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UNIVERSIDAD CATLICA DE SANTA MARA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS, BIOQUMICAS Y


BIOTECNOLGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA BIOTECNOLGICA

ASIGNATURA: OPERACIONES UNITARIAS II

SISTEMAS BIOLGICOS EN LA
OBTENCIN DE PRODUCTOS
BIOFARMACUTICOS Y ENZIMAS
Ing. Cinthia Crdova Barrios
cinthia.biotech@yahoo.es

SISTEMAS BIOLGICOS
OBJETIVO

Explicar y comprender la importancia de los sistemas biolgicos en el diseo del


Downstream Processing (DSP) para la obtencin de productos biofarmacuticos.

SISTEMAS BIOLGICOS
1. Introduccin

2. Definicin y caractersticas.
3.Tipos
4. Importancia
5. Ventajas y desventajas: Bacterias, levaduras, hongos, clulas
animales, animales transgnicos y plantas transgnicas.
6. Bibliografa

INTRODUCCIN:
Un bioproceso es una parte esencial de la industria biotecnolgica, es un
proceso en el que utilizan clulas vivas o alguno de sus componentes
para obtener un producto.

UPSTREAM

DOWNSTREAM

BIOPROCESO

INTRODUCCIN:
SISTEMAS BIOLOGICOS

La biotecnologa se refiere a toda aplicacin tecnolgica que utilice sistemas biolgicos


(organismos vivos o sus derivados) para la creacin o modificacin de productos o
procesos para usos especficos.

Sistema biolgico

UPSTREAM

DEFINICIN Y CARACTERSTICAS:
SISTEMAS BIOLOGICOS

Es un organismo
vivo o los productos
de su metabolismo.

Ser seguro.

Ser
genticamente
estable.

Eficiente nivel
de expresin
del producto
deseado.

Sencillez y
economa de
su cultivo.

TIPOS:
SISTEMAS BIOLOGICOS
Bacterias: Escherichia coli

Levaduras: Saccharomyces cerevisiae

Hongos: Aspergillus sp.


Cultivo de clulas animales: BHK y CHO
Cultivo de clulas vegetales
Animales transgnicos: Cabras, ovejas, cerdos, conejos,
vacas.
Plantas: Nicotiana tabacum

IMPORTANCIA:

IMPORTANCIA:
Biopharmaceutical

Source

Biopharmaceutical

Source

tPA
Insulin

E. coli, CHO
E. coli

IFN-
IFN-
IL-2
G-CSF
hGH

E. coli
E. coli
E. coli
E. coli
E. coli

FSH
IFN-
EPO
Glucocerebrosidase
Factor VIIa

CHO
CHO
CHO
CHO
BHK

BACTERIAS: Escherichia coli

Ventajas

Desventajas

Facilidad de manipulacin gentica.

Las protenas heterlogas se acumulan


intracelularmente (implicancias en el DSP)

Crecimiento rpido en medios


relativamente simples y de bajo costo.

Incapacidad para realizar modificaciones


post-traduccionales.

Su tecnologa de fermentacin est bien


establecida.

La presencia de lipopolisacrido (LPS) en


su superficie con capacidad inmunognica.

Altos niveles de expresin de la protena


heterologa.

BACTERIAS:
Escherichia
coli
Table 5.4 Proteins of actual or potential therapeutic use that are
glycosylated when produced naturally in the body (or by hydridoma

PROTENAS CON POTENCIAL TERAPUTICO, GLICOSILADAS AL SER


technology in the case
of monoclonal
antibodies). These proteins are
PRODUCIDAS
NATURALEMTE

discussed in detail in various subsequent chapters. See also Table 2.9


Most interleukins (IL-1 being an important exception)
IFN- and - (most IFN-s are unglycosylated)
CSFs
TNFs
Gonadotrophins (FSH, luteinizing hormone and hCG)
Blood factors (e.g. Factor VII, VIII and IX)
EPO
Thrombopoietin
tPA
1-Antitrypsin
Intact monoclonal antibodies

BACTERIAS: Escherichia coli


DESVENTAJA

Cuerpos de
inclusin

Protena heterloga

Parcialmente
plegada.

Agregados
insolubles

DSP

Centrifugacin

Lisis qumica de los


cuerpos de
inclusin

Dilisis

Evitar su
formacin

Disminuir la
temperatura del
crecimiento
bacteriano

Expresin de una
protena de fusin
(protena de inters
+ tioredoxina)

Lisis por osmosis y


adicin de
enteroquinasa a la
protena de fusin

BACTERIAS: Escherichia coli

BACTERIAS:

cido
polihidroxibutrico
(PHB)

Ralstonia eutropha

CLULAS ANIMALES: CHO y BHK

Ventajas

Desventajas

Facilidad de manipulacin gentica.

Crecimiento lento

Altos niveles de expresin de protenas


heterlogas.

Requiere de medios complejos.

Poseen la capacidad de realizar


modificaciones post-traduccionales

Requiere condiciones exigentes de


incubacin.
Mayores costos de produccin.
Susceptibles al dao fsico.

CLULAS ANIMALES:

Factor VIII (Hemofilia),


EPO,TPO.

CHO (Chinese Hamster


Ovary)

SISTEMAS BIOLGICOS: E.coli y


CHO/BHK

Biorreactor de clulas microbianas

Biorreactor de lneas celulares animales

LEVADURAS: Saccharomyces cerevisiae

Ventajas

Desventajas

Facilidad de manipulacin gentica.

Menores niveles de expresin de protenas


heterlogas.

Crecimiento relativamente rpido en medios


sencillos, de bajo costo y resistencia al dao fsico.

En ocasiones los patrones de glicosilacin difieren.

Su tecnologa de fermentacin se encuentra


establecida y definida.
Son organismos GRAS (generally regarded as
safe).
Poseen la capacidad de realizar modificaciones
post-traduccionales.

LEVADURAS: Saccharomyces cerevisiae


PROTENAS RECOMBINANTES PRODUCIDAS EN S. CEREVISIAE
Trade name

Description

Use

Novolog

Engineered short-acting
insulin
Granulocyte
macrophage CSF
(GM-CSF)
All vaccine preparations
containing rHBsAg as
one component

Diabetes mellitus

11

Bone marrow
transplantation

10

Vaccination

13

Hirudin
Urate oxidase
PDGF

Anticoagulant
Hyperuricaemia
Diabetic ulcers

12
12
10

Leukine

Recombivax, Comvax,
Engerix B, TritanrixHB, Infanrmix,
Twinrix, Primavax,
Hexavax
Revasc, Refludan
Fasturtec
Regranex

Chap

LEVADURAS:

Bioetanol

Saccharomyces cerevisiae

HONGOS: Aspergillus sp.

Ventajas

Desventajas

Su tecnologa de fermentacin se
encuentra establecida y definida.

Menores niveles de expresin de


protenas heterlogas.

Genera protenas extracelulares

En ocasiones los patrones de glicosilacin


difieren.

Poseen la capacidad de realizar


modificaciones post-traduccionales

Generacin de proteasas extracelulares.

HONGOS:

Vitamina B2 (Riboflavina)

Ashbya Gossypii

ANIMALES TRANSGNICOS: Cabras

Ventajas

Desventajas

Altos niveles de expresin de protenas


heterlogas.

Resultado negativo de la transgnesis.

La capacidad de produccin es alta.


Suministro continuo.

La variabilidad de los niveles de


expresin

Facilidad de manejo y cra.

En ocasiones los patrones de


glicosilacin difieren.

Facilidad de recoleccin.

El animal transgnico debe alcanzar la


madurez sexual.

Baja inversin de capital.

ANIMALES TRANSGNICOS:

Animales como biorreactores


para la produccin de
protenas teraputicas.

Gene - pharming

El gen que produce la protena


teraputica deseada es
introducido mediante
transgnesis en la clula diana.
Por clonacin se hace crecer la
clula hasta convertirla en un
animal adulto

El animal adulto puede


producir la protena teraputica
o el producto biofarmacutico
en huevos y leche.

ANIMALES TRANSGENICOS:
TECNICAS TRANSGENICAS

Retrovirus
Introduccin de un
transgen (material
gentico transferido) en
el estadio mas
temprano posible del
desarrollo del cigoto.

Microinyeccin
pronuclear

Infeccin de embriones
con vectores virales
(retrovirus como vector
del nuevo DNA) antes
de su implantacin.

Fusin de clulas madre


embrionarias con el
DNA transferido,
reabsorcin,
transformacin e
inyeccin en el husped.
Clulas madre

ANIMALES TRANSGENICOS:

Biosteel

Antitrombina
recombinante

Los mtodos transgnicos son rpidos, de confianza y mas baratos.


Se utiliza principalmente cabras porque se reproducen mas rpidamente y son mas
baratas que el ganado vacuno, adems de ser grandes productoras de leche.
Las aves de corral tienen un sistema de reproduccin muy eficiente, y es fcil generar
cientos de huevos en un tiempo relativamente corto.

ANIMALES TRANSGNICOS:
PROTENAS RECOMBINANTES PRODUCIDAS EN LA LECHE DE
ANIMALES TRANSGENICOS

Protein

Animal species

tPA
IL-2
Factor VIII
Factor IX
1-Antitrypsin
Fibrinogen
EPO
Antithrombin III
Human -lactalbumin
IGF-I
Protein C
GH

Goat
Rabbit
Pig
Sheep
Goat
Sheep
Rabbit
Goat
Cow
Rabbit
Pig
Rabbit

Expression level in milk (mg l 1)


6000
0.5
3
1000
20 000
5000
50
14 000
2500
1000
1000
50

ANIMALES TRANSGNICOS:
RENDIMIENTO DE LECHE Y EL TIEMPO ENTRE GENERACION DE UN
EMBRION TRANSGENICO Y LA OBTENCION DEL PRODUCTO

Species

Annual milk yield (l)

Time to first production batch (months)

Cow
Goat
Sheep
Pig
Rabbit

60009000
700800
400500
250300
45

3336
1820
1820
1617
7

ANIMALES TRANSGNICOS:

tPA (Activador del


plasmingeno tisular)

Cabra transgnica

PLANTAS TRANSGNICAS: Tabaco

Ventajas

Desventajas

Costo bajo del cultivo.

Los niveles de expresin son variables.

Metodologa de cosecha establecida.

En ocasiones los patrones de


glicosilacin difieren.

Facilidad de ampliacin econmicamente


factible.

La presencia de metabolitos secundarios


interferentes.

Protenas expresadas en las semillas son


generalmente estables.

Riesgo de escape accidental al medio


ambiente del material gentico.

Los sistemas basados en plantas son


libres de patgenos humanos.

PLANTAS TRANSGNICAS:

EPO

Tabaco

PLANTAS TRANSGNICAS:
PROTENAS RECOMBINANTES PRODUCIDAS EN PLANTAS
TRANSGNICAS

Protein

Expressed in

Production levels achieved

EPO

Tobacco

0.003% of total soluble plant

HSA
Glucocerebrosidase
IFN-
IFN-
GM-CSF
Hirudin
Hepatitis B surface antigen
Antibodies/antibody fragment

Potato
Tobacco
Rice
Tobacco
Tobacco
Canola
Tobacco
Tobacco

0.02% of soluble leaf protein


0.1% of leaf weight
Not listed
0.000 02% of fresh weight
250 ng ml 1 extract
1.0% of seed weight
0.007% of soluble leaf protein
Various

Referencias Bibliogrficas:

WALSH, G. Pharmaceutical Biotechnology Concepts and


Applications. John Wiley & Sons Ltd. England. 2007.

Referencias Bibliogrficas:

THIEMAN, W. y PALLADINO, M. Introduction to


Biotechnology. Third Edition. Pearson Education. USA. 2013.

Referencias Bibliogrficas:

ARGENBIO.Por qu Biotecnologa. Consejo Argentino


para la formacin y desarrollo de la Biotecnologa. Argentina.
2000.

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