sendo que em 100g de peso seco de aa 32,5g so
gorduras (saturadas e insaturadas). Dessas gorduras totais, 8,5g esto representadas por
cidos graxos saturados, onde se destaca a presena do cido palmtico e 24g so
representados por cidos graxos insaturados (SCHAUSS et al., 2006a).
O fruto tambm apresenta 13g de protena por 100g, sendo fonte de minerais,
como potssio, magnsio, clcio, fsforo e sdio, e vitaminas E e B1 (ROGEZ, 2000).
O aa ainda contm quantidades importantes de fitosteris, entre eles o betasitosterol, o campestrol e o estigmasterol (SCHAUSS et al., 2006a), e fibras alimentares,

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cerca de 12,5g por 100g de peso seco de aa (TOIARI et al., 2005).

A protena Polifenol oxidase uma das enzimas mais bem estudadas em frutas e
vegetais porm, pouco se sabe a respeito de sua funo fisiolgica nas plantas (WALKER
et al.,1998; MAYER, 2006). Estudos evidenciam que P. oxidase fornece algum grau de
proteo contra patgenos e insetos (THIPYAPONG et al.,2004), outros estudos
demonstram que a protena pode estar envolvida na sntese de pigmentos vegetais
(STRACK & SCHLIEMANN, 2001) e lignanas (CHO et al., 2003).
O escurecimento enzimtico catalisado por dois grandes grupos de enzimas: as
difenol oxidases e as peroxidases. As contribuies relativas destes dois grupos de
enzimas para os pigmentos resultantes ainda no foram resolvidas de forma clara e
provavelmente diferente entre organismos (MASON & PETERSON, 1965;
PIERPONT, 1969; WALKER, 1995; WALKER & FERRAR, 1995).
Este trabalho visa realizar a predio estrutural da protena Poliphenol oxidase
presente na espcie Euterpe oleracea Mart., o que poder contribuir no avano da
compreenso da funo desta protena na fisiologia da presente espcie.

2. PREDIO ESTRUTURAL DA PROTENA Poliphenol oxidase DE

EUTERPE OLERACEA (AAIZEIRO)
A homologia da protena Poliphenol oxidase de Euterpe oleracea (aaizeiro) foi
realizada utilizando o servidor SWISS MODEL atravs do qual pde-se propor a estrutura
da protena-alvo (target) partindo de sua sequncia primria obtida por MAZZAFERA et
al. (2005) e de estruturas homlogas tridimensionais.
No servidor UNIPROT realizou-se a pesquisa de uma sequncia de protena sem
PDB, obtendo-se a seguinte sequncia conforme mostra a Figura 1.

Figura 1- Sequncia de peptdeos obtida para a protena Poliphenol oxidase de Euterpe

oleracea no servidor UNIPROT.
>tr|Q3YJ63|Q3YJ63_9LILI Poliphenol oxidase (Fragment) OS=Euterpe oleracea PE=2 SV=1
HCAYCNEAYDQVGFPGVPVQVHYSWLFLPWHRYYLHFYERILGKLIDDDTFTLPFWNFDSDDG
MTMPEIFTNDTSSSLYNANRDTSHYSPAILDYKYSYGNTAGSGLTGKALVLSNLVLHEEDIQADP
AAGGAIYGGPAAGRAGGGHYQWVRAAGEHPQRHPHVGGHARISPHRHGRLRHRRRRLHFFQPP
LQRRPPLAPLPHVPWQQDRVQRHRLAGRLIHLLRRK

O segundo passo foi determinar os moldes (templates) que estivessem diretamente

relacionados ao alvo atravs de uma maior identidade e similaridade entre eles, esse
alinhamento foi realizado no servidor PDB (Protein Data Bank), obteve-se como melhor
molde a protena Poliphenol oxidase de Vitis vinifera com 38% de identidade conforme a
Figura 2.
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Figura 2. PDB 2P3X.

No servidor SWISS MODEL realizou-se a construo de modelos similares ao

alvo a partir do alinhamento entre o target e o template, obteve-se o seguinte modelo
proposto pelo servidor, conforme a Figura 3.

Figura 3. Modelo proposto.

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3.

VALIDAO

A avaliao estereoqumica do modelo foi feita atravs do grfico de

Ramachandran (RAMACHANDRAN; RAMAKRISHNAN; SASISEKHARAN, 1963).
O nmero de resduos localizados em regies com ngulos favorveis, dados em
porcentagem, para o modelo foi considerado satisfatrio, o modelo gerado do domnio
cataltico apresentou 83,5% dos resduos previstos dentro da regio favorvel. Esse
resultado est apresentado na Figura 4. Esta uma anlise estatstica dos nmero de
aminocidos em cada regio e permisses, exceto para resduos de prolina e glicina
(tringulo), pois estes devido a suas flexibilidades apresentam permisses diferente em
relao aos demais.

Figura 4 - Grfico de RAMACHANDRAN obtido atravs do servidor SWISS-MODEL

para validar o modelo 3D de Poliphenol oxidase.

O grfico de ANOLEA usado para avaliar a qualidade do modelo, mostra a

energia de interao de cada resduo de uma cadeia de protena podendo determinar assim

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zonas com elevada energia, geralmente relacionadas a erros estereoqumicos e choques

ou interaes indevidas. O grfico de ANOLEA est em processo de validao.
Valor de RMSD calculado para o modelo foi de 0,075 . Esse resultado
demonstra que o desvio mdio na construo do modelo foi satisfatrio, principalmente
por ser uma protena que apresenta muitas regies de ala, sendo assim, a estrutura
tridimensional proposta satisfaz as condies exigidas durante a evoluo, considerando
a estabilidade da estrutura das protenas (ARNOLD et al., 2006).
O DFIRE analisa as interaes atmicas, provendo pseudo-energias para os
modelos as quais indicam a sua qualidade. Este valor para a presente protena foi de 160,33.

4.

CONCLUSO

O presente modelo encontra-se em processo final de validao para

posteriormente ser depositado no banco de dados PDB (Protein Data Bank).
Atravs da elaborao do modelo tridimensional da protena Poliphenol oxidase
ser possvel realizar estudos de ancoragem e dinmica molecular permitindo o estudo
das interaes moleculares presentes nesta protena e com outras substncias.

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