You are on page 1of 101

Universidade Estadual Paulista UNESP

Jlio de Mesquita Filho


Faculdade de Cincias e Tecnologia de Presidente Prudente
Ps-Graduao em Cincia e Tecnologia de Materiais - PosMat

CARACTERIZAO DOS CONSTITUINTES DO


LTEX E DA BORRACHA NATURAL QUE
ESTIMULAM A ANGIOGNESE

Deuber Lincon da Silva Agostini


Orientador: Prof. Dr. Aldo Eloizo Job

Presidente Prudente
2009

Deuber Lincon da Silva Agostini

CARACTERIZAO DOS CONSTITUINTES DO LTEX


E DA BORRACHA NATURAL QUE ESTIMULAM A
ANGIOGNESE

Dissertao apresentada como requisito


obteno do ttulo de Mestre Universidade
Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho
Programa de Ps-Graduao em Cincia e
Tecnologia de Materiais, rea de concentrao de
Materiais Polimricos, Hbridos e NanoEstruturados, sob orientao do Prof. Dr. Aldo
Eloizo Job.

Presidente Prudente
2009

A221c

Agostini, Deuber Lincon da Silva.


Caracterizao dos constituintes do ltex e da borracha natural
que estimulam a angiognese / Deuber Lincon da Silva
Agostini. - Presidente Prudente : [s.n], 2009.
v, 87 f. : il.
Dissertao (mestrado) - Universidade Estadual
Faculdade de Cincias e Tecnologia
Orientador: Aldo Eloizo Job
Banca: Ana Maria Pires, Gabriel Pinto de Souza
Inclui bibliografia

Paulista,

1. Ltex. 2. Borracha natural. 3. Isopreno. 4. Angiognese.


I. Autor. II. Ttulo. III. Presidente Prudente - Faculdade de Cincias e
Tecnologia.
CDD(18.ed.) 620.11
Ficha catalogrfica elaborada pela Seo Tcnica de Aquisio e
Tratamento da Informao Servio Tcnico de Biblioteca e
Documentao
UNESP,
Cmpus
de
Presidente
Prudente.
claudia@fct.unesp.br

gx ut xx x tux tw xv| wx tutA gx vt


tux vxxwx tw xv|A gx { xx| x xwxvx
tw xv| wx t |A gt yt x x t x w||z|t xt |wt
x x wxt t tt x xv|tt tt tA

Dedico este trabalho e toda a minha vida a estas pessoas


especiais que sempre acreditaram que poderamos, atravs de
muito trabalho, dedicao, confiana e respeito mtuo,
melhorar nossas condies de vida.

Dourival Ftima F- Flvia Diego - Clia.

Agradecimentos
a vt|{ x vtt w|tx wx |wxt vA ct|{t vtwt wxvuxt? wxty| x v|tA
W||w| xw? |vxxt x |xzttAAA `t t x|t? yt x txz|tAAA ft xxt
t| txt |{t }twtA T x tw? t |x|x| {t wx xw? t |x w|wt x
w|t wx xx vtt yt t| yx|xA [}x? t t|twx x t t| yx x xutt x t yA
bu|ztw? t|z? t |xxvx |{t yt? t tztwx |{t xv{tM
tuxzt? wxw|vt? xxztA bu|ztw t wvx x ytv|tx txw|tw wt |wtA
Agradeo a minha famlia, Dourival, Ftima F, Flvia e Diego por acreditarem que
seria capaz de chegar a esta etapa, e pelos intensos conflitos que encontrei durante esta
jornada. A Clinha, que j faz parte da famlia a um bom tempo, obrigado por ter me
suportado por todo este tempo.
Ao Prof. Dr. Aldo Eloizo Job pela orientao neste trabalho e grande amizade. Pessoa
que tem o poder de cativar a todos e mudar a vida destas, mostrando um mundo muito
melhor. Dizem que bares no um lugar para quem quer procurar uma vida melhor,
mas se naquele ano de 2001, se no tivesse ido at o bar Marlia em Adamantina-SP
no teria conhecido esta pessoa maravilhosa, que mudou drasticamente a minha vida.
A ngela, esposa do Prof. Aldo, que sempre dava conselhos e motivao para seguir
este caminho. Agradeo tambm aos seus filhos Neto e Pepe.
Ao Prof. Dr. Giacometti pelos conhecimentos, amizade e orientao provisria
enquanto o Prof. Dr. Aldo estava realizando Ps-doutorado em Windsor-Canad.
A banca, Prof. Dr. Ana Maria Pires e Prof. Dr. Grabriel de Souza Pinto, pelo tempo
dedicado a correo de minha dissertao e pela contribuio na melhoria da qualidade
deste trabalho. Toda a minha considerao e amizade.
As secretrias Andressa (PosMat) e Juvanir (DFQB) pela alta eficincia e rapidez
quando precisvamos de algum documento, sempre de ultima hora.
Ao Prof. Dr. Carlos Jos Leopoldo Constantino (Cas) pela amizade, contribuio em
minha formao desde a iniciao cientifica e pelo suporte tcnico nas medidas de
Raman.
A Prof. Dr. Maria de Lourdes Corradi Custodio da Silva e seu aluno Nilson pela
caracterizao de protenas e discusso do resultado do mtodo de Bradford.
Ao Prof. Dr. Eduardo Ribeiro de Azevedo, da USP de So Carlos, pelo auxilio nas
medidas e discusses dos resultados de RMN.
Ao Prof. Dr. Adonilson dos Reis Freitas pelas medidas auxilio nas medidas e
discusses dos resultados de MEV.
Ao Prof. Dr. Pedro Iris pelas medidas de AFM.

Ao Instituto de Fsica de So Carlos (USP) pelas medidas de raios x.


A Prof. Dr. Dbora Terezia Balogh que realizou as medidas de DMA em uma
velocidade relmpago, pois nosso equipamento estava com problemas.
Aos Professores do DFQB: Ana Maria, Carlitos, Eduardo, Francisco, Roberto, Silvio,
Tot, que tornaram o dia-a-dia no departamento muito melhor.
Aos Professores da FAI: Dr. Alexandre Teixeira de Souza, Dr. Fabio Cezar Ferreira,
Dr. Patrcia Alexandra Antunes, pelas caronas, Luclia-Presidente Prudente, e pela
amizade conquistada nestes anos. Toda a minha considerao e amizade.
Aos amigos do DFQB, Aninha, Carol, Clebo, Dalton, Diogo, Efraim, Elton, Felipe,
Flavinho, Lenine, Makoto, Pirap, Priscila, Igor, Zanfa e outros igualmente
importantes, pela amizade e convivncia.
Aos amigos a Balo Mgico, Caito, da Ponta, Diogaum, Julhaum, Luizo, Paulim,
Pedro, pela hospedagem no perodo em que no havia sido contemplado com a bolsa,
pelos churrascos e festas. Sem eles teria terminado esta dissertao a algum tempo.
Agradeo tambm aos amigos de Luclia, onde muitos por l no est mais, Botim,
Dudu, Duzo, Junin, Z Roberto, Boco, Lukinha, Guerinha, Fernando, os Vacari pelos
interminveis churrascos e carnavais e pela grande amizade que mesmo a distncia no
consegue terminar.
Agradeo a FAPESP e ao IMMP/MCT, pelo apoio financeiro, pois sem estas
instituies este trabalho no poderia ser realizado.

SUMRIO
LISTA DE FIGURAS............................................................................................................ I
LISTA DE TABELAS ......................................................................................................... III
RESUMO ..................................................................................................................... IV
ABSTRACT ...................................................................................................................V
INTRODUO ............................................................................................................. 1
OBJETIVOS ................................................................................................................. 6
CAPTULO 1 - REVISO BIBLIOGRFICA ................................................................. 7
1.1 - Polmeros ...................................................................................... 7
1.2 - Ltex e Borracha Natural............................................................... 8
1.2.1 - Composio do ltex...........................................................11
1.2.1.1 - Partculas de borracha ..............................................12
1.2.1.2 - Lutides e complexos de Frey-Wyssling ...................13
1.2.1.3 - Soro e constituintes inorgnicos ...............................14
1.2.2 - Clone RRIM 600..................................................................15
1.2.3 - Preservao do ltex...........................................................15
1.3 - Biomateriais..................................................................................16
CAPTULO 2 - MTODOS EXPERIMENTAIS.............................................................18
2.1 - Materiais.......................................................................................18
2.2 - Coleta do Ltex ............................................................................18
2.3 - Ltex Centrifugado .......................................................................19
2.4 - Preparao das Membranas de Borracha Natural ........................20
2.5 - Liofilizao....................................................................................21
2.6 - Mtodos de Caracterizao ..........................................................22
2.6.1 - Espectroscopia por FT-IR modo ATR..................................23
2.6.2 - Espectroscopia Raman .......................................................24
2.6.3 - Ressonncia Magntica Nuclear (RMN)..............................25
2.6.4 - Difrao de raios X (DRX) ...................................................26
2.6.5 - Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)........................26
2.6.6 - Microscopia de Fora Atmica (AFM) .................................28
2.6.7 - TG acoplado com infravermelho (TG/FT-IR) .......................29
2.6.8 - Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) ........................30
2.6.9 - Anlise Dinmico Mecnico (DMA) .....................................30
2.6.10 - Mtodo de Bradford...........................................................31
CAPTULO 3 - RESULTADOS E DISCUSSO ...........................................................32
3.1 - Espectroscopia no infravermelho (FT-IR) no modo ATR...............32

3.2 - Espectroscopia Raman.................................................................37


3.3 - Ressonncia magntica nuclear (RMN) .......................................38
3.4 - Difrao de raios X (DRX) ............................................................42
3.5 - Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV) .................................43
3.6 - Microscopia de Fora Atmica (AFM)...........................................45
3.7 - Anlise Termogravimtrica (TG)...................................................47
3.8 - TG acoplado com FT-IR ...............................................................52
3.9 - Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC)..................................70
3.10 - Anlise Dinmico Mecnico (DMA) ............................................71
3.11 - Mtodo de Bradford....................................................................73
CAPTULO 4 - CONCLUSO......................................................................................76
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ............................................................................81

i
Lista de Figuras
Figura 1 - Estrutura qumica da parte isoprnica da borracha natural. ............................ 10
Figura 2 Modelo de uma partcula de borracha em ltex envolvida por uma camada de
fosfolipdio e outra mais externa de protenas, proposto por Blackley. Adaptado de [6]... 13
Figura 3 - Coleta do Ltex................................................................................................... 19
Figura 4 Trs fases constituintes do ltex centrifugado. .................................................. 20
Figura 5 Curva de DSC para resfriamento e aquecimento do ltex................................. 22
Figura 6 Analisador Temogravimtrico NETZSCH modelo 209...................................... 29
Figura 7 - Espectros na regio do infravermelho das amostras de ltex, F1, F2, F3, e das
membranas de borracha natural tratadas termicamente a 60, 85 e 120C, liofilizados. .... 33
Figura 8 Ampliao dos espectros na regio do infravermelho das amostras de ltex, F1,
F2, F3, e das membranas de borracha natural tratadas termicamente a 60, 85 e 120C,
liofilizados............................................................................................................................ 35
Figura 9 Espectros Raman das amostras de Ltex, F1, F2, F3 e das membranas tratadas
termicamente a 60, 85 e 120oC, liofilizados......................................................................... 37
Figura 10 Espectro de RMN 13C DP/MAS das amostras F1, F3 e das membranas tratadas
a 60, 85 e 120oC................................................................................................................... 39
Figura 11 - Espectro de RMN 13C CP/MAS das amostras F2, F3 e das membranas tratadas
a 60, 85 e 120oC................................................................................................................... 40
Figura 12 - Espectro de RMN 1H das amostras F1, F3 e das membranas tratadas a 60, 85 e
120oC.................................................................................................................................... 41
Figura 13 Difrao de raios X das fraes F2 e F3, liofilizadas. .................................... 42
Figura 14 Micrografia da membrana de borracha natural tratada a 60C..................... 43
Figura 15 - Micrografia da membrana de borracha natural tratada a 85C. .................... 44
Figura 16 - Micrografia da membrana de borracha natural tratada a 120C ................... 45
Figura 17 Micrografias por AFM das membranas tratadas a 60, 85 e 120oC................. 46
Figura 18 Curvas de TG e DTG do ltex, das fases, F1, F2 e F3, e das membranas
produzidas a 60, 85 e 120C, liofilizados............................................................................. 48
Figura 19 Imagem 3D de TG/FT-IR acoplado do ltex liofilizado. ................................. 53
Figura 20 - Espectros extrados da imagem de 3D do TG/FT-IR do ltex liofilizado......... 54
Figura 21 Imagem 3D de TG/FT-IR da F1 do ltex centrifugado e liofilizado................ 55
Figura 22 - Espectros extrados da imagem de 3D de TG/FT-IR da F1 do ltex
centrifugado. ........................................................................................................................ 56
Figura 23 Imagem 3D de TG/FT-IR da F2 do ltex centrifugado e liofilizado................ 57
Figura 24 - Espectros extrados da imagem de 3D de TG/FT-IR da F2 do ltex
centrifugado e liofilizado. .................................................................................................... 58
Figura 25 Imagem 3D de TG/FT-IR da F3 do ltex centrifugado e liofilizado................ 59
Figura 26 - Espectros extrados da imagem de 3D de TG/FT-IR da F3 do ltex
centrifugado e liofilizado. .................................................................................................... 60
Figura 27 Imagem 3D de TG/FT-IR para a membrana de borracha natural obtida a 60C
liofilizada. ............................................................................................................................ 61
Figura 28 - Espectros extrados da imagem de 3D do TG/FT-IR da membrana de borracha
natural obtida a 60C liofilizada.......................................................................................... 62
Figura 29 - Imagem 3D de TG/FT-IR para a membrana de borracha natural obtida a 85C
liofilizada. ............................................................................................................................ 63
Figura 30 Espectros extrados da imagem de 3D do TG/FT-IR da membrana de borracha
natural obtida a 85C liofilizada.......................................................................................... 64
Figura 31 Imagem 3D de TG/FT-IR para a membrana de borracha natural obtida a
120C liofilizada................................................................................................................... 65
Figura 32 - Espectros extrados da imagem3D de TG/FT-IR para a membrana de borracha
natural obtida a 120C liofilizada........................................................................................ 66
Figura 33 Absorbncia versus Temperatura (oC), em 1643 cm-1 para a amostra F2 e
membranas tratadas a 60 e 120oC. ...................................................................................... 67

ii
Figura 34 - Absorbncia versus Temperatura (oC), em 1588 cm-1 para a amostra F2 e
membranas tratadas a 60 e 120oC. ...................................................................................... 68
Figura 35 - Absorbncia versus Temperatura (oC), em 1544 cm-1 para a amostra F2 e
membranas tratadas a 60 e 120oC. ...................................................................................... 69
Figura 36 - Curva de DSC da amostra de ltex, F1, F2, F3 e das membranas de borracha
natural tratadas termicamente a 60, 85 e 120C, liofilizados.............................................. 70
Figura 37 Curva de DMA das membranas tratada a 60, 85 e 120oC............................... 72
Figura 38 Curva de Calibrao com BSA. ....................................................................... 74

iii
Lista de Tabelas
Tabela 1 - Composio mdia do ltex recm coletado. ..................................................... 12
Tabela 2 - Principais modos vibracionais do cis 1,4-poli-isopreno. ................................... 34
Tabela 3 Atribuies das bandas nos espectros de FT-IR para grupos funcionais
observados nas amostras de ltex, F1, F2, F3, e das membranas de borracha natural
tratadas termicamente a 60, 85 e 120C, liofilizados. ......................................................... 36
Tabela 4 Valores obtidos por meio das curvas termogravimtricas, das fases, F1, F2 e F3
do ltex centrifugado e liofilizado........................................................................................ 51
Tabela 5 - Atribuies das bandas caractersticas nos espectros de FT-IR extrados da
imagem 3D do ltex liofilizado. ........................................................................................... 54
Tabela 6 Massa e volume de BSA para a curva de Calibrao........................................ 73
Tabela 7 Valores da absorbncia para cada diluio do soro......................................... 74

iv
AGOSTINI, Deuber Lincon da Silva. Caracterizao do ltex e da borracha
natural que estimulam a angiognese: 2009. 87 f. Dissertao (Mestre em
Cincias e Tecnologia de Materiais) UNESP, Faculdade de Cincias e
Tecnologia, Presidente Prudente, 2008.

RESUMO
As membranas de borracha natural so usadas freqentemente como material
biolgico na induo de angiognese e neoformao. Neste trabalho foram
realizados estudos com objetivo de identificar os componentes do ltex que so
responsveis pelo processo de angiognese e neoformao. O ltex, as fases
centrifugadas do ltex e as membranas da borracha natural, tratados termicamente
em 60, 85 e 120C, foram liofilizados para a reduo de gua nos mesmos. A
caracterizao de tais materiais foi realizada por espectroscopia infravermelha (FTIR), micro-Raman, ressonncia magntica nuclear (NMR - 1H e

13

C), difrao de

raio x (DRX), microscopia eletrnica de varredura (MEV) e microscopia de fora


atmica (AFM), anlise do termogravimtrica (TG) acoplado com infravermelho
(TG/FT-IR), calorimetria exploratria diferencial (DSC), anlise dinmico mecnica
(DMA) e o mtodo de Bradford. Nos resultados de espectroscopia no
infravermelho, micro de Raman, NMR (1H e

13

C), de raios x e TG/FT-IR; os

componentes qumicos do ltex, das fases centrifugadas do ltex e das membranas


da borracha natural foram identificados. A tcnica de TG foi utilizada para avaliar a
estabilidade trmica e os resultados mostraram que as membranas obtidas a 60oC
possuem maior estabilidade. Nos resultados de DSC notou-se que a transio vtrea
acontece em ~ -68oC, para todos os materiais que contm isopreno e a degradao
estrutural ocorrem em torno de 376oC. As transies de vtreas foram confirmadas
atravs dos resultados de DMA. O ltex centrifugado apresenta trs fases: partculas
de borracha (F1), lutides (F2) e Frey-Wyssling (F3). Nas fraes F2 e F3 o
isopreno ausente, ou apresenta pequena proporo, mas contm diversos
componentes qumicos: protenas, cidos aminados e grupos funcionais que podem
induzir o angiognese e a neoformao em tecidos biolgicos. A membrana de
borracha natural tratada termicamente a 60oC, juntamente com a frao F2, mostrou
as atividades mais elevadas de angiognese e neoformao. Alm disso, as
membranas que contm poros favorecem o processo de cicatrizao e
vascularizao.
Palavras-chave: ltex, borracha natural, isopreno, angiognese.

v
ABSTRACT
Natural latex and natural rubber membranes are frequently used as biomaterial in
the angiogenesis induction and neoformation of biological tissues. Our studies
aimed to study and identify the latex components that are responsible for
angiogenesis and neoformation processes. The natural latex, the centrifuged latex
phases and the natural rubber membranes were thermally treated at 60, 85 and
120C and afterward all samples were lyophilized. The characterization of such
materials were carried out using infrared (FT-IR), micro Raman spectroscopy,
nuclear magnetic resonance (NMR - 1H e
electronic

microscopy

(SEM)

and

13

C), X-ray diffraction, scanning

atomic

force

microscopy

(AFM),

thermogravimetry analysis coupled with infrared (TG/FT-IR), differential scanning


calorimeter (DSC), dynamic mechanical analysis (DMA) and the method of
Bradford. From the results of infrared and micro Raman spectroscopy, NMR (1H e
13

C), X-rays and TG/FT-IR the chemical components present in the latex, in the

centrifuged latex phases and in natural rubber membranes were identified. TG


technique was used to evaluate the thermal stability and results showed that
membranes obtained at 60oC present greater stability, up to 350oC. From DSC
results it was found that the glass transition happens at 68oC, for all materials
containing isoprene, and the structural degradation occurs at 376oC. Glass
transitions were confirmed also by DMA results. Centrifuged latex presents three
phases: rubber particles (F1), lutoids (F2) and Frey-Wyssling (F3). In the fractions
F2 and F3 the isoprene is absent but they contain several chemical components:
proteins, amino acids and functional groups that can induce angiogenesis and
neoformation on biological tissues. The treated membrane 60oC of natural rubber
showed the highest angiogenesis and neoformation activities. Furthermore,
membranes containing pores favor the cicatrization process and the vascularization
processes.
Keywords: latex, natural rubber, isoprene, angiogenesis.

Introduo_______________________________________________________

INTRODUO

As primeiras informaes que se tem sobre a descoberta da


Borracha Natural, data de 1743, quando em sua segunda viagem Amrica do Sul,
Cristvo Colombo viu nativos do Haiti brincando com bolas que eles faziam com
uma seiva de cor branca leitosa extrada de rvores, que os nativos chamavam de
Cau-uchu, que na lngua nativa significa a rvore que chora. Em 1745, Charles de
La Condamine apresentou e publicou os primeiros documentos referentes
borracha natural, depois de fazer muitas observaes nas amostras do material
trazido do Peru em 1736.
A reao de vulcanizao foi descoberta por Charles Goodyear em
1839 que percebeu uma sensvel mudana no estado fsico da borracha natural, de
muito plstica para elstica quando a esta era adicionado enxofre. Aps a descoberta
da vulcanizao, rapidamente a demanda de artigos feitos de borracha cresceu
muito, sendo que basicamente os produtos eram produzidos a partir da borracha
natural vinda da regio Amaznica no Brasil.
Em 1876 Henry Wiekham em sua viagem a Amrica do Sul
coletou aproximadamente 70.000 sementes das rvores produtoras do ltex de
borracha natural, Hevea brasiliensis, levando-as para a Europa e em seguida para a
sia, sendo que dez anos depois j produziam sementes em abundncia e ltex de
tima qualidade [1].
Atualmente, a borracha natural uma importante matria-prima
agrcola renovvel essencial para a manufatura de um amplo espectro de produtos
em todos os ramos da atividade humana. Considerado um produto estratgico, ao

Introduo_______________________________________________________

lado do ao e do petrleo (matrias-primas no renovveis), um dos alicerces que


sustentam o progresso da humanidade [2].
No mbito dos pases produtores, observa-se que o governo da
Malsia investe maciamente em borracha natural e a qualidade da borracha natural
produzida atende aos padres tecnolgicos mais exigentes das indstrias de
pneumticos e de artefatos, conferindo alta qualidade aos artefatos.
J se sabe que o ltex de seringueira apresenta algumas
propriedades nicas, superiores a qualquer outro polmero, mesmo seu anlogo
sinttico. A boa elasticidade, combinada com a baixa histerese mecnica, faz da
borracha natural um material importante na produo de pneus, elementos de
suspenso e pra-choques [3] e produtos leves com alta resistncia como bales,
luvas cirrgicas, preservativos [4] e em inovaes tecnolgicas como o seu uso em
argamassas para construo civil, indstria aeronutica e naval, tubos para usos em
hospitais e centros cirrgicos, compsitos condutores e materiais de alta preciso
como vlvulas e retentores. Existem inmeras patentes registradas a respeito de
artefatos de borracha natural, vrias dessas patentes so de propriedades de
empresas lderes mundiais [5,6].
Em meados da dcada de 90 iniciaram-se estudos para aplicaes
de ltex natural na rea da sade, onde ltex extrado dos clones da seringueira
Hevea brasiliensis se mostrou promissor em vrios tipos de aplicaes biomdicas
[4].
Estudos iniciais, obtidos pelo Laboratrio de Neuroqumica do
Departamento de Bioqumica e Imunologia da Universidade de So Paulo-USP de
Ribeiro Preto atravs da equipe de pesquisadores coordenados pelo Professor Dr.
Joaquim Coutinho Netto, mostraram que as membranas de borracha natural obtidas

Introduo_______________________________________________________

a temperaturas inferiores a 85C contribuem para a formao de angiognese e de


neoformao. Portanto, a temperatura de tratamento do ltex, na obteno das
membranas, o fator mais importante, pois a evaporao a baixa temperatura
preserva a conformao nativa das protenas e uma reorganizao dos constituintes
fosfolipdicos [7].
A atividade angiognica encontrada em alguns trabalhos que
estudaram as membranas de borracha natural de grande importncia, j que nas
ltimas dcadas vrios estudos foram realizados, com diversos materiais [8-17], no
sentido de se identificar substncias capazes de favorecer o processo de reparo, e
tambm a busca de substncias com atividade angiognica, pelo seu grande
potencial de aplicao clnica.
Desde sua descoberta como biomaterial, as membranas de
borracha natural, tem sido objeto de vrios estudos, sendo suas propriedades fsicas,
microarquiteturais e de biocompatibilidade determinadas inicialmente em modelos
animais, encontrando-se atualmente em fase de utilizao em humanos [18]. Este
material demonstrou ser a base de um biomaterial inovador com excelentes
resultados na cicatrizao de lceras crnicas e na reconstituio de esfagos e
tmpanos perfurados, observando a neoformao vascular evidente ao redor das
prteses, mostrando a possibilidade de neoformao tecidual [19,20], sendo que a
biocompatibilidade do ltex natural, em forma de prtese esofgica, foi investigada
e constatada, no demonstrando qualquer indcio de manifestao alrgica [21,18 ].
A biomembrana de ltex natural foi utilizada em 420 pacientes do
Hospital das Clnicas da Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto-USP, portadores
de perfurao de tmpano, com sucesso em 98% versus 70% quando comparado
com a cirurgia convencional (implante da fscia do msculo temporal) [20]. Em

Introduo_______________________________________________________

estudos onde foi implantada a membrana de borracha natural no esfago e na parede


abdominal de ces, sendo removida uma rea de 6 a 10 cm2 de tecido e substitudo
cirurgicamente por esta membrana, foi observado o poder de induo da
angiognese, bem como a promoo da adeso celular e a formao de matriz
extracelular provisional favorecendo o processo de reparao tecidual, no sendo
observado o desenvolvimento de fibrose em qualquer dos casos estudados [22].
O comportamento da membrana de borracha natural tambm foi
estudado como substituto parcial do pericrdio em 16 ces. Os animais foram
observados por 345 dias, e aps este perodo ocorreu a regenerao do pericrdio
nativo, demonstrando que o material mostrou-se adequado para a substituio
parcial do pericrdio [23]. Outro fator interessante que apesar de a sensibilidade
ao ltex ou aos seus aditivos ser um fenmeno freqente [24], os autores no
observaram em nenhum animal qualquer reao adversa.
Prteses de borracha natural foram utilizadas em diferentes
tecidos, apresentando resultados satisfatrios como prtese arterial [25]. Com o
xito das aplicaes da membrana em modelos animais, sua utilizao em humanos
foi iniciada em leses cutneas, onde foram realizados tratamentos de lceras de
perna com a utilizao da membrana de borracha natural [18]. Os pacientes eram
portadores de lceras com mais de 2 meses de instalao e maiores que 1 cm. Os
autores observaram sinais evidentes de estmulo granulao visualizada sob o
aspecto clnico e com confirmao histopatolgica, associada reduo dos
sintomas, especialmente da dor nas lceras crnicas de perna. Foi observado
tambm que a membrana de borracha natural induz a diferenciao do tecido de
cicatrizao, com aumento da deteco de fatores de crescimento como VEGF e

Introduo_______________________________________________________

TGF1, com o aumento da permeabilidade vascular que organiza a angiognese j


na 1 semana de tratamento.
Duas teses de doutorado, desenvolvidas no Departamento de
Cirurgia e Anatomia da FMRP-USP, apontaram, depois de testes feitos em animais,
que possvel a recuperao de artrias cardiovasculares por meio de utilizao de
membranas de borracha natural [26].
Pesquisas recentes descobriram que o ltex de borracha natural
pode ser aplicado como um poderoso gel anti-rugas e possvel aplicao para
estimular a produo de cabelos, resultado de trabalhos desenvolvidos por
universidades e empresas nacionais. Neste tratamento houve uma reduo em cerca
de 80% das rugas na regio da testa e dos olhos, em apenas um ms [27].
Foi observado que membrana de borracha natural favorece a
cicatrizao conjuntival e a angiognese quando submetida a testes in vivo
utilizando a conjuntiva ocular em coelhos, demonstrando que o material
potencialmente um promissor recurso teraputico de reconstruo da conjuntiva
ocular [28].

Objetivos________________________________________________________

OBJETIVOS

Atravs dos estudos realizados, at o momento, sobre as


membranas de borracha natural utilizadas como biomaterial na induo de
angiognese e de neoformao, notrio que este material deve ser amplamente
estudado, tanto em aplicaes clnicas, como os seus componentes indutores.
Portanto neste trabalho, est sendo apresentado estudos de caracterizao do ltex in
natura, das fases do ltex centrifugado e das membranas de borracha natural,
tratadas termicamente a 60, 85 e 120C, liofilizados, utilizando as tcnicas de
espectroscopia no infravermelho (FT-IR), Raman, Ressonncia Magntica Nuclear
(RMN), Difratometria de raios-X, microscopia eletrnica de varredura (MEV) e de
fora atmica (AFM), TG acoplado com FT-IR (TG/FT-IR), calorimetria
exploratria diferencial (DSC), anlise dinmico mecnico (DMA) e o mtodo de
Bradford, com objetivo de conhecer e dominar seus componentes indutores de
angiognese e de neoformao.

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________7

CAPTULO 1 - REVISO BIBLIOGRFICA

1.1 - Polmeros

O termo polmeros deriva do grego, Polys = muitos; Meros =


unidades de repetio, portanto significa muitas unidades de repetio, foi criada
por Berzelius, em 1832, para designar compostos de pesos moleculares mltiplos
[29]. Polmeros so substncias de alto peso molecular proveniente de reaes de
polimerizao. Isto , so provenientes da combinao qumica de um grande
nmero de molculas idnticas ou similares (monmeros) para formar uma
molcula complexa de elevado peso molecular (macromolcula). Podem ser
homopolmeros, polmeros formados por monmeros de um nico tipo de
substncia, ou copolmeros, polmeros formados por duas ou mais substncias [30].
H diversas formas de classificao dos polmeros, que
geralmente so apresentados em trs grandes categorias: termoplsticos, termofixos
e elastmeros. Esses materiais so usados amplamente em todas as reas da
engenharia, devido sua extrema versatilidade. Como exemplo de aplicao de
polmeros, citamos o uso em bases de tintas, adesivos, pneus, pra-choques de
automveis, fibras e recobrimentos de fibras ticas, de fios de alta tenso e esta
multiplicidade de aplicaes derivam essencialmente da sua facilidade de
processamento, aliado ao seu relativo baixo custo [31].
Em termos de materiais para implantes, os polmeros apresentam
uma boa alternativa, visto que, possuem propriedades mecnicas desejveis. Por
exemplo, Fukada et al. trabalhando com teflon implantado no fmur de coelhos,
constataram a formao de calo sseo em apenas duas semanas [32]. No entanto,

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________8
apesar de apresentar qualidades desejveis para agir como um biomaterial, se o
polmero apresentar toxidade, o processo inflamatrio se mostrar muito acentuado
provocando necrose no tecido receptor. Geralmente a toxicidade dos polmeros
considerada maior que a dos metais e das cermicas. A presena de cargas
superficiais no polmero outro fator que influencia a formao do tecido fibroso.
No caso de carga superficial positiva pode atrair eritrcitos, que possuem carga
superficial negativa; e o contato das clulas com o material potencialmente
citotxico pode destru-las [33].

1.2 - Ltex e Borracha Natural

A seringueira uma planta da famlia das Euforbiceas, que


abrange uma gama de espcies com grande interesse comercial como, por exemplo,
a mamona (Ricinus communis L.), o tungue (Aleurites) e a mandioca (Manihot)
[4,34]. Numerosas espcies botnicas espalhadas pelo planeta produzem ltex,
ocorrendo no reino das plantas em mais de 12.000 espcies pertencentes a 900
gneros. Dessas plantas laticferas aproximadamente 1.000 espcies contm
borracha [35]. Entretanto, a nica espcie que gera borracha de alta qualidade e em
condies econmicas a Hevea brasiliensis. Originria da regio setentrional da
Amrica do Sul foi climatizada em 1890 no Sri Lanka (antigo Ceilo) e na Malsia
[36]. Hoje em dia a Hevea brasiliensis cultivada nas regies tropicais da sia
(Malsia, Indonsia, Tailndia e Sri Lanka), onde 90% da produo mundial
extrada [37].
O Brasil j foi o principal produtor e exportador de borracha no
mundo, at os anos cinqenta, hoje produz apenas cerca de 1% da produo
mundial, o que insuficiente para o consumo interno, sendo necessria a

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________9
importao de aproximadamente 60% da borracha consumida no pas [38,39,40,41].
Contudo, o interesse pela produo de borracha natural est sendo recuperado, com
o Estado de So Paulo atuando como o maior produtor do pas [42,43]. O Estado de
So Paulo conta hoje com cerca de 45.000 hectares plantados com seringueira. Duas
regies do Estado so aptas para o cultivo desta planta: a regio do Oeste Paulista e
a regio litornea [38,42].
O ltex um sistema coloidal polifsico, sendo a parte dispersa
constituda de micelas de borracha, protenas, lutides e partculas Frey-Wyssling e
o meio dispersivo constitudo do soro aquoso [44]. As partculas Frey-Wyssling,
que ocorrem em pequena quantidade (cerca de 1%), so constitudas de
carotenides e lipdios conferindo borracha uma colorao amarelada [35,56].
A borracha natural obtida por coagulao do ltex por rvores do
gnero Hevea brasiliensis, com cerca de 10 15 metros de altura, tronco retilneo,
com dimetro aproximado de 30 centmetros. As plantaes de seringueiras
apresentam uma densidade de aproximadamente 450 rvores por hectare e comeam
a produzir aps 7 a 8 anos de plantio. A obteno de espcies de alta produtividade
conseguida atravs de processos de enxertia de borbulhas, de rvores reconhecidas
como de alta produo, em mudas obtidas a partir de sementes; estas mudas, assim
enxertadas, so denominadas clones [45].
Embora a borracha sinttica obtida do petrleo possua quase a
mesma composio qumica da borracha natural, suas propriedades fsicas so
inviveis para alguns manufaturados, como por exemplo: para luvas cirrgicas,
preservativos, pneus de automveis e revestimentos diversos [42], alm de ser uma
fonte no renovvel. A borracha natural tambm matria prima essencial para a

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________10
fabricao de vrios artefatos em transportes, indstrias e materiais blicos
[4,42,46].
O polmero natural sintetizado pela espcie Hevea tem um peso
molecular mdio prximo a um milho. composto de aproximadamente trs
unidades trans isoprnicas, responsvel pela parte cristalina, seguidas de cerca de
10.000 unidades cis isoprnicas, responsvel pela parte amorfa, do tipo cabeacalda [47], combinadas por ligaes 1,4 e um grupo terminal, conforme mostrado
na Figura 1. Esse grupo terminal varia com a origem da borracha [35,48]. Como a
unidade de repetio da parte cis isoprnica existe em uma proporo muito maior
que a parte trans isoprnica a borracha natural se mostra um polmero amorfo.

Figura 1 - Estrutura qumica da parte isoprnica da borracha natural.

Os constituintes no borracha do ltex so protenas, aminocidos,


carboidratos, lipdios, cidos nuclicos e outros constituintes inorgnicos [49]. Os
principais componentes ao redor da membrana do ltex so os lipdios que
apresentam importante papel no tempo de estabilidade mecnica do ltex
estabilizado em amnia [50].

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________11
1.2.1 - Composio do ltex

Este tpico sobre os constituintes do ltex foi retirado da Tese da


Profa. Dra. Marcia Maria Rippel [6], orientada pelo Prof. Dr. Fernando Galembeck,
vencedora do Premio CAPES de Melhor Tese na rea de Qumica, no ano 2005. Os
constituintes do ltex estavam muito bem descritos, por este motivo no foi
modificado ou resumido para no perder a qualidade apresentada e teve grande
contribuio nesta dissertao, pois foi possvel comparar com os resultados
obtidos.
O ltex composto por uma complexa mistura de diferentes
componentes, incluindo macromolculas. Um dos componentes majoritrios do
ltex o cis e/ou trans poli-isopreno. Outros constituintes presentes no ltex e
relatados em estudos fitoqumicos so: polissacardeos, flavanides, lipdeos,
fosfolipdios e protenas, ficou comprovado tambm a existncia de alcanos, cetonas
triterpnicas, triterpenides, acares e cidos graxos [51]. Sabe-se que o
polisopreno um dos componentes de todas as espcies laticferas, porm a
elucidao dos outros constituintes necessita de estudos mais aprofundados [52].
O ltex de Hevea brasiliensis um sistema polidisperso, no qual
partculas negativamente carregadas de vrios tipos esto suspensas em um soro.
Trs tipos de partculas predominam: partculas de borracha que constituem 30 a
45% (em massa) do ltex, os lutides que constituem 10 a 20% e os chamados
complexos de Frey-Wyssling (FW) [apud. 53,6]. O soro no qual as partculas esto
dispersas chamado de soro C.
O ltex recm coletado tem pH na faixa de 6,0 a 7,0 e densidade
de 0,975 e 0,980 g/cm3 e viscosidade varivel, principalmente se o ltex for diludo

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________12
em gua em virtude do intumescimento e ruptura dos lutides [apud. 54,6]. A
composio mdia do ltex natural recm coletado apresentada na Tabela 1.
Tabela 1 - Composio mdia do ltex recm coletado.

Constituinte
Borracha
Protena
Carboidratos
Lipdios neutros
Lipdeos polares
Inorgnicos
Aminocidos, aminas, etc.
gua

% em massa no ltex
25-45
1-1,8
1-2
0,4-1,1
0,5-0,6
0,4-0,6
0,4-0,6
49-71

1.2.1.1 - Partculas de borracha

As partculas de borracha natural contm centenas de molculas


de hidrocarboneto e envolvida por um filme de protenas e fosfolipdios, que lhe
confere carga negativa promovendo estabilidade coloidal das partculas. O dimetro
das partculas de borracha pode variar de 5 nm at 3.000 nm, chegando em alguns
casos at a 5.000 nm ou 6.000 nm [apud. 55,56,57]. Aproximadamente 27% do
contedo total de protenas no ltex recm coletado esto adsorvidos na superfcie
das partculas de borracha e acredita-se que parte das protenas estejam no interior
das partculas [58,6]. Esta camada de protenas adsorvida que conferem
estabilidade as partculas de ltex estabilizado com amnia, devido a sua carga
negativa.
A presena de longas cadeias de hidrocarbonetos nas molculas de
fosfolipdios faz com que tenha forte atividade de superfcie, sendo fortemente
adsorvidos na superfcie das partculas de borracha: as cadeias de hidrocarbonetos
ficam ancoradas na borracha e os grupos de cabea polar na fase aquosa. Assim

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________13
possvel explicar a forte adsoro de protenas na superfcie das partculas
considerando que os fosfolipdios tm carga positiva, enquanto as protenas tm
carga negativa, levando a associao inica entre dois tipos de molculas [6,54].
Assim podemos representar em um modelo proposto por Blackley [54], conforme a
Figura 2.

Figura 2 Modelo de uma partcula de borracha em ltex envolvida por uma camada de
fosfolipdio e outra mais externa de protenas, proposto por Blackley.
Adaptado de [6].

1.2.1.2 - Lutides e complexos de Frey-Wyssling

Os lutides formam o segundo componente principal do ltex de


Hevea brasiliensis. Eles so constitudos de protenas (solveis e insolveis),
fosfolipdios e sais minerais [54, apud. 59], ligados ou circundados por membranas
e so, na mdia, muito maiores em tamanho do que as partculas de borracha. Eles
tm de 2.000 a 5.000 nm de dimetro, ligados por uma membrana de cerca de 8 nm
de espessura tambm com carga negativa.
O contedo dos lutides chamado soro B, contm vrios ctions,
principalmente clcio, magnsio, potssio e cobre [apud. 60] e protenas catinicas

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________14
que tem ao floculante muito rpida sobre partculas de borracha no ltex,
resultando na formao de microflocos.
Os complexos de Frey-Wyssling so constitudos de carotenides
e lipdios conferindo borracha sua colorao, mais ou menos amarela [54,58].
Estes complexos so aproximadamente esfricos, tendo um tamanho que varia de
3.000 a 6.000 nm de dimetro e so ligados por uma dupla membrana. Acredita-se
que estes complexos tenham uma funo vital nas atividades metablicas, sendo
possveis stios da biossntese da borracha.
Os lutides e complexos de Frey-Wyssling dissolvem quando o
ltex recm coletado estabilizado com amnia, de tal forma que temos no ltex
amoniacal um sistema de duas fases, constituindo das partculas de borracha e do
soro [5, apud.55].

1.2.1.3 - Soro e constituintes inorgnicos

O soro do ltex natural tem densidade de 1,020 g/cm3 e contm


diferentes

espcies

qumicas

como

carboidratos,

eletrlitos,

protenas

aminocidos. O principal carboidrato encontrado o quebrachitol (ou 1-metil


inositol) e at o momento no se sabe qual a sua funo biolgica no ltex. A
principal implicao dos carboidratos no ltex que estes so oxidados
microbiologicamente a cidos volteis (frmico, actico e propinico) se o ltex no
adequadamente preservado e uma medida da qualidade do ltex [54].
O soro do ltex contm, alm de protenas, bases nitrogenadas
como colina, alm de aminocidos, nions inorgnicos (fosfatos e carbonatos), sais
minerais encontrados no soro B e mais outros de rubdio, mangans, sdio, potssio,

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________15
cobre, magnsio, ferro e zinco [13,27]. Estes elementos so absorvidos do solo,
transportados na seiva e participam de reaes que envolvem a biossntese do ltex
[5].

1.2.2 - Clone RRIM 600

O ltex usado neste trabalho foi colhido de rvores da seringueira


Hevea brasiliensis, clone RRIM 600, o mais plantado na regio do Planalto do
Estado de So Paulo, por apresentar bom desempenho e vigor na produo. um
clone secundrio desenvolvido pelo Rubber Research Institute of Malaysia RRIM.
Apresenta rvores altas, com caule vertical e de rpido crescimento quando jovem.
A alta produo seu ponto de destaque, sendo um dos que apresenta maior
produtividade de borracha seca [42].
Todas as rvores de um mesmo clone, sob as mesmas condies
ambientais, apresentam baixa variabilidade. Outro ponto importante a considerar no
clone a uniformidade das propriedades do ltex. Para propsitos industriais
especficos, ele mais bem apreciado, considerando essa uniformidade essencial
[42].

1.2.3 - Preservao do ltex

A estabilizao do ltex atravs de aditivos decorre da necessidade


de se evitar o processo de coagulao espontnea, em que se observa a formao de
uma fase superior coagulada e uma fase inferior aquosa e clara. Vrias hipteses
[54] explicam o porqu de este processo ocorrer rapidamente, em questo de horas.
A primeira considera a ao de microorganismos reagindo com compostos no

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________16
borracha, diminuindo seu poder de estabilizao. A segunda hiptese atribui esse
efeito liberao de nions de cidos graxos atravs da hidrlise de vrias
substncias lipdicas presentes no ltex. Estes nions so ento adsorvidos na
superfcie das partculas de borracha, possivelmente removendo parte das protenas
adsorvidas. Estes nions ento interagem com ctions metlicos divalentes como
clcio e magnsio, presentes no ltex ou gradualmente liberados de complexos pela
ao de enzimas.
Dois fatos so considerados com estas teorias: o pH reduzido
durante a coagulao espontnea, de 6 para 5 e este processo pode ser acelerado
pela adio de pequenas quantidades de sabes carboxilados. Como se pode esperar,
grandes quantidades de sabo retardam este efeito de coagulao. Isto justificado
pela dependncia da concentrao de clcio e magnsio presentes no ltex. Alm
disso, o tempo no qual o ltex pode ser mantido sem coagular muito aumentado se
estes ctions so removidos.
O preservativo mais utilizado a amnia, quando se necessita
preservar o ltex a longo prazo, sem a adio de preservativos auxiliares. A amnia
um bactericida muito eficiente em concentraes acima de 0,35% em massa,
enquanto que baixas concentraes, 0,05% em massa, podem acelerar o crescimento
de bactrias, devido ao aumento do pH de 6,5 para 8, pH este ideal para a
multiplicao de muitas formas comuns de bactrias [6].

1.3 - Biomateriais

Um biomaterial definido como uma substncia ou combinao


de duas ou mais substncias, farmacologicamente inertes, de origem sinttica ou
orgnica, capaz de ser utilizado por um perodo de tempo, como parte ou todo de

Reviso Bibliogrfica_______________________________________________17
um sistema, para melhorar, aumentar ou substituir, parcial ou inteiramente tecidos,
rgos ou funes do corpo humano [61,62]. A classificao dos biomateriais
depende da sua natureza qumica, dividindo-se em biomateriais naturais que se
subdividem homlogos (quando originados do prprio indivduo, como o caso das
pontes de safena), autlogos (quando originados de outras pessoas) e heterlogos
(quando originados de animais e aproveitados em implantes ou cirurgias) ou
biomateriais sintticos que incluem implantes cirrgicos, e que se dividem em
metlicos (ferrosos e no ferrosos), cermicos, polmeros e compsitos, e que
venham a substituir parcial ou integralmente a funo original dos materiais
biolgicos [63].
As

principais

caractersticas

dos

biomateriais

so

biocompatibilidade, no ser txico nem carcinognico, apresentar bioestabilidade,


propriedades mecnicas adequadas, peso e densidade adequados, ter custo
relativamente baixo, ser reprodutvel e de fcil fabricao. Com a experincia no
uso destes materiais atravs dos anos, chegou-se a concluso que biomateriais
modernos no devem ter apenas a funo de preenchimento de espao [63]. Devem
estar associados a uma resposta biolgica particular, disparada por sinais originados
em nvel molecular que incluem: correntes eltricas, distribuio eletrnica,
conformao molecular, estado de agregao ou propriedades fsico-qumicas locais
particulares [64], caractersticas estas que podem ser introduzidas por arranjos
especiais de grupos funcionais sobre uma estrutura polimrica, reaes de
reticulao, propriedades particulares de superfcie e arranjos macromoleculares.

Mtodos Experimentais_____________________________________________18

CAPTULO 2 - MTODOS EXPERIMENTAIS

2.1 - Materiais

Toda vidraria foi, primeiro, lavada antes de ser utilizada para cada
experimento, com soluo sulfocrmica, em seguida com gua e detergente neutro e
enxaguada em gua corrente. Por ltimo foi feito um enxge com gua deionizada
e seca em estufa.

2.2 - Coleta do Ltex

O ltex de borracha natural est contido no sistema de vasos


lactferos situados no crtex da rvore, formando um feixo helicoidal ascendente,
que leva o alimento para as partes superiores da rvore. Este sistema encontra-se
logo abaixo da casca da rvore, e os vasos apresentam uma inclinao para o lado
direito, no sentido vertical ascendente [2]. A Figura 3 mostra uma imagem da
sangria em meio espiral para a coleta do ltex.

Mtodos Experimentais_____________________________________________19

Figura 3 - Coleta do Ltex.

O ltex foi extrado de diferentes rvores de seringueira, clone


RRIM 600, na Fazenda Indiana localizada na regio de Presidente Prudente-SP. A
sangria da rvore foi realizada com uma faca em forma de U, com a qual provoca-se
um corte, em dias alternados, com o comprimento igual metade da circunferncia
do tronco, iniciam-se cortes sucessivos a partir de uma altura de 1,20 m do solo, de
maneira a atingir convenientemente os vasos lactferos; o ngulo de 30 para
baixo, em relao a horizontal e, a cada corte remove-se cerca de 1,5 mm de crtex.
O ltex, de aspecto leitoso, foi armazenado em vidros escuros previamente limpos.

2.3 - Ltex Centrifugado

A centrifugao de longe o mtodo mais utilizado para


concentrar ltex natural, chegando a representar 90% de todo o ltex concentrado
utilizado industrialmente, pois um processo contnuo e econmico [65,54].
O ltex foi centrifugado em uma centrfuga da marca Fanem, tipo
Microhemato, modelo 2410. A centrfuga possui 24 tubos de 1,5 mL cada, uma

Mtodos Experimentais_____________________________________________20
inclinao fixa de 45 e rotao mxima de 1400 rpm. A frao menos densa que a
gua contm partculas de borracha, migrando para a superfcie do tubo [66]. A
frao aquosa, logo abaixo da frao superior, um soro que contm ons,
protenas, carboidratos, acares e outras substncias solveis [66,67]. A frao de
fundo contm os lutides, organelas ricas em soro catinico, que promovem a
coagulao do ltex, alm de funes bioqumicas como o controle do pH e de
patgenos [4,68]. Portanto existem trs fases, conforme Figura 4, distintas
resultantes da centrifugao do ltex, estas fases esto representadas, neste trabalho
como:

F1

F2

F3

Figura 4 Trs fases constituintes do ltex centrifugado.

F1 Fase superior, contendo partculas de borracha;


F2 Fase intermediria, sendo o soro do ltex;
F3 Frao de fundo, contendo os lutides.

2.4 - Preparao das Membranas de Borracha Natural

Os filmes de borracha natural foram preparados pelo mtodo de


casting de soluo lquida de ltex estabilizada com hidrxido de amnio

Mtodos Experimentais_____________________________________________21
(NH4OH). Na preparao dos filmes foram utilizadas placas de petri de 9,5 cm de
dimetro interno e de fundo reto, para obter filmes de espessura uniforme e
controlada. Ento a soluo de ltex foi depositada sobre a placa de petri, em
seguida a placa foi colocada em uma estufa, com temperatura mantida em 60, 85 e
120C, em um perodo de 6 horas, com sistema de exausto ligado, para evaporao
mais rpida do soro.

2.5 - Liofilizao

O ltex in natura, as fases do ltex centrifugado e as membranas


de borracha natural foram liofilizados utilizando-se um liofilizador Edwards modelo
E-C modolyo, gentilmente disponibilizado pela Profa. Dra. Maria de Lourdes
Corradi da Silva, do Departamento de Fsica, Qumica e Biologia da FCT - UNESP
de Presidente Prudente. As amostras foram expostas ao ar seco e congeladas pela
exposio a uma corrente de ar frio. A seguir, a gua do material foi removida aps
sofrer sublimao em uma cmara de vcuo, sendo retirada da mesma atravs de
uma bomba. O mtodo consiste no congelamento do produto sob vcuo, quando
ocorre sublimao.
Para confirmao da efetiva liofilizao do ltex foi realizado uma
medida de calorimetria exploratria diferencial (DSC), Figura 5, portanto o
processo de liofilizao foi bem sucedido, pois o resfriamento foi realizado a
temperatura de -35oC. H na literatura a discusses [69,70] sobre a diferena entre o
ponto de fuso e congelamento, onde sais presentes no material alteram estes
pontos, sendo que a concentrao destes sais aumentam a medida que a gua liquida
passa para de gelo, diminuindo o ponto de congelamento. No entanto foi realizada
uma medida de DSC para gua ultra pura e estes valores foram semelhantes aos

Mtodos Experimentais_____________________________________________22
obtidos para o ltex, Figura 5, sendo que a presena de sais no ltex altera o ponto
de fuso e congelamento, mas no significantemente como consta na literatura.
Atravs destas medidas de DSC verifica-se que o ponto de congelamento e de fuso
no corresponde a um nico valor e sim a valores distintos.
8
aquecimento
resfriamento

exo

DSC

2
o

-24,2 C

-9 C

-40

-30

-20

-10

Temperatura ( C)
o

10

Figura 5 Curva de DSC para resfriamento e aquecimento do ltex.

O processo de liofilizao foi utilizado neste trabalho para


remover o excesso de gua presente nas amostras, pois o objetivo deste trabalho
identificar os componentes do ltex e da borracha natural e interfere no processo de
identificao destes constituintes do ltex.

2.6 - Mtodos de Caracterizao

Neste item so apresentados os mtodos utilizados para investigar


as caractersticas do ltex in natura, das fases do ltex centrifugado e das

Mtodos Experimentais_____________________________________________23
membranas de borracha natural, tratadas termicamente a 60, 85 e 120C,
liofilizados.

2.6.1 - Espectroscopia por FT-IR modo ATR

Na Espectroscopia no infravermelho com Transformada de


Fourier a amostra colocada entre a sada do interfermetro e o detector. Como a
amostra absorve certos comprimentos de onda de luz, o interferograma contm o
espectro da fonte menos o espectro da amostra, ou, com menor intensidade nos
comprimentos absorvidos pela amostra [71].
A tcnica conhecida como reflexo total atenuada (ATR) ou
espectroscopia de reflexo interna permite a obteno de espectros qualitativos de
slidos, como no caso na borracha natural. Esta tcnica se baseia no fato que um
feixe de luz refletido internamente pela superfcie de um meio transmissor penetra
uma pequena distncia alm da superfcie refletora e retorna ao meio transmissor
durante o processo de reflexo [72]. O ltex e a borracha natural posto em contato
com a superfcie refletora, a luz atravessa alguns micrmetros, produzindo, assim,
um espectro de absoro.
O ltex e as membranas de borracha natural foram caracterizados
por espectroscopia no infravermelho com transformada de Fourier (FT-IR), marca
Bruker modelo Vector 22, na regio entre 4000-570 cm-1, com resoluo de 2 cm-1 e
32 varreduras.

Mtodos Experimentais_____________________________________________24
2.6.2 - Espectroscopia Raman

O fenmeno de Espalhamento Raman foi previsto teoricamente


por Smekal (1923) e descoberto experimentalmente pelo fsico indiano
Chandrasekhara Venkata Raman, que recebeu o prmio Nobel em 1930, por este
trabalho [73]. O efeito logo despertou o interesse entre os fsicos, que procuravam
explicar o seu mecanismo [74].
Os deslocamentos Raman esto associados a determinados tipos
de ligao da mesma maneira que so as absores no infravermelho. A
espectroscopia Raman mostrou-se particularmente importante no campo das
anlises de hidrocarbonetos [75].
O Efeito Raman um efeito de espalhamento da luz, porm, com
alteraes na freqncia de uma pequena poro da luz espalhada. Esta mudana de
freqncia derivada da combinao entre a radiao incidente e os nveis de
energia vibracional das molculas [76].
A luz, interagindo com uma molcula, pode ser espalhada com
uma freqncia diferente (deslocamento Raman), que corresponde freqncia do
estado vibracional da molcula [73].
O ltex e as membranas de borracha natural foram caracterizados,
no Laboratrio de Filmes Finos e Espectroscopia do Departamento de Fsica,
Qumica e Biologia da FCT UNESP de Presidente Prudente, atravs do
espectrgrafo micro-Raman, marca Renishaw modelo In-Via, sendo o Prof. Dr.
Carlos Jose Leopoldo Constantino responsvel pelo laboratrio.

Mtodos Experimentais_____________________________________________25
2.6.3 - Ressonncia Magntica Nuclear (RMN)

Em

conseqncia

da

complexidade

de

suas

estruturas

moleculares ou por causa da pequena diferena entre unidades isomricas, a


investigao de molculas e macromolculas no estado slido requer boa resoluo
espectral. Os deslocamentos qumicos no espectro de RMN so muito sensveis
estrutura e conformao da molcula, s interaes intermoleculares, troca
qumica, mudanas de conformao e os tempos de relaxao so sensveis
dinmica molecular. Por estes motivos, Ressonncia Magntica Nuclear do estado
slido uma espectroscopia muito til ao estudo de polmeros [77].
Os experimentos de RMN foram realizados em um espectrmetro
VARIAN INOVA de 9.4 T, operando nas freqncias de 100.5 MHz para 13C e 400
MHz para 1H. Em todos os experimentos utilizou-se uma sonda da empresa
equipada com rotao em torno do ngulo mgico de 5 mm modelo Jackobsen. Os
espectros de 1H foram obtidos utilizando excitao por um nico pulso de rdio
freqncia com durao de 4.0 s enquanto que os espectros de 13C foram obtidos
utilizando dois modos de excitao: 1) a tcnica de polarizao cruzada (CPMAS)
com tempo de contato de 1 ms; 2) Excitao por um nico pulso de 3.5 s (ou
polarizao direta DPMAS). O uso destes dois modos de excitao permite separar
as componentes moleculares do sistema baseado em sua mobilidade. Nos espectros
CPMAS o sinal da parte rgida do sistema evidenciado (tipo slido), enquanto que
o sinal de molculas com mobilidade molecular mais alta (tipo lquido) suprimida.
Nos espectros DPMAS e 1H, em princpio, o sinal de todos os segmentos da amostra
deve aparecer. No entanto, como as linhas referentes parte da amostra que se
comporta como lquido (borracha) so muito mais estreitas, elas geralmente se

Mtodos Experimentais_____________________________________________26
sobrepem. Em outras palavras, nos espectros de DPMAS e

H os sinais

correspondentes as partes mveis da amostra so privilegiados. Baseado nestas


caractersticas pode-se dizer que os espectros 1H e DPMAS so predominantemente
da borracha (parte com maior mobilidade molecular), enquanto os espectros
CPMAS os segmentos mais rgidos aparecem. O fato de os sinais no espectro
CPMAS serem tpicos de protenas (aminocidos), mostra que as protenas
presentes na amostra se encontram em regies com menor mobilidade molecular.

2.6.4 - Difrao de raios X (DRX)

A Espectroscopia Atmica de raios X est baseada nas medidas


de emisso, absoro, espalhamento, fluorescncia e difrao da radiao
eletromagntica. O espalhamento dos raios X pelo ambiente ordenado de um cristal
resulta na interferncia entre os raios espalhados (construtiva ou destrutiva) porque
as distncias entre os centros espalhadores so da mesma ordem de grandeza que o
comprimento da onda da radiao.
As medidas de difrao de raios X foram realizadas, no Instituto
de Fsica da USP campus de So Carlos, em um difratmetro da marca RIGAkUROTOFLEX modelo RV-200B com comprimento de onda caracterstico do Cu-k,
igual a 1,54 , e com ngulos de varredura (2) entre 5 e 50o, as amostras foram
acondicionadas em superfcie de vidro.

2.6.5 - Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)

O microscpio eletrnico de varredura geralmente utilizado


para o estudo de estruturas superficiais ou subsuperficiais de amostras com

Mtodos Experimentais_____________________________________________27
dimenses relativamente grandes, possui alta profundidade de foco, podendo obter
diferentes relevos da superfcie da amostra simultaneamente em foco. O MEV
tambm produz imagens de alta resoluo, o que garante obter alta ampliao de
detalhes sem perder a nitidez [72].
O princpio de funcionamento do MEV so eltrons gerados por
um dispositivo chamado canho de eltrons, neste canho os eltrons so gerados
pelo aquecimento resistivo de um filamento de tungstnio em forma de V utilizando
uma fonte de alta tenso. A tenso de operao pode variar de 1 kV at 40 kV e,
quanto maior a tenso de acelerao, mais fino se torna o feixe de eltrons, o que
resulta em uma maior resoluo [78], porm nem todo tipo de material resiste a
tenses elevadas.
A preparao da amostra feita sobre suportes metlicos,
utilizando adesivos condutivos, como fitas de carbono ou suspenses coloidais de
prata ou carbono. O revestimento da amostra por um filme condutor tem como
objetivo evitar o acmulo de carga negativa, no caso da mesma ser formada por um
filme no condutor, como no caso de polmeros. A camada de metal deve ser
contnua e fina (menor que 20 nm) para no mascarar a topografia. Geralmente
utiliza-se a tcnica de sputtering para a evaporao do metal, sendo o ouro, liga
ouro-paldio, platina, alumnio e carbono os materiais mais utilizados.
Apesar da relativa facilidade de preparao da amostra, a
investigao de polmeros por MEV requer que sejam considerados problemas
como a sensibilidade irradiao de eltrons e ao baixo contraste da estrutura, uma
vez que estes materiais so constitudos por elementos leves (C, H e O) [72].
Neste trabalho foi utilizado um microscpio eletrnico de
varredura (MEV) marca Shimadzu, modelo SSX-550 pertencente ao Laboratrio de

Mtodos Experimentais_____________________________________________28
Microscopia da Central Analtica da Universidade Estadual de Maring UEM. As
amostras foram colocadas em suporte de alumnio e fixadas atravs de uma fita de
carbono condutora. Sobre estes filmes foi pulverizada uma fina camada de ouro por
sputtering em um aparelho da marca Shimadzu, modelo IC-50.

2.6.6 - Microscopia de Fora Atmica (AFM)

A microscopia de forca atmica (AFM) uma tcnica que mede


as interaes entre uma ponta de contato e a superfcie a ser analisada. Tais
interaes se do a partir de forcas de Van der Waals, forcas eletrostticas,
magnticas e de atrito, dependendo do tipo de material e da distncia entre a ponta e
a amostra. Na escala de fraes de angstrons prevalecem as forcas eletrostticas
(coulombianas) de repulso, enquanto que em nvel de angstrons as forcas de
atrao de Van der Waals passam a predominar. J na escala de 10 a 200 nm
destacam-se as forcas atrativas da tenso de superfcie do fluido, entre 0,1 e 1,0 m
voltam a prevalecer as forcas eletrostticas, podendo ser de atrao ou repulso
nestes casos e, finalmente, para distncias da ordem de 10 m h um amortecimento
pelo filme fluido [79].
A tcnica de AFM fornece, entre outras informaes, a
topografia da superfcie do filme com seus defeitos e ordenamentos moleculares,
possibilitando a medida direta de suas alturas e profundidades, bem como a
rugosidade do filme. As medidas de AFM so feitas localmente, varrendo reas de
centenas de angstrons quadrados e no requer que a superfcie estudada seja
condutora eletricamente, ampliando ainda mais suas possveis aplicaes. As
imagens de AFM foram obtidas no modo tapping, utilizando um equipamento da

Mtodos Experimentais_____________________________________________29
Digital Instrument modelo Nanoscope IV com ponta de nitrato de silicio e uma
constante de mola de 0,12 N/m.

2.6.7 - TG acoplado com infravermelho (TG/FT-IR)

Esta uma tcnica dinmica na qual a perda de massa de uma


amostra medida continuamente, enquanto a temperatura aumentada a uma taxa
constante. Nestas anlises utilizou-se o equipamento da marca NETZSCH modelo
209, apresentado na Figura 6, na faixa de temperatura ambiente (~25C) at 800C,
utilizando uma massa de aproximadamente 12 mg para o ltex, para suas fases e
para as membranas de borracha natural, com uma razo de aquecimento de
10C/minuto, em um cadinho de alumina em atmosfera inerte de nitrognio, com
fluxo de 25 mL/min. Os gases evaporados nos estudos termogravimtricos so
canalizados, por diferena de temperatura, para uma cmara que faz as medidas no
infravermelho simultaneamente.

Figura 6 Analisador Temogravimtrico NETZSCH modelo 209.

Mtodos Experimentais_____________________________________________30
2.6.8 - Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC)

Calorimetria exploratria diferencial (DSC) uma tcnica de


anlise trmica usada para detectar mudanas fsicas ou qumicas que so
acompanhadas de ganho ou perda de calor. Quando as substncias so aquecidas,
vrias transformaes fsicas ou qumicas envolvendo absoro (processo
endotrmico) ou evoluo de calor (processo exotrmico) podem ocorrer. A tcnica
de DSC pode ser usada para investigar propriedades trmicas de uma variedade de
materiais, sendo empregada para caracterizar materiais orgnicos, inorgnicos,
biolgicos e polimricos. Dentre as aplicaes pode-se citar: determinao
qualitativa e quantitativa de transies de fase, tais como transio vtrea, fuso,
cristalizao, estudo da cintica de polimerizao, de decomposio e de cura.
O ltex e as membranas de borracha natural foram caracterizados
por calorimetria exploratria diferencial (DSC), marca Netzsch, modelo DSC 204
Phoenix. Para realizao das medidas foi utilizado cadinho de alumnio com tampa
furada no centro, razo de aquecimento de 10C/min num intervalo de temperatura
de 140C a 500C em atmosfera inerte de N2 com fluxo de 25 mL/mim. Para as
medidas de DSC foi utilizada uma massa de aproximadamente 8 mg, tanto para o
ltex como para as membranas de borracha natural.

2.6.9 - Anlise Dinmico Mecnico (DMA)

A anlise dinmico mecnica tem sido amplamente usada como


uma tcnica de caracterizao de polmeros atravs de deteco dos processos de
relaxao, tanto microscpico quanto molecular. Essa tcnica fornece informaes a
respeito do mdulo elstico (E), do mdulo de dissipao viscosa (E) e do

Mtodos Experimentais_____________________________________________31
amortecimento mecnico (tan = E/E) de um material, quando sujeito a uma
solicitao dinmica. Uma das utilizaes mais comuns da tcnica de DMA a
determinao da temperatura de transio vtrea (Tg) que apresenta a grande
vantagem de ser um mtodo direto de medio.
Neste trabalho foi utilizado um DMA marca Netzsch, modelo 204,
no modo tenso, utilizando ar como atmosfera, freqncia de 10 Hz, razo de
aquecimento de 5C/min num intervalo de temperatura de 100 a 180C.

2.6.10 - Mtodo de Bradford

Para a realizao do mtodo de Bradford utilizou-se 40 mg de BG250 que foi dissolvido em 20 mL de etanol absoluto. Em seguida adicionou-se 40
mL de acido fosfrico 85% agitando com basto de vidro. Finalizando, adicionou-se
gua deionizada para completar 100 mL de soluo em balo volumtrico. Esta
soluo foi deixada em repouso e sob abrigo da luz por 24 h, sendo aps este tempo
filtrada utilizando papel de filtro. No momento da realizao das medidas foi feita
uma diluio (1:4, v/v) da soluo em gua. Uma curva padro para protenas foi
realizada utilizando-se uma soluo diluda de protenas de Albumina de soro
bovino (BSA) na concentrao de 1 mg/mL. Foi dissolvido 0,25 g de BSA para 50
mL da seguinte soluo: 0,5 mL de soluo tampo de fosfato de sdio 0,1 M e 49,5
mL de gua deionizada. Cada 1 mL desta soluo contm 5 mg de protenas. Esta
soluo espuma muito, por este motivo no deve ser agitada fortemente.

Resultados e Discusso_____________________________________________32

CAPTULO 3 - RESULTADOS E DISCUSSO


Neste item sero apresentados os resultados de caracterizao do
ltex in natura, das fases do ltex centrifugado e das membranas de borracha natural
tratadas termicamente a 60, 85 e 120C liofilizadas, utilizando as tcnicas de FT-IR
modo ATR, TG acoplado ao FT-IR, DSC e o mtodo de Bradford para quantificar
as protenas presentes na fase intermediaria, resultado da centrifugao do ltex.

3.1 - Espectroscopia no infravermelho (FT-IR) no modo ATR

A Figura 7 apresenta os espectros de FT-IR obtidos das amostras


de Ltex, F1, F2, F3 e das membranas tratadas termicamente a 60, 85 e 120oC,
liofilizados, na regio de 4000 a 600 cm-1. Nota-se duas regies distintas contendo
vrios picos, a primeira entre 4000 e 2700 cm-1 e a segunda regio entre 1800 e 600
cm-1, para todas as amostras.

Absorbncia

837

1738

Ltex

1643
1588
1544
1450
1371
1305
1240
1128
1070

2855

2911

2724

2960
3036

3285

Resultados e Discusso_____________________________________________33

F1

F2

F3
o

BN 60 C
o

BN 85 C
o

BN 120 C

4000

3500

3000

2500

2000

1500

-1

1000

Nmero de Onda (cm )


Figura 7 - Espectros na regio do infravermelho das amostras de ltex, F1, F2, F3, e das
membranas de borracha natural tratadas termicamente a 60, 85 e 120C,
liofilizados.

As bandas de absoro relativas aos principais modos vibracionais


do cis-1,4-poli-isopreno esto na Tabela 2. Nota-se na F2 a ausncia de vrios picos
referentes ao isopreno, pois no processo de centrifugao as partculas de borracha
migram para o topo, deixando a frao do soro (F2) extremamente lmpida contendo
diferentes

espcies

qumicas

como

carboidratos,

eletrlitos,

protenas

aminocidos. Todas as amostras apresentaram o pico em 3285 cm-1 referente ao


estiramento simtrico de ligaes N-H formando ligao de hidrognio em
protenas, sendo que na F2 este pico possui maior absorbncia em relao aos picos
em 3036, 2960 e 2911 cm-1, pois no soro a quantidade de partculas de borracha
muito reduzida.

Resultados e Discusso_____________________________________________34
Tabela 2 - Principais modos vibracionais do cis 1,4-poli-isopreno.

Experimental

Literatura [80]

Atribuio [81, 82]

3036
2960
2911
2855
2724
1450
1371
1305
1240

3036
2962

s (=CH)
s C-H no CH3 [83]
s CH no CH3
s C-H no CH2 [84]
CH2C=(CH3) [85]
CH2
s CH3
CH2 twist
CH2 twist

2912
2854
2726
1450
1375
1309
1244
1125 ou 1128

1128

[146,158]

837

837

CH bending no plano ou (CC) cis ou CH2


wag
C = C H [86]

A segunda regio do espectro, de 1800 a 600 cm-1, de maior


interesse, pois contm picos caractersticos que permitem avaliar a presena de
grupos funcionais devido a grupos carbonlicos como steres, aldedos, cetonas,
cidos carboxlicos e amidas. A Figura 8 apresenta uma ampliao desta regio
espectral, para melhor visualizao e comparao dos picos.

837

1070

1128

1305

1240

1371

1450

1588
1544

1738

Absorbncia

1643

Resultados e Discusso_____________________________________________35

Ltex
F1

F2

F3
o

BN 60 C
o

BN 85 C
o

BN 120 C

1800

1600

1400

1200

1000

-1

800

600

Nmero de Onda (cm )


Figura 8 Ampliao dos espectros na regio do infravermelho das amostras de ltex, F1,
F2, F3, e das membranas de borracha natural tratadas termicamente a 60, 85
e 120C, liofilizados.

Na regio de 1800-1500 cm-1, os espectros apresentam picos de


absoro em 1738 cm-1, de baixa absorbncia, relativo ao estiramento simtrico de
C=O em ster. A absoro em 1643 cm-1 sendo um ombro para as amostras de ltex,
F2 e BN 85oC e um pico para F1, F3, BN 60oC e BN 120oC caracterstica, de
amida primria, em estiramento de C=O em ligao de hidrognio com gua. Em
1588 cm-1 h um pico caracterstico de estiramento assimtrico de C=O de COOem protenas na F2, sendo um ombro para as amostras de BN 60oC e BN 85oC,
estando ausente nas F1, F3 e na BN 120oC. O pico em 1544 cm-1, caracterstico de
amida secundria, apresentou-se nas amostras de F3 e BN 120oC, apresentando para

Resultados e Discusso_____________________________________________36
as outras amostras como apenas um ombro. Esta regio entre 1800-1500 cm-1
apresentou-se muito semelhante entre F3 e BN 120oC.
A Tabela 3 mostra um grupo de freqncias referentes aos grupos
funcionais presentes na borracha que no so atribudos ao cis 1,4-poli-isopreno [6].
Tabela 3 Atribuies das bandas nos espectros de FT-IR para grupos funcionais
observados nas amostras de ltex, F1, F2, F3, e das membranas de borracha
natural tratadas termicamente a 60, 85 e 120C, liofilizados.

Freqncia
Experimental

Literatura
[87]

Atribuio
[88, 89,90]

3400
3200-3400

s NH livre
s OH (ligao de hidrognio)

3285

3280-3300

s NH formando ligao de hidrognio

1643

1640

Amida primaria C=O em ligao H com


gua

1630

NH ligado a C=O em ligao H

1588

1565-1585

ass C=O de COO- de protenas

1544

1530-1560

Amida secundria (CN)+ (NH)

1259

ass P=O em (PO2-) de fosfolipdio [91]

1176-1080

CO de ter aliftico
CO de ter

3500-3200

1070

1080-1040

A regio entre 1700 e 1000 cm-1 apresenta as maiores diferenas


entre as amostras, portanto esta regio ser de grande interesse para nosso estudo. A
amostra F2 foi que apresentou as maiores discrepncias com a amostra BN 120oC, o
que evidencia que a parte protica que est agindo como indutor de angiognese.

Resultados e Discusso_____________________________________________37
3.2 - Espectroscopia Raman

A Figura 9 apresenta os espectros Raman obtidos das amostras de


Ltex, F1, F2, F3 e das membranas tratadas termicamente a 60, 85 e 120oC,
liofilizadas, na regio de 4000 a 400 cm-1. As amostras de F1, F3, BN 85oC e BN
120oC apresentaram o fenmeno de fluorescncia, encobrindo assim o sinal dos

3030

2913

1668

2715

1440

1371

998

picos.

Intensidade

Ltex
F1

F2
F3
o

BN 60 C

BN 85 C
o

BN 120 C

500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000


-1

Nmero de Onda (cm )


Figura 9 Espectros Raman das amostras de Ltex, F1, F2, F3 e das membranas tratadas
termicamente a 60, 85 e 120oC, liofilizados.

As amostras de ltex, F1, BN 60oC apresentam alguns picos


caractersticos ao isopreno, apesar de tambm apresentar o fenmeno de
fluorescncia.

Resultados e Discusso_____________________________________________38
Em 998 cm-1 observa-se um pico caracterstico de ligaes =C-H,
j em 1371 cm-1, tem-se a deformao de grupos CH3 e em 1440 cm-1 nota-se um
pico referente a ligaes do tipo H-C=O. A vibrao do C=C est particularmente
desobstruda e sensvel a seu ambiente em uma maneira similar vibrao do
C=O no infravermelho. As vibraes da cadeia tipo cis, do C=C, podem ser vistas
em 1668 cm-1. As vibraes entre 2715 e 3030 cm-1 corresponde ao estiramento CH,
sendo pertencente ao grupo CH2 e CH3 [92].

3.3 - Ressonncia magntica nuclear (RMN)

A Figura 10 apresenta os espectros de RMN de 13C DP/MAS das


amostras F1, F3 e das membranas de borracha natural tratadas termicamente a 60,
85 e 120oC. Esses espectros so tpicos da estrutura do isopreno em estado slido,
com duas regies distintas, sendo uma entre 140 e 120 ppm e outra entre 35 e 20
ppm.

Resultados e Discusso_____________________________________________39

c d
ae b
F1

F3

B N 60 0 C

B N 85 0 C

B N 120 0 C
140

120

100

80

ppm

60

40

20

Figura 10 Espectro de RMN 13C DP/MAS das amostras F1, F3 e das membranas
tratadas a 60, 85 e 120oC.

Os espectros obtidos, em todas as amostras, mostraram cinco


sinais caractersticos dos dois carbonos etilnicos, dos dois grupos metilnicos e do
grupo metil da estrutura cis-1,4-poli-isopreno, cuja estrutura qumica est
representada na Figura 10. Os sinais em 133,5 e 124,1 ppm so atribudos aos
carbonos (c) e (d) da dupla ligao, respectivamente. O sinal em 31,3 ppm
atribudo ao carbono metilnico (a), o sinal em 25,3 ppm atribudo ao carbono (e)
e o sinal em 21,20 ppm ao carbono (b) do grupo metil [93,94,95,96].

Resultados e Discusso_____________________________________________40
Pela anlise de RMN de

13

C CP/MAS, Figura 11, foi detectado

um sinal na regio de 172 ppm, certamente das carboxilas da cadeia lateral, sinais
relacionados a grupos C=C em 134,05 e 123,7 ppm dos carbonos (c) e (d),
respectivamente.

F2

F3
B N 60 0 C
B N 8 5 0C

B N 12 0 0 C
240 210 180 150 120
ppm

90

60

30

Figura 11 - Espectro de RMN 13C CP/MAS das amostras F2, F3 e das membranas tratadas
a 60, 85 e 120oC.

Foram detectados sinais, com maior relevncia nas amostras F2 e


F3, referentes a grupos C-O em 83,7 ppm; CH-O em 79,7 ppm, na faixa de 7570
ppm relacionados a grupos CH-O, na faixa de 6755 ppm a grupos CH2-, sinais
estes derivados de grupos tipos acares como, monossacardeos, dissacardeos e
polissacardeos.

Ainda foram detectados sinais na faixa de 35-12 ppm,

Resultados e Discusso_____________________________________________41
correspondentes a regio de CH2, CH, CH3 de cadeias alifticas dos carbonos
(a),(e),(b), que podem ser constituintes tanto de ramificaes quanto da cadeia.
Os espectros de RMN 1H, Figura 12, tambm apresentaram duas
regies bem distintas, sendo uma de 4-6 ppm e outra de 0,5-2 ppm.

ae b
c d
F1

F3

B N 6 0 0C

B N 8 5 0C

B N 1 2 0 0C
6

ppm

Figura 12 - Espectro de RMN 1H das amostras F1, F3 e das membranas tratadas a 60, 85
e 120oC.

O deslocamento qumico de 4-6 ppm est associado a prtons de


C=C, j a segunda regio de deslocamento entre 0,5-2 ppm est associada a prtons

Resultados e Discusso_____________________________________________42
do grupo metlico (-CH3) [95]. Os sinais de prton metlico (-CH3) do 1,4- cisisopreno foram observados em 1,75 e 1,61 ppm, nas membranas tratadas a 60 e
120oC e em 1,55 ppm nas amostras F1, F3 e na membrana tratada a 85oC.
O espectro da membrana tratada termicamente a 85oC
apresentou-se muito diferente das outras membranas, tal fato pode estar associado
as condies experimentais no qual foi realizada a coleta dos dados, onde pode ser
detectado somente a parte isoprnica que compe a membrana.

3.4 - Difrao de raios X (DRX)

A tcnica de difrao de raios X foi utilizada nas fraes F2 e de


Fundo, conforme a Figura 13 com o intuito de verificar a presena de compostos

Intensidade (u.a.)

cristalinos, como a presena de metais ou estruturas com certa organizao.

F3

F2

10

20

30

2 (graus)

40

50

Figura 13 Difrao de raios X das fraes F2 e F3, liofilizadas.

No difratograma da amostra F2 temos a ausncia de picos


difratados que caracterizariam uma fase cristalina, observou-se apenas um largo

Resultados e Discusso_____________________________________________43
pico de espalhamento centrado em 2=19o atribudo a difrao de raios x nas
regies amorfas das amostras, portanto a frao F2 no apresenta estrutura cristalina
bem definida. J na frao F3 o difratograma apresenta alguns picos de difrao
caractersticos de material com certa estrutura cristalina, tais picos podem estar
associados a ctions metlicos que compe esta fase, pois Ca, Zn e Rb formam o
segundo grupo mais abundante de elementos, enquanto que as concentraes de
Mn, Fe, Ni, Cu e Br so muito baixas [6].

3.5 - Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV)

A Figura 14 apresenta a micrografia com ampliao de 8000


vezes da membrana de borracha natural tratada termicamente a 60C.

Figura 14 Micrografia da membrana de borracha natural tratada a 60C.

Nota-se nesta micrografia a presena partculas de borracha, que


coagularam mais rapidamente, durante a evaporao de subprodutos do ltex,
permitindo assim maior presena de fosfolipdios e protenas no ligados por
partculas de borracha.

Resultados e Discusso_____________________________________________44
Na Figura 15 tem-se a micrografia da membrana de borracha
natural tratada termicamente a 85C. Nota-se maior homogeneidade nesta
membrana, no apresentando grandes partculas de borracha natural, como no caso
da membrana tratada a 60C. Vale destacar que membranas tratadas a temperatura
de 85 C esto no limiar para agir como indutores de angiognese, onde
possivelmente as partculas de borracha podem ligar-se com um maior nmero de
fosfolipdios e protenas no permitindo que estes grupos atuem na angiognese.

Figura 15 - Micrografia da membrana de borracha natural tratada a 85C.

Na Figura 16 tem-se a micrografia da membrana de borracha


natural tratada termicamente a 120C.

Resultados e Discusso_____________________________________________45

Figura 16 - Micrografia da membrana de borracha natural tratada a 120C

Nesta micrografia possvel notar que houve um processo de


evaporao muito rpido de gua, mas levando juntamente subprodutos do ltex,
formando regies bem caractersticas. A evaporao destes subprodutos pode
diminuir a concentrao de substncias de grande importncia no processo de
induo de angiognese, impossibilitando o uso desta membrana como biomaterial
[97].

3.6 - Microscopia de Fora Atmica (AFM)

A morfologia das membranas, tratadas termicamente a 60, 85 e


120oC, foram estudadas por microscopia de fora atmica (AFM), como mostra a
Figura 17. As amostras dos filmes micrografados tem dimenses de 2,5 m x 2,5
m. Nota-se grande diferena entre a morfologia das membranas, onde a membrana
tratada a 60oC apresentou maior quantidade poros, tal fato pode estar associado a
evaporao lenta dos componentes no borracha. Estudos realizados na USP de
Ribeiro Preto mostram que a quantidade de poros ou a induo de poros melhora a

Resultados e Discusso_____________________________________________46
vascularizao, melhorando assim o processo de induo da angiognese, por este
motivo a membrana tratada a 60oC tem maior poder nesta induo, alm de ter
maior concentrao de subprodutos do ltex que tambm colaboram para esta
induo.

Figura 17 Micrografias por AFM das membranas tratadas a 60, 85 e 120oC.

A membrana, tratada a 85oC, apresentou maior uniformidade


assim como analisado na microscopia eletrnica de varredura (MEV). J a
membrana, tratada a 120oC, possui uma superfcie irregular com algumas regies
mais claras e outras um pouco mais escuras, sendo este fato associado a evaporao
mais rpida dos subprodutos do ltex e a diminuio da concentrao de compostos
no borracha, presentes nesta amostra. H muitos dados a serem explorados com a
tcnica de AFM, mas as medidas foram salvas em formato JPEG o que impossibilita
a coleta de alguns dados, como, tamanho e profundidade dos poros.

Resultados e Discusso_____________________________________________47
3.7 - Anlise Termogravimtrica (TG)

429C

40

-2

97%

-4

Ltex
100

14%

380C

200

300

400

-8

500

Temperatura (C)

428C

40

-2

99%

-4
-6

20

-8

F1

-10

378C

100

200

300

400

Temperatura (C)

500

100

200

300

400

500

600

7%
0

272C

445C

-4

60

77% 98% -8

40

-12

20
0

14%
393C
400
500

BN 60C
100

200

300

Temperatura (C)

-16

600

100

20%

-8

Temperatura (C)

80

600

100

-4

391C

Massa (%)

60

7%

430C

60
209C

74%

38%

-1

40

F2

100

200

300

400

500

Temperatura (C)

426C

60

98%
76%

40

-2

600

-4

-8
o

-2

-6

20

8%

250C
128C
281C 308C

247C

80

Massa (%)

Massa (%)

8%

DTG (%/min)

DTG (%/min)

80

20

F3

100

DTG (%/min)

Massa (%)

-2

-6

80

74%

58%

20

600

100

261C

40

-6

20

136C

60

DTG (%/min)

450C

265C

Massa (%)

60 68C

80

DTG (%/min)

Massa (%)

71%

8%
10%

80

100

9%

DTG (%/min)

3%

100

BN 85 C
100

369C

200

300

15%

400 o 500

Temperatura ( C)

-10

600

Resultados e Discusso_____________________________________________48
100

7%

80

Massa (%)

60

434C

40

77%

-2

99%

-4
-6

20
0

DTG (%/min)

254C

BN120C
100

200

300

15%
378C
400 500

Temperatura (C)

-8

600

Figura 18 Curvas de TG e DTG do ltex, das fases, F1, F2 e F3, e das membranas
produzidas a 60, 85 e 120C, liofilizados.

A Figura 18 apresenta as curvas de TG e DTG do ltex, das fases,


F1, F2 e F3, e das membranas produzidas a 60, 85 e 120C, liofilizados. Nota-se
uma perda de 3% em massa no intervalo de temperatura de 30-180C, formando
dois pequenos vales em 68 e 147C na curva de DTG. Estas perdas esto associadas
liberao de subprodutos de baixa estabilidade trmica dos componentes no
borracha presentes no ltex (protenas, aminocidos, carboidratos, lipdios, cidos
nuclicos). A perda de massa, em 265C, de 9% pode estar associada
simultaneamente a reticulao e ciso de cadeias. No caso da reticulao ocorre
uma perda muito pequena, sendo a perda mais acentuada associada formao de
aldedos, cetonas e cidos carboxlicos [6,98]. Em 380C ocorre a maior perda de
massa, 71%, em que ocorre a degradao das cadeias polimricas do isopreno,
principal constituinte do ltex, juntamente com outros compostos ligados. Notam-se
tambm perdas de 14% em massa nas temperaturas de 429 e 450C, associadas
degradao de cadeias polimricas termicamente mais estveis, talvez produtos de
reticulao ou ciclizao. O resduo final aps a completa degradao do polmero

Resultados e Discusso_____________________________________________49
de 3%, podendo ser xidos, carbonatos, fosfatos e silicatos metlicos presentes no
ltex.
Na F1, frao superior resultado do processo de centrifugao,
uma nica perda de massa observada na curva de TG, de 99%, correspondendo na
curva de DTG a um pico em 378C e um ombro em 428C referente a degradao
de cadeias polimricas e tambm destas cadeias polimricas termicamente mais
estveis [99].Esta parte superior apresenta as mesmas propriedades trmicas do
isopreno, portanto foi denominada de frao borracha. J na frao F2, que uma
frao intermediria entre a borracha (F1) e a frao de fundo. Nota-se uma perda
de massa de 20% no intervalo de temperatura de 30-180C, formando um vale em
128C na curva de DTG e tambm outra perda, em 209C, de 8% em massa, em que
ambos podem estar associados parte protica (fosfolpidica) que possuem carga
negativa promovendo a estabilidade das partculas de borracha presentes no ltex.
Como no processo de centrifugao estes constituintes so separados das partculas
de borracha, a frao superior que foi denominada borracha se coagula tornando-se
um slido borrachoso. A F2 apresenta outra perda significativa de 38% em massa
no intervalo de 220-400C, a qual pode estar associada a triglicerdeos, esteris,
steres de esteris e outros lipdeos. Estes constituintes ocorrem predominantemente
dentro das partculas de borracha, portanto pode haver partculas de borracha
tambm neste soro. Devido densidade dos constituintes, estas partculas no
coagulam, no ficando na parte superior. A amostra F2 apresentou uma massa
residual de 26% podendo estar associada a nions inorgnicos (fosfatos e
carbonatos), sais minerais e outros de rubdio, mangans, sdio, potssio, cobre,
magnsio, ferro e zinco, pois estes produtos so constituintes do soro.

Resultados e Discusso_____________________________________________50
A amostra F3, frao de fundo, apresenta 3 perdas de massa
significativas. A primeira de 8% entre 30-180C corresponde aos constituintes no
borracha mencionados para a mesma regio soro (F2). As outras 2 perdas coincidem
com a degradao trmica da borracha. As partculas de borracha podem estar
fortemente ligadas com elementos de alta densidade, mencionados na regio de 220400C, e resduos do soro, fazendo com que as partculas de borracha fiquem no
fundo do tubo de centrifugao. A frao de fundo apresentou uma massa residual
de 26%, valor que coincide com o do soro, portanto associado aos mesmos
elementos.
Nota-se uma perda muito pequena de massa entre 30-120C, nas
membranas de borracha natural tratadas termicamente a 60 e 85C, que somada a
perda em 272C de 7%. Este valor inferior a quantidade de massa degradada no
ltex, de 12%, o que pode estar relacionado a menor quantidade de compostos no
borracha na membrana, os quais podem ter sido evaporados ou, ao contrrio, terem
se ligado mais fortemente s partculas de borracha durante o tratamento trmico em
estufa. A perda de massa em 393C, de 77%, evidencia que no tratamento trmico
em estufa os componentes no borracha se ligam s partculas de borracha,
degradando somente quando ocorre a degradao das cadeias polimricas [98]. A
degradao de cadeias polimricas termicamente mais estveis ocorre em 445C
apresentando a mesma porcentagem para o ltex, 14%. O resduo final aps a
completa degradao do polmero de 2%.

As perdas de massa para as membranas obtidas a 60, 85 e 120C


so semelhantes. J a estabilidade trmica da membrana a 120C apresentou-se
semelhante a do ltex, porm um pouco inferior a aquela observada para a
membrana produzida a 60C. Tal fato, provavelmente, pode ser associado prpria

Resultados e Discusso_____________________________________________51
histria trmica da membrana produzida a 120oC. A degradao de cadeias
polimricas termicamente mais estveis, de 15%, ocorre em 434C e o resduo final
aps a completa degradao do polmero de 1%. Esta diminuio gradual dos
resduos pode estar associada a ligaes que podem ocorrer no tratamento trmico
em estufa, visto que o tratamento em estufa um processo isotrmico e nas medidas
de TG o processo dinmico.
A Tabela 4 apresenta os valores obtidos nas medidas de TG do
ltex, das fases, F1, F2 e F3, e das membranas produzidas a 60, 85 e 120C,
liofilizados.
Tabela 4 Valores obtidos por meio das curvas termogravimtricas, das fases, F1, F2 e
F3 do ltex centrifugado e liofilizado.
Amostra
Ltex
F1
F2

F3

BN 60C

BN 85C

BN 120C

T (C)
30-200
220-300
300-420
420-500
300-500
30-170
170-230
230-400
400-600
30-200
200-300
300-550
30-300
300-430
430-500
30-290
280-430
410-490
30-280
290-410
410-480

m (%)
3
9
71
14
99
20
8
38
8
8
10
58
7
77
14
7
76
15
7
77
15

dm (C)
68 e 147
265
380
429 e 450
428
128
209
250, 281 e 308
430
136
261
391
272
393
445
247
369
426
254
378
434

Resduo
3%
1%
26%

26%

2%

2%

1%

Resultados e Discusso_____________________________________________52
3.8 - TG acoplado com FT-IR

Medidas de FT-IR foram realizadas simultaneamente com a


anlise de TG. Todo gs emitido pela amostra com o aumento da temperatura no
TG canalizado para uma cmara que coleta espectros de FT-IR a cada segundo e
os resultados so agrupados formando uma imagem em 3D com os eixos das
ordenadas compostos por nmero de onda, temperatura e absorbncia.
A Figura 19 apresenta a medida de TG/FT-IR acoplado da
amostra do ltex liofilizado. Observa-se que os picos de absoro ocorrem
predominantemente em 2 faixas distintas de temperatura. A primeira regio est
associada aos componentes no borracha como visto nas curvas de TG. A partir de
250C tem-se a degradao da borracha natural e de compostos fortemente ligados
borracha presente no ltex. Nota-se que prximo a 3000 cm-1 e entre 1000-2000 cm1

ocorrem dois picos para esta mesma freqncia caracterstica, tal fato ocorre pela

degradao das cadeias polimricas do isopreno e pelos mesmos altamente


reticulados, respectivamente.

Resultados e Discusso_____________________________________________53

Figura 19 Imagem 3D de TG/FT-IR acoplado do ltex liofilizado.

A Figura 20 apresenta os espectros extrados da imagem 3D do


ltex liofilizado da Figura 19. Nos espectros extrados do ltex liofilizado referentes
s temperaturas de 68C e 265C notam-se duas regies de destaque uma em 39003100 cm-1 e outra de 1800-1300 cm-1 referentes, predominantemente, frao no
borracha que compe o ltex. Vale destacar os picos em 1730 cm-1 caracterstico de
ligaes C=O em aldedos e em 1680 cm-1 atribudo ao estiramento C=O em amida
primria. Em 1648 cm-1 nota-se absores de estiramento simtrico de nion
carboxilato e em 1565 cm-1 ligaes C=O de COO de protenas, sendo em 1527
cm-1 de amidas secundrias [100]. Estes picos apresentam diminuio da
intensidade relativa conforme ocorre o aumento de temperatura e so responsveis
pela parte protica que constitui o ltex. Nos espectros referentes s temperaturas de
380 e 429C nota-se que os picos so caractersticos da cadeia do isopreno.

380 C

892

1680
1730
1648
1565 1527
1452
1375

3275

429 C
3043

3740

Absorbncia

Ltex

2860

2928

Resultados e Discusso_____________________________________________54

265 C

68 C

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000


-1

Nmero de Onda (cm )


Figura 20 - Espectros extrados da imagem de 3D do TG/FT-IR do ltex liofilizado.
Tabela 5 - Atribuies das bandas caractersticas nos espectros de FT-IR extrados da
imagem 3D do ltex liofilizado.
68C

265C

380C

429C

Regio

Atribuio

3740

3740

3740

3740

3900-3500

O-H de vapor de gua


Estiramento simtrico NH formando
ligao hidrognio
Estiramento simtrico (=CH)

3275

3280-3300
3043
2928

2928

Estiramento antissimtrico CH no CH2

2860

2860

Estiramento simtrico C-H no CH2


Estiramento simtrico C=O de aldedos e
cetonas
Amida primria C=O livre, em
ambiente hidrofbico

1730

1730

1725-1730

1680

1680

1680

1648

1648

1545-1650

Estiramento simtrico C=O de nion


carboxilato, COO- de cido graxo

1648

1648

1565

1565

1527

1527

1527

1527

1530-1560

1452

1452

1452

1452

1450

Amida secundria
Estiramento (CN)+ deformao (NH)
Deformao CH2

1375

1375

1375

1375

1375

Deformao CH3

890

CH3 wagging

1565-1585

892

ou tambm Amida primaria C=O em


ligao H
Estiramento antissimtrico C=O de
COO- de protenas

Resultados e Discusso_____________________________________________55
A Figura 21 apresenta a imagem 3D de TG/FT-IR da F1, resultado
da centrifugao do ltex. Esta frao formada por particulas de borracha, porm,
notam-se tambm picos de absoro caractersticos dos componentes no borracha,
como vapor de gua, componentes proticos do ltex e grupos funcionais.

Figura 21 Imagem 3D de TG/FT-IR da F1 do ltex centrifugado e liofilizado.

Nota-se que a degradao desta frao ocorre somente a partir de


300C. Com exceo das absores que ocorrem abaixo de 100C, a imagem 3D
desta borracha se assemelha com a membrana produzida a 120C, ou seja, somente
picos caractersticos do isopreno e de alguns grupos funcionais (1682 e 1570 cm-1)
fortemente ligados s partculas de borracha, como mostra a Figura 22 dos espectros
extrados da imagem 3D desta frao nas temperaturas de 378 e 428C.

Resultados e Discusso_____________________________________________56

891
795

428 C

1682
1570

3047

Absorbncia

2860

F1

378 C

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

-1

Nmero de Onda (cm )


Figura 22 - Espectros extrados da imagem de 3D de TG/FT-IR da F1 do ltex
centrifugado.

A Figura 23 apresenta a imagem 3D da F2, frao intermediria


do processo de centrifugao. Esta frao apresentou resultados interessantes sobre
os grupos funcionais constituintes do ltex que no pertencem ao isopreno. Nota-se
que no h picos significativos a temperaturas superiores a 300C.

Resultados e Discusso_____________________________________________57

Figura 23 Imagem 3D de TG/FT-IR da F2 do ltex centrifugado e liofilizado.

Na Figura 24 tm-se os espectros extrados nas temperaturas de


128, 209, 250, 280, 308 e 430C. O espectro em 430C o nico que apresenta
picos com absoro significativa referentes ao isopreno (2927 cm-1) e grupos
funcionais. Tal fato refora a possibilidade desses grupos aumentarem a estabilidade
trmica da borracha natural, explicando o fato de ocorrer degradao de uma parte
da borracha em temperaturas superiores a 400C. A regio de 3900-3500 cm-1
caractersticos de vapor de gua mostra-se presente em todos os espectros. A regio
de 1400-1800 cm-1 apresenta vrios picos referentes aos grupos funcionais
constituintes da parte protica que compe o ltex. Em 1732 cm-1 tem-se o
estiramento simtrico de C=O de aldedos e cetonas apresentando menor
absorbncia no espectro em 430C. O pico em 1680 cm-1 caracterstico de amidas
primrias teve maior absorbncia no espectro em 128C, j em 1645 cm-1 houve um
aumento na intensidade relativa do pico conforme o aumento da temperatura. Os

Resultados e Discusso_____________________________________________58
picos em 1568 e 1530 cm-1, caractersticos do estiramento assimtrico C=O de
COO- de protenas e amidas secundrias, respectivamente, no apresentou variao
na intensidade relativa nos espectros conforme o aumento da temperatura. Em 1455
cm-1 tem-se um pico, com maior absoro no espectro em 430C, caracterstico de
deformao angular de CH2. O pico em 1060 cm-1 de estiramento C-O de ter

430 C

1060

1732
1680
1645
1568
1530
1455

2927

3272

F2

3740

mostrou-se evidente em 209, 250, 430C e com maior absorbncia em 280 e 308C.

Absorbncia

308 C
o

280 C
o

250 C
o

209 C
o

128 C

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000


-1

Nmero de Onda (cm )


Figura 24 - Espectros extrados da imagem de 3D de TG/FT-IR da F2 do ltex
centrifugado e liofilizado.

A Figura 25 apresenta a imagem 3D da F3 (frao de fundo).


Nesta frao h presena tanto de grupos funcionais como de partculas de borracha,
estando esta borracha fortemente ligada a esses grupos e a metais, o que faz com
que haja precipitao destas partculas.

Resultados e Discusso_____________________________________________59

Figura 25 Imagem 3D de TG/FT-IR da F3 do ltex centrifugado e liofilizado.

A Figura 26 apresenta os espectros extrados da imagem 3D da


frao de fundo nas temperaturas de 136 e 391C. O espectro na temperatura de
136C apresenta vrios picos de grupos funcionais podendo estar ligados s
partculas de borracha ou a metais presentes no ltex. O pico em 985 cm-1
caracterstico do estiramento de CCH3. Na temperatura de 391C ocorre a
degradao das partculas de borracha juntamente com os grupos funcionais ligados
a estas partculas, pois os picos de maior absoro so do isopreno, que compe a
borracha natural.

985

890

1525
1457
1375

1682
1644
1730

136 C

3047

391 C

3273

Absorbncia

2969

F3

2855

2928

Resultados e Discusso_____________________________________________60

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000


-1

Nmero de Onda (cm )


Figura 26 - Espectros extrados da imagem de 3D de TG/FT-IR da F3 do ltex
centrifugado e liofilizado.

Em todas as amostras h presena de grupos funcionais


responsveis pela parte protica do ltex, ou seja, partes destes grupos ligam-se s
partculas de borracha. Porm, a frao mais rica em protenas est no soro. Este
soro garante a estabilidade do ltex de borracha natural, pois no processo de
centrifugao a frao superior (borracha) e a frao de fundo so slidas, resultado
da coagulao do ltex.
A Figura 27 apresenta a imagem 3D da membrana de borracha
natural liofilizada obtida a 60C. Esta amostra tambm apresenta uma regio de
degradao relacionada aos componentes no borracha, conforme j discutido para
o ltex liofilizado. Na regio prxima a 3000 cm-1 para temperatura superior a
350C notam-se no dois picos como no ltex, mas um ombro referente a
degradao mais lenta das cadeias polimricas do isopreno. Tal fato pode estar
ocorrendo pelo tratamento trmico em estufa, aumentando a reticulao das cadeias.

Resultados e Discusso_____________________________________________61

Figura 27 Imagem 3D de TG/FT-IR para a membrana de borracha natural obtida a 60C


liofilizada.

Na Figura 28 tm-se os espectros extrados da imagem 3D da


membrana de borracha natural produzida a 60C liofilizada, na temperatura de
272C nota-se picos caractersticos de constituintes no borracha como amidas
primrias, secundrias e vapor de gua. O pico em 3279 cm-1 de estiramento NH
formando ligao hidrognio, apresenta uma pequena diferena entre o ltex e a
membrana de borracha natural produzida a 60C, pois no ltex ele evidente
somente na temperatura de 265C, sendo na membrana de borracha natural
produzida a 60C evidente tanto em 272C como em 455C. As regies onde foram
extrados os espectros mostram-se bastante semelhantes tanto para o ltex como
para a membrana de borracha natural produzida a 60C, tanto pela degradao das
cadeias do isopreno como para os grupos funcionais que compe o ltex de
borracha natural.

893

1456
1375

1527

1562

393 C
o

1680

3279

455 C
3045

3742

Absorbncia

BN 60C

1643

2930

Resultados e Discusso_____________________________________________62

272 C

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000


-1

Nmero de Onda (cm )


Figura 28 - Espectros extrados da imagem de 3D do TG/FT-IR da membrana de borracha
natural obtida a 60C liofilizada.

A Figura 29 apresenta a imagem 3D da membrana de borracha


natural liofilizada obtida a 85C. Esta amostra apresentou um comportamento muito
semelhante membrana tratada a 60C, onde apresenta uma regio de degradao
relacionada aos componentes no borracha, conforme j discutido anteriormente.
Na regio prxima a 3000 cm-1 para temperatura superior a 350C notam-se no
dois picos referente a degradao mais lenta das cadeias polimricas do isopreno.
Tal fato pode estar ocorrendo pelo tratamento trmico em estufa, aumentando a
reticulao das cadeias.

Resultados e Discusso_____________________________________________63

Figura 29 - Imagem 3D de TG/FT-IR para a membrana de borracha natural obtida a 85C


liofilizada.

Na Figura 30 tm-se os espectros extrados da imagem 3D da


membrana de borracha natural produzida a 85C liofilizada, na temperatura de 247 e
426C nota-se picos caractersticos de constituintes no borracha como amidas
primrias, secundrias e vapor de gua. Em 369 C tem a degradao de
praticamente toda a parte isoprnica da amostra. Compostos no borracha ser
encontrados a temperatura de 247 e 426C deve-se ao fato de que no primeiro caso
estes compostos esto em uma forma mais livre, apenas envolvendo as partculas de
borracha e no segundo caso podem estar encapsulados juntamente com as partculas
de borracha degradando somente a altas temperaturas. Todos os picos
caractersticos j foram apresentados para as amostras de ltex e para a membrana
tratada termicamente a 60 C.

BN 85C
892

1740
1642
1549
1457
1373

2855

2927

Absorbncia

3280

2962

Resultados e Discusso_____________________________________________64

426C
369C

247C

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

-1

Nmero de Onda (cm )


Figura 30 Espectros extrados da imagem de 3D do TG/FT-IR da membrana de borracha
natural obtida a 85C liofilizada.

Na Figura 31 apresenta-se a medida de TG/FT-IR da membrana


de borracha natural produzida a 120C liofilizada. Observa-se na imagem 3D que os
picos de absoro ocorrem em uma faixa superior a 350C, os quais so
caractersticos do isopreno.

Resultados e Discusso_____________________________________________65

Figura 31 Imagem 3D de TG/FT-IR para a membrana de borracha natural obtida a


120C liofilizada.

A Figura 32 apresenta os espectros extrados da imagem 3D da


membrana de borracha natural obtida a 120C. Com exceo dos picos em 3660,
3260 e 1643 cm-1 caractersticos de vapor de gua, amidas secundrias e primrias,
respectivamente, todos os outros picos so caractersticos do isopreno, principal
constituinte do ltex.

2935

Resultados e Discusso_____________________________________________66

892

1456
1376

1643

3260

434 C

3085

3660

Absorbncia

2857

BN 120C

378 C

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000


-1

Nmero de Onda (cm )

Figura 32 - Espectros extrados da imagem3D de TG/FT-IR para a membrana de borracha


natural obtida a 120C liofilizada.

Atravs das imagens 3D e dos espectros extrados das amostras foi


possvel notar diferenas significativas entre as amostras de ltex e membranas de
borracha natural obtidas a 60 e 120C, sendo a presena de grupos funcionais os
fatores que diferem da membrana produzida a 120C para as demais amostras.
Apesar de amidas primrias e secundrias terem sido notadas na membrana
produzida a 120C, sendo tal fato associado a forte ligao entre as partculas de
borracha a estes grupos funcionais, no foram notados a presena dos mesmos em
regies de baixa temperatura na membrana de borracha natural produzida a 120C, o
que refora a idia de que podem estar estes grupos associados aos fatores que
induzem a angiognese. Para uma anlise mais aprofundada desta regio do
espectro, de 1700-1500 cm-1, foi utilizado um recurso do software que produz a
imagem 3D resultado do acoplamento TG/FTIR, onde possvel plotar a uma curva
de Absorbncia versus Temperatura (oC), que para este trabalho de fundamental

Resultados e Discusso_____________________________________________67
relevncia pois permite monitorar determinado grupo funcional em relao a
temperatura.
A Figura 33 apresenta as curvas em relao ao pico em 1643 cm-1,
referente a amida primaria, deformao C=O em ligao de hidrognio com gua,
para a amostra F2 e as membranas tratadas a 60 e 120oC.

Figura 33 Absorbncia versus Temperatura (oC), em 1643 cm-1 para a amostra F2 e


membranas tratadas a 60 e 120oC.

Nota-se que na frao F2 foi detectado este tipo de ligao at a


temperatura de ~150oC, o que tambm foi notado a temperatura abaixo de 100oC
para a membrana tratada a 60oC, e posteriormente na faixa de 200 a 400oC para a
amostra F2 e com maior estabilidade trmica, acima de 300oC, nas membranas
tratadas a 60 e 120oC.

Resultados e Discusso_____________________________________________68
Na Figura 34 tem-se as curvas em relao ao pico em 1588 cm-1
da Absorbncia versus a Temperatura (oC), tambm para a amostra F2 e membranas
tratadas a 60 e 120oC.

Figura 34 - Absorbncia versus Temperatura (oC), em 1588 cm-1 para a amostra F2 e


membranas tratadas a 60 e 120oC.

Nota-se que em 1588 cm-1, referente a estiramento assimtrico


C=O de COO- em protenas, um comportamento muito semelhante com o
ocorrido em 1643 cm-1 em relao a todas as amostras, por este motivo vale a
mesma justificativa ocorrida para este nmero de onda especifico.
Na Figura 35 tem-se a curva para o nmero de onda em 1544 cm1

, referente a amida secundria, para a amostra F2 e as membranas tratadas a 60 e

120oC; foram utilizadas somente estas amostras, para este tipo de anlise, pois so

Resultados e Discusso_____________________________________________69
as que apresentaram maiores discrepncias nas outras tcnicas de caracterizao e
acreditamos que estas amostras contm o grupo funcional indutor de angiognese.

Figura 35 - Absorbncia versus Temperatura (oC), em 1544 cm-1 para a amostra F2 e


membranas tratadas a 60 e 120oC.

Em 1544 cm-1 a amostra F2 apresenta o mesmo comportamento


quando comparado a 1643 e 1588 cm-1, pois nesta fase do ltex centrifugado h
praticamente todos os compostos no borracha, como protenas, aminocidos,
carboidratos e acares. A membrana tratada a 60oC apresentou a degradao deste
composto em vrios intervalos de temperatura, sendo que a principal regio est
abaixo de 150oC, o que pode reforar a hiptese de serem compostos com esta

Resultados e Discusso_____________________________________________70
caractersticas os indutores de angiognese. J na amostra a 120oC no notou-se
picos onde possa ser identificado a regio de degradao deste composto.

3.9 - Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC)

A Figura 36 apresenta a medida de DSC do ltex in natura, das


fases do ltex centrifugado (F1, F2 e F3) e das membranas de borracha natural
tratadas termicamente a 60, 85 e 120C, liofilizados.

376
-65

Ltex

315

exo

F1
336

DSC

F2
-68

-68

F3

213

BN 60 C

120

BN 85 C

302

BN 120 C
97

-100

100

200

300
o

Temperatura ( C)

400

500

Figura 36 - Curva de DSC da amostra de ltex, F1, F2, F3 e das membranas de borracha
natural tratadas termicamente a 60, 85 e 120C, liofilizados.

A transio vtrea (Tg), propriedade do material onde podemos


obter a temperatura da passagem do estado vtreo para um estado malevel, sem
ocorrncia de uma mudana estrutural, do ltex e da F1 de -65C e para as

Resultados e Discusso_____________________________________________71
amostras F3, BN 60oC, BN 85oC e BN 120oC sendo de -68oC. Os valores da Tg
observados esto dentro da faixa de valores encontrados na literatura
[101,102,103,104,105]. A amostra F2 no apresentou valor de Tg, fato que
comprova a pequena quantidade de partculas de borracha presente nesta fase.
A amostra BN 60oC e BN 120oC apresentam um pico largo,
endotrmico, em torno de 97oC, sendo que este pico se estende para temperaturas
mais altas na amostra de BN 60oC. Este pico pode estar relacionado a evaporao de
gua em ambas as amostras e tambm de subprodutos presentes no ltex.
Nas amostras F2 e F3, nota-se um pico endotrmico em torno de
120oC, responsvel pela degradao dos constituintes no isopreno, como,
protenas, aminocidos e nions inorgnicos (fosfatos e carbonatos), fato observado
nas medidas de TG acoplado ao FT-IR, em torno de 128oC. Na F2 nota-se tambm
um outro pico endotrmico em 213oC talvez pela degradao de constituintes
inorgnicos presentes nesta fase intermediria.
Nas amostras de BN 60oC, BN 85oC e BN 120oC h um pico
exotrmico em 302oC e na amostra de ltex e na F3 em torno de 315oC, responsvel
por estgios iniciais de degradao, podendo ser reaes de oxidao, reticulao e
ciso de cadeias.
Em 376oC nota-se um pico exotrmico para as amostras de ltex,
F1, F3, BN 60oC, BN 85oC e BN 120oC, responsvel pela degradao das cadeias
polimricas do isopreno.

3.10 - Anlise Dinmico Mecnico (DMA)

A Figura 37 apresentra as curvas de DMA para as membranas


tratadas termicamente a 60, 85 e 120oC. Nota-se que a membrana tratada a 85oC

Resultados e Discusso_____________________________________________72
possui o maior valor do mdulo de armazenamento (E), acima de 2,5 GPa, tal fato
pode estar associado a maior homogeneidade da membrana, conforme visto nas
micrografias (MEV).

1,2

BN 85 C

2,5

1,0
0,8

tan

2,0

E' (GPa)

-62oC

1,5 BN 60 C

-70oC

0,6
0,4
0,2

1,0

0,0

-100

-80

-60

-40

-20

0,5
o

BN 120 C
0,0

-100

-80

-60

-40

-20

Temperatura (oC)
Figura 37 Curva de DMA das membranas tratada a 60, 85 e 120oC.

A membrana tratada a 120oC possui o menor valor para o mdulo


de armazenamento, onde a diminuio da concentrao de compostos no borracha
pode estar colaborando para a reduo no valor do E. A membrana tratada a 60oC
ficou em um valor intermedirio entre as outras membranas, onde no h uma
grande diminuio na concentrao dos compostos no borracha, mas h a formao
de partculas de borracha, conforme visto na microscopia eletrnica de varredura
(MEV).

Resultados e Discusso_____________________________________________73
Os picos apresentados na curva de tan esto associados a
transio vtrea (Tg) em -62oC para as membranas tratadas a 85 e 120 oC, sendo de 70oC para a membrana tratada a 60oC.
O estudo de anlise dinmico mecnico poder servir para
trabalhos futuros, onde ser possvel comparar o comportamento mecnico destas
membranas com tecidos ou parte de rgos para ser utilizado como implante deste
material.

3.11 - Mtodo de Bradford

O mtodo de Bradford foi utilizado para quantificar as protenas


totais presentes no soro. A Albumina de Soro Bovino (BSA) foi diluda nas
concentraes apresentada na Tabela 6.
Tabela 6 Massa e volume de BSA para a curva de Calibrao.

Tubo
1
2
3
4
5

Massa BSA
(g)
5
10
20
40
50

Volume de gua
(L)
95
90
80
60
50

Volume BSA
(L)
5
10
20
40
50

As diluies foram feitas sempre em triplicata para verificar-se a


reprodutibilidade dos resultados. O soro do ltex tambm foi diludo nas
concentraes (soro:gua) de 1:10, 1:50 e 1:100 (v:v). As diluies da BSA foram
analisadas em um espectrofotmetro a 595 nm para fazer-se uma curva de
calibrao. No momento da anlise no espectrofotmetro foi adicionado o
Coomassie brilliant blue (BG-250) na proporo de 1:4 (v:v) de BSA:BG-250 e
soro:BG-250. A Figura 38 apresenta a curva de calibrao.

Resultados e Discusso_____________________________________________74

1,0 Curva de Calibrao com BSA

Abs. (595 nm)

0,8
0,6
0,4
0,2

soro
0,0

10

20

30

40

50

Massa (g)
Figura 38 Curva de Calibrao com BSA.

Foi traada uma reta entre os valores encontrados para a BSA em


que a inclinao serve como parmetro para o clculo de protenas totais presentes
no ltex. O valor encontrado para a inclinao da reta foi de 0,02; sendo a equao
da reta dada por y = Bx, em que y o valor encontrado para a absoro do soro no
espectrofotmetro, B o valor da inclinao da reta e x a quantidade em massa de
protenas totais presentes no soro. A Tabela 7 apresenta os valores da absorbncia
para cada diluio do soro.
Tabela 7 Valores da absorbncia para cada diluio do soro.

Tubo
1
2
3
4
5

Massa
Soro (g)
5
10
20
40
50

Volume de gua
Abs. (595 nm)
(L)
95
0,11
90
0,25
80
0,49
60
0,80
50
0,95

Resultados e Discusso_____________________________________________75
A proporo soro:gua de 1:50 foi o que mais se aproximou dos
valores de absoro da BSA, sendo de 0,80 a 595 nm. Substituindo este valor na
equao foi encontrado o valor de 40 g que, multiplicado por 50 (proporo de
gua no soro), resulta em 2000 g para cada 0,1 mL de soro. Simplificando os
valores tem-se que a quantidade de protenas totais de 20 mg/mL, o que
corresponde a 0,2% do volume total do soro.

Concluso________________________________________________________76

CAPTULO 4 - CONCLUSO

Neste trabalho apresentou-se um estudo bibliogrfico relacionado


com conceitos que englobam o tema do projeto, tais como: biomateriais,
angiognese, composio do ltex, polmeros e borracha natural. O enfoque
principal deste estudo foi caracterizao do ltex para uso em cirurgias. Os
resultados apresentam fortes indcios de que a parte protica indutora de
angiognese.
Nas medidas de FT-IR no modo ATR foi possvel identificar os
componentes presentes no ltex, nas fases do ltex centrifugado e nas amostras de
borracha natural, tanto pertencentes ao isopreno, principal constituinte do ltex,
como para os grupos funcionais. Notou-se que na regio entre 1700 e 1000 cm-1
apresentou as maiores diferenas entre as amostras, portanto esta regio ser de
grande interesse para nosso estudo. A amostra F2 foi que apresentou as maiores
discrepncias com a amostra BN 120oC, o que evidencia que a parte protica e que
est agindo como indutor de angiognese.
Os espectros de RMN de 13C DP/MAS das amostras F1, F3 e das
membranas de borracha natural tratadas termicamente a 60, 85 e120oC. Os
resultados mostraram a estrutura do isopreno em estado slido, com duas regies
distintas, sendo uma entre 140 e 120 ppm e outra entre 35 e 20 ppm. Os espectros
obtidos, em todas as amostras, mostraram cinco sinais caractersticos, sendo dois
carbonos etilnicos, dois grupos metilnicos e o grupo metil da estrutura cis-1,4poli-isopreno.
Pela anlise de RMN de 13C CP/MAS, foi detectado um sinal na
regio das carboxilas da cadeia lateral e sinais relacionados a grupos C=C. Foram

Concluso________________________________________________________77
detectados sinais, com maior relevncia nas amostras F2 e F3, referentes a grupos
C-O; CH-O, CH2-, sinais estes derivados de grupos tpicos de acares como,
monossacardeos, dissacardeos e polissacardeos. Ainda foram detectados sinais
correspondentes a regio de CH2, CH, CH3 de cadeias carbnicas alifticas.
Os espectros de RMN 1H, tambm apresentou duas regies bem
distintas. Os deslocamentos qumicos esto associado a prtons de C=C e a segunda
regio apresenta deslocamentos associado a prtons do grupo metlico (-CH3).
Nas medidas de difrao de raios x observou-se que a frao de
fundo (F3) possui picos de difrao caractersticos de materiais com certa estrutura
cristalina, sendo tais picos associados a ctions metlicos que compe esta frao,
como Ca, Zn, Rb, Mn, Fe, Ni, Cu e Br.

Na microscopia eletrnica de varredura (MEV), na membrana


tratada termicamente a 60oC, a presena partculas de borracha, que coagularam
mais rapidamente, durante a evaporao de subprodutos do ltex, permitindo assim
maior presena de fosfolipdios e protenas no ligados com partculas de borracha.
Na amostra tratada termicamente a 85oC notou-se uma grande homogeneidade e na
amostra a 120oC houve um processo de evaporao muito rpido de gua, levando
juntamente subprodutos do ltex, formando regies bem caractersticas. A
evaporao destes subprodutos pode diminuir a concentrao de substncias de
grande importncia no processo de induo de angiognese, impossibilitando o uso
desta membrana como biomaterial.
A morfologia das membranas, tratadas termicamente a 60, 85 e
120oC, estudadas por microscopia de fora atmica (AFM) onde houve uma grande
diferena entre a morfologia das membranas. A membrana tratada a 60oC
apresentou maior quantidade poros, tal fato podendo estar associado a evaporao

Concluso________________________________________________________78
lenta dos componentes no borracha, onde estudos realizados na USP de Ribeiro
Preto mostram que a quantidade de poros ou a induo de poros melhora a
vascularizao, melhorando assim o processo de induo da angiognese.

Nas medidas de termogravimetria (TG) notou-se alm da


degradao das cadeias polimricas a temperaturas acima de 300oC, tambm perdas
associadas liberao de subprodutos de baixa estabilidade trmica dos
componentes no borracha presentes no ltex, como, protenas, aminocidos,
carboidratos, lipdios, cidos nuclicos.
Atravs das imagens 3D e dos espectros extrados das amostras foi
possvel notar diferenas significativas entre as amostras de ltex, das fraes do
ltex centrifugado e membranas de borracha natural obtidas a 60 e 120C, sendo a
presena de grupos funcionais os fatores que diferem da membrana produzida a
120C para as demais amostras. Apesar de amidas primrias e secundrias terem
sido notadas na membrana produzida a 120C, sendo tal fato associado a forte
ligao entre as partculas de borracha a estes grupos funcionais, no foram notados
a presena dos mesmos em regies de baixa temperatura na membrana de borracha
natural produzida a 120C, o que refora a idia de que podem estar estes grupos
associados aos fatores que induzem a angiognese.
Na curvas extradas das imagens 3D, Absorbncia versus
Temperatura (oC), notou-se as discrepncias, para os grupos funcionais em 1544,
1588 e 1643 cm-1, entre a frao F2 e a membranas tratadas termicamente a 60 e
120oC, tais grupos podem estar colaborando na induo de angiognese e de
neoformao, devido a seu comportamento em relao a temperatura de tratamento
das membranas de borracha natural.

Concluso________________________________________________________79
Nas medidas de DSC foi possvel notar um pico endotrmico em
torno de 120oC para as amostras F2 e F3 responsvel pela degradao dos
constituintes no isopreno, como, protenas, aminocidos e nions inorgnicos
(fosfatos e carbonatos), fato tambm observado nas medidas de TG acoplado ao FTIR, em torno de 128oC. Em todas as amostras, com exceo da F2, notou-se a Tg
com valores que correspondem aos encontrados na literatura.
Em todas as amostras houve a presena de grupos funcionais
responsveis pela parte protica do ltex, ou seja, partes destes grupos ligam-se as
partculas de borracha, mas a frao mais rica em protenas est no soro (F2). Este
soro garante a estabilidade do ltex de borracha natural, pois no processo de
centrifugao a frao superior (F1) e a frao de fundo (F3) so slidos, resultado
da coagulao do ltex. Atravs do mtodo de Bradford calculou-se que a
quantidade de protenas totais no soro foi de 20 mg/mL que corresponde a 0,2% do
volume total.
As fraes F2 e F3 so as que apresentam maior quantidade de
compostos no isopreno, referentes a protenas, aminocidos e grupos funcionais
que podem induzir a angiognese. A frao F2 a mais recomendada para o uso
como frmaco, pois a frao F3 apesar de conter compostos semelhantes pode
apresentar contaminantes provenientes da coleta do ltex. A membrana tratada a
65oC apresenta-se como a mais eficiente no processo de induo de angiognese e
por possuir uma morfologia que favorece o processo de cicatrizao devido a
quantidade de poros colaborando na vascularizao.
Os trabalhos foram apresentados no ano de 2008 em eventos nacionais e
internacionais, como:

Concluso________________________________________________________80
(1) IIV Workshop Multidisciplinar de Materiais Polimricos (IMMP), na cidade
de Atibaia-SP, de 16 a 20 de maro, intitulado de Caracterizao por FTIR modo ATR, TG/FT-IR e DSC do ltex e das fases do ltex centrifugado,
liofilizados..
(2) VII Encontro da Sociedade Brasileira de Pesquisa em Materiais (SBPMat),
na cidade do Guaruj-SP, de 28 a 02 de outubro de 2008 intitulado de
Characterization by coupling TG/FTIR of the natural rubber membrane.
(3) Associao Brasileira de Anlise Trmica e Calorimetria (ABRATEC), que
neste ano foi realizado juntamente o 14th International Congress on
Thermal Analysis and Calorimetry (ICTAC) com o Congresso Brasileiro de
Anlise trmica e Calorimetria (VI CBRATEC) na cidade de So Pedro-SP,
de 14 a 18 de setembro de 2008, apresentando dois trabalhos intitulados de
Thermal Characterization of the Phases of the Centrifuged Latex by
TG/FT-IR

Coupled

and

DSC

Thermoplastic

Natural

Rubber/Leather/Starch Blends. Participou, como colaborador, em dois


trabalhos

sendo:

Thermal

and

Spectoscopic

Properties

of

POLY(AZO)URETHANE Sinthetized by CO2 Fixation e Thermal Study of


Products Formed from the CO2 Capture with Cyclic Amines.

Referncias Bibliogrficas___________________________________________81

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

[1] Portal da vulcanizao, http://www.vulcanizar.com.br, consultado em 20/12/07


[2] IAPAR INSTITUTO AGRONMICO DO PARAN, http://www.iapar.br,
consultado em 13/12/07.
[3] BIKALES, N. M.; MARK, H. F.; GAYLORD, N. G. Encyclopedia of Polymer
Science and Technology. New York: American Chemical Society, 1973.
[4] DALLANTONIA, A. C. et all; Avaliao de Clones de Borracha Natural Crua
por Ensaios Padro e Anlise Dinmico-Mecnica Polmeros: Cincia e
Tecnologia, vol. 16, n 3, p. 239-245, 2006.
[5]

PIERRE R., JEAN-LUC, C. Vulcanizable rubber composition for the


manufacture of a tire, and a tire, the tread of which comprises such a
composition. MICHELIN RECH. TECH. 2003. US6667362. b GRIFFITH,
W.B., BUNN, A.G., UHL, I.E., HO K.S. Adhesive tape, comprises polymer
film, primer coat on the polymer film, and adhesive layer on the primer coat
ROHM & HAAS CO. 2002 EP1223206-A2. c AKINORI, O., DAISUKE, N.
Rubber composition. BRIDGSTONE CORP. 2003. US6667356. d MEYER, J.,
SCHOLZ, M., KERNER, D. A method for improving the thermal stability of
polymers, e.g. silicone rubber, silicone oil and natural or synthetic rubber,
involves adding hydrophobic, pyrogenic, iron oxide-containing titanium oxide
before or during processing. DEGUSSA. 2002, DE10059003-A1. e
GENNARO, C.F., VICTOR, T.G.M. Rubber stock for bead wire components.
GOODYEAR TIRE & RUBBER CO. 2003.US6662840.

[6] RIPPEL, M.M. Caracterizao microestrutural de filmes e partculas de ltex


de borracha natural, Tese (Doutorado em Cincias na rea de FsicoQumica) Universidade Estadual de Campinas, Instituto de QumicaUNICAMP Campinas, SP (2005).
[7] MENDONA, R.J. Caracterizao biolgica de uma frao angiognica do
latex natural da seringueira Hevea brasiliensis. Dissertao de Mestrado.
FMRP-USP, Ribeiro Preto, 2004.
[8] NAKAYAMA, Y. et al. Surface microarchitectural design in biomedical
applications: In vivo analysis of tissue ingrowth in excimer laser-directed
micropored scaffold for cardiovascular tissue engineering. Journal of
Biomedical Materials Research, 51, 520-528, 2000.
[9] NAKAYAMA, Y.; MATSUDA T. Surface microarchitectural design in
biomedical applications: Preparation of microporus polymer surfaces by an
excimer laser ablation technique. Journal of Biomedical Materials Research,
29, 1295-1301, 1995.
[10] NAKAYAMA, Y.; MATSUDA T. Surface microarchitectural design in
biomedical applications: In vitro transmural endothelialization on microporus
segmented polyurethane films fabricated using an excimer laser. Journal of
Biomedical Materials Research, 31, 235-242, 1996.

Referncias Bibliogrficas___________________________________________82

[11] DOI K. et al. Novel compliant tissue-permeable microporous polyurethane


vascular prothesis fabricated using excimer ablation technique. Journal of
Biomedical Materials Research, 31, 27-33, 1996.
[12] NEVES Jr., W. F. P., FERREIRA, M., ALVES, M. C. O., Graeff, C. F. O.,
MulatoInfluence of Fabrication Process on the Final Properties of NaturalRubber Latex Tubes for Vascular Prosthesis ,Brazilian Journal of Physics, vol.
36, 2006.
[13] ARIYOSHI, H. et al. Expanded polytetrafluorethylene (ePTFE) vascular graft
loses its thrombogenicity six months after implantation. Thrombosis Research,
88, 427-433, 1997.
[14] AOMATSU, Y. et al. Efficacy of agarose/polystyrene sulfonic acid
microencapsulation for islet xenotransplantation, Transplant Proc., 32, 10711072, 2000.
[15] ABALOVICH, A. et al Pancreatic islets microencapsulation with polylactideco-glycolide, Transplant. Proc. 33: 1977-1979, 2001.
[16] PETERSEN, P. et al. Improved diffusion properties of a new polysulfone
membrane for the development of a bioartificial pncreas, Transplant Proc.,
33, 1952-1953, 2001.
[17] GUPTA, B. S.; KASYANOV, V. A. Biomechanics of human commom carotid
artery and design of novel hybrid textile compliant vascular grafts Journal of
Biomedical Materials Research, 34, 341-349, 1997.
[18] FRADE, M. A. C. et al. Cronic phlepoppathic cutaneos ulcer: a therapeutic
proposal. Int. J. Dermatol. 2001; 40(3): 238-240.
[19] MRU, F. Neoformao tecidual induzida por biomenbrana de ltex natural
com polilisina. [tese] Ribeiro Preto (SP): Departamento de Cirurgia e
Anatomia, FMRP-USP, 2000.
[20] OLIVEIRA, J. A. A. et al. Revista Brasileira de Otorrinolaringologia. Vol. 69,
n5. So Pauo. Set/Out.2003.
[21] THOMAZINI, J. A et al. J. Morphological and biochemical characterization of
a phrosthesis manufactured from natural latex of Hevea brasilienses for
medical utilization. Acta Microscopica, v.6, suppl. B, p.798-799, 1997.
[22] MRUE, F. et al, Evaluation of The
Biocompatibility of a New Biomembrane,
Materials Reasearch, Vol 4l. 7, No. 2, 277-283, 2004.
[23] SADER, S. L. et al Substituio parcial do pericrdio de ces por membrana do
ltex natural. Rev Bras Cir Cardiovas., 15, 338-344, 2000.
[24] GELLER, M.; GELLER, P. Consideraes sobre a alergia ao ltex. JBM, v.73,
p.33-6, 1997.
[25] FREITAS, M. A. S. Uso de prteses do composto de ltex natural em
arterioplastias femorais. Estudo experimental em ces. Tese de doutorado
aprovado na rea de Ps Graduao em Cirurgia da FMRP-USP, Ribeiro
Preto, 2001.
[26] ERENO, D. Curativo de Borracha. Pesquisa FAPESP, n.88, p.66-69, Jun,
2003.
[27] FIORAVANTI, C. Marcas Esmaecidas, Revista FAPESP, Seo Tecnologia,
157, 76-79, 03/2009.

Referncias Bibliogrficas___________________________________________83

[28] PINHO, E. C. C. M, et al. Uso experimental da biomembrana de ltex na


reconstruo conjuntival. Arq. Bras. Oftalmol., v.67, p.27-32, 2004.
[29] CARRAHER Jr., C. E.; Polymer chemistry: an introduction, 4th ed., p.348,
1996.
[30] MANO, E. B.; MENDES, L. C.; Introduo a polmeros, Ed. Edgar Blcher, 2
ed., Cap 1, 1999.
[31] LUNARDI, G.; BRETAS, R. E. S., Polmeros Intrinsecamente Condutores
Eltricos. Revista no identificada. Vol. 10, n 3, p. 34-40, 1987.
[32] FUKADA, E., TAKAMATSU, T.I., YASUDA, Callus formation by electret,
J. Appl. Phys., 14 (1975) 2079.
[33] MARIOLANI, J.R.L., BELANGERO, W.D., ARRUDA, A.C.F. Resposta
interfacial provocada pelas interaes biolgicas e mecnicas entre material de
implante e tecido receptor Acta. Orthop. Bras. 6 (1993) 48.
[34] ALLINGER, N. L.; CAVA, M.P.; JONH, C. R.; LEBEL, N.A.; Qumica
Orgnica. 2a Edio. Rio de Janeiro: LTC, 1976.
[35] Honorato S. B. Efeito Antioxidante de Componentes do Ltex da Seringueira e
Mangabeira Sobre a Degradao termo-oxidativa do Poli(1,4-cis-isopreno)
Sinttico. Dissertao (Mestrado em Cincias na rea de Qumica Inorgnica)
Universidade Federal do Cear - UFC Fortaleza, 2005.
[36] Leela E., P. Muhamed A.; Assessment of biodeterioration of rubber wood
exposed to field conditions. International Biodeterioration & Biodegradation
57, 3136, 2006.
[37] Adiwilaga, K.; Kush, A. Cloning and characterization of cdna encoding
farnesly diphosphate synthase from rubber tree Hevea brasiliensis. Plant. Mol.
Biol., 30, 935 1996.
[38] FERREIRA, M.; MORENO R. M. B.; GONALVES, P. S.; MATTOSO, L.
H. C. Avaliao dos Parmetros Fisiolgicos do Ltex de Clones de
Seringueiras da Regio de Presidente Prudente (SP) Embrapa Boletim de
Pesquisa 8/99, 1999.
[39] FERREIRA, M., Estudo da Qualidade e Produtividade do Ltex de Seringais
da Regio de Presidente Prudente. Relatrio de Atividades. FAPESP - Proc.
97/09688-8, 1998.
[40] International Rubber Study Group - Natural Rubber Statistical Bulletin, 58, p.9,
2004.
[41] Moreno, R. M. B. et al. Monitoramento e Avaliao da Borracha Natural Crua
Utilizando a Tcnica de Anlise Trmica Dinmico-Mecnica Polmeros:
Cincia e Tecnologia, vol. 16, n 3, p. 235-238, 2006
[42] Instituto Agronmico de Campinas. http://www.iac.br. Consultado em
15/01/2001.
[43] JOB, A. E. Avaliao da Qualidade do Ltex e da Borracha Seca de
Seringueira e Preparao de Blenda Condutora com Polianilina. Relatrio de
Ps-Doutorado. FAPESP Proc. 97/14460-9, 2000.

Referncias Bibliogrficas___________________________________________84

[44] Wititsuwannakul R. et al,A rubber particle protein specific for Hevea latex
lectin binding involved in latex coagulation. Phytochemistry, 69, 11111118,
2008.
[45] BRASIL, Ministrio da Indstria e do Comrcio. Superintendncia da
Borracha. Curso bsico em tecnologia de elastmeros, v. 1-6, 1993.
[46] SEMEGEN, 5. T. & FAH, C. 5., Natural Rubber. In: BABBIT, R. O. The
Vanderbilt Rubber Handbook, Vanderbilt Co. Iric. Publi., p. 18-41, 1978.
[47] GALIANI, P. D., MALMONGE, J. A., SANTOS, D. P., MALMONGE, L. F.,
Avaliao de Clones de Borracha Natural Crua por Ensaios Padro e Anlise
Dinmico-Mecnica, Polmeros: Cincia e Tecnologia, vol. 17, n 2, p. 93-97,
2007
[48] Tanaka, Y., Kawahara, S., Tangpakdee, J., Journal of Kautsch Gummi Kunst.,
50, 6 1997.
[49] BAUKKWILL, W. J., eds. Rubber. London, Longman, cap. 1, p. 1-56, 1989.
[50] HASMA, H., Lipids Associated with Rubber Particles and Their Possible Role
in Mechanical stability of latex Concentrates. Journal of Natural Rubber
Research. V.62, p. 105-114, 1991.
[51] UZABAKILIHO, B.; LARGEAU, C.; CASADEVALL, E. Latex constituents
of Euphorbia candelabrum, E. grantii, E. tirucalli and Synadenium grantii.
Phytochemistry, v. 26, n. 11, p. 3041-3045, 1987
[52] Nascimento A. M. R.; Estudo do ltex e fruto da sorva pela espectroscopia de
ressonncia magntica nuclear. Tese (Doutor em Cincias, em Cincia e
Tecnologia de Polmeros), Universidade Federal do Rio de Janeiro IMA/UFRJ - Rio de Janeiro RJ, 2006.
[53] WEBSTER, C.C.; BAULKWILL, W.J. Rubber. Longmam, New York, first
edition, 1989.
[54] BLACKLEY, D.C. Polymers Latices; Chapman & Hall: Glasgow, 1997. vol. 2.
[55] CYR, D.R. Natural Rubber. In: Encyclopedia of Chemical Technology. KirkOthmer, 1991, 20, 468-491.
[56] WISNIEWSKI, A. Ltex e Borracha. Faculdade de Cincias Agrrias do Par.
SDI, Belm, 1983.
[57] COCKBAIN, E.G.; PHILPOTT, M.W. Colloidal Properties of Latex. In: The
Chemistry and Physics of Rubber-like Substances. Maclaren, London, 1963,
73-95.
[58] SETHURAJ, M.R.; MATHEW, N.M. Natural Rubber. Biology, Cultivation
and Thechnology. Elsevier Science, Netherlands, 1992.
[59] DAUZAC, J.; JACOB, J-L; CHRESTIN, H. Physiology of Rubber Tree
Latex. CRC Press, Florida, 1989.
[60] SCHOON, G.F., VAN DE BIE, G.J. Particle size distribution in brominated
Hevea lattices. J. Polymer Sci., 1955, 16, 63-88.
[61]Williams DF. Definitions in biomaterials. Amsterdam: Elsevier, 1987.

Referncias Bibliogrficas___________________________________________85

[62] SANTOS, F.P. Desenvolvimento de Cermicas de Dixido de Titnio para


utilizao como biomaterial, Tese (Doutorado em Engenharia Mecnica na
rea de Projetos e Materiais) Faculdade de Engenharia do Campus de
Guaratinguet, UNESP - Guaratinguet (2002) 130.
[63] PARK, J.B. Biomaterials: an introduction, New York: Plenum Press, 1980.
[64] TUREG, S.L. Ortopedia, princpios e aplicaes, Flrida, Manole, 1991.
[65] GREVE, H-H. Natural Rubber. In: Ulmanns Encyclopedia of Industrial
Chemistry. VCH Publishers, 1993, 23A, 225-237.
[66] GAZELEY, K.F., GORTON, A.D.T., and PENDLE, T.D. In Natural Rubber
Science and Technology; ROBERTS, E.D., Ed., Oxford University: New
York, 1988.
[67] BLACKLEY, D.C. Polymers Latices; Chapman & Hall: Glasgow, 1997. vol. 2.
[68] COCKBAIN, E.G.; PHILPOTT, M.W. Colloidal Properties of Latex. In: The
Chemistry and Physics of Rubber-like Substances. Maclaren, London, 1963,
73-95.
[69] PRISTA L. M. Tecnologia farmacutica. 4 Ed. Lisboa; Fundao Calouste
GULBENKiAN. 1995.
[70] OLIVEIRA, S. D. Estudo da Otimizao do Ciclo de Liofilizao da Vacina
contra Febre Amarela, Mestrado Profissional (Dissertao em Tecnologia de
Imunobiolgicos), Instituto Oswaldo Cruz., Rio de Janeiro, 2005.
[71] HARRIS, D. C.. Quantitative Chemical Analysis, Quinta Edio, W. H.
Freedman and Company, New York, USA, 1999.
[72] CANEVAROLO Jr., S.V. Tcnicas de Caracterizao de Polmeros. ArtLiber,
p. 31, So Paulo, Brasil, 2003.
[73] EWING, G.W. Mtodos Experimentais de Anlise Qumica, Edgard Blcher,
So Paulo, Brasil, 1972.
[74] GRASSELLI, J.G.; BULKIN, B.J. Analytical Raman Spectroscopy, John
Whiley and Sons, New York, USA, 1991.
[75] Omega Filters Inc.. Raman Spectroscopy, Technical Bulletins, USA, 1998.
[76] SALA, O. Fundamentos da Espectroscopia Raman e no Infravermelho, Editora
Unesp, So Paulo, Brasil, 1995.
[77] SILVA, A. L. B. B. Princpios Bsicos de Ressonncia Magntica Nuclear do
Estado Slido. (Edio do Autor). So Carlos, 2005.
[78] BITTENCOURT, P. R. S. Nylon 6 e 6,6 em Blendas com a Frao da Lignina
Kraft Solvel em cido Frmico: Caracterizao e Efeito de Radiao UV,
Tese (Doutorado em Qumica Aplicada) Universidade Estadual de Maring UEM Maring, 2008.
[79] HERMANN, P.S.P.; DA SILVA, M.A.P.; BERNARDES FO, R.; JOB, A.E.;
COLNAGO, L.A.; FROMMER, J.E.; MATTOSO, L.H.C. Polmeros: Cincia
e Tecnologia 1997, 4, 27.

Referncias Bibliogrficas___________________________________________86

[80] WEST, Y.D., HENDRA, P.J. and HEALY, A.M. A Fourier-transform raman
study of the strain-induced crystallization and cold crystallization of natural
rubber. Polymer 1996, 37, 4009-4024.
[81] CORNELL, S.W. and KOENING, J.L. Ramam spectra of polyisoprene
rubbers. Macromolecules 1969, 2, 546
[82] SAUNDERS, R.A. and SMITH, D.C. Infra-red spectra and structure of hevea
and gutta elastomers. J. App. Phys. 1949, 20, 953-965.
[83] HSU, S.L. and LU, F.J. A vibration spectroscopic analysis of the structure of
natural rubber. Rubber Chem. Technol. 1987, 60, 647-658.
[84] EBDIN, J.R. and Nor, H.M. Ozonolysis of natural rubber in chloroform
solution part 1. A study by GPC and FTIR spectroscopy. Polymer 2000, 41,
2359-2365.
[85] ELLIOT, A. Infra-red spectra and structure of organic long-chain polymers.
London. Edward Arnold Publishers, 1696, 107-108.
[86] PACKHAM, D.E., EDGE, S., COOK, J. W. and THOMPSON, A. S. The
thermal behaviour of natural rubber and chlorinated rubber blends. J. Applied
Polym. Sci. 65, 1348-1379, 1997.
[87] ISAKSON, K. Infrared Spectroscopy. Its Use in the Coating Industry.
Federation of Societies for Paint Technology, Philadelphia, 1969.
[88] SERVAGENT-NOINVILLE, S., REVAULT, M., QUIQUAMPOIX, H.,
BARON, M.-H. Conformational changes of bovine serum albumin induced by
adsorption on different clay surfaces: FTIR analysis. J. Colloid Interf. Sci.
2000, 221, 273-283.
[89] VERNOOIJ, E.A.A.M., KETTENES-VAN DEN BOSCH, J.J., CROMMELIN,
D.J.A. Fourier transform infrared spectroscopic determination of de hydrolysis
of poly(ethylene glycol)- phosphatidylethanolamine-containing liposomes.
Langmuir, 2002, 18, 3466-3470.
[90] PUSKAS J.E., DAHMAN Y., MARGARITIS A. Novel Thyminefunctionalized Polystyrenes for applications in biotechnology. 2. Adsorption
of model proteins. Biomacromolecules, 2004, 5, 1412-1421.
[91] GEVC, G. Phospholipids Handbook. New York, Marcel Deker, 1993, 372-373.
[92] Nallasamy, P.; Mohan, S. Vibrational Spectra of CIS-1,4-POLYISOPRENE.
The Arabian Journal for Science and Engineering, Volume 29-1. 2004.
[93] TANAKA, Y. et al. Initiation of Biosynthesis in CIS Poly-isoprenes,
Phytochemistry, Vol. 39, No. 4, pp. 779-784, 1995.
[94] KANG, H. et al. Characterization of natural rubber biosynthesis in Ficus
benghalensis, Plant. Physiol. Biochem. 38, 979987, 2000.
[95] CHEONG, I. W. et al., Synthesis and cross-linking of polyisoprene latexes
Polymer 45, 769781, 2004.
[96] MARTINS, M. A. et al. Evaluation of natural rubber from IAC series clones by
solid state 13C NMR. Anais do 8o Congresso Brasileiro de Polmeros. 2005.
[97] OLIVEIRA, P.C. Modificao Qumica da Borracha Natrual pela tcnica de
polimerizao em emulso por semente: propriedades coloidais, estrutura

Referncias Bibliogrficas___________________________________________87

qumica e comportamento, Tese (Doutorado em Materiais e Processos de


Fabricao) Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP Campinas,
2003.
[98] LI, S-D., YU, H-P., ZHU, C-S., LI, P-S. Study on thermal degradation of sol
and gel of natural rubber. J. Appl. Polym. Sci. 2000, 75, 1339-1344.
[99] OLIVEIRA, L.C.S. et al. Evaluation of thermal behavior of latex membranes
from genetically improved rubber tree (Hevea brasiliensis), Thermochimica
Acta 445, 2731, 2006.
[100] RIPPEL, M.M.; LEE, L.; LEITE, GALEMBECK, F. Skim and Cream Rubber
Particles: Colloidal Properties, Coalescence and Film Formation, Journal of
Colloid and Interface Science, 268, 330-40, 2003.
[101] LOADMAN, M.J.R. The glass transition temperature of natural rubber. J.
Thermal Anal. 1985, 30, 929-941.
[102] KOW, C., MORTON, M., FETTERS, L.J., HADJICHRISTIDIS, N. Glass
transition behavior of polysoprene influence of molecular weight, trminal
hidroxi groups, microstructure and chain branching. Rubb. Chem. Technol.
1982, 55, 245-252.
[103] BURFIELD, D.R., LIM, K.L. Differential scanning calorimetry analysis of
natural rubber and related polysoprenes measurement of glass transition
temperature. Macromolecules 1983, 16, 1170-1175.
[104] SCHNEIDER, M., PITH, T., LAMBLA, M. Tougheing of polystyrene by
naural rubber-based composite particles. 1. Impact reinforcement by PMMA
and PS grafted core-shell particles. J. Mater. Sci. 1997, 32, 6331-6342.
[105] KHEW, M.C., HO, C.C. Low glass transition temperature (Tg) rubber film
formation studied by atomic force microscopy. Langmuir, 16, 2436-2449,
2000.

You might also like