Aula 10 - Cinética Dos Processos Fermentativos

29/05/2014
Universidade Federal de So Joo Del Rei
Engenharia Bioqumica
Cintica dos Processos

Fermentativos
Prof. Marlia Magalhes Gonalves
Crescimento Microbiano
Em microbiologia, o termo crescimento
refere-se a um aumento do nmero de
clulas e no ao aumento das dimenses
celulares
Crescimento populacional aumento do
nmero ou da massa microbiana
Reproduo Microbiana
Bactrias
- fisso binria (assexuada)
Leveduras
- brotamento ou gemulao (assexuada)
- fisso binria (assexuada)
Fungos
- assexuada ou sexuada (esporulao)
Reproduo Microbiana
Reproduo Microbiana
Fungos filamentosos crescem por extenso
Nos cultivos submersos, as clulas fngicas
das hifas e a morfologia de seu miclio
podem crescer unidas a partculas de
pode variar em funo do meio ambiente
nutrientes suspensas na forma de miclio
Quando um fungo cresce na superfcie de

um meio slido produz uma rede miceliana,
cuja natureza reflete a natureza do meio
filamentoso difuso ou como massa densa

A morfologia e crescimento influem na
velocidade de crescimento e na formao
de produtos
29/05/2014
Matria-prima
Quando
se
acompanha
crescimento
de
microrganismos em meio lquido, durante um

espao de tempo em que a quantidade de
nutrientes superior s suas necessidades e
Numa cultura descontnua, as condies

no permanecem ideais por muito tempo
A quantidade de nutrientes comea a
substncias txicas no se acumularam de forma
diminuir
significativa,
microbiano vo se acumulando
verifica-se
normalmente
que
produtos
do
metabolismo
crescimento ocorre de forma exponencial

Aumento de nmero ou massa obedece uma
Essas
modificaes
influenciam
crescimento microbiano
progresso geomtrica
Quando um microrganismo inoculado em
Fase de crescimento exponencial (log) as
um
meio
de
volume
composio
conhecidos, o cultivo passa por uma srie

de fases
Fase de latncia (lag) aps a inoculao.
clulas crescem a uma velocidade constante

mxima
Fase
mais
importante
do
crescimento
microbiano, fornece dados para estudos de

fisiologia e cintica, permite estudar influencia
Adaptao do microrganismo ao meio.
de
No se observa aumento em nmero dos
microrganismos
fatores
sobre
crescimento
dos
microrganismos
29/05/2014
Fase
estacionria
velocidade
de
crescimento diminui at que finalmente o

crescimento cessa
Esgotamento de um nutriente ou oxignio,
acmulo de algum produto txico
Fase de declnio nmero de microrganismos
que morre torna-se progressivamente superior
ao dos que surgem
Fatores que influenciam o

Metablitos
primrios
formados
essencialmente ao mesmo tempo que novas
Temperatura
Para todos os microrganismos, trs temperaturas devem
clulas, durante a primeira fase do crescimento
ser observadas
microbiano
- temperatura mnima
Metablitos secundrios no so produzidos

at que o microrganismo tenha completado
toda sua fase de crescimento logartmico e
tenha
iniciado
fase
estacionria
do
- temperatura mxima
- temperatura tima (termfilos, mesfilos, psicrfilos)
Para outras atividades microbianas existem outras
temperaturas
timas
que
no
necessariamente
coincidem com a temperatura tima de crescimento
crescimento

pH
Como para temperatura, existe sempre um
valor timo, mximo e mnimo de pH para o
A maioria dos microrganismos tem seu timo
em torno da neutralidade
Muitos processos fermentativos so realizados
por microrganismos que crescem melhor em
pH cido

Agitao
Agitao
promove
aerao
do
meio,
favorecendo o crescimento de aerbios

facultativos
Tambm promove homogeneizao dos
nutrientes no meio de cultura e disperso
dos produtos metablicos
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Cintica dos processos

fermentativos
Estudo cintico de um processo fermentativo
Tipo de matria-prima (C, N)
anlise
Concentrao do substrato
da
evoluo
dos
valores
de
concentrao de um ou mais componentes do
Nutrientes (macro e micro)
sistema de cultivo, em funo do tempo de

fermentao
Formao de produto inibidor

Presena de inibidores inicialmente
no
Componentes:
produtos
cultivo
do
microrganismo
metabolismo
(biomassa),
(metablitos),
nutrientes ou substratos que compem o meio

de cultura

fermentativos
Estudo permite aumento de escala

fermentativos
Valores experimentais de concentrao dos componentes

quando representados em funo do tempo, permitiro o
Anlise
comparativa
entre
diferentes
traado das curvas de ajuste
condies de cultivo => otimizao do

processo
Sem obteno de valores intermedirios
no h estudo cintico

fermentativos
Quantificao do nmero de clulas
densidade ptica
massa seca
contagem microscpica
dosagem de protenas, DNA

fermentativos
Quantificao do substrato
Com frequncia escolhido o substrato
limitante para ser quantificado - define a
velocidade de crescimento celular
consumo de substrato (indireta)
geralmente a fonte de C
volume de sedimento aps centrifugao
cromatografia, espectrofotometria
Dificuldade no caso de culturas mistas
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fermentativos
Parmetros Cinticos (Regime

em Batelada)
Quantificao do produto
Velocidade instantnea ou volumtrica de
escolhido o produto de interesse econmico,
transformao
em alguns casos a quantificao simples
Valores das inclinaes das respectivas
enzimas - separao pode ou no ser simples e

a quantificao indireta atividade
hormnios
quantidades
curvas de ajuste
1) rx = dX
2) rs = - dS
3) rp= dP
dt
dt
dt
baixssimas
(quantificao dificultada)
Unidade: g / L.h (massa/volume x tempo)
cromatografia, espectrofotometria

em Batelada)

em Batelada)
Produtividades
Produtividade em clulas (Px):
Velocidade mdia de crescimento ou gerao

de produtos referente ao tempo total ou final
Px = X = massa de clula obtida = Xf Xo

t
intervalo de tempo
tf - to
[g/L.h]
Produtividade em produto (Pp):
de fermentao
Interessante na avaliao de desempenho de
um processo fermentativo
Pp = P = massa de produto obtido = Pf Po [g/L.h]

t
intervalo de tempo
tf to
Alta produtividade significa mais produto em

menos tempo de processo

em Batelada)
Durante
um
concentrao
cultivo
de
descontnuo,
microrganismos

em Batelada)
a
Dessa forma, mais interessante analisar os
(X)
valores das velocidades instantneas, com
aumenta
relao concentrao microbiana (valor
Consequente aumento de concentrao do

complexo
enzimtico
responsvel
pela
transformao de substrato (S) em produto
de X em determinado instante)
Definio
mais
precisa
do
processo
fermentativo
(P)
29/05/2014

em Batelada)
Velocidade
especfica
de
crescimento

em Batelada)
Velocidade
especfica
celular = x (ou simplesmente );
substrato = s
x = 1 . dX = rX
X dt X
s = 1 . (- dS) = rS
x
dt
x
Unidade:
L . g cel => h-1

g cel L . h

em Batelada)
Velocidade especfica de formao de
produto = p
p = 1 . dP = rP
x dt x
Unidade:
L . g prod => g prod

g cel
L.h
g cel . h
Unidade:
de
consumo
de
L . g sub => g sub

g cel L . h
g cel . h

em Batelada)
Fatores de converso (rendimento)
Fator de converso de substrato em clula
(YX/S):
YX/S = X = massa de clula obtida______
-S massa de S limitante consumido
Permite o clculo do valor de X a partir de
um valor conhecido de S e vice-versa
til na definio do substrato limitante

em Batelada)

em Batelada)
Fator de converso de substrato em Produto
Fator de rendimento em clulas em relao
(YP/S):
ao produto:
YP/S = P = massa de produto obtido__

-S massa S limitante consumido
YX/P = X = massa de clula obtida

P
massa de produto obtido
Se alto, pode chegar ao prprio fator

estequiomtrico
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em Batelada)

em Batelada)
Fatores de converso de substrato inicial em
Eficincia do processo:
produto (YP/So) e clulas (YX/So):

YP/So = P
So
YX/So = X
So
Ef =
massa de produto obtido

x 100
massa de produto estequiomtrica
Ef = (YP/S)processo x 100
(YP/S)terico
Exemplo
Exemplo
Dados para cultivo em batelada de S.

cerevisiae
Extrado de Bastos (2010)
Exemplo
Figura. Perfis de concentrao celular (X), consumo de substrato (S) e formao

de produto (P) a partir dos dados da Tabela anterior (cultivo em batelada).
Extrado de Bastos (2010)
Exemplo
ART = acares redutores totais
(valor acima do Yp/s terico) ???
29/05/2014

em Batelada)
Exemplo

Em
fermentaes industriais,
dificilmente
se
observa valores constantes dos fatores de

converso
Apesar
Figura. Ajuste dos perfis de consumo de substrato e formao de produto
(polinmios das curvas da Figura anterior)
de
dependerem
microrganismo
dP/dt = 1,66 g L-1 h-1

dS/dt = 3,33 g L-1 h-1
em
da
relao
espcie
do
determinado
substrato, no dependem somente da natureza

deste

em Batelada)

em Batelada)
Outros componentes do meio tambm exercem
Dessa forma, se os fatores de converso no
influncia sobre essas converses, alm do
forem constantes, devem ser considerados
tempo de mistura e transferncia de oxignio
apenas seus valores instantneos
Alm disso, as clulas utilizam a energia de

oxidao
do
substrato
no
apenas
para
crescimento, mas para manuteno das suas
Y X/S = dX = rX = X
-dS
rS
Y X/P = dX = rX = X
dP
rp
Y P/S = dP = rP = P
-dS rS S
funes vitais

em Batelada)
Equao de Monod
Interpretao da fase exponencial de crescimento
A equao
emprica
proposta
por
Monod
comumente empregada para explicar a relao

entre a concentrao de substrato limitante no meio
de cultivo, S, e a velocidade especfica de
Velocidade
substrato
especfica
considerando
viabilidade celular (mS)
de
a
consumo
manuteno
de
da
reproduo do microrganismo, X
x = max . S
kS + S
max = velocidade especfica mxima de crescimento
kS = constante de saturao
29/05/2014
Linearizao da Equao de Monod

(Lineweaver-Burk)
X = max . S
kS + S
- Se h excesso de substrato
S >>> kS ento X = max
-Fazendo kS = s => X = max/2
- kS a concentrao de substrato
na qual a velocidade especfica
de crescimento metade de seu
valor mximo
- Se S <<< kS ento X = max.S/kS e
a cultura se encontra na fase
exponencial de crescimento
1 = 1
X max
y
b
ks . 1
max s
a
x
Expresso de Monod formalmente igual equao de

Michaelis- Menten
Quanto menor kS maior afinidade do microrganismo pelo
substrato ( maior durao da fase exponencial)
Linearizao da Equao de Monod

(Lineweaver-Burk)
Exerccio
A expresso de Monod no leva em conta o efeito da
Um cultivo batelada, tendo a glicose como substrato limitante,
presena de um inibidor, seja substrato ou produto formado
apresentou os seguintes dados experimentais
Mas esse no o nico modelo referente a tal condio ideal

de cultivo
t (h)
X (g/L)
S (g/L)
19,37
92,37
dX/dt (g/L.h)
15,3
0,65
28,12
75,75
19,87
1,07
35,75
61,5
24,54
1,47
44,12
45,62
27,86
1,79
51,37
31,87
29,9
2,17
60,25
13,75
25,25
2,57
66,25
3,87
11,4
Determinar parmetros cinticos mx e kS a partir da equao

de Monod
Exerccio
Exerccio
Clculo dos Recprocos de Lineweaver-Burk
Determinao de mx e kS
1/ = f(1/S)
S (g/L)
1/S (L/g)
X (h-1)
1/X (h)
92,37
0,0108
0,7899
1,2660
75,75
0,0132
0,7066
1,4152
61,5
0,0163
0,6864
1,4569
45,62
0,0219
0,6314
1,5838
31,87
0,0314
0,5820
1,7182
13,75
0,0727
0,4191
2,3861
3,87
0,2584
0,1721
5,8106
29/05/2014
Inibio pelo substrato

A ausncia de inibio uma situao muito pouco
comum, na prtica, especialmente em cultivos

A expresso de Monod apenas se aplica a valores
relativamente baixos de S (menores ou iguais a ks)
descontnuos, onde ocorre acmulo de metablitos

A com inibio
B sem inibio
que podem interferir no crescimento e metabolismo

microbiano
O efeito da inibio pelo substrato se manifesta

quando um valor alto de concentrao inicial S
pode, ao invs de aproximar X de max, provocar
uma inibio do crescimento celular

Para
explicar
essa
reduo
na
velocidade
especfica de crescimento (X ) provocada por altos

valores iniciais de concentrao de substrato (S)
proposta uma modificao na equao de Monod
Ks a constante de saturao j definida e kI,S a

constante de inibio (valor de S para o qual X =
max /2, porm para um valor de S que provoque a
inibio, superior ao correspondente equao de
Monod)
Inibio pelo produto

Equao semelhante da inibio pelo substrato,
na qual se aplicam as mesmas consideraes
kI,S relativamente alto, requer valores elevados de S

para que o efeito inibidor se manifeste (pouca
inibio pelo substrato)
Valores baixos de kI,S
representam um substrato
muito inibidor
10
29/05/2014
Classificao dos processos

fermentativos

fermentativos
Relacionada formao de produtos e crescimento
Produo associada ao crescimento
Produto formado (metablito primrio) est diretamente ligado
microbiano
- Produo associada ao crescimento
- Produo parcialmente associada
- Produo no associada
s reaes do catabolismo ou decomposio do substrato. Ex:

produo de etanol e de algumas vitaminas e aminocidos.

fermentativos

fermentativos
Produo parcialmente associada ao crescimento
Produo no associada ao crescimento
Produo defasada em relao ao crescimento. Formao do
Produto formado um metablito secundrio. A clula no
produto no est diretamente ligada produo de energia.
necessita de tais produtos para crescer e sim para outras
Ex: produo de cido ctrico por Aspergillus niger
finalidades. Ex: antibiticos (penicilina), toxinas microbianas

fermentativos
Luedeking
Piret,
obtiveram
uma

fermentativos
expresso
emprica relacionando velocidade especfica de

formao do cido ltico (p) com a velocidade
especfica de crescimento do microrganismo (x), na
produo
descontnua
dessa
substncia
Dividindo por X: P = X +
por
Lactobacillus delbrueckii em pH constante
11
29/05/2014
Exerccio
A cintica
Exerccio
x (g/g.h)
de formao de um produto (P) obtido por
fermentao apresenta a seguinte expresso:
p (g/g.h)
0,125
0,25
0,250
0,500
0,375
0,750
P = + X
0,500
1,000
0,625
1,250
y = a + bx
0,687
1,374
0,725
1,450
0,750
1,500
0,785
1,570
0,812
1,624
Os valores calculados para x e p so mostrados na

tabela a seguir:
Em que grupo de fermentao segundo Luedeking e Piret este

processo pode ser enquadrado? Justifique.
Para o estudo cintico de um processo, deve-se:
Referncias Bibliogrficas
Medir S, X e P (de interesse)
Rech, R. Apostila Bioengenharia para Engenharia Qumica.
Obter os grficos [S], [X], e [P] = f (t)
Departamento de Tecnologia de Alimentos. Universidade
Calcular as velocidades instantneas
Calcular as velocidades especificas
Determinar a fase exponencial no grfico lnX = f(t) e
atravs de seu max
Delimitar as fases de crescimento X = f(t)
Calcular os fatores de converso e produtividade
Determinar o modelo cintico para o crescimento
Federal do Rio Grande do Sul, 2006;

Schmidell, W. et al. Biotecnologia Industrial. So Paulo: Edgard
Blucher, vol. 2 Engenharia Bioqumica, 2001;
Notas de aula professor Andr Aguiar, Engenharia Bioqumica,
UFSJ - CAP
12

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Cintica dos Processos

Prof. Marlia Magalhes Gonalves

Fungos filamentosos crescem por extenso

Nos cultivos submersos, as clulas fngicas

das hifas e a morfologia de seu miclio

podem crescer unidas a partculas de

pode variar em funo do meio ambiente

nutrientes suspensas na forma de miclio

Quando um fungo cresce na superfcie de

filamentoso difuso ou como massa densa

microrganismos em meio lquido, durante um

Numa cultura descontnua, as condies

substncias txicas no se acumularam de forma

crescimento ocorre de forma exponencial

Quando um microrganismo inoculado em

Fase de crescimento exponencial (log) as

conhecidos, o cultivo passa por uma srie

clulas crescem a uma velocidade constante

microbiano, fornece dados para estudos de

Adaptao do microrganismo ao meio.

No se observa aumento em nmero dos

crescimento diminui at que finalmente o

Fatores que influenciam o

essencialmente ao mesmo tempo que novas

clulas, durante a primeira fase do crescimento

Metablitos secundrios no so produzidos

coincidem com a temperatura tima de crescimento

Fatores que influenciam o

Fatores que influenciam o

favorecendo o crescimento de aerbios

Fatores que influenciam o

Cintica dos processos

Tipo de matria-prima (C, N)

concentrao de um ou mais componentes do

Nutrientes (macro e micro)

sistema de cultivo, em funo do tempo de

Formao de produto inibidor

nutrientes ou substratos que compem o meio

Cintica dos processos

Cintica dos processos

Valores experimentais de concentrao dos componentes

traado das curvas de ajuste

condies de cultivo => otimizao do

Cintica dos processos

Cintica dos processos

consumo de substrato (indireta)

volume de sedimento aps centrifugao

Dificuldade no caso de culturas mistas

Cintica dos processos

Parmetros Cinticos (Regime

Velocidade instantnea ou volumtrica de

escolhido o produto de interesse econmico,

em alguns casos a quantificao simples

Valores das inclinaes das respectivas

enzimas - separao pode ou no ser simples e

Unidade: g / L.h (massa/volume x tempo)

Parmetros Cinticos (Regime

Parmetros Cinticos (Regime

Produtividade em clulas (Px):

Velocidade mdia de crescimento ou gerao

Px = X = massa de clula obtida = Xf Xo