FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS

Y BIOQUMICA

PRACTICA N 5:
QUMICAS DE MONOSACARIDOS
CURSO: ORGNICA III
MESA: 1

INTEGRANTES:
HUARANGA FUERO, Cynthia
FERNANDEZ ALTAMIRANO, Carmen
OLANO HILARIO, scar
DOCENTE: Q.F MILLA FLORES, Feliz Hugo

REACCIONES

LIMA PERU

INDICE
I.

INTRODUCCIN........................................................................................ 3

II.

HISTORIA.................................................................................................. 3

III.

MARCO TERICO...................................................................................4

IV.

TECNICAS.............................................................................................. 4

a) Aplicaciones de intercambio catinico:...................................................5

b) Aplicaciones de intercambio aninico:....................................................6
Equipo para cromatografa de intercambio inico.......................................6
V.

ELEMENTOS BASICOS...............................................................................7
a)

Fase estacionaria (Fija).......................................................................7

Fase Estacionaria:.................................................................................... 7
Resinas..................................................................................................... 7
Tipo de resinas usadas.............................................................................7

.................................................................................................................... 8
b) Fase mvil ( Se desplaza )...................................................................8
Fase Mvil:............................................................................................... 8
Tampones................................................................................................. 8
Eleccin del tampn y la fuerza inica.....................................................8
Etapas del proceso cromatogrfico.............................................................9
VI.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS....................................................................9

Ventajas:..................................................................................................... 9
Desventajas:............................................................................................... 9
VII.

APLICACIONES.................................................................................... 10

Otras aplicaciones..................................................................................... 11
VIII.

APLICACIN EN LA INDUSTRIA FARMACEUTICA...................................11

I.

INTRODUCCIN
La cromatografa de intercambio inico es un mtodo que permite la
separacin de molculas basada en sus propiedades de carga elctrica.
Se compone de dos fases: la fase estacionaria o intercambiador inico, y
la fase mvil. La fase estacionaria insoluble lleva en la superficie cargas
electrostticas fijas, que retienen contraiones mviles que pueden
intercambiarse por iones de la fase mvil, la cual suele ser una
disolucin acuosa con cantidades moderadas de metanol u otro
disolvente orgnico miscible con agua que contiene especies inicas
generalmente en forma de buffer. Los iones de sta compiten con los
analitos por los sitios activos de la fase estacionaria.

II.

HISTORIA
Los mtodos inicos han sido utilizados desde 1850, cuando H.
Thompson y J. T. Way, investigadores de Inglaterra, trataron diversas
arcillas con sulfato de amonio o carbonato en solucin para extraer el
amonaco y liberar calcio. En 1927, la primera columna de zeolita
mineral fue utilizada para eliminar iones de calcio y magnesio que
interferan en la solucin, para determinar el contenido de sulfato de
agua. La versin moderna de la IEC se desarroll durante la poca de la
guerra del Proyecto Manhattan. Era necesaria una tcnica para separar
y concentrar los elementos radiactivos necesarios para hacer la bomba
atmica. Los investigadores eligieron absorbentes que pudieran cerrarse
sobre elementos transurnidos cargados, y que pudieran ser eliminados
diferencialmente. ltimamente, una vez desclasificado, estas tcnicas
pueden utilizar nuevas resinas IE para desarrollar los sistemas que se
utilizan a menudo hoy en da para la purificacin especfica de productos
biolgicos y de sustancias inorgnicas. A principios de los '70, la
cromatografa inica, fue desarrollada por Hamish Small y sus
compaeros de trabajo en Dow Chemical Company como un novedoso
mtodo de IEC utilizables en el anlisis automatizado. CI utiliza resinas

inicas ms dbiles para su fase estacionaria y una nueva neutralizacin

de stripper, o supresor de la columna para eliminar los iones quitados
que se depositan en el fondo. Es una poderosa tcnica para determinar
bajas concentraciones de iones y es especialmente til en estudios
sobre el medio ambiente y la calidad del agua, entre otras aplicaciones.

III.

MARCO TERICO
La cromatografa de intercambio inico consiste en separar especies
inicas de igual signo, en una columna cargada con una resina
intercambiadora con funciones fijas de signo contrario, aprovechando los
diferentes coeficientes de selectividad. Para ello se carga una columna
con una suspensin acuosa de la resina, la que debe mantenerse
permanentemente cubierta de fase lquida (se carga en suspensin
totalmente hidratada para evitar explosin de la columna por
hinchamiento de la resina y se mantiene cubierta de lquido para evitar
formacin de vas de aire). Generalmente se procede por la tcnica
denominada elusin, en la que la introduccin de la muestra (solucin
que contiene los iones a separar) se realiza colocando una fina banda de
la misma en la parte superior de la columna. Luego, los iones son
arrastrados en sentido descendente mediante el pasaje de un eluyente
adecuado, en una serie de procesos de intercambio. Si los coeficientes
de los iones de la muestra difieren suficientemente, cada ion viajar por
la columna con diferente velocidad y emerger como una banda distinta.

IV.

TECNICAS
La cromatografa de intercambio inico se lleva a cabo con empaques de
columna que tiene grupos funcionales cargados unidos a una matriz
polimrica. Los grupos funcionales enlazados permanentemente y
asociados con contraiones de carga opuesta. El mecanismo de retencin
ms comn es el intercambio simple de los iones de la muestra y de la
fase mvil con el grupo cargado de la fase estacionaria.
En el caso de empaques cargados negativamente sirven para
intercambiar especies catinicas. Los ms comunes son los sulfnicos,

los cuales son fuertemente cidos y tiene las propiedades de los cidos
fuertes cuando est en la forma H. los empaques cargados
positivamente se utilizan para el intercambio con especies aninicas. Los
ms comunes son las aminas cuaternarias, las cuales son fuertemente
bsicas y en su forma OH presentan las propiedades de una base fuerte.
Ambos grupos funcionales estn totalmente disociados. As, sus
propiedades de intercambio son independientes del pH de la fase mvil.
La cromatografa de intercambio inico puede efectuarse con alguno de
los varios tipos de empaques. El tipo pelicular consiste en un
recubrimiento de resina, alrededor de 1-2 m de espesor, sobre una
cuenta de vidrio con dimetro de 30-40m. Las resinas superficialmente
porosas se obtienen recubriendo cuentas de vidrio con un lecho delgado
de microesferas de slice en el que se impregna o enlaza un
intercambiador de iones. Para ambos tipos de empaques la capacidad
de intercambio es baja: 0.01- 0.1 meq/g. El intercambiador puede
tambin estar enlazado a macropartculas de slice por medio de
reacciones de sililacin o polimerizado dentro de los poros de un gel
suficientemente poroso. El proceso primario en la cromatografa de
intercambio inico involucra la adsorcin/desorcin de materiales inicos
cargados en la fase mvil con una fase estacionara permanentemente
cargadas (de signo contrario). Ejemplo, una resina ionizada, inicialmente
en forma H, en contacto con una solucin que contiene iones K+, existe
un equilibrio: resina, H + K+ resina, K+ + H+ Las diferencias de retencin
estn gobernadas esencialmente por las propiedades fsicas de los
iones solvatados. La fase de resina presenta preferencia por:
1. El ion de carga mayor.
2. El ion con menor radio solvatado.
3. El ion que tenga mayor polarizabilidad.

a) Aplicaciones de intercambio catinico:

Los cationes inorgnicos se pueden determinar en alimentos, tales como
los alimentos dietticos bajos en sodio, y en muestras de orina.

b) Aplicaciones de intercambio aninico:

Se pueden separar los cidos HCN, carbnico, silcico y brico de los
cidos fosfrico, sulfrico y clorhdrico. Los metales que forman
complejos cloruro y floruro.

Equipo para cromatografa de intercambio inico

Instrumentacin: Un equipo para anlisis mediante cromatografa de
intercambio inico (C.I.I.) est constituido bsicamente por los
componentes siguientes:

Un inyector

Una vlvula para la inyeccin

Un compartimiento para la columna

Una o varias columnas

Una bomba un sistema de deteccin conductimtrico

Un sistema de registro o de integracin

Un auto muestreador

Un microprocesador para automatizar operaciones

Un computador para manejar y almacenar informacin.

El diseo de un equipo con estas caractersticas, permite aplicaciones

analticas cualitativas y

cuantitativas rpidas, selectivas y simultneas

principalmente de especies inicas inorgnicas en el rango de

microgramos por litro en

muestras de aguas, contaminantes

ambientales, industria de alimentos, bebidas, productos farmacuticos,

recubrimientos, productos agrcolas, laboratorios clnicos, laboratorios de
control de calidad y anlisis en general. Las determinaciones de aniones
y cationes ms frecuentes son: Cloruros, bromuros, fluoruros, nitritos,
23nitratos , sulfatos, fosfatos, boratos, sulfocianuro, silicatos, litio, sodio,
potasio, calcio, magnesio, estroncio, bario, zinc, cobalto, manganeso,

amonio, cidos carboxlicos (tartratos, lactato, acetato) y aminas (metil

amina, dimetil amina, trimetil amina).

V.

ELEMENTOS BASICOS
a) Fase estacionaria
Fase

Estacionaria:

(Fija)

Insoluble, lleva en la superficie cargas

electrostticas fijas que retienen contraiones mviles que pueden

intercambiarse por iones de la fase mvil.
La fase estacionaria es normalmente una resina de intercambio inico
que contiene grupos funcionales cargados que interaccionan con grupos
cargados de signo opuesto del compuesto que se quiere retener. Puede
ser:
1. Intercambiador de iones cargado positivamente (intercambiador
de aniones), que interacciona con aniones
2. Intercambiador de iones cargado negativamente (intercambiador
de cationes), que interacciona con cationes
Resinas
I. Resinas de poliestireno entrecruzadas
II. Resinas basadas en Carbohidratos- (Carbohidratos Polimricos,
Agarosa, dextrano, celulosa) Especialmente usados en la separacin de
biomoleculas.
III. Soportes basados en la Slice
Tipo de resinas usadas

b) Fase mvil

( Se desplaza )

Fase Mvil: Disolucin acuosa con cantidades moderadas de metanol

u otro disolvente orgnico miscible con agua que contiene especies
inicas en forma, generalmente de buffer. Los iones de la fase mvil
compiten con los anlitos por los sitios activos de la fase estacionaria.

Tampones
Para estos intercambiadores se suelen usar. Histidina (pKa 6,15),
imidazol (7,0), trietanolamina (7,77), Tris (8,16), dietanolamina (8,8) y
otros. Por la misma razn, para la cr. i. catinico se debe usar un tampn
aninico, como actico (pKa 4,76), ctrico (4,76), Mes (6,15), fosfato
(7,2), Hepes (7,55) y otros.
Eleccin del tampn y la fuerza inica.
Aparte del pH de la fase movil, en la purificacion de un soluto/proteina
hay que tener en cuenta el tipo de tampn que se usa y la fuerza inica
o concentracion salina en la que tiene lugar la interaccion con el
intercambiador.
Respecto al tipo de tampon, la forma cargada del mismo no debe
interferir con el proceso de intercambio de iones, por lo que no debe
actuar como contraion y competir con la proteina por la union a la f.
estacionaria, porque ello desvirtuaria su equilibrio (y ademas se crearia
un gradiente de pH en la columna). Para ello, el componente inico del
tampn debe de tener la misma carga que la fase estacionaria.

Etapas del proceso cromatogrfico

1. La protena que contiene en mayor porcentaje cargas negativas, se
ve rodeada por iones positivos. Esta protena interaccionar con una
matriz que posea cargas positivas.
2. Se producen interacciones electroestticas entre la protena y la
matriz, por lo cual se desplazan los iones positivos y negativos que
se encontraban interaccionando tanto con la protena como con la
matriz.
3. Una vez que la protena es adsorbida en la matriz se lava la columna
con un buffer que permita eliminar los contami-nantes que no estn
adsorbidos.
4. Posteriormente se eluye la protena adsorbida en forma diferencial
mediante cambios:
- de fuerza inica

- pH de la solucin eluyente
5. Finalmente se reacondiciona la matriz para iniciar un nuevo ciclo.
Dependiendo del material se pueden realizar hasta 100 ciclos.

VI.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Ventajas:

Alta capacidad

Alta resolucin.

Paso concentrador: Se puede sembrar un gran volumen para

luego eluirlo en un menor volumen.

Con una misma columna se puede utilizar a diferentes pH y

obtener diversos perfiles de elucin.

Desventajas:

Las muestras deben estar desalinizadas antes de ser aplicadas a

este tipo de cromatografa

VII. APLICACIONES
Como aplicaciones de la cromatografa inica est el anlisis de drogas
y sus metabolitos, sueros, conservantes de alimentos, mezclas para
vitaminas, azcares, y preparaciones farmacuticas.
El intercambio inico se utiliza ampliamente en las industrias de
alimentos y bebidas, hidrometalrgica, acabado de metales, qumica y
petroqumica, farmacutica, azcar y edulcorantes, agua subterrnea y
potable, nuclear, ablandamiento industrial del agua, semiconductores,
energa, y otras muchas industrias.
En bioqumica es ampliamente utilizado para separar molculas
cargadas, tales como protenas. Un rea importante de aplicacin es la

extraccin y purificacin de sustancias de origen biolgico, tales como

protenas (aminocidos) y ADN/ARN.
Un ejemplo muy importante es el proceso PUREX (Plutonium-URanium
EXtraction process, proceso de extraccin de plutonio-uranio) que se
utiliza para separar el plutonio y eluranio entre los productos presentes
en el combustible gastado de un reactor nuclear, y poder eliminar los
productos de desecho. De este modo, el plutonio y el uranio estn
disponibles para ser empleados como materiales relacionados con la
energa nuclear, como nuevo combustible de reactor y armas nucleares.
Se utiliza tambin para separar otros conjuntos de elementos qumicos
muy similares, tales como circonio y hafnio, que por cierto son tambin
muy importantes para la industria nuclear. El circonio es prcticamente
transparente a los neutrones libres, y se utiliza en la construccin de
reactores, pero el hafnio es un absorbente de neutrones muy fuerte,
usado en las barras de control del reactor.
Se utilizan en el reprocesamiento del combustible nuclear y el
tratamiento de los residuos radiactivos.

Otras aplicaciones
En ciencia del suelo, la capacidad de intercambio catinico es la
capacidad de intercambio inico de los suelos para los iones de
carga positiva. Los suelos pueden ser considerados como
intercambiadores naturales de cationes dbiles.
En la fabricacin de guas de onda planas, el intercambio inico se
utiliza para crear la capa gua de ndice de refraccin superior.
Desalcalinizacin, o eliminacin de los iones alcalinos de la superficie
de un vidrio.
Produccin de Vidrio endurecido qumicamente, producido por el
intercambio de iones Na+ por K+ en las superficies de cristal usando
KNO3 fundido.

 Extraccin y purificacin de cidos nucleicos Purificacin de agua

Purificacin del fibringeno de la leche
Determinacin de anticonvulsantes en el suero despus de la
extraccin de la fase slida. Anlisis de antibiticos de poli ter.
Determinacin de pesticidas.
Identificacin de cidos orgnicos en la fruta y en el jugo.
Deteccin de derivacin-fluorescencia post-columna para anlisis
para varios tipos de pesticidas agrcolas.
Determinacin de metabolitos de Triptfano en el suero umbilical.

VIII. APLICACIN EN LA INDUSTRIA FARMACEUTICA