OPS/CEPIS/96

Original: espaol

CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA

MTODOS DE ANLISIS PARA LA

EVALUACIN DE LA CALIDAD DEL AGUA

Ing. Antonio Guevara Vera

M.S. en Saneamiento Ambiental
Profesional Residente, CEPIS

Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria y Ciencias del Ambiente

Divisin de Salud y Ambiente
Organizacin Panamericana de la Salud
Oficina Sanitaria Panamericana Oficina Regional de la
Organizacin Mundial de la Salud
Lima
1996

CONTROL DE LA CALIDAD DEL AGUA

MTODOS DE ANLISIS PARA LA
EVALUACIN DE LA CALIDAD
DEL AGUA

ING. ANTONIO GUEVARA VERA

M. S. Saneamiento Ambiental
Profesional Residente, CEPIS

Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria y Ciencias del Ambiente

Divisin de Salud y Ambiente
Organizacin Panamericana de la Salud
Oficina Sanitaria Panamericana. Oficina Regional de la
Organizacin Mundial de la Salud
Lima- Per
1996

Siempre el inicio de toda tarea se torna

dificultosa, pero luego de comenzado ella,
el camino no parece tan tortuoso.
A. G. V.

Dedicado a:
Margarita
Victor
Yaissa
Jose de la Paz
Esther
Quienes siempre estn conmigo

AGRADECIMIENTO
Quiero expresar mi agradecimiento:
Al Dr. Clemente Quintero Rojo, Rector de la Universidad Nacional Experimental de los
Llanos Occidentales " Ezequiel Zamora" ( UNELLEZ ), y a todas las Autoridades Universitarias,
por haber apoyado la realizacin de mi de ao sabtico.
Al Ing. Sergio Caporali, Director del Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria y
Ciencias del Ambiente ( CEPIS ), y a todo su personal, por permitir que realizara mi ao sabtico
en el Centro , me apoyaron y me dieron todas las facilidades para la realizacin del presente
trabajo.
Al Ing. Guillermo Len S., Asesor del CEPIS en el area de Tratamiento de Aguas
Servidas por su asesoramiento ayuda en la presente Investigacin
A los Ingenieros Freddy Piate profesor Titular de la Universidad Nacional Experimental
de los Llanos Centrales " Romulo Gallegos " ( UNERG. ), y Emerson Rincn profesor Asociado
de la UNELLEZ, Ncleo San Carlos Cojedes, por su aporte y ayuda a la realizacin de la
presente Investigacin.

2
NDICE

Pag.
1. Generalidades ................................................................................................. 3
2. Criterios y Tcnicas de Muestreo de Aguas ...... ..... ... ........... ... ... ... ... . .. .. ... .... 3
2.1. Frecuencia de Muestreo para Anlisis Fsico-Qumico .. ... .. ... .. .. .... .. ... ... ... .. 4
2.2. Frecuencia de Muestreo para Anlisis Bacteriolgico .. ......... ... .. ... .. .. . ... .... .. 5
2.3. Seleccin del Sitio de Muestreo para anlisis Fsico-Qumico ... ................. 7
2.4. Seleccin del Sitio de Muestreo para Anlisis Bacteriolgico ....................... 7
2.5. Tcnica de Captacin y Transporte de las Muestras de Agua
para Anlisis Fsico-Qumico ........................................................................ 8
2.6. Tcnicas de Captacin y Transporte de las Muestras de Agua
para Anlisis Bacteriolgico ...................................................................... 1O
2.7. Mtodos de Preservacin de Muestras de Agua para Anlisis
de Laboratorio ........................................................................................... 11
3. Mtodos de Anlisis para los Parmetros Fsico - Qumicos de la
Calidad del Agua ........................................................................................... 17
3. 1. Determinaciones Fsicas .............................................................................. 17.
3.2. Determinaciones Qumicas .......................................................................... 20
4. Mtodos de Anlisis para los Parmetros Bacteriolgicos de la
Calidad del Agua ........................................................................................... 36
4.1. Contaje Total de Colonias .......................................................................... 36
4.2. Tcnicas de los Tubos Mltiples de Fermentacin. ................. ................. 37
4.3 Mtodos Rpidos Para Determinar la Calidad del Agua ............................ .41
Bibliografia ...................................................................................................... 44
TABLAS

1. Frecuencia Mnima De Muestreo Para Anlisis De Parmetros

Fsico- Qumicos ............................................................................................. 6
2. Frecuencia Mnima De Muestreo Para Anlisis De Parmetros
Microbiolgicos ............................................................................................... 6
3. Preservantes Importantes Para Muestras De Agua ........................................ 13
4. Tratamiento De Campo Para Muestras De Agua ............................................ 16
5. Diluciones Recomendables Segn La DBO Esperada ..................................... 31
6. Indice NMP para varias combinaciones de resultados positivos ...................... 40
FIGURAS

l. Ejercicio De La DBO En El Tiempo .............................................................. 30

2. Diagrama Esquemtico Para Detectar Coliformes Totales
Y Coliformes Fecales ....................................................................................... 38

MTODOS DE ANLISIS PARA LA EVALUACIN DE LA CALIDAD

DEL AGUA
1. Generalidades
La evaluacin de la calidad del agua se realiza mediante una serie de anlisis de laboratorio
dirigidos a conocer cualitativa y cuantitativamente, las caractersticas fisicas, qumicas y biolgicas
ms importantes que pueden afectar, su uso real y potencial , como el tipo y grado de tratamiento
requerido para un adecuado acondicionamiento.
A fin de garantizar la confiabilidad de los resultados, que arrojen tales anlisis de
laboratorio, las tcnicas y procedimientos deben haber sido cuidadosamente desarrollados,
evaluados y con los niveles de sensibilidad requeridos, ademas se deben establecer un conjunto de
normas y procedimientos para la correcta captacin, traslado y preservacin de muestras de agua,
as como tambin debe tenerse cuidado en las unidades y terminologa usada.
Es de suma importancia destacar que los resultados de los exmenes de laboratorio no
tienen valides si la muestra es captada sin cumplir la normativa sobre criterios y tcnicas de
muestreo, puesto que es condicin indispensable que la muestra sea lo ms representativa posible
del agua en estudio
La Asociacin Americana de Salud Pblica (American Public Health Association, APHA);
La Asociacin Americana de Abastecimiento de Agua (American Water Works Association,
AWWA) y la Federacin para el control de la Polucin de las Aguas (Water Pollution Control
Federation, WPCF), han establecido normas internacionales para la caracterizacin de la calidad
del agua (APHA-AWWA-WPCF, 1992), las cuales se encuentran incluidas en los denominados
"Mtodos Normales para el Examen de las Aguas y de las Aguas Residuales" (Standard Methods
For The Examination ofWater and Wastewaster), de comn adopcin por numerosos pases en
todo el mundo.
En base a lo recomendado en estas normas internacionales, han surgido diversos criterios,
mtodos y tcnicas de anlisis, que permiten el estudio adecuado de los distintos parmetros ,
desde el proceso inicial de captacin de las muestras hasta la interpretacin correcta de los
resultados obtenidos. Los exmenes de laboratorio pueden ser fisicos, qumicos y biolgicos; a
continuacin se describen los mtodos ms usuales para efectuar tales estudios de calidad del
agua; comenzando por los criterios y tcnicas para la captacin, traslado y preservacin de las
muestras de agua, luego los mtodos para los anlisis fisico - qumicos y finalmente los mtodos
para los anlisis bacteriolgicos.

2. Criterios y Tcnicas de Muestreo de Aguas

Los procedimientos para la captacin de muestras varan segn los anlisis que se van a
efectuar y de las condiciones del cuerpo de agua; independientemente de los fines para los cuales
han sido tomadas esas muestras, ellas deben ser representativas del cuerpo de agua en estudio.
Una muestra es representativa en la medida en que sus caractersticas correspondan a la
existencia de una gran masa total. Sin embargo para lograr tal condicin, deben tomarse en cuenta
varios factores, entre los cuales podemos incluir: homogeneidad del cuerpo de agua a muestrear,
nmero de sitios muestreados, frecuencia de muestreo, tamao de las muestras individuales y las
tcnicas de captacin.

En la mayora de los casos, las diferentes fuentes de agua no presentan una total
homogeneidad, por lo que la obtencin de una muestra representativa requiere de una buena
tcnica y de un adecuado nmero y tamao de muestras. El criterio generalmente utilizado, es el
de captar varias muestras individuales del tamao que las normas permitan y en el mayor nmero
de sitios muestreados, para as obtener una muestra compuesta que represente mejor la fuente de
agua bajo anlisis.
La frecuencia de muestreo, igualmente puede afectar el grado de representatividad,
cuando el intervalo seleccionado no permita la deteccin de cambios importantes de las
caractersticas de calidad de las aguas, por lo que es recomendable establecer una frecuencia
mnima de muestreo, que adems de evidenciar tales cambios, sea razonable desde el punto de
vista prctico y econmico; y en cuanto a los sitios de muestreo, es necesario sealar que la
seleccin de los mismos va a depender fundamentalmente del tipo de anlisis a realizar y de la
naturaleza y caractersticas de la fuente en cuestin. Por ejemplo, si se van a efectuar anlisis
fisico - qumico para definir de un modo muy general la calidad del agua de un embalse, el sitio
ms recomendable para la captacin de la muestra seria en el centro de la masa de agua; si el
objetivo de la evaluacin es para fines de uso, el sitio de captacin deberla ser en un lugar cercano
a la toma. Cuando se trata de anlisis bacteriolgicos, con fines de control de la calidad del agua
servida a las poblaciones, el muestreo debe realizarse en la red de distribucin, etc.
Por otro lado, existen una serie de factores de carcter operacional que pueden afectar la
frecuencia y seleccin de los sitios de muestreo y por ende la representatividad y exactitud de los
estudios realizados, estos factores son: acceso al lugar de muestreo, disponibilidad de equipos de
recoleccin confiables, recursos humanos capacitados, disponibilidad de energa para operar
equipos de recoleccin y registros, disponibilidad de registros de flujos o caudales de las fuentes a
muestrear, etc.
Los factores ms importantes relacionados con el proceso de muestreo para determinar las
caractersticas y composicin de las aguas, estn basados en los criterios y normas establecidos
por el Ministerio de Sanidad (MSAS, 1992) y el INOS (S/Fa, S/Fb) y complementado con la
informacin dada por el CEPIS (1985, 1979, 1976), Cubillos (1977); Castillo (1970) y Guevara
(1990)
2.1.Frecuencia de Muestreo para Anlisis Fsico-Qumico
Un factor determinante en. la frecuencia de muestreo, lo constituye la variabilidad de la
composicin fisico-qumico de las aguas, la cual a su vez est condicionada por factores
geolgicos, hidrolgicos, biolgicos, humanos, etc. Si la variabilidad es significativa durante el
ao, el muestreo debe ser ms frecuente e incluso se puede requerir un registro continuo para
poder describir adecuadamente los parmetros de estudio. Si por el contrario la variabilidad es
pequea o poco significativa, la frecuencia se puede establecer en forma estacional o limitarse la
misma a comprobaciones peridicas.
a) Frecuencia de muestreo en aguas superficiales:
En trminos generales la variabilidad de los factores de calidad en las aguas superficiales
es ms acentuada y ms rpida que la que presentan las aguas subterrneas. Para el caso de las

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aguas superficiales donde el flujo es controlado por grandes embalses o se mantiene constante por
alimentacin subterrnea, la frecuencia de muestreo mensual podra ser la ms recomendable. En
aguas superficiales sujetas a los efectos de escorrenta, como ros y quebradas, es necesario que el
muestreo se realice con una mayor frecuencia, debido a los cambios constantes a que es sometida
la composicin de estas fuentes de agua; la instalacin de equipos de registros y analizadores
automticos para una vigilancia continua de parmetros crticos, o la captacin de muestras con
intervalos diarios, sera los ideal en estos casos.
El muestreo diario ha sido considerado adecuado para la investigacin amplia de la calidad
qumica del agua, sin embargo en estudios de reconocimientos o de cuencas la frecuencia de
muestreo se sugiere que sea semanal o mensual.
b) Frecuencia de muestreo en aguas subterrneas:
De manera general, los cambios en la composicin fisico-quimico de las aguas
subterrneas son lentos y poco significativos, no obstante, en algunos casos los mismos pueden
ser muy acentuados como resultado de cambios en el equilibrio hidrolgico debido a las
variaciones en las ratas de cargas o descarga de los acuferos, o bien la infiltracin de aguas
superficiales.
En relacin al muestreo de aguas subterrneas, dada la naturaleza relativamente estable de
las mismas, los programas de muestras mensuales, estacionales o anuales pueden detectar los
cambios en la calidad del agua de estas fuentes.
c) Frecuencia de muestreo en Plantas de Tratamiento:
El muestreo en este caso se realiza con el fin de controlar los procesos de tratamiento.
Normalmente se captan muestras tres veces al da y durante todos los das. Puede ser aconsejable
instalar monitores continuos para la vigilancia de parmetros crticos, tales como turbiedad, pH y
cloro residual.
En la tabla 1 se muestra la frecuencia mnima de muestreo para el anlisis de los
parmetros fisico- qumicos

2.2.Frecuencia de Muestreo para Anlisis Bacteriolgico

La frecuencia del muestreo para el control de la calidad bacteriolgica de los sistemas de
abastecimiento y de los sistemas propios de los usuarios, debe ser tal que se garantice una estricta
vigilancia. de su condicin sanitaria. Esta se establece en funcin de la poblacin servida y de los
riesgos de contaminacin del sistema de distribucin como se aprecia en la tabla 2.
Cuando se van a tomar varias muestras al mismo tiempo y en un mismo lugar, se debe
empezar por el muestreo bacteriolgico para evitar los riesgos de contaminacin, al manipular
otros tipos de muestras.

TABLA 1 FRECUENCIA MINIMA DE MUESTREO PARA ANLISIS DE

PARMETROS FSICO- QUMICOS
Componente o Caractersticas

Frecuencia Mnima

Color
Turbiedad

Una(!) muestra quincenal aguas no sometidas

a tratamiento de clarificacin.
Una(!) muestra diaria en aguas tratadas

Olor
Sabor
Aspecto
Temperatura
Cloro Residual

Una (1) muestra diaria

Todos los dems parmetros incluidos en las

Normas Sanitarias de calidad de las aguas

U na ( 1) muestra anual

Fuente: Normas Sanitarias de Calidad de las Aguas Destinadas al Uso Humano

TABLA 2 FRECUENCIA MINIMA DE MUESTREO PARA ANLISIS DE

PARMETROS MICROBIOLGICOS

Poblacin Abastecida

Frecuencia Minima

Menor de 5,000

U na ( 1 ) muestra mensual

5,000 a 100,000

Una ( 1 ) muestra mensual por cada 5,000 personas

Mayor de 100,000

Una ( 1) muestra mensual por cada 100,000 personas

Fuente: Normas Sanitarias de Calidad de las Aguas Destinadas al Uso Humano

2.3. Seleccin del Sitio de Muestreo para anlisis Fsico-Qumico

La seleccin del sitio de muestreo para este tipo de anlisis, debe estar en funcin del tipo
de investigacin a efectuar, propsito del estudio y las variaciones fisico-qumicas que se puedan
prever en las fuentes de agua a analizar.
a) Seleccin del sitio de muestreo en aguas superficiales:
- Ros y Corrientes: Se debe partir de la necesidad de definir la calidad del agua a lo largo
de la seccin transversal del ro en el punto y en el momento que se hace el muestreo. Si las
caractersticas fisico- qumicas son homogneas a lo largo de la seccin transversal ,se considera
que una muestra tomada en un punto de la seccin es representativa y por lo tanto define la
calidad del agua. Si por el contrario, las caractersticas del agua no son uniformes a lo largo de la
seccin transversal, tericamente se puede obtener una muestra que represente la composicin
total de la corriente, mezclando varias muestras captadas simultneamente en lugares de flujos
similares.
En este ltimo caso, el nmero de muestras requerido puede ser muy elevado, por lo que
es deseable que el proceso de captacin se simplifique. Una forma de lograr esto, consiste en
ubicar sitios de muestreo donde la composicin del agua sea uniforme con la profundidad y la
seccin transversal, de tal manera que una muestra captada en cada centro de flujo sea
representativa de la seccin en cuestin.
-Lagos y Embalses: El muestreo se realiza de acuerdo con un modelo tridimensional,
para lo cual se procede a cuadricular el rea de inters, y efectuar las captaciones a diferentes
profundidades en cada interseccin de esa cuadrcula.
Cuando slo se recolecta una muestra para definir de un modo general el carcter medio
del lago o embalse, esa muestra debe captarse en el centro de la masa de agua. Para evaluar la
calidad del agua para fines de uso, el sitio de captacin o lugar de muestreo debe estar ubicado en
un lugar cercano a la toma, ademas se tomaran otras muestras para tener una idea de las
caractersticas del agua embalsada.
b) Seleccin del sitio de muestreo en aguas subterrneas.
Cuando el objetivo del muestreo es para el control de la calidad del agua en un pozo en
produccin, o de un pozo recin perforado, el sitio ms adecuado para efectuar la captacin de las
muestras, es a la descarga de la bomba en el pozo en estudio.
Cuando lo que se quiere estudiar es la calidad del agua del acufero, las muestras se
tomarn directamente en el pozo a. diferentes niveles de profundidad.
2.4. Seleccin del Sitio de Muestreo para Anlisis Bacteriolgico
Para el control de la calidad del agua servida a poblaciones, el muestreo se realiza en las
redes de distribucin del agua potable, como en la planta de tratamiento; en esta ltima, antes de
ser conducida a los tanques de almacenamiento o de distribucin, el muestreo se realiza en grifos
ubicados entre el punto de incorporacin del suscriptor a la red y un punto en la red domstica;
cuando se trata de vivienda con estanques, la captacin debe ubicarse en sitios entre el punto de
incorporacin y el estanque.

Los sitios de muestreo en los embalses, ros, manantiales, etc. se seleccionan en funcin al
estudio a realizar. Si se trata de cuerpos de agua destinados a sistemas de abastecimiento, las
muestras debern ser representativas del agua que entra o va entrar al sistema en el punto de
toma. Las muestras no sern captadas demasiado cerca a las orillas, ni tan alejadas de Ja toma. En
los ros se evitarn las zonas de estancamiento relativo (remansos).
En el caso de pozos, la captacin debe efectuarse en grifos colocados en la descarga
directa de los mismo.
2.5. Tcnica de Captacin y Transporte de las Muestras de Agua para Anlisis
Fsico-Qumico
En la captacin de muestras para anlisis fsico-qumicos, se requiere de un volumen
mnimo de dos litros para lo cual se recomienda el uso de una botella qumicamente limpia y hecha
de un vidrio de buena calidad (neutro) o tambin de Polivinil Clorido Rgido (P.V.C),
prcticamente incolora y equipada con una tapa con excelente condicin de cierre. Antes de
captar la muestra, se debe enjuagar el envase dos o tres veces en Ja misma agua que se va a
analizar, a fin de "curarla", es decir, eliminar cualquier sustancia que no corresponda con la
verdadera composicin del agua bajo estudio; luego se llena y se tapa hermticamente.
Cuando se desea medir la radiactividad en una muestra de agua, es recomendable el uso de
botellas hechas de polietileno.
Las muestras deben ser transportadas al laboratorio en el menor tiempo posible. El tiempo
permisible entre la captacin de la muestra y el examen fsico-qumico no debe pasar de 24 horas,
a fin de evitar alteraciones en parmetros tales como: Alcalinidad, nitratos, nitritos, sulfatos, pH,
slidos, color, flor, hierro, etc. Adems las muestras para su transporte deben ser refrigeradas,
sta precaucin es debido a que durante el periodo de almacenamiento y envo las muestras estn
sujetas a cambios atribuibles a sus caractersticas y al recipiente que las contiene.
Es necesario que al refrigerar las muestras se tomen las medidas que prevengan cualquier
contaminacin proveniente del hielo derretido. La refrigeracin debe mantenerse despus de su
llegada al laboratorio y el anlisis debe iniciarse mximo dos horas siguientes al arribo de la
muestra.
El procedimiento para captar las muestras vara segn los sitios:
a) Captacin de muestras en ros:
Se toma la muestra en la parte donde la velocidad del flujo sea mayor. La botella se debe
inclinar en un ngulo de 45 con la horizontal, dirigiendo la boca hacia arriba contra la corriente y
destapndose esta cerca del agua. Mientras la botella se llena, se mover lentamente contra la
corriente para evitar que el agua toca Ja mano entre en ella; De este modo la botella se llena una
cuarta parte con el agua que se quiere captar, se repone el tapn y se le da a la botella unas
cuantas sacudidas para lavar el interior; esta operacin se repite dos (2) veces ms. Despus de
lavarla la tercera vez, se llena Ja botella por completo con el agua y se tapa. Durante la operacin
de llenar la botella debe sostenerse con la otra mano el tapn para evitar que se ensucie.

b) Captacin de muestras en manantiales:

La botella se colocar lo ms cerca posible de la boca del manantial, a fin de captar el agua
antes de que esta toque el suelo; luego se procede a llenarla igual que en el caso anterior.
c) Captacin de muestras en pozos:
Si no tiene bomba, se saca con baldes el agua existente en el pozo, para que se renueve
con agua fresca. Luego se saca un balde lleno de agua para obtener la muestra y se enjuaga la
botella tres veces consecutivas, llenndola por ltimo completamente. Se coloca el tapn y se
enva al laboratorio. Si el pozo tiene bomba, se debe poner en funcionamiento la misma, en forma
ininterrumpida, por lo menos media hora antes de captar la muestra.
d) Captacin de muestras en grifos
Se abre el grifo totalmente, en forma ininterrumpida, durante un tiempo minimo de cinco
minutos, a fin de renovar el agua de la tuberia interior. Despus de enjuagar la botella tres veces
consecutivas se llenar totalmente.
e) Captacin de muestras en un estangue:
Se toma la botella destapada, por la parte inferior, se llena parcialmente de agua dos o tres
veces, se enjuaga y se bota fuera del estanque. Luego se sumerge la botella 30 cm. por debajo de
la superficie y se hace un rpido recorrido hacia adelante para que termine de llenarse, se tapa y se
enva al laboratorio.
En todos los casos de captacin de muestras de agua, se debe evitar alterar la composicin
fisico-qumico con elementos extraos a ella, y que adems no transcurra mucho tiempo (no ms
de 24 horas) entre la captacin de la muestra y sus anlisis.
f) Identificacin de la muestra
Inmediatamente despus de tomar la muestra se debe proceder a su identificacin,
colocando una tarjeta donde se anotan los siguientes datos minimos requeridos:
- Nombre de la persona o entidad que solicita el anlisis.
- Si proviene de un acueducto, nombre de la poblacin servida por este
- Estado o Entidad Federal de la Repblica.
- Fuente de agua.
- Localizacin del sitio de captacin.
- Punto de la fuente donde se capt la muestra.
- Fecha y hora de la captacin
- Nmero de la botella de captacin.
- Olor del agua, aspecto.
- Informe del tiempo meteorolgico.
- Dispositivos de captacin.
- Si el agua proviene o no de algn sistema de tratamiento especificarlo (cruda o tratada).

g ) Transporte de las muestras

El transporte de las muestras debe hacerse en cajas de madera, plstico u otro material de
resistencia satisfactoria, para evitar la ruptura durante el transporte al laboratorio.

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2.6. Tcnicas de Captacin y Transporte de las Muestras de Agua para Anlisis
Bacteriolgico
Cuando se toman muestras para el anlisis bacteriolgico es necesario adoptar todas las
precauciones a fin de asegurarse que la muestra sea representativa del agua que se desea analizar
y para evitar contaminacin accidental de la misma durante el proceso de muestreo.

Igualmente si se van a captar varias muestras, para otros tipos de anlisis, al mismo tiempo
y en la misma fuente, es recomendable que se tome primero la muestra para el examen
bacteriolgico, a objeto de evitar el riesgo de contaminacin del punto de muestreo durante la
recoleccin de las otras muestras.
En la captacin de muestras para exmenes bacteriolgicos deben ser usadas botellas
especialmente destinadas para este fin y previamente esterilizadas. Se recomiendan los envases de
vidrio neutro con tapa de vidrio esmerilado de baquelita de capacidad 120 mi. La tapa y el
cuello de la botella deben estar protegidos con papel de aluminio para evitar su contaminacin.
Los envases no deben destaparse sino hasta el momento mismo del muestreo y debe evitarse que
el agua toque algn objeto mientras pase el punto de captacin a la botella.
Los envases que se utilicen para el muestreo de agua potable, deben contener, antes de ser
esterilizados, una concentracin suficiente de tiosulfato de sodio (O, 1 mi de una solucin al 10%
de tiosulfato de sodio por cada 100 mi. de agua) con el fin de neutralizar el cloro residual que
pueda estar presente en la muestra e impedir de esta manera, que contine ejerciendo su accin
bacteriolgica y disminuya o elimine la oportunidad de detectar los microorganismos que podrian
indicar una posible contaminacin del agua.
Para la esterilizacin de las botellas y la cubierta protectora, son sometidas a condiciones
de presin (15 Psi) y temperatura de 12lC durante 15 minutos.
Una vez captadas las muestras debern ser enviadas al laboratorio, lo ms pronto posible.
Para muestras de agua potable el tiempo recomendable entre la captacin de la muestra y el
examen bacteriolgico, no debe pasar de seis horas para aguas muy contaminadas y de doce horas
para aguas relativamente puras; sin embargo se puede tolerar un tiempo mximo de veinticuatro
horas, bajo la condicin de que sean sometidas a una adecuada refrigeracin entre 5C y 1OC y
as impedir o atenuar el crecimiento bacteriano durante el perodo de traslado y almacenamiento
de las muestras.
El procedimiento para captar las muestras vara segn los sitios:
a) Captacin de muestras en ros y manantiales:
Se baja la botella formando un ngulo de 45C con la horizontal, apuntando la boca hacia
arriba contra la corriente hasta que casi toque el agua. Luego se saca el tapn, al mismo tiempo
que la botella se introduce en el agua movindola despacio contra la corriente mientras se llena,
para evitar que el agua que toca la mano entre en la botella. Cuando el envase se ha llenado tres
cuartas parte de su capacidad se saca del agua y se tapa, se introduce en un termo que contenga

11

suficiente agua natural como para cubrir las botellas hasta tres cuartas partes, y luego se enva al
laboratorio.
b) Captacin de muestras en pozos:
Si no tiene bomba se extrae el agua que tena el pozo, para que se renueve con agua
fresca, luego con un balde se saca agua nueva para obtener la muestra. Si tiene bomba deber
funcionar en forma ininterrumpida una o ms horas antes de captar la muestra, esta se puede
tomar en la descarga libre de la bomba o en algn grifo colocado para este fin y se siguieron las
instrucciones dadas para captacin de un grifo.
c) Captacin de muestras en un grifo:
Se abre el grifo por cinco minutos y luego se cierra; se procede a esterilizar la boca del
grifo mediante flameado con un soplete o una lamparita de alcohol. Despus de dejar enfriar el
grifo y de regular el flujo, se inicia la captacin de la muestra retirando el tapn y colocando la
botella donde sale agua, hasta que la misma se ha llenado unas tres cuartas partes, se tapa de
nuevo, se coloca en la caja y se enva al laboratorio.
d) Captacin de muestras en un estanque:
Se destapa la botella sosteniendo el tapn con una mano. Con la otra mano se invierte
boca abajo el envase y se introduce en el agua unos 30 cm. bajo la superficie, se da vuelta de
manera que se llene, evitando que el agua que toca la mano entre en la botella. Se saca el envase
lleno hasta tres cuartas parte de su capacidad, se tapa inmediatamente, se coloca en la caja y se
enva al laboratorio.
e ) Registro de las muestras
Despus de captadas las muestras deben ser registradas e identificada apropiadamente
para lo cual se le colocan a las botellas unas etiquetas con los siguientes datos: Nombre de la
persona que capt la muestra, fecha, hora y ubicacin exacta del sitio de muestreo, temperatura
del agua, detalles de cualquier tratamiento aplicado al agua, condiciones del tiempo, gasto de la
fuente, etc.
f) Transporte de las muestras
Para su transporte las muestras son colocadas en cavas o recipientes adecuados llenos de
hielo y con una bolsa plstica adjunta; en ningn caso debe colocarse el hielo y los envases que
contienen las muestras en forma simultnea, ya que al derretirse el hielo puede ocurrir
contaminacin de estas ltimas.

2.7. Mtodos de Preservacin de Muestras de Agua para Anlisis de Laboratorio.

Durante el perodo que generalmente transcurre desde la captacin de las muestras de
agua hasta la realizacin de los anlisis de laboratorio respectivos, se pueden producir cambios
significativos en la composicin qumica y biolgica de estas muestras debido a la inestabilidad de
sus diversos constituyentes. Estos cambios a su vez pueden traer como consecuencia una
incorrecta interpretacin de la verdadera calidad de tales aguas, al disminuir la representatividad
de las muestras.

12

De lo anterior se desprende la necesidad de aplicar mtodos o tcnicas de preservacin de

muestras de agua, que permiten la mayor estabilidad posible de los elementos o factores de
calidad de agua, durante el proceso de muestreo.
La preservacin de muestras, completa y sin errores, de cualquier tipo de agua, es una
imposibilidad prctica, ya que nunca se puede conseguir la estabilidad completa de cada
constituyente, a lo sumo pueden solamente retardar los cambios qumicos, que surgen al remover
la muestra de la fuente original.
Los cambios qumicos que pueden ocurrir en una muestra de agua, son debidos a
reacciones qumicas y fisicas como la oxidacin, reduccin, precipitacin, absorcin, e
intercambio de iones. Los cationes metlicos pueden precipitarse como hidrxidos o formar
complejos con otros constituyentes: los cationes y/o aniones pueden cambiar su estado de
valencia bajo ciertas condiciones de reduccin u oxidacin; otros constituyentes pueden disolverse
o volatilizarse con el transcurso del tiempo. Los cationes metlicos, tales como el hierro y plomo,
pueden ser absorbidos en superficies de vidrio, cuarzo, plstico, etc.
Los cambios biolgicos pueden transformar la valencia de un elemento en otra valencia
distinta, la destruccin de clulas por lisis puede resultar en la descarga de materia celular en una
solucin; la influencia biolgica puede alterar el ciclo de algunos elementos en la composicin de
muestras de agua, como es el caso del nitrgeno y el fsforo.
La preservacin de las muestras de agua tambin es muy importante cuando se desea
evaluar la calidad sanitaria y bacteriolgica de una fuente de agua o la eficacia de un tratamiento.
En este caso la disminucin o incremento en el desarrollo de organismos, bacterias
principalmente, presentes en la muestra, pueden alterar la concentracin de los mismos durante el
tiempo transcurrido entre la captacin y el inicio del examen de laboratorio.
a ) Mtodos de preservacin de muestras
Los mtodos de preservacin son relativamente limitados y van dirigidos a:
Retardar la accin biolgica, retardar la hidrlisis de compuestos y complejos qumicos y
reducir la volatibilidad de algunos constituyentes.
Entre estos mtodos tenemos la adicin de sustancias qumicas y la refrigeracin.
En la tabla 3 se muestran los diferentes preservantes que generalmente se utilizan para
retardar los cambios en las muestras de agua.

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TABLA 3 PRESERVANTES IMPORTANTES PARA MUESTRAS DE AGUA

Preservantes

Accion

Aplicable a

Cloruro de Mercurio

Inhibidor Bacteriano

Formas Nitrogenadas
Formas Fosfricas

Acido Ntrico (HN03)

Solvente metlico, previene la Metales

precipitacin

Acido Sulfrico ( H,SO4 )

Inhibidor Bacteriano

Muestras orgnicas ( DQO,

aceites, grasas).
Nitrgeno, formas fosfricas.

Formacin de sal con bases

orgnicas

Amonaco, aminas

lcali, hidrxido de sodio

(NaOH)

Formacin de sal con

compuestos voltiles

Cianuros, cidos orgnicos.

Refrigeracin

Inhibidor Bacteriano, retrasa

las tasas de reaccin qumica

Acidez- alcalinidad, materiales

orgnicos, DBO, color, olor,
nitrgeno orgnico, fsforo
orgnico, carbono, etc.
Organismos biolgicos
( coliformes, etc. )

Fuente: CEPIS ( 1979 )

14
El cloruro de mercurio como preseiverante tiene la desventaja, de que adems de su alta
toxicidad, presenta dificultades para su segura eliminacin, por lo que su uso para tales fines es
muy restringido y solo en casos especiales. Se utiliza para formas nitrogenadas (nitratos, nitrito,
amonaco y nitrgeno orgnico) y para formas fosfricas (ortofosfato, hidrolizable y total) a una
concentracin de 40 mg. por litro de muestra.

En la determinacin de trazas de iones metlicos en el agua, se debe eliminar cualquier

riesgo de contaminacin de las muestras por efecto de impurezas que puedan estar presentes en
los recipientes utilizados para su captacin. Por esto es recomendable que las botellas sean lavada
suficientemente con detergente y agua de grifo, cido nitrico, cido clorhdrico y agua destilada o
deionizada y as evitar errores en la interpretacin de los resultados de laboratorio realizados.
Cuando se desean efectuar determinaciones de sustancias o compuestos orgnicos, es
aconsejable que las botellas de captacin sean lavadas con cido cromnico y abundante agua
destilada, a fin de eliminar posibles depsitos orgnicos en tales botellas.
b ) Acondicionamientos previos al envo. para el anlisis de elementos metlicos
Otros acondicionamientos que son recomendables efectuar a las muestras de agua para el
anlisis de elementos metlicos, antes de su envo al laboratorio (an cuando pueden ser
realizados en el momento del anlisis respectivo) son los siguientes:
- Para el caso de elementos metlicos disueltos, se procede a filtrar la muestra a travs de
un filtro de membrana 0,45u tan pronto como sea posible despus de la captacin. Ordinariamente
dos litros de filtrado son suficientes. Luego se acidifica el filtrado con cido ntrico (3 ml/I)
redestilado en un pH de 3 menos, a fin de disminuir la prdida de solutos por oxidacin y/o
precipitacin o por adsorcin sobre las paredes del recipiente.
- Para determinar metales totales la muestra de acidifica con cido ntrico redestilado a un
pH de 2 en el momento de la recoleccin (aproximadamente 5 mi de HN03 por cada litro de
muestra). No se filtra la muestra. El volumen requerido para los anlisis de laboratorio se sita
entre 50 a 100 mi de muestra.
- La determinacin de metales en suspensin se realiza mediante la filtracin en el campo
de una muestra sin tratamiento preseivativo, a travs de un filtro de membrana de 0,45u.
Generalmente 100 mi de filtrado son suficientes para los anlisis de laboratorio.
c )Tratamiento de sedimentacin y mesclado previo al envo de algunas muestras
Existen otras determinaciones fisico-qumicas que requieren que las muestras de agua
reciban un tratamiento de sedimentacin y mezclado, sin filtrar, antes de su envo al laboratorio, a
tal efecto tenemos:
- Sedimentacin, sin filtrar: En este caso se toma un litro de muestra y luego se almacena
en un lugar frio y fuera de la luz diurna. Despus que haya sedimentado cualquier partcula en
suspensin, se toman alcuotas del sobrenadante y se procede inmediatamente al anlisis

15

respectivo, despus de abrir la botella con la muestra. Este tratamiento se hace para las siguientes
determinaciones: Acidez, alcalinidad, dixido de carbono, color y pH.
- Bien mezclada, sin filtrar: Se toma un litro de muestra y se almacena en un lugar fro y
fuera de la luz diurna. Analice tan pronto como sea posible despus de la captacin, para lo cual
se agita la muestra hasta que todo el material suspendido se distribuya uniformemente y se toman
las alcuotas correspondientes (100 mi es suficiente). En las alcuotas se hacen las siguientes
determinaciones: Nitrgeno orgnico, nitrgeno amoniacal, fsforo, DQO, cianuros, slidos
suspendidos, slidos voltiles, turbiedad.
d ) Tratamientos especiales para algunas muestras:
Determinaciones especiales de nitrgeno, oxgeno disuelto, fsforo orgnico y sulfuros,
pueden requerir de muestras representativas adicionales y de tratamientos individuales:
- Nitrgeno: Para evitar que las concentraciones de los varios componentes del ciclo del
nitrgeno, puedan cambiar como resultado de la actividad biolgica, se suele utilizar el
cloroformo (5 mi por litro de muestra) o mercurio (40 mg. por litro de muestra), as como
tambin se recomienda la refrigeracin de las muestras a OC - 4C. Las muestras deben
mantenerse en la oscuridad, hasta el anlisis respectivo.
- Oxgeno disuelto: Inmediatamente despus de recoger la muestra, se sugiere convertir el
oxgeno disuelto en una cantidad equivalente de yodo libre que es ms estable en solucin que el
oxgeno, para lo cual se utiliza el yoduro de potasio alcalino (KI + NaOH) a razn de 1 mi por
300 mi de muestra.
- Fsforo orgnico: El uso del cloroformo (5 mi por litro de muestra) inactiva los
microorganismos y estabiliza el sistema de fsforo orgnico a ortofosfato.
- Sulfuros: La adicin de 2 gramos de acetato de zinc por litro de agua evitar que el agua
que contiene sulfuros disueltos pierda cido sulfidrico, sobre todo si el pH de la muestra es bajo.
Si el pH es elevado, el oxgeno tiende a oxidar los sulfuros. Adems se debe evitar la aireacin de
la muestra.
En la tabla 4 se presenta un resumen de los tratamientos de campo recomendados para las
muestras de agua antes de efectuar los respectivos anlisis de laboratorio.

16

TABLA 4.

TRATAMIENTO DE CAMPO PARA MUESTRAS DE AGUA.

Tipo de Tratamiento

Volumen de
muestra

Determinaciones que se pueden efectuar

Filtrada ( filtro de membrana de 100 mi a 2 litros

0.45 )y acidificada
( HN03 a pH menor de 3) a
razn de 3 ml/l.

Aluminio, arsnico, bario, cadmio, calcio,

cromo, cobalto, cobre, hierro, plomo, litio,
magnecio, manganeso, molibdeno, niquel,
potacio, plata, sodio, estroncio, vanadio,
zmc.

Filtrada ( filtro de membrana de 100 mi

0.45 ), sin acidificar.

Boro, cloruro, fluoruro, dureza, litio,

nitrgeno, fsforo, potacio, selenio, silice,
sodio, slidos disueltos, sulfatos.

Acidificada con cido ntrico a

pH menor de 2, a razn de 5ml
por cada litro de muestra sin
filtrar.

50 a 100 mi

Todos los anteriores.

Sedimentacin sin filtrar.

50 a 100 mi

Acidez, alcalinidad, dixido de carbono,

color y pH.

Bien mezclada sin filtrar

50al00ml

Nitrgeno orgnico, nitrgeno amoniacal,

fsforo, DQO, cianuros, slidos
suspendidos, turbidez.

50 a 100 mi

Nitrgeno amoniacal, nitratos y nitritos.

Fosforo orgnico.

Mercurio (cloruro de mercurio) 50 a 100 mi

40 mg por litro de muestra.

Nitrgeno amoniacal, nitratos y nitritos

Yoduro de potasio alcalino 1 mi 50 a 100 mi

por 300 mi de muestra.

Oxgeno disuelto.

Acetato de zinc 2 gr. por litro

de muestra.

50 a 100 mi

Sulfuros.

Refrigeracin a OC - 4C

50 a 100 mi

Nitrgeno amoniacal, nitratos y nitritos

Tratamiento Especial:
Cloroformo ( 5 mg por litro de
muestra)

Fuente: Cubillos ( 1977 ).

17
3. Mtodos de Anlisis para los Parmetros Fsico - Qumicos de la Calidad del
Agua.
Los mtodos fsicos-qumicos ms usados en la determinacin de la Calidad del agua estn
basados en los mtodos de anlisis recomendados por el "Standard Methods far the Examination
of Water and Wastewater" y que son utilizados normalmente por los diferentes laboratorios de
aguas; ademas se han revisado los procedimientos empledos por:
MSAS, 1990, 1991; CEPIS, 1985; Rivas, 1976; Lara, 1974; INOS,S/Fa.
3.1. Determinaciones Fsicas
Los anlisis fsicos miden y registran aquellas caractersticas del agua que pueden ser
observadas por los sentidos y que en algunos casos crean problemas de rechazo por parte del
pblico consumidor, hacindola inadecuada para uso domstico e industrial. Sin embargo estas
caractersticas tiene menor importancia desde el punto de vista sanitario, ellas son: Color, olor,
sabor, turbiedad, temperatura, residuos, conductividad especfica.
a) Color:
El mtodo ms utilizado en la determinacin del color de una muestra de agua, consiste en
la comparacin visual de la misma con una serie de patrones de soluciones coloreadas de
cloroplatinato de potasio, cloruro de cobalto y cido clorhdrico. Este mtodo se base en que la
combinacin de tales sustancias da colores muy parecidas al color del aguas naturales; es muy til
para medir el color del agua proveniente de materias orgnicas tales como residuos vegetales,
hojas, corteza, races, humus y turba. No es recomendable para medir el color en aguas
industriales con alta concentracin de colorantes, en este caso se deben usar los mtodos
espectrofotomtricos.
El mtodo platino-cobalto utiliza como unidad de color aquel producido por 1 mg/l de
platino (como K2PT CL6). Se puede emplear para determinar el color aparente y el color real de
una muestra de agua. En ambos casos el procedimiento consiste en preparar una solucin madre
con las sustancias mencionadas anteriormente ( cloroplatinado de potasio, cloruro cobalto so y
cido clorhdrico), luego con esta solucin se prepara la serie de patrones de color usando tubos
de Nessler de 50 mi, como se observa a continuacin:
Solucin Madre (mi)
0,0
0,5
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0

Unidades de Color

o
5
10
20
30
40
50
60
70

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Para determinar el color aparente con menos de 70 unidades de color, se colocan 50 mi de
la muestra de agua a analizar en un tubo de Nessler de 50 mi y se compara el color con la serie de
patrones, anotando aquel que ms coincida. Para un color mayor de 70 unidades se colocan 25 mi
o porciones ms pequeas (20 mi, 1O mi, 5 mi) de la muestra original en un tubo de Nessler de 50
mi, hasta poder hacer la comparacin con los patrones correspondientes y luego el color estimado
se multiplica por el factor de dilucin, obtenindose as el valor del color total.
En el caso del color real o verdadero, a la muestra original debe eliminarse la turbiedad
antes de la determinacin del color respectivo. Para lo cual se procede a filtrar (Papel Whatman
N4) o centrifugar la muestra de agua en forma usual (3600 R.P.M.).
Si se desean efectuar comparaciones entre muestras de color, deben ajustarse a valores del
pH iguales, ya que el color vara como funcin del pH. Se sugiere un valor de pH de 8,3, ya que
ste es un valor representativo de muchas aguas potables tratadas.
b) Turbiedad:
La turbiedad de una suspensin mide la capacidad de un lquido de diseminar un haz
luminoso producido por la presencia de material insoluble, tales como partculas de arcillas
provenientes de la erosin del suelo y otras sustancias inorgnicas finamente divididas, o materas
similares y organismos microscpicos. La turbiedad es funcin tanto de la concentracin como del
tamao de la partcula del materal y se expresa en "Unidades de Turbiedad".
En la determinacin de turbiedad se recomienda el mtodo Nephelomtrco que mide la
fraccin de la luz que es dispersada 90 grados con respecto a la luz incidente. Este mtodo
consiste en un instrumento llamado Nephelmetro y un patrn de referencia a base de Polmero
Formazina (sulfato de hidrazina, hexametilentetramina y agua destilada), que generalmente tiene
una turbiedad de 400 unidades, an cuando algunos casos se elaboran con 4000 unidades de
turbiedad.
Las suspensiones estndar, para valorar la turbiedad de la muestra, se preparan del patrn
de referencia por dilucin proporcional directa; por ejemplo para obtener una suspensin estndar
de 40 unidades a partir de la suspensin patrn de 400 unidades, se toman 1O mi de sta ltima y
se diluyen a 100 mi con agua destilada.
Otro mtodo muy utilizado para medir la turbiedad es el denominado turbidmetro de buja
(o de vela) Jackson, que puede ser empleado satisfactoriamente en aguas superficiales; sin
embargo es inadecuado para la evaluacin de la calidad del agua potable ya que solamente mide
turbiedades mayores de 25 unidades. La medicin con este mtodo se hace introduciendo en
forma progresiva, una fraccin del lquido a analizar en el tubo calibrado o turbidmetro Jackson,
la lectura mnima que no permita ver al otro lado la buja o vela determina la turbiedad buscada.
c. Conductancia Esoecfica:
La conductancia o conductividad es una medida de la capacidad de un lquido para
transmitir la corriente elctrica; es un parmetro relacionado con la cantidad de iones presentes en
el lquido y con la temperatura a la cual se efecta la determinacin.
Esta propiedad se determina indirectamente a partir de la medicin de una resistencia
elctrica en un circuito elctrico o puente Wheatstone con una solucin estndar de cloruro de
potasio (0,01 M), la cual tiene una conductividad de 1141,8 micromhos/cm a 25C.

19

La conductancia se mide a travs de un instrumento denominado conductmetro. Los

resultados de la muestra del lquido se expresan en milisiemens por metro (ms.m-1) que equivale a
10 micromhos/cm (mhos.Cm-1).
Frecuentemente la conductividad se relaciona en forma emprica con los slidos disueltos
totales mediante la siguientes expresin:
Slidos disueltos totales = 0,65 x conductividad (mg/l ).
d) Slidos:
La determinacin de los slidos es importante para evaluar la calidad del agua y para
controlar los procesos de tratamiento en aguas potables y residuales.
Los slidos se clasifican en filtrables y no filtrables, a su vez, cada uno de stos se dividen
en voltiles y no voltiles. La porcin voltil representa el material orgnico y la no voltil el
material inorgnico presente.
Los slidos totales por ser valores absolutos dan muy poca informacin sobre la
composicin del lquido a evaluar.
El anlisis para obtener los slidos totales consiste en tomar una muestra del agua a
analizar (25 - 50 mi), que se coloca en un crisol de platino o porcelana de 100 mi de capacidad y
luego se somete a evaporacin a 103C.
Los slidos filtrables o disueltos miden la concentracin de slidos disueltos en el agua.
Para su determinacin se utiliza un filtro de fibra de vidrio, filtro de membrana, papel de filtro
lavado con cido, o un crisol de fondo poroso etc. Se toma un volumen conocido del filtrado (25
- 50 mi) y se repite el procedimiento utilizado para medir el residuo total.
Los slidos no filtrables o suspendidos miden los slidos suspendidos o que son
susceptibles de sedimentar al fondo de los cuerpos de agua. La determinacin se hace filtrando a
travs de un filtro de fibra de vidrio un volumen conocido de agua, luego se seca el filtro a 103 1OSC y se pesa la materia retenida en el mismo.
El residuo voltil se determina al calcinar la muestra a 550C en un horno de mufla. Su
medicin es importante puesto que da una medida indirecta de la materia orgnica presente.
Los slidos fijos son aquellos residuos minerales que no se volatilizan cuando la muestra
se calcina a temperatura de 550C y son considerados de naturaleza inorgnica.
Los slidos sedimentables miden el volumen de la materia que se deposita en el fondo de
los cuerpos de agua y son tiles para determinar la eficiencia de ciertos sistemas de tratamiento de
aguas residuales. La determinacin se realiza en un Cono Imhoff, el cual consiste en un recipiente
de forma cnica graduado en volumen (mi), en donde se coloca un litro del lquido a evaluar, se
deja en reposo durante 30 minutos o una hora y luego se lee el volumen sedimentado,
expresndolo en ml/I.
e) Temperatura:
Normalmente las mediciones de temperatura pueden efectuarse con cualquier buen
termmetro centgrado de mercurio. Debe ser siempre registrada en el campo y hasta obtener una
lectura constante.
Este parmetro afecta fundamentalmente los sistemas de tratamiento biolgico de las
aguas debido a su efecto sobre el metabolismo bacteria!; tambin afecta la solubilidad de los
gases, lo cual es muy importante ya que un aumento de la misma, disminuye la solubilidad del

20
oxgeno en el agua. desfavoreciendo la aireacin del sistema. Por otro lado la temperatura afecta
la velocidad de sedimentacin de los slidos.
f) Olor y Sabor:
Generalmente estas propiedades no se determinan a nivel de laboratorio, limitndose a
establecer si las mismas son o no objetables por parte del pblico consumidor. No obstante,
existen pruebas que permiten estimar tales caractersticas del agua en forma ms precisa y
objetiva.
En el caso del olor se requiere la preparacin de agua inodora diluida mediante filtracin
por un lecho de carbn activado. Luego se determina el "Nmero de Olor Incipiente" (N.0.1.), es
decir, la proporcin en la cual la muestra a analizar debe ser diluida con agua inodora para que el
olor de la misma pueda apenas detectarse:
N.0.1. =

mi muestra + mi de agua inodora

mi de muestra

Durante la prueba la temperatura se conserva en 60C (prueba caliente) o en 40C (prueba

normal).
Para una mayor precisin se usa un grupo de observadores (5 ms) que darn su opinin
sobre la clasificacin del agua por su olor.
La determinacin del "sabor incipiente" se realiza slo de muestras aceptables para agua
potable, y el procedimiento es parecido a la prueba de olor; es decir, se requiere la preparacin de
agua inspida (filtracin con lecho de carbn activado), dilucin de la muestra con agua inspida y
el uso de un grupo de catadores. Las pruebas deben efectuarse a 40C ya que sta es la
temperatura ms cercana a la del cuerpo.

3.2. Determinaciones Qumicas:

Los anlisis qumicos tienen como objetivo fundamental, determinar la concentracin de
las sustancias de naturaleza mineral y orgnica que pueden afectar la calidad de agua,
proporcionando informacin sobre posible contaminacin o mostrando las variaciones producidas
por el tratamiento a que pueden ser sometidos las mismas.
Los resultados de los anlisis qumicos normalmente se indican en partes por milln
(P.P.m.), es decir, kilogramos de la sustancia indicada por milln de litros de agua. Tambin se
puede indicar en miligramos de sustancia o elemento por litro de muestra. El pH se expresa en
cifras absolutas de O a 14, con un decimal.
A continuacin se presentan los anlisis ms comunes de los parmetros qumicos que
afectan la calidad del agua.
a) Elementos Txicos.
Mercurio: Generalmente se mide slo el mercurio total. Su determinacin se hace a travs
del mtodo de absorcin atmica por vapor fro, para lo cual se procede primero a la oxidacin
por permanganato seguida por persulfato, a objeto de asegurar que los compuestos orgnicos de

21
mercurio, si los hubiera, sean oxidados al ion mercrico, forma sta ltima en que se hace la
medicin correspondiente con la tcnica de absorcin atmica.
Plomo: Puede ser determinado por un mtodo colorimtrico de Di tizona o por
espectrofotometra de absorcin atmica.
En el mtodo colorimtrico de Ditizona, es necesario la eliminacin de la interferencia
proveniente de la mayora de los metales que forman ditizonatos, para lo cual se procede a la
extraccin doble con tetracloruro de carbn a pH controlado.
En el mtodo de absorcin atmica, el plomo debe extraerse con cido Pirrolidina
ditiocarbamato amoniacal en met! isobutl cetona antes de aspirarlo a la llama del
espectrofotmetro.
Cadmio: Puede ser determinado por el mtodo colorimtrico de ditizona o por
espectrofotometra de absorcin atmica. En este ltimo se recomienda la extraccin con
ditiocarbamato de Pirrolidina amoniacal en metil isobutil cetona o con cido ditiocarbnico de
Pirrolidina en cloroformo.
Bario: Puede ser determinado por espectrofotometra de absorcin atmica, usando una
llama de xido nitroso y acetileno.
Cobre: El mtodo ms utilizado en la determinacin de este elemento consiste en la
aplicacin del reactivo de cuprethol, el cual hace que los iones de cobre formen un compuesto
amarillo soluble. Con este mtodo debe controlarse el pH entre 5 - 6, para lo cual se usa cido
clorhdrico y el acetato de sodio como amortiguador. El pirofosfato anula la posible interferencia
del hierro.
Arsnico: Puede ser determinado por el mtodo de espectrofotometra de absorcin
atmica, que puede estimar concentraciones de 2 microgramos/litro o ms. En este mtodo se
debe reducir primero el arsnico de la muestra a la forma trivalente, usando cloruro de estao y
luego se convierte a arsina (A,H3), usando Zinc. El hidruro gaseoso se aspira a la llama de
argn-hidrgeno de un espectrofotmetro de absorcin atmica para efectuar la medicin
correspondiente.
Cianuro: En muestras con concentracin mayor de 1 mg/I generalmente se usa el mtodo
volumtrico con nitrato de plata usando un indicador de P-dimetilamino-bensal-rodanino. Para
. niveles menores de 1 mg/I se debe usar el mtodo colorimtrico con Pirazolono de Pirimidina o
cido barbitrico. La naturaleza del tratamiento preliminar, en ambos mtodos, depende de las
sustancias interferentes que puedan estar presentes. Por ejemplo el sulfato, cidos grasos y los
agentes de oxidacin, entre otros, interfieren en el proceso.
Los sulfatos se eliminan con la adicin de carbonato de plomo en polvo, previa
alcalinizacin de la muestra a pH 12. Los cidos grasos por extraccin con iso-octano, hexano o
cloroformo a un pH de 6 a 7. Los agentes oxidantes por titulacin con sulfato de sodio o por la
adicin de cristales de cido ascrbico. La mayora de la otras sustancias que interfieren son
eliminadas por destilacin; adems, ste ltimo proceso convierte a la mayora de complejos de

22
cianuro en cianuro de sodio, que puede ser fcilmente medido por anlisis volumtrico o prueba
colorimtrica.
Cromo: El cromo total puede determinarse por espectrofotometria de absorcin atmica o
por el mtodo colorimtrico de difenilcarbazida. En este ltimo debe oxidarse primero el cromo
trivalente existente a cromo hexavalente. Si Ja medicin a efectuar es solamente de cromo
hexavalente puede usarse el mtodo colorimtrico de difenilcarbazida o bien se extrae Ja forma
hexovalente con Pirrolinida ditiocarbamato amoniacal en metil isobutil cetona o con cido
Pirrolinida ditiocarbnico en cloroformo, antes de efectuar la espectrofotometria de absorcin
atmica.
Selenio: Se puede utilizar por el mtodo colorimtrico con diaminobenzidina o por el
mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica. Este ltimo es ms recomendable por su
sencillez y el menor tiempo que requiere para la obtencin de los resultados. El mtodo de
absorcin atmica es un mtodo de hidruro gaseoso que requiere llama de Argn-hidrgeno.
b) Metales Nocivos.
Nquel: Se usa el mtodo colorimtrico con heptoxina ( cicloheptano-dionadioxima). Este
mtodo se basa en que despus de separar el niquel de los otros se iones por extraccin del
complejo nquel-heptoxima con cloroformo, se reextrae a Ja fase acuosa con cido clorhdrico y se
determina colorimetricamente en la solucin cida con heptoxima en presencia de un oxidante. El
color resultante es proporcional a la concentracin de nquel presente y se mide comparando con
una serie de patrones previamente elaborados.
Zinc: Este metal al igual que otros 19 ms son capaces de reaccionar con la
difeniltiocarbazona (Ditizina), para producir compuestos coloridos (Ditizonatos), que se pueden
extraer con disolventes orgnicos como el tetracloruro de carbono. De aqu que el mtodo
comnmente utilizado es el colorimtrico con ditizona, an cuando tambin puede ser
determinado por espectrofotometra de absorcin atmica.
Para la determinacin del zinc, mediante el mtodo colorimtrico de ditizona, se deben
anular las posibles interferencias de los metales con la adicin de tiosulfato de sodio. Luego se
procede a Ja extraccin del zinc con la ditizona y con el tetracloruro de carbono. Al igual que en
el caso anterior el color resultante es proporcional a la concentracin de zinc presente y se mide
comparandolo con una serie de patrones previamente preparados.
Manganeso: Se usa el mtodo colorimtrico con Persulfato de amonio, pero tambin
puede ser determinado por espectrofotometra de absorcin atmica. El mtodo colorimtrico se
basa en los compuestos manganosos solubles son oxidados por el Persulfato de amonio, en
presencia del ion palta, a la forma de permanganato; el color resultante es directamente
proporcional a la concentracin de manganeso presente. El color es medido visualmente
comparndolo con una serie de patrones previamente preparados, para lo cual se usan los tubos
Nessler de 100 mi.
El sulfato mercrico evita la posible interferencia del cloruro.

23

Aluminio: Puede ser determinado por el mtodo calorimtrico empleando el cianuro de

Eriocromo R. Tambin se utiliza la espectrofotometra de absorcin atmica cuando los niveles de
aluminio son superiores a 1mg/I; debe usarse llama de xido nitroso y acetileno.
La interferencia por cloruros se puede corregir por el uso de curvas especiales de
correccin o por la adicin de cantidades iguales a las muestras estndar de aluminio.
Hierro: La determinacin de hierro se hace por el mtodo calorimtrico con fenantrolina o
por la espectrofotometra de absorcin atmica. El primero se usa cuando no hay interferencia de
sustancias o iones metlicos por lo que en caso contrario se recomienda el mtodo
espectrofotomtrico.
El mtodo de la fenantrolina se basa en el hecho que el hierro ferroso reacciona con 1, 10
fenantrolina en solucin acuosa para formar un complejo rojo anaranjado que puede ser
fcilmente medido por comparacin visual.
Plata: Puede ser determinado por el mtodo calorimtrico de ditizona o por
espectrofotometra de absorcin atmica. Este ltimo por ser sencillo, rpido y menos susceptible
a errores por interferencia es el ms recomendable.
c) Detergentes Aninicos:
Generalmente se utiliza el mtodo de azul de metileno. Este mtodo se basa en la
formacin de una sal de color azul, al reaccionar los agentes aninicos de activacin superficial
(detergentes) con el azul de metileno. Los agentes activos superficiales incluyen al alquil sulfonato
de benceno (ASB), de degradacin lenta, y ltimamente el alquil sulfonato lineal, que tiende a
biodegradarse mucho ms rpidamente.
La sal formada es soluble en cloroformo y la intensidad del color es proporcional a la
concentracin del agente de activacin superficial.
Para la eliminacin de interferentes (sulfatos orgnicos, sulfonatos, carboxilatos, fosfatos,
fenoles, cloruros, nitratos, etc.), se puede utilizar el mtodo de absorcin con carbono activado y
luego se cuantifica el agente de activacin por el mtodo de azul de metileno.
d) Nutrientes:
Nitrgeno Amoniacal: Se determina por destilacin directa de la solucin bsica en cido
brico, seguida por la medicin del amoniaco por anlisis volumtrico con cido sulfrico normal,
colorimtricamente por Nesslezacin o por Potenciomtricamente por el electrodo de ammaco.
El mtodo de destilacin se basa en que el nitrgeno amoniacal libre se puede recuperar
cuando la mezcla se mantiene a un pH cercano a 7,4, y luego se procede a la absorcin con cido
brico. El amonaco aislado se puede determinar por nesslerizacin o por titulacin, con una
solucin valorada de un cido mineral fuerte.
La determinacin calorimtrica por Nesslezacin se basa en la serie de colores, del
amarillo al caf, que se produce por la reaccin Nessler-amoniaco, por lo que la medicin
fotomtrica de la concentracin de nitrgeno amoniacal se puede hacer en un mbito
considerable.

24
Nitrgeno Orgnico: El mtodo clsico de Kjeldahl determina al nitrgeno ligado
orgnicamente en estado trivalente. Puede ser calculado como la diferencia entre el nitrgeno
Kjeldhl total y el amonaco.
Para determinar el nitrgeno Kjeldhal total se digiere la muestra en cido sulfrico, sulfato
de potasio y sulfato de mercurio para convertir el amonaco y el nitrgeno orgnico en bisulfato
de amonio. Despus se procede a la descomposicin del complejo formado (complejo
mercurio-amonio) por digestin con tiosulfato de sodio; para luego destilar el amonaco en un
medio alcalino y absorberlo en cido brico. El amonaco se determina por nesslerizacin o
titulacin con cido sulfrico normal.
Para la determinacin directa del nitrgeno orgamco se usa el mismo procedimiento
bsico, excepto que es necesario la eliminacin previa del amonaco.
Nitratos: Se puede determinar por el mtodo de Brucina (sulfato de brucina y cido
sulfanlico), el cual se basa en que al reaccionar el nitrato y la brucina se produce un color amarillo
que puede ser usado para la estimacin colorimtrica del nitrato.
La interferencia producida por el cloro residual se puede eliminar mediante la adicin de
arsenito de sodio; en el caso de nitritos su interferencia se anula con el cido sulfanlico.
El mtodo espectrofotomtrico ultravioleta tambin se utiliza para la determinacin de
nitratos, por su rapidez y por que no requiere reactivos; sin embargo requiere la preparacin de
curvas de correccin individuales para eliminar las interferencias por nitritos, cromo hexavalente y
surfactantes; la interferencia de la materia orgnica puede minimizarse por dilucin.
Nitritos: La determinacin de nitritos se basa en que en medio cido el ion nitrito como
cido nitroso reacciona con el cido sulfanlico para formar la sal de diazonio. Esta ltima bajo
condiciones de acidez se une a la N-(1-naftil)- etilenediamina para producir un compuesto de
color prpura rojizo, el cual es directamente proporcional a la concentracin de nitrito presente
que se puede leer en un espectrofotmetro.
Fsforo: El anlisis de ortofosfato es la base para determinar todas las formas de fsforo.
La seleccin del mtodo analtico depende principalmente de la concentracin de ortofosfato.
El mtodo de cido vanadomolbdico se utiliza para anlisis de rutina en la escala de
1-20mg P/I, el mtodo de cloruro estaoso es ms adecuado para niveles de 0,01 a 6 mg. P/I.
El fsforo total se determina indirectamente convirtiendo todas las formas fosfricas a
ortofosfato mediante digestin con persulfato y luego se mide el ortofosfato con algunos de los
mtodos antes mencionados. Las formas de fsforo disueltas e insolubles pueden separarse
mediante filtracin de la muestra a travs de un filtro de membrana de 0,45 micrones antes de
efectuar la digestin y determinacin colorimtrica.
e) Aniones.
Alcalinidad: Se determina la capacidad de un agua para neutralizar el cido titulndose
con un cido fuerte a los puntos de equivalencia del cido carbnico y bicarbonato.
La alcalindad de un lquido se clasifica como alcalinidad total o consumo de cido para
alcanzar el pH = 4,5 y Ja alcalinidad fenoltaleinica o consumo de cido para alcanzar el pH = 8,3.

25
Esta ltima corresponde a la fraccin de alcalinidad por el hidrxido y la mitad del
carbonato, la determinacin colorimtrica del punto final se efecta normalmente mediante un
indicador de fenoltaleina.
La alcalinidad total corresponde al hidrxido, bicarbonato y carbonato. El valor de
equivalencia del pH depende de la concentracin total de alcalinidad (como CaCo3) en la
siguiente forma: pH 5, 1 para alcalinidad total de 30 mg/I, pH 4,8 para 150 mg/I y 4,5 para 500
mg/I. Para la deteccin colorimtrica del punto final a pH menos de 4,6 es ms efectivo el
anaranjado de metilo, mientras que para valores de pH mayores a 4,6 es recomendable una mezcla
de indicadores (verde de bromocresol y rojo de metilo).
Cloruro: Se determina generalmente por titulacin del ion cloruro en medio cido con
solucin de nitrato mercrico para formar cloruro mercrico soluble. el punto final de titulacin
es indicado por la formacin de un complejo de color prpura que forma la fenilcarbazona con el
exceso de ion mercrico a un pH 2,3 a 2,8. Para lograr un ajuste del pH a 2,5 O, 1 se agrega un
mezcla de cido ntrico y difenilcarbazona.
Los cloruros tambin se pueden determinar mediante anlisis volumtrico con un
potenciometro (medidor de pH), con una solucin de nitrato de plata usando un electrodo de
vidrio y otro de plata. El punto final del anlisis volumtrico es la lectura del instrumento en la
cual haya ocurrido el mayor cambio de voltaje.
Fluoruros: El principio de la determinacin se basa en el efecto "blanqueador" del ion
fluoruro en un color previamente formado por la accin entre el ion circonio y el colorante
alizarina. La accin decolorante es directamente proporcional a la concentracin del ion fluoruro.
Sulfatos: Se determinan por mtodos gravimtricos y el turbidimtrico. Para
concentraciones superiores a 10 mg/I se considera que el mtodo gravimtrico de calcinacin
(800C) es el ms exacto. El mtodo turbidmetrico es recomendable para niveles por debajo de los
10 mg/I.
El mtodo gravimtrico se basa en que el ion sulfato tiende a precipitar en un medio de
cido clorhidrico, como sulfato de bario por la adicin de cloruro de bario. La precipitacin se
verifica a un punto cercano a la ebullicin, y despus de un periodo de digestin el precipitado se
filtra, se lava con agua hasta que quede libre de cloruros, se calcina o seca y se pesa como sulfato
de bario.
El mtodo turbidimtrico se basa en que el ion sulfato se precipita con cloruro de bario, en
un medio de cido clorhidrico, en condiciones que permitan la formacin de cristales de sulfato de
bario de tamao uniforme. Se mide la absorbancia de la suspensin de sulfato de bario por medio
de un nefelmetro o turbidimtro y luego se determina la concentracin del ion sulfato por
comparacin de la lectura con la curva de calibracin preparada a partir de la solucin patrn.
f) Otras Determinaciones.
Dureza: La dureza del agua es debida a iones metlicos bivalentes que son capaces de
reaccionar con el jabn para formar precipitados y con ciertos aniones presentes en el agua para
formar incrustaciones. Los principales iones bivalentes son el calcio y magnesio.

26
En algunos casos es importante conocer las cantidades de dureza clcica y dureza
magnsica presentes en el agua. Por ejemplo, es necesario conocer la dureza magnsica para
calcular la cantidad de cal requerida para el ablandamiento del agua.
La dureza clcica y la dureza magnsica pueden ser determinadas partiendo del anlisis
qumico completo, calculando la dureza debido a cada ion en particular, para lo cual se multiplica
la concentracin de cada catin por el factor apropiado, que permite obtener las concentraciones
equivalentes de carbonato de calcio. La sumatoria de ambas concentraciones nos daria la dureza
total; en el caso de existir otros cationes productores de dureza deben tambin incluirse en este
clculo. Para obtener el equivalente de CaCo3 (mg/l} de los siguientes cationes, se multiplica la
concentracin encontrada (mg/l) por el factor respectivo:
Catin

Factor

Calcio ................ .
Magnesio .............. .
Estroncio ............. .
Hierro ................ .
Aluminio .............. .
Zinc .................. .
Manganeso ............. .

2,497
4,116
1,142
1,792
3,710
1,531
1,822

El otro mtodo para la determinacin de la dureza es por medio de titulacin, el cual se

basa en que el indicador Eriocromo Negro T a pH 1O O, 1 a ser agregado a una solucin acuosa
que contenga iones de calcio y magnesio, se forma un complejo de color rojo vino. Si entonces se
agrega cido etilendiaminotetractico y sus sales de sodio (EDT A) como titulador, se forman
complejos de calcio y magnesio y el color de la solucin virar del rojo vino al azul que es el
punto final de la titulacin.
Calcio: Pueden usarse tanto el mtodo de anlisis volumtrico EDT A como el de
absorcin atmica. El primero por su rapidez y simplicidad lo hacen adecuado para aplicaciones
rutinarias y de control.
El mtodo volumtrico se basa en que cuando el ADT A se agrega a un agua que contenga
tanto calcio como magnesio, se combina en primer lugar con el calcio que se tiene presente. El
calcio se puede cuantificar directamente con el EDT A, cuando el pH se eleva a 12-13 a fin de que
la mayor del magnesio se precipite como hidrxido y cuando se use un indicador (Purpurato de
amonio o indicador de murexina) que solo se combine con el calcio.
Magnesio: En la mayoria de los casos se determina como la diferencia entre la dureza total
y la determinacin de calcio. Si se desea una medicin directa del magnesio puede usarse el
mtodo gravimtrico o el de absorcin atmica.

Jll:I:

Es el logaritmo de la recproca de la concentracin del ion hidrgeno, o ms

precisamente, de la actividad del ion hidrgeno, en moles por litro. En el agua un nmero
constante de molculas se ionizan de manera que el producto de las concentraciones de los iones
(H+) y (OH-) es 10- 14 (Ki}, la cual es la constante de disociacin del agua. En agua pura existe el

27

mismo nmero de iones (H+) y (OH-) o sea 10-7. La adicin de cidos o bases desplaza este
equilibrio hacia uno u otro sentido, el pH mide esta caracteristica del agua.
La escala prctica del pH comprende del O, muy cido a 14, muy alcalino, con el valor
medio de 7 que corresponde a la neutralidad.
La medicin del pH se realiza por el mtodo electromtrico usando un electrodo de vidrio
en combinacin con el potencial de referencia dado por un electrodo saturado de calomel. El
sistema de electrodo de vidrio est basado en que, a 25C, un cambio de una unidad de pH
produce un cambio elctrico de 59, 1 milivoltios.
La determinacin de pH debe ser realizada preferiblemente en el campo; si no es posible,
la medicin de laboratorio debe hacerse unas pocas horas despus de la captacin de la muestra.
Acidez: La acidez del agua puede ser definida como su capacidad para neutralizar bases.
Generalmente es debida, en condiciones naturales, a la presencia de bixido de carbono y varios
cidos orgnicos, tales como cido tnico y hmico. En aguas industriales puede estar presente
cualquier cido o sal hidrolizable.
La acidez se determina por titulacin con solucin 0,02N de hidrxido de sodio, con la
presencia de un indicador que permita apreciar los diferentes puntos de equivalencia. Para el caso
de la acidez total, la titulacin se realiza con fenoltaleina como indicador; la acidez por cidos
minerales se realiza con el indicador anaranjado de metilo y para la acidez de cidos minerales y
sulfatos de hierro y aluminio la titulacin se efecta a temperatura de ebullicin usando
fenoltaleina como indicador.
Cloro: En los sistemas de tratamiento de agua potable es importante determinar el cloro
libre residual, ya que por su fuerza de desinfeccin puede asegurar la eliminacin de organismos
coliformes cuando se encuentra en concentraciones entre 0,2 a 0,3 mg/l.
Su determinacin puede efectuarse por varios mtodos, pero el ms recomendable por su
exactitud y precisin es el de DPD (reactivo de color, N-N-dietil-P-Fenilenediamina), el cual
puede realizarse colorimtricamente o titulomtricamente. El primero tiene mejor aplicacin en el
campo con un comparador, mientras que el segundo es preferible para el anlisis de laboratorio.
Ambos mtodos pueden distinguir entre cloro combinado y libre.
Penoles: Para su determinacin se recomienda el mtodo colorimtrico de
4-aminoantipiridina con destilacin. Antes de efectuar la medicin, los tintes del compuesto
formado se deben extraer con cloroformo o ter dietlico.
Aceites y Grasas: En la determinacin de grasa de cuantifica un grupo de substancias con
caractersticas fisicas similares, que se basan en su mutua solubilidad en el disolvente usado. Aqu
se incluyen las grasas, ceras, aceites y otros materiales no voltiles que se extraen con el hexano
de una muestra acidificada de aguas residuales o industriales.
En la medicin de aceites y grasas se recomiendan los mtodos de extraccin con un
aparato soxhlet, extraccin por embudo de separacin y por espectrofotometria infrarrojo.
El mtodo de extraccin de soxhlet se basa en que los hidrocarburos relativamente no
voltiles, tales como, aceites vegetales, grasas animales, ceras, jabones, grasas y materia orgnica
afin, se hidrolizan por acidificacin (pH 1,0) con cido clorhdrico. Las grasas slidas o viscosas
que se absorben en el auxiliar de filtracin, (suspensin de auxiliar de filtracin de slice de

28
diatomeas) se separan por filtracin. Luego se extrae la grasa en un aparato soxhler, usando
hexano como disolvente, y el residuo remanente despus de la evaporacin del hexano, se pesa
para determinar el contenido de grasa de la muestra.
El mtodo de extraccin por embudo de separacin es aplicable a la misma clase de
aceites y grasas que en el mtodo anterior. El solvente recomendado para la extraccin es el
l,2,2-triclo-1,2,2 trifluoetano o tambin el ter de petrleo. Este mtodo cubre al igual que el de
extraccin de soxhlet, la escala entre 5-1000 mg/l. La extraccin se efecta con un embudo de
separacin y el contacto entre el disolvente y la grasa se fuerza mecnicamente con un agitador de
cristal.
El mtodo infrarrojo se utiliza para medir concentraciones de 0,2 a 1000 mg/I, y materiales
orgnicas voltiles como la mayora de combustibles de petrleo ligero.
Oxgeno Disuelto: Los dos mtodos ms usados para medir el oxgeno disuelto (OD) son:
el Mtodo de WINKLER (o yodomtrico) y sus modificaciones y el Mtodo de Electrodo de
Membrana. (De Giner, 1988; Gonzles, 1992; Cubillos, 1985).
Las muestras de agua deben ser analizadas lo ms pronto posible, porque el contenido de
oxgeno vara con el tiempo y adems debe evitarse la posible entrada o salida de gases del envase
que la contiene. La preservacin, en todo caso, puede hacerse agregando cido sulfrico
concentrado y solucin de nitrato de sodio.
El mtodo Winkler determina en forma indirecta el oxgeno disuelto en un lquido
mediante reacciones de oxido-reduccin. Consiste en agregar el ion manganoso a la muestra y en
caso de presencia de oxgeno libre, ste lo oxida bajo condiciones alcalinas a un estado de
valencia mayor y en este estado el manganeso es capas de oxidar el ion yoduro (1-), que se
agrega, a iodo libre (I,) en condiciones cidas. As la cantidad de iodo libre que se forma es
equivalente al oxgeno disuelto originalmente presente; para lo cual se mide por titulacin con
solucin de Tiosulfato de sodio usando almidn como indicador del punto final, al virar de azul a
incoloro.
El mtodo de electrodo de membrana se recomienda en muestras que contienen materiales
que interfieren con el mtodo anterior, tales como: nitritos, dextrosa, sulfitos, cloro, sales frricas
etc. Adems el mtodo de electrodo es menos costoso, no destruye la muestra, ni requiere
personal muy especializado, presenta mayor facilidad para determinaciones de oxgeno disuelto en
un mayor nmero y menor tiempo.
El electrodo de membrana consiste en dos electrodos, uno de plomo (nodo) y el otro de
plata (ctodo), ambos aislados por una membrana permeable solamente al oxgeno molecular. Los
dos electrodos se encuentran en una solucin hidroltica de carbonato cido de potasio para
favorecer la conductividad elctrica; entre ambos se encuentra un micro ampermetro que mide la
corriente elctrica que se produce en la reaccin de oxido reduccin, cuando el oxgeno al
atravesar la membrana y llegar al nodo, oxda el plomo. La corriente elctrica registrada es
proporcional a la oxidacin del plomo y por lo tanto a la cantidad de oxgeno disuelto.
Demanda Bioqumica de Oxgeno: La Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO) de un
muestra de agua, es la cantidad de oxgeno molecular consumida por los microorganismo:
principalmente bacterias, para oxidar la materia carbonada susceptible a biodegracin en t
perodo de 5 das y a una temperatura de 20C 1C.

29
La DBO se utiliza para determinar la demanda de oxgeno en cuerpos de agua, la carga
orgnica aplicada a plantas de tratamiento y la eficiencia de esos sistemas en la remocin de DBO.
Adems se usa como parmetro de diseo de sistemas de tratamiento de lquidos residuales y
como base de investigaciones sobre cintica microbiana y procesos biolgicos de tratamiento.
El ejercicio de la DBO se lleva a cabo en dos etapas bien definidas; la primera etapa
representada por la demanda que ejercen los compuestos nitrogenados o etapa nitrificante. (Ver
figura 1).
La estabilizacin completa de la materia orgnica se realiza en un periodo ms largo de
tiempo, sin embargo se aceptan 5 das para estandarizacin de la prueba, porque durante este
tiempo alrededor del 70 por ciento de la materia orgnica carbonacea se ha estabilizado.
La determinacin de la DBO de una muestra de agua con materia orgnica (Residuos con
requerimiento de oxgeno), se realiza generalmente por el Mtodo de Winkler modificado o por
el Mtodo Respiromtrico. En ambos casos, para que el anlisis sea representativo de la masa de
agua a analizar y se lleve a cabo sin ningn tipo de interferencia, por tratarse de un proceso
netamente biolgico, se deben cumplir las condiciones siguientes:
- No debe haber posibilidad de reaereacin en las muestras.
- No deben existir sustancias txicas en concentraciones que inhiban la actividad de los
microorganismos.
- El pH debe ser adecuado para el desarrollo de los microorganismos.
- Debe existir los nutrientes necesarios para el crecimiento bacteria!, tales como, nitrgeno
y fsforo y micro nutrientes como hierro, magnesio etc.
- Si el residual no tiene una poblacin biolgica capaz de oxidar la materia orgnica, se
hace necesario la inoculacin. El material de inoculacin normal es agua tpicamente domstica,
sedimentada, aireada continuamente durante 15 das y mezclada en forma creciente con porciones
del lquido residual a analizar.
Mtodo de Winkler Modificado para el clculo de la DBO: Este mtodo se puede usar
con muestras de agua cuya DBO no exceda de 7 mg/l, es decir, que sean pocos contaminadas
como ros limpios, lagos, etc. Consiste en llenar dos botellas de Winkler con la muestra bien
aireada, a una de ellas se le mide el oxgeno disuelto inmediatamente, y la otra se incuba a 20C
durante 5 das, al trmino de los cuales se le determina el Oxgeno Disuelto (O.D.) La diferencia
entre ambas medidas de O.D. es la DBO.
Para muestras con una DBO mayor de 7 mg/l, tales como residuos domsticos e
industriales, efluentes tratados y las aguas superficiales contaminadas, es necesario diluirlas antes
de la incubacin; de forma que el oxgeno disuelto que puede tener el agua sea suficiente para el
proceso de degradacin. Como la fuerza contaminante del lquido residual no se conoce a priori,
debe prepararse una serie de diluciones que abarque un rango considerable. En la tabla 5 se
presentan diluciones a utilizar segn la DBO esperada.
Slo es confiable estadsticamente valores de DBO en diluciones que produzcan un
agotamiento de oxgeno entre el 40 por ciento y el 70 por ciento, que se puede expresar que el
oxgeno disuelto final (ODF) debe ser mayor de 1 mg/l y la diferencia entre Oxgeno Disuelto
Inicial (ODI) y ODF debe ser mayor de 2 mg/l. Para el anlisis final de la DBO se debe obtener el
promedio de los diferentes DBO en cada dilucin, que cumplan la norma antes sealada.

30
FIGURA 1 EJERCICIO DE LA DBO EN EL TIEMPO

Demanda Carbonacea + Nitrogenada

DBO
(mg/I)
Demanda Carbonacea

Tiempo en d(as

FUE.NTE: Elaboracin propia

31

TABLA 5.

DILUCIONES RECOMENDABLES SEGN LA DBO ESPERADA.

(AGREGANDO DIRECTAMENTE EN LAS
BOTELLAS WINKLER DE 300 ML)

Mililitros de Muestra
0,02
0,05
0,10
0,20
0,50
1,0
2,0
5,0
10,0
20,0
50,0
100,0

FUENTE:

............................

............................
............................
............................
............................
............................
............................
............................
............................
............................
............................
............................

Rango DBO
30.000 12.000 6.000 3.000 1.200 600 300 120 60 30 12 6-

105.000
42.000
21.000
10.500
4.200
2.100
1.050
420
210
105
42
21

DE GINER (1988).

Mtodo Respiromtrico para el clculo de la DBO: Se basa en colocar la muestra del

lquido bajo estudio en una atmsfera de aire en un sistema cerrado, manteniendo condiciones de
agitacin y temperatura constantes. El oxgeno utilizado es medido en cualquier instante por los
cambios de presin observados, a travs de un manmetro el cual tiene un lquido de densidad
conocida.
Con esta tcnica la muestra no queda inutilizada al hacer el anlisis de la DBO, como en el
caso del mtodo de Winkler. Sin embargo esta ltima es la tcnica estndar y para propsitos de
normas se debe recurrir a ella.
Demanda Qumica de Oxgeno: Esta representa el oxgeno requerido para la oxidacin
qumica de los constituyentes orgnicos e inorgnicos presentes en una muestra de agua. La
oxidacin se lleva a cabo con dicromato de potasio en una solucin de cido sulfrico a
temperatura de reflujo. Se usa sulfato de plata como catalizador y sulfato de mercurio para
eliminar la interferencia del cloruro, el exceso de dicromato se titula con sulfato ferroso
amoniacal, usando un complejo ferroso de ortofenatrolina como indicador.
La DQO se utiliza principalmente en el anlisis de desechos industriales, establecer
relaciones con la DBO, conocer la carga orgnica impuesta a un sistema de tratamiento y
determinar la eficiencia de los mismos en la remocin de las sustancias contaminantes.

32

Pesticidas: El anlisis de pesticidas en las aguas y aguas de desecho es sumamente

complejo, por lo que se requiere del uso de equipos especializados y de personal altamente
capacitado.
Existen una serie de mtodos para la determinacin y cuantificacin de pesticidas, sin
embargo los ms extendidos son el anlisis por cromatografia de gases segn la extraccin
lquido- liquido de las muestras de agua y el mtodo de cromatografia de gases/espectrometria de
masas. (APHA-AWW A-WPCF, 1992).
Los mtodos de cromatografia de gases son procedimientos microanalticos altamente
sofisticados. Para su aplicacin microanalticos altamente sofisticados. Para su aplicacin se
necesita una fase mvil (un gas portador) y una fase estacionaria (columna de relleno o
recubrimiento de columnas capilares) para separar los compuestos individuales. El gas portador
suele ser nitrgeno, argn-metano, helio o hidrgeno; para la columna del relleno, la fase
estacionaria consiste en un lquido recubierto por un slido inerte granular denominado relleno de
columna que se conserva en un conducto de vidrio de borosilicato. La columna se instala en un
horno cuya boca de entrada esta conectada a un bloque inyector calentado y la de salida a un
detector. Cuando se introduce una solucin muestra en la columna, los compuestos orgnicos se
vaporizan y se mueven a travs de la columna mediante el gas portador, hasta llegar a los
detectores que permitan identificar los compuestos presentes.
Existen varios tipos de detectores de compuestos para su uso en los sistemas de
cromatografia de gases, entre los cuales tenemos:
Detectores de conductividad electroltica: Suelen utilizarse en el anlisis de halocarburos,
pesticidas, herbicidas, productos farmacuticos y nitrosaminas. Estos detectores identifican a los
compuestos presentes por la contrastacin de la diferencia de conductividad entre un electrodo de
referencia que contiene el disolvente adecuado (halgeno, nitrgeno, azufre o nitrosamina), y el
electrodo analtico que contiene el disolvente, el gas portador y los productos de la reaccin.
Detectores de captura electrnica: Se utiliza para analizar compuestos que posean altas
afinidades electrnicas, como es el caso de los pesticidas dorados, los medicamentos y sus
metabolitos. Son altamente sensibles a las molculas que contengan grupos electronegativos,
halgenos, perxidos, quinonas y grupos nitrogenados. La identificacin de los compuestos se
realiza por comparacin de la intensidad de corriente que se produce al introducir la muestra en el
detector y la intensidad de una corriente de referencia.
Detector de ionizacin de llama: Se utiliza para la deteccin de compuestos orgnicos que
contengan carbono. Consiste en una llama de difusin de hidrgeno- aire que prende en el
extremo de un quemador y cuando un compuesto orgnico penetra en ella, se forman productos
intermedios elctricamente cargados, cuya corriente resultante se amplifica y se mide con un
electrmetro.
Detector de fotoionizacin: La fotoionizacin se produce cuando una especie molecular
absorbe un fotn de energa luminosa y se disocia en un ion asociado y un electrn. El detector de
fotoionizacin esta dotado de una fuente de luz ultravioleta que emite fotones, los cuales llegan a
una cmara de ionizacin son absorbidos por los compuestos presentes, producindose la
ionizacin de los mismos. Los iones resultantes son acelerados hacia un electrodo de toma de

33

muestras; la corriente que se produce es medida con un electrmetro y es proporcional a la

concentracin de las sustancias a analizar.
Espectrmetro de masas: Con este detector se pueden identificar una amplia gama de
compuestos y deducir las estructuras de stos a partir de unos modelos de fragmentacin. El
espectrmetro de masas detecta los compuestos mediante la ionizacin de las molculas. Los
iones cargados de diferentes tamaos, se separan en funcin de la relacin carga-masa (ligada al
peso molecular), por medio del detector, que utiliza campos variables elctricos y de
radio-frecuencia. Cuando abandonan el detector, los iones son atrados hacia el multiplicador de
electrones, y dado que los campos elctricos y de radio-frecuencia poseen un carcter cclico de
algunos segundos se puede obtener un modelo de fragmentacin. La mayoria de las sustancias
qumicas poseen un modelo nico de fragmentacin llamado "Espectro de Masa"; por lo cual la
identificacin de las mismas puede ser posible con la obtencin de modelos de fragmentacin a
travs de la espectrometria de masas.
Cromatrografia de Gases segn la Extraccin lquido-lquido. Este procedimiento de
cromatografia de gases es adecuado para determinar cuantitativamente los compuestos siguientes:
BHC, lindano, heptaclor, aldrin, epxido de heptaclor, dieldrin, endrin, captn, DDE, DDD,
DDT, metoxiclor, endosulfan, diclorn, mirex, pentacloro, nitrobenceno, estrobano, toxafeno,
clordano, paratin, metilparatin, malatin, herbicidas clorado, fenoxicidos y sus esteres, etc.
El mtodo consiste en extraer los pesticidas con un disolvente mixto, ya sea dietil
ter/hexano o cloruro de metileno/hexano. El extracto se concentra por evaporacin, y luego se
determinan los compuestos mediante una cromatografia de gases. Al pasar cada componente a
travs del detector, se mide un cambio cuantitativamente proporcional en seal elctrica sobre un
grfico registrador, observndose en ste ltimo un pico para cada componente detectado. La
relacin altura del pico/rea del pico es proporcional a su concentracin.
El detector utilizado en este mtodo es un detector de captura electrnica, sin embargo si
se dispone de suficiente pesticida para la deteccin, es recomendable la espectrometria de masas.
Cromatografia de Gases/Espectrometria de Masas Depuracin de Ciclo Cerrado. Este
procedimiento es adecuado para analizar la presencia de un amplio espectro de compuestos
orgnicos en el agua, tales como: Tricloroetano, tricloroeteno, diclorobromometano,
clorobenceno, tetracloroeteno, etilbenceno, xileno, bromoformo, bromobenceno, diclorobenceno,
hexacloroetano, naftaleno, hexaclorobenceno, antraceno, pireno, crisemo, benzoantraceno, etc.
En la depuracin de ciclo cerrado, los compuestos orgnicos voltiles de peso molecular
intermedio se depuran mediante una corriente cclica de aire. Las sustancias orgnicas se retienen
en un filtro de carbono activado y se extraen de este filtro con disulfuro de carbono. El extracto se
inyecta en una columna capilar cromatgrafo de gases -espectrometra de masas para identificar el
compuesto orgnico segn el tiempo de retencin y la correspondencia del espectro; la
cuantificacin se realiza por integracin de una corriente de iones simples.
Radiactividad: La determinacin de la radiactividad, como la de los pesticidas, es una
actividad especializada que no se efecta rutinariamente en la mayora de los laboratorios de
calidad de agua. Sin embargo, debido a la presencia de contaminantes radiactivos en
abastecimientos de agua y en las descargas de desechos, se ha creado la necesidad de desarrollar

34

mtodos para el muestreo, preparacin de las muestras, y medicin de la radiactividad en el agua

y materiales afines. Por lo que se recomienda que en cada pas exista por lo menos un centro o
laboratorio en donde puedan realizarse exmenes radiolgicos simples.
En el caso de la recoleccin de muestras para anlisis radiactivos se debe tener cuidado de
evitar la deposicin de la radioactiviadad en las paredes de la cristalera y del equipo, ya que
puede inducir a prdidas en su determinacin y posibles contaminantes de las subsiguientes
muestras. En este sentido se recomienda el uso de recipientes de polietileno, las cuales presentan
menor tendencia a la contaminacin con respecto a la mayor parte de los radionuclidos.
La medicin del grado de radiactividad se realiza a travs de instrumentos especiales de
lectura, dentro de los cuales los ms usados son los "Contadores Internos Proporcionales", que
permiten determinar la actividad alfa (radiacin emitida por el Uranio, Radio, Torio}, la actividad
beta de radionuclidos especficos, tales como estroncio total, estroncio -90, yodo 131, entre otros.
Los instrumentos contadores consisten, bsicamente, en un detector y un medidor de
intensidad o un cantador electrnico (escalmetro ). Cada instrumento exige el uso de un tipo
especifico de gas y de accesorios de lectura, as como ajustes especiales para la sensibilidad y la
verificacin de instrumentos para su operacin adecuada.
Las tcnicas para el examen radiolgico van a depender del tipo de radiactividad, as:
- La actividad alfa global puede ser determinada por la tcnica de evaporar completamente
la muestra justamente abajo de la temperatura de ebullicin y luego proceder al conteo. Esto
ltimo debe efectuarse con un contador proporcional interno.
- La actividad beta global puede ser determinada, al igual que la alfa, por la tcnica de
evaporar la muestra por completo y luego contar, por medio de un contador proporcional interno.
La diferencia con la actividad alfa, radica en que el volumen de la muestra evaporada sea tal que
la capa slida que quede en el fondo del recipiente no exceda de 1O mg por centmetro cuadrado,
en el rea contada; mientras que en la medicin de la actividad alfa dicha capa no exceda de 5
mg/cm2 del fondo del recipiente.
- El estroncio total radioactivo se determina agregando una cantidad conocida de iones
inactivos de estroncio, en la forma de nitrato de estroncio, para que acte como acarreador de los
radionuclidos del estroncio. Estos ltimos junto con el "acarreador", se separan de los otros
elementos radiactivos y de los slidos inactivos de la muestra por precipitacin como nitrato de
estroncio en una solucin concentrada de cido ntrico. El conjunto de istopos radiactivos del
estroncio (incluyendo el acarreador}, se precipita finalmente como oxalato de estroncio
monohidratado, mediante la adicin de solucin saturada de oxalato de amonio. Luego el
precipitado se seca y se pesa, y en el cual cuantifica la radiactividad, a travs de un contador
proporcional interno.
La concentracin mxima del estroncio radiactivo en el agua es de 8 PCi/1.
- Cesio Radiactivo: Si la actividad del cesio es alta, puede determinarse directamente el
cesio radiactivo mediante el conteo gamma de una muestra lquida de 4 litros o bien puede
evaporarse hasta total sequedad y contarse. En muestras bajo nvel, como las que ocurren en el
medio ambiental natural, se aade el portado de cesio a una muestra acidificada y se recoge el
cesio en forma de fosfomolibdato, que se purifica y precipita como Cs2Ptcl6 para el conteo
correspondiente. Si el radiocesio total determinado supera el valor de 30 Pci/1, se mide el Cs 134 y

35
Cs 137 mediante espectrometra gamma. El lmite de deteccin recomendado para el Cs es de 1O
Pci/I.
-Yodo Radiactivo: El yodo radiactivo resulta de los dispositivos de ensayos nucleares o se
libera durante el uso y tratamiento de combustibles nucleares. Los productos de fisin pueden
contener desde yodo 129 hasta yodo 135. En la actualidad en 1131 presenta probabilidades de
encontrase en el agua. Cuando se ingiere o se inhala, se concentra en la glndula tiroides y puede
provocar cncer de tiroides.
El mtodo ms utilizado para su determinacin es el de precipitacin, debido a su sencillez
y al menor gasto de tiempo que requiere en su aplicacin. Consiste el mtodo en aadir el
portador de yodo a una muestra acidificada, y despus de la reduccin con sulfito de sodio o
yoduro, se precipita el 1131 con nitrato de plata. El precipitado se disuelve y se purifica con polvo
de zinc y cido sulfrico, y se vuelve a precipitar la solucin como yoduro de paladio para conteo
mediante un contador beta de baja radiacin de fondo. El mximo nivel de contaminacin de 1131
en el agua potable es de 3 Pci/I.
-Radio: El radio tiene cuatro istopos producidos de forma natural = Radio 223, radio
224, radio 226 y radio 228. Los tres primeros istopos son emisores alfa mientras que el ltimo
(radio 228} es emisor beta.
La determinacin del radio por precipitacin es el ms utilizado para los istopos de radio
emisores alfa; es una tcnica aplicable a las aguas potables, aunque tambin se puede usar en
residuos industriales y cloacales, con previa eliminacin de la materia orgnica y de estos iones
interfirientes. Para la determinacin del radio 228 se utiliza el mtodo de precipitacin secuencial,
tambin se usa para determinar la combinacin de radio 228 y 226.
El mtodo de precipitacin se basa en que debido a la diferencia existente en las vidas
medias de los nclidos, en las series que incluyen los istopos de radio emisores alfa, estos
istopos pueden identificarse por la tasa de crecimiento interior y la desintegracin de sus
descendientes en un precipitado de sulfato de bario. Se utilizan como portadores el nitrato de
plomo y el cloruro de bario, los cuales se aaden a la muestra que contiene citrato alcalino, luego
se agrega cido sulfrico para precipitar radio, bario y plomo en forma de sulfatos. El precipitado
se purifica mediante lavado con cido ntrico, disolucin en Etilen-doaminotetraacetato disdico
alcalino y nueva precipitacin como sulfato de radiobari para el conteo correspondiente con un
contador proporcional interno o contador de centelleo alfa. El nivel mximo de contaminacin
para radio 226 y 228 es de 5 PCi/I, y de 3 PCl/I para el radio 226.
El mtodo secuencial de precipitacin consiste en concentrar el radio 228 y el radio 226
presentes en el agua, luego separarlos por coprecipitacin con bario y plomo en forma de sulfatos
y purificar por quelacin con Etilen-diaminotetraacetato disdico. Despus de un periodo de
crecimiento (36 horas) se transporta mediante oxalato de itrio realizndose un conteo beta sobre
l (radio 228). El radio 226 se precipita en forma de sulfato, se purifica y se efecta sobre l un
conteo alfa. Si no se desea el anlisis de radio 226 puede terminarse el procedimiento de radio 228
mediante un conteo beta del precipitado de oxalato de itrio, con una precipitacin complementaria
de sulfato de bario.
-Tritio: El tritio existe en el ambiente como resultado de la produccin natural de
radiacin csmica y de los ensayos con armas nucleares. El nivel mximo de contaminacin se

36

sita en 20.000 PCi/I. Para su determinacin se utiliza el mtodo espectromtrico de centelleo

lquido, el cual consiste en tratar la muestra por destilacin de permanganatos alcalinos para
retener la mayor parte de los materiales de amortiguamiento, como el yodo y el carbono
radiactivos. Se mezcla una submuestra del destilado con solucin de centelleo ( 1, 4 dioxano,
naftaleno; l,4-di-2-(5-Feniloxazolil) benceno; 2,5-difeniloxazol) y se mide la actividad beta en un
espectrmetro de centelleo lquido.
-Uranio: Es una mezcla de tres istopos radiactivos: Uranio 238, Uranio 235 y Uranio
234. La mayor parte de las fuentes de agua potable, en especial las aguas de superficie, contienen
carbonatos y bicarbonatos que pueden formar complejos de uranio y mantenerlos en solucin. El
nivel de contaminacin en las aguas es de 1O PCi/I.
Los mtodos para la determinacin del uranio en las aguas son el mtodo radioqumico y
el fluoromtrico.
El mtodo radioqumico consiste en acidificar la muestra con cido clorhdrico y se hierve
para eliminar los iones carbonato y bicarbonato. El uranio se coprecipita con hidrxido frrico y
se separa a continuacin. El hidrxido frrico se disuelve, pasa a travs de una columna de
intercambio aninico y se lava con cido, mientras que el uranio despus de agregarle cido
clorhdrico se evapora hasta sequedad casi total, la sal residual se convierte a la forma de nitrato
aadiendo porciones de cido ntrico concentrado y se mide la actividad alfa con un instrumento
de centelleo.
El mtodo fluoromtrico consiste en filtrar porciones de la muestra a analizar y luego
evaporar hasta que se seque. Despus se aade solucin patrn de uranio y se evapora totalmente.
Se funde el residuo en un fundente de fluoruro de sodio-carbonato de potasio. El material se
solidifica y produce fluorescencias debidas al uranio, que se miden bajo luz ultravioleta en un
fluormetro de alta sensibilidad
4. Mtodos de Anlisis para los Parmetros Bacteriolgicos de la Calidad del Agua.
Hasta los actuales momentos no existen anlisis que se realicen en forma rpida y que
garanticen en grado razonable la presencia o ausencia de microorganismos patgenos en el agua.
Algunos procedimientos que se usan para el aislamiento, identificacin y enumeracin son dificiles
y complicados, adems de que requieren mayor volumen de muestra y mayor tiempo de
procesamientos. Por estas razones se han adaptado procedimientos indirectos, a travs de los
llamados indicadores biolgicos, para definir la calidad bacteriolgica del agua.
Los indicadores biolgicos ms usados para stos fines son los llamados organismos
coliformes, cuya presencia, adems de estar asociada con posibles riesgos para la salud, es
utilizada como indicador de la eficiencia del tratamiento al cual es sometida el agua.
El estimado o determinacin de los organismos coliformes se realiza empleando la tcnica
de los tubos mltiples de fermentacin y el contaje total de colonias.
4.1. Contaje Total de Colonias.
Tiene por objeto determinar el contenido bacteria! de la muestra de agua por unidad de
volumen (mi) bajo condiciones definidas de cultivo. Es utilizado como un anlisis auxiliar en el
control de la potabilidad del agua y puede dar informacin importante cuando se evala la calidad
de un sistema de distribucin y la efectividad de los procedimientos de purificacin.
Esta tcnica consiste en transferir una cierta cantidad de muestra ( 1 mi) a una placa de
petri estril, en el caso de aguas de desecho o aguas no tratadas se siembran volmenes de

37
diluciones decimales. Luego se agrega a la placa una cantidad establecida de medio de cultivo ( 12
- 15 mi) de Agar Standard, a una temperatura de 45C (aproximadamente); despus se incuban a
35C por un perodo de 48 horas 3. El conteo de las colonias se realiza directamente cuando no
son muy numerosas y se multiplica por la dilucin respectiva; cuando son muchas las colonias se
utiliza el contador de colonias.
4.2. Tcnicas de los Tubos Mltiples de Fermentacin.
El anlisis bacteriolgico por esta tcnica consiste en determinar la densidad del grupo
coliforme expresada en trminos del "Nmero Mas Probable" (NMP). Por 100 mi de muestra.
Este NMP debe entenderse como un ndice del nmero de bacterias coliformes que tienen mayor
probabilidad sobre cualquier otro nmero y no es la enumeracin real de coliformes presentes.
En la aplicacin de esta tcnica, se utilizan volmenes determinados de la muestra y
nmeros definidos de proporciones de cada volmen analizado. Se recomienda utilizar por lo
menos cinco porciones de 1O mi de cada muestra, cuando son aguas tratadas, pero en definitiva el
nmero de diluciones se selecciona de acuerdo al rango previamente estimado de coliformes.
Dentro de la tcnica de los tubos mltiples de fermentacin se incluyen tres pruebas:
presuntiva, confirmativa y completa complementaria.
a) Prueba Presuntiva:
Para el caso de aguas para consumo humano se inocula una serie de 5 tubos de
fermentacin que contiene 20 mi de caldo lactosado estril con 1O mi de muestra. Luego se
incuban a la temperatura de 3 SC O,SC, durante 24 horas y 48 horas, al cabo de estos tiempos
se examinan los tubos. La presencia de cualquier cantidad de gas en los tubos de la serie,
constituye una prueba presuntiva positiva; lo contrario es un prueba negativa.
En aguas ligeramente o muy contaminadas, se inoculan series de 5 tubos de fermentacin
que contengan 1O mi de caldo lactosado estril. Se incuban durante 24 horas a la temperatura de
35C O,SC y se examinan los tubos, y si no se ha producido gas se examinan al cabo de 48
horas. La presencia de gas en los tubos de la serie constituye una prueba Presuntiva Positiva.
b) Prueba Confirmativa:
Se emplean tubos de fermentacin con caldo lactosado con bilis y verde brillante, este
medio es selectivo para los miembros del grupo coliforme e inhibidor para la flora restante. Los
tubos positivos de la prueba anterior se inoculan en una serie de 5 tubos con el medio de cultivo
antes mencionado, se incuban a 35C O,SC por 48 horas. La presencia de gas en los tubos de
fermentacin, constituye una prueba confirmativa positiva.
Para separar los coliformes de origen fecal de los no fecales, se procede a la inoculacin
de los tubos positivos de la prueba confirmativa, en tubos con caldo lactosado y se incuban a 3 SC
durante 24 horas; de los tubos positivos se inoculan en una serie de 5 tubos con medio EC y se
incuban en bao de maria a 44,SC O,SC de 6 a 24 horas. La presencia de gas se considera una
reaccin positiva que indica presencia de organismos coliformes de origen fecal. En la figura 2 se
presenta un diagrama esquemtico de las pruebas antes descritas.
c) Prueba Completa:
Esta prueba generalmente no se efecta como anlisis de rutina, pero puede hacerse para
el control de calidad de agua potable o para comprobar la validez de la prueba confirmativa. La

38
FIGURAN 2 DIAGRAMA ESQUEMTICO PARA DETECTAR COLIFORMES
TOTALES Y COLIFORMES FECALES

MUESTRA DE AGUA NATURAL

LAU~iL

CALDO
TRIPTOSE
!PRUEBA PRESUNTJ'IA)

INCUBAR ) HORAS A 35' C

SJN!SAS

'1
BAS 1>1

1-l

INCUBAR 24 HORAS A 3'.'C

Medio: 81l1s
1 Verde Bn I lante

____

r+.
__,!,'-------

1
0

'

SAS 1>)

1
COL!FORMES AUSENTES

\
'

'

PRUEBA DE TEMPERATURA
ELEVADA iECI
INCUBAR 24 HORAS !BAO MARIA!

A 44.5' l!D.51

CALDO LACTOSADO
BILIS VERDE
BRILLANTE
INCUBAR 24-48 HORAS A 3'.'C
1

r
1

SIN GAS
COLIFORMES FECALES

AUSEIHES

L._

GAS - COLIFGRMES
FECALES PRESEllTES
CALCULAR NKP

i
i

SINJ SAS
PRUEBA NEGATIVA
COLIFOR"ES AUSENTES .

Fuente: !NOS IS/Fa). Manual de Laboratorio Fis1co-Oui1co r icter1oltq1co.

i >I

G~S

PRUEBA POS!T!VA
CALCULAR NMP CONF IRMADD

39

prueba completa consiste en inocular Placas de Eosina Azul de Metileno o Agar de Endo a partir
de los tubos confirmados positivos, luego se incuban a 35C O,SC durante 24 horas. Al cabo de
este tiempo, las colonias formadas se replican en caldo Lauryl y tubos de Agar Nutritivo. Despus
del Periodo de incubacin, se preparan frotis para la tincin de Gram, que permite identificar los
organismos Gram positivos y los Gram negativos (organismos coliformes).
El clculo y registro de NMP, tanto de la prueba presuntiva, confirmativa o completa, se
efecta en base a la combinacin del nmero de tubos positivos y negativos, para lo cual se
utilizan tablas apropiadas para este fin (ver tabla 6 ).

40

TABLA 6. Indice NMP y limites de confianza del 95% para varias combinaciones
de resultados positivos cuando son usados 5 tubos por dilucin
( 10 mi, 1 mi, 0.1 mi.)
Limites de confianza
Limites de confianza
Combinacin Indice
Combinacin Indice
del 95%
NMPpor
NMPpor
del 95%
de tubos
de tubos
100 mi limite inferior limite superior
positivos
100 mi limite inferior limite superior positivos
<2
o -O -O
4-2-0
22
9
56
10
26
12
65
2
1
o -o - 1
4-2-1
27
1
0-1-0
2
10
12
67
4-3-0
0-2-0
4
1
13
33
15
77
4-3- 1
1-0-0
2
1
34
16
11
4-4-0
80
1
1 - o- 1
4
15
23
9
86
5-0-0
1
1- 1- o
4
15
30
10
110
5-0-1
2
1- 1- 1
6
18
40
20
140
5-0-2
1-2-0
2
6
18
30
10
120
5-1-0
1
2 - o -o
4
17
50
20
150
5 - 1- 1
2
2 - o- 1
7
20
60
30
180
5 - 1- 2
2-1-0
7
2
21
50
20
170
5-2-0

2- 1- 1
2-2-0
2-3-0
3-0-0

9
9
12
8

3 -O - 1
3 - 1- o
3 - 1- 1
3-2-0

11
11
14
14

6
6

3-2- 1
4-0-0

17

40

13
17

30
45
46

5-4-2
5-4-3
5-4-4
5-5-0

55

5-5- 1

63

5-5-2
5-5-3

4 - o- 1
4 - 1 -O
4- 1- 1
4-1-2

17
21
26

3
3
5

3
4
4

7
7
9
12

24
25
29
24

5-2-1
5-2-2
5-3-0

29
29
35

5-3-2
5-3-3
5-4-0
5-4-1

35

5-3-1

5-5-4
5-5-5

Fuente: M.S.AS. (1992 ). Manual de Laboratorio

70
94
79
110
140
180
130
170

30
40
30
40
60
80
50
70

210
250
250
300
360
410
390
480

220
280
350
240
350
540
920

100
120
160
100
100
200
300
600

580
690
820
940
1.300
2.000
2.900
5.300

1.600
2.400

41
4.3 Mtodos Rpidos Para Determinar la Calidad del Agua.
En casos de desastres o fenmenos naturales en los cuales se producen interrupciones del
suministro de agua debido a fallas en los sistemas de tratamiento y/o rupturas en las tuberas de
distribucin o en casos de epidemias de enfermedades de origen hdrico, es de suma importancia
la consecucin de resultados rpidos y efectivos en la determinacin de la calidad sanitaria del
agua, para garantizar la salud de la poblacin afectada. En tales situaciones de emergencia, es
posible contar con una serie de mtodos de laboratorio, que de manera cualitativa, puedan
cumplir con esta finalidad.
Estos mtodos estn basados en la deteccin de organismos del grupo coliforme mediante
tcnicas convencionales modificadas y en la deteccin de colfagos o bacterifagos que infectan y
se multiplican en las bacterias del grupo coliforme. (Pimentel, 1991 ). A continuacin se describen
los mtodos ms usados:
a) Presencia o Ausencia <P-A) Anlisis de Coliformes:
Este mtodo es una modificacin simplificada del mtodo de tubos mltiples de
fermentacin, obtenindose los resultados en menos de 48 horas, adems de que permite efectuar
grandes cantidades de anlisis por unidad de tiempo. Consiste en inocular una porcin de 100 mi
de muestra en una botella con medio de cultivo a base de caldo P-A (Caldo Lactosado, Caldo
Lauril Triptosa, Prpura de Bromocresol y agua destilada) y despus de mezclar por medio de
agitacin, se incuba a 35C 0,5C durante 25 y 48 horas. En estos perodos de tiempo se
observa con el fin de detectar un viraje en el color, indicativo de una reaccin cida (coloracin
amarilla), debido a la fermentacin de la lactosa. Luego se procede a observar la produccin de
gas, que se manifiesta en la formacin de espuma en la superficie del medio de cultivo, cuando se
agita levemente el frasco contentivo de la muestra. La presencia de gas, requerir la realizacin de
la prueba de confirmacin en el Caldo Bilis verde Brillante (BGLB}, para lo cual se inocula en
este medio de cultivo y se procede a su incubacin bajo las condiciones de tiempo y temperatura
antes mencionadas. La produccin de gas a las 48 horas confirmar la presencia tle organismos
coliformes en la muestra baja estudio.
b) Anlisis Directo de Coliformes Fecales en 24 Horas (A-1)
Este mtodo se basa en la seleccin de los organismos coliformes, por medio de elevadas
temperaturas, en coliformes totales y coliformes fecales. El procedimiento consiste en inocular 1O
mi de muestra en tubos con medio de cultivo a base de caldo A-1 (Lactosa, Triptona, Cloruro de
Sodio, Salicn, Triton X-100 y agua destilada}, de igual manera como se efecta para los
exmenes de rutina, luego se incuban por 3 horas a temperatura de 35C 0,5C, y se transfieren
posteriormente al bao de mara a'44,5C 0,5C e incubar por un perodo adicional de 21 horas.
La produccin de gas en cualquier tubo indica la presencia de organismos coliformes en la
muestra de agua; as mismo se puede determinar el NMP de coliformes fecales utilizando la
combinacin de tubos positivos y negativos, como se efecta en las pruebas de rutina.
e) Anlisis de Coliformes Fecales por el Mtodo de las Siete Horas.
Este mtodo es similar al de la membrana filtrante, pero con la utilizacin de un medio de
cultivo diferente y una temperatura de incubacin ms elevada que permite la obtencin de
resultados en un tiempo de 7 horas. El medio de cultivo utilizado es el Agar FC M-7 h, el cual
est integrado por las siguientes sustancias: Proteosa Peptona N3 o Polipeptona, extracto de

42
levadura, lactosa, d-Manitol, cloruro de sodio, sodio lauril sulfato, desoxicolato de sodio, prpura
de Bromo-creso!, rojo fenol, agar y agua destilada.
El procesamiento consiste en filtrar un volumen apropiado de la muestra a travs de una
membrana filtrante, colocar la membrana sobre la superficie del medio de cultivo e incubar por 7
horas a una temperatura de 41,5C. Si hay la presencia de colonias de coliformes fecales aparecer
una coloracin amarillenta en el medio, como resultado de la fermentacin de la lactosa.
d) Determinacin de Colifagos:
Debido a la estrecha relacin existente entre los organismos del grupo coliforme y la
presencia de colifagos en el agua, estos ltimos se han venido utilizando como indicadores de la
calidad sanitaria del agua potable. Adems de que los colifagos son ms resistentes a la accin
desinfectante del cloro, la cual los coloca en situacin ventajosa como indicadores de
contaminacin fecal, con respecto a los organismos coliformes. Actualmente existen dos mtodos
para la deteccin de bacterfagos:
-Metodologa segn el Standard Methods: En la aplicacin de este mtodo se utiliza la
Escherichia coli como husped y los siguientes medios de cultivo; 1) Agar Tripticasa soya (TSA),
el cual se prepara con Triptona, Soytone o Peptona de la soya, cloruro de sodio, agar y agar
destilada. 2) Caldo Triticasa soya (TSB) el cual se prepara con Triptona, Soytone o Peptona de la
soya, dextrosa, cloruro de sodio, fosfato cido de potasio y agua destilada. 3) Agar Tripticasa
soya modificado (MTSA), que se prepara con el medio de TSA, nitrato de amonio, nitrato de
estrontium y agar. 4) Glicerina y 5) 2,3,5-Trifenil tetrazolium cloro (TPTZ).
El procedimiento consiste en aadir el organismo husped a un volumen apropiado de la
muestra a analizar, luego se procede a mezclar bien con los medios de cultivos antes sealados y
se vierte en placas de Petri para su incubacin a 3 5C por 4 o 6 horas. Al final de este periodo se
cuentan las placas formadas y se estima el nmero de coliformes totales y fecales en la muestra,
aplicando las siguientes expresiones:
coliformes totales
log y = 0,627 (log X)+ 1,864.
coliformes fecales
log yl = 0,805 (log X)+ 0,895.
donde:
y = coliformes totales/l OOml.
yl = coliformes fecales/IOOml.
X = colifagos/l OOml.

-Metodologa segn Atlantic Research Cooperation: Para la aplicacin de este mtodo se

utiliza el mismo husped (Eschericha Coli) que en el caso anterior y los siguientes medios de
cultivo: 1) caldo nutritivo y cloruro de sodio. 2) Agar sernislido y 3) Agar en placas.
El procedimiento consiste en mezclar el organismo husped en un volumen apropiado de
la muestra a analizar, y los medios de cultivos antes mencionados, luego se vierten en placas de

43

Petri para su incubacin a 37C durante 4 a 6 horas. Al final de este periodo se cuentan las placas
formadas y se estima el nmero de coliformes totales y fecales presentes en la muestra, aplicando
las frmulas presentadas en el mtodo anterior (Standard Methods).
e) Otros mtodos rpidos:
Existen otros mtodos que permiten determinar rpidamente la calidad sanitaria del agua,
pero que requieren del uso de tcnicas y personal altamente especializados, estos son:
Ouimioluminicencia: Que se basa en la deteccin y registro, por medio de circuitos de luz
visible que se producen cuando reaccionan el perxido de hidrgeno, luminol y microorganismos.
lnmunofluorescencia: Se basa en que las bacterias en el agua pueden ser detectadas por su
reaccin con anticuerpos y despus se visualizan por medio de tinciones.
Tcnicas enzimticas: Se basan en que las bacterias y virus pueden ser detectados
indirectamente por la presencia de ciertas enzimas que son comunes entre los organismos
patgenos, las cuales pueden ser detectadas por medio del luminol.
Sonda gentica: Se basa en la deteccin de pequeas cantidades de material gentico de
organismos especficos.

44

BIBLIOGRAFIA
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