UNIVERSIDADE ESTADUAL DO RIO GRANDE DO SUL - UERGS

ENGENHARIA DE BIOPROCESSOS E BIOTECNOLOGIA

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

ANLISE MICROBIOLGICA DE GUAS MINERAIS E DE

GUA POTVEL DE ABASTECIMENTO EM NOVO HAMBURGO

Bruna J. Canalli
Elaine Ferreira

Novo Hamburgo, 14 de Outubro de 2015.

1.

INTRODUO
Apesar dos grandes avanos nos sistemas de tratamento de gua, as doenas

causadas por patgenos contidos na gua ainda so uma questo de grande

preocupao. Com a dvida sobre a qualidade da gua de abastecimento pblico, o
cidado passou a utilizar a gua mineral com maior intensidade (ALVESA, 2002). Existe a
percepo de que o consumo de gua mineral natural representa um estilo saudvel de
vida e que esses produtos so relativamente seguros. Entretanto, pode no ser verdadeira
a afirmao de que a gua mineral apresente qualidade microbiolgica superior das
guas de abastecimento pblico, pois a contaminao pode vir durante o processo de
armazenamento; isso tanto para a gua pblica tratada quanto para as guas minerais
(SILVA, 2008 e FARACHE FILHO, 2008).
A gua de abastecimento pblico provm geralmente de rios e mananciais e passa
por uma estao de tratamento para torna-la potvel. Nesta estao a gua passa pelas
etapas: i) Captao, onde a gua passa por um sistema de grades que impede a entrada
de elementos macroscpicos grosseiros; ii) floculao, a gua agitada lentamente, para
favorecer a unio das partculas de sujeira, formando os flocos; iii) decantao, a gua no
mais agitada e os flocos vo se depositando no fundo, separando-se da gua; iv)
filtrao,

gua j decantada passa por um filtro de cascalho/areia/antracito (carvo

mineral), onde vai se livrando dos flocos que no foram decantados na fase anterior e de
alguns microrganismos; v) Clorao, a gua filtrada recebe um produto que contm cloro,
que mata os microrganismos; vi) Reservao. A gua tratada armazenada em grandes
reservatrios, antes da distribuio.
J a gua mineral natural considerada como a gua obtida diretamente de fontes
naturais ou artificialmente captadas de origem subterrnea, caracterizada pelo contedo
definido e constante de sais minerais (composio inica) e pela presena de
oligoelementos e outros constituintes (FARACHE FILHO, 2008). Estudos sobre a ecologia
de guas minerais, tem demonstrado que amostras coletadas diretamente do aqufero tem
uma populao bacteriana de 10-100 UFC/ 100 ml, sendo que aps o envase esta
populao aumenta para 103 -106 UFC/ 100 ml (SANTANA, 2003). Os microrganismos
presentes na gua engarrafada podem fazer parte da microbiota inicial, antes da sua
captao. Pertencem a esse grupo as bactrias dos gneros Pseudomonas, Acinetobacter,

Alcaligenes, Flavobacterium, Micrococcus e Bacillus. Porm, a maior preocupao com a

presena de patgenos (SANTANA, 2003).

2. OBJETIVOS
O presente trabalho tem por finalidade avaliar a qualidade microbiolgica, quanto
presena de coliformes totais e fecais, em diferentes marcas de guas minerais comerciais
e gua potvel destinadas ao abastecimento pblico da cidade Novo Hamburgo -RS,
comparando os resultados referentes aos padres estabelecidos pela legislao brasileira
vigente.

3. REFERENCIAL TERICO
3.1 QUALIDADE MICROBIOLGICA DA GUA
A quantidade de matria orgnica presente na gua depende de uma srie de fatores,
incluindo todos os organismos que ali vivem, os resduos de plantas e animais carregados
para as guas e tambm o lixo e o esgoto nela jogados. Se a quantidade de matria
orgnica muito grande, a poluio das guas alta, e uma srie de processos sofrer
alteraes.
difcil restabelecer o equilbrio se os processos poluidores no so controlados. Os
principais componentes de matria orgnica encontrados na gua so protenas,
aminocidos, carboidratos e gorduras, alm de uria, surfactantes e fenis. Os
microorganismos desempenham diversas funes de fundamental importncia para a
qualidade das guas. Participam das diversas transformaes da matria nos ciclos
biogeoqumicos como o do N, P, S, Hg, C e da gua. Outros aspectos de grande relevncia
em termos de qualidade biolgica da gua so a presena de agentes patognicos e a
transmisso de doenas (DAE, 2015)
A deteco dos agentes patognicos, principalmente bactrias, protozorios e vrus,
em uma amostra de gua extremamente difcil, em razo de suas baixas concentraes.

Portanto, a determinao da potencialidade de um corpo d'gua ser portador de agentes

causadores de doenas pode ser feita de forma indireta, atravs dos organismos
indicadores de contaminao fecal do grupo dos coliformes. Os coliformes esto presentes
em grandes quantidades nas fezes do ser humano e dos animais de sangue quente. A
presena de coliformes na gua no representa, por si s, um perigo sade, mas indica a
possvel presena de outros organismos causadores de problemas sade. Os principais
indicadores de contaminao fecal so as concentraes de coliformes totais e coliformes
fecais, expressas em nmero de organismos por 100 ml de gua (DAE, 2015).

3.1.1 Microorganismos indicadores da qualidade da gua

3.1.1.1 Coliformes totais (C.T.)
Este grupo composto por bactrias da famlia Enterobacteriaceae, capazes de
fermentar a lactose com produo de cido e gs, quando incubados a 35-37C, por 48
horas. So bastonetes Gram-negativos, no formadores de esporos, aerbios ou
anaerbios facultativos (RAY, 1996). Pertencem a este grupo predominantemente,
bactrias dos gneros Escherichia, Enterobacter, Citrobacter e Klebsiella. Destas, apenas
a Escherichia coli tem como habitat primrio o trato intestinal do homem e animais. Os
demais - Enterobacter, Citrobacter e Klebsiella alm de serem encontrado nas fezes,
tambm esto presentes em outros ambientes como vegetais e solo, onde persistem por
tempo superior ao de bactrias patognicas de origem intestinal como Salmonella e
Shigella. Consequentemente, a presena de coliformes totais no alimento no indica,
necessariamente, contaminao fecal recente ou ocorrncia de enteropatgenos
(FRANCO; LANDGRAF, 2003).
3.1.1.2 Coliformes fecais (C.F.) e Escherichia coli
As bactrias pertencentes a este grupo correspondem aos coliformes totais que
apresentam a capacidade de continuar fermentando lactose com produo de gs, quando
incubadas temperatura de 44,5-45,5C. Nessas condies, ao redor de 90% das culturas
de Escherichia coli so positivas, enquanto entre os demais gneros, apenas algumas
cepas de Enterobacter e Klebsiella mantm essa caracterstica. Escherichia coli a

espcie predominante entre os diversos microrganismos anaerbios facultativos que fazem

parte da microbiota intestinal do homem e de animais. Esse microrganismo pertence
famlia Enterobacteriaceae e entre suas principais caractersticas destacam-se: bastonetes
Gram-negativos, no esporulados, capazes de fermentar lactose com produo de gs.
Os coliformes termotolerantes distintos de E. coli, podem originar-se de guas
enriquecidas organicamente como, por exemplo, de efluentes industriais ou de materiais
vegetais e solo em decomposio. Por esta razo, o termo mais apropriado
termotolerantes e no coliformes fecais. A pesquisa de coliformes fecais ou de Escherichia
coli fornece com maior segurana, informaes sobre as condies higinica da gua e
melhor indicao da eventual presena de enteropatgenos.
3.1.2 Padro microbiolgico da gua para consumo humano
A Portaria MS N 2914 DE 12/12/2011 traz a seguintes definies para a gua:
I - gua para consumo humano: gua potvel destinada ingesto, preparao e produo
de alimentos e higiene pessoal, independentemente da sua origem;
II - gua potvel: gua que atenda ao padro de potabilidade estabelecido nesta Portaria e
que no oferea riscos sade;
III - padro de potabilidade: conjunto de valores permitidos como parmetro da qualidade
da gua para consumo humano, conforme definido nesta Portaria.
O Decreto federal n 5.440 de 04/05/2005 prev o seguinte padro microbiolgico da gua
para consumo humano:

3.1.3 Determinao de C.T. e C.F. pela Tcnica de Fermentao em Tubos Mltiplos

A Tcnica de Fermentao em Tubos Mltiplos (TFTM), tambm conhecida como

Mtodo do Nmero mais Provvel, uma maneira bastante utilizada para estimar alguns
tipos de microrganismos, como coliformes totais, coliformes fecais, Escherichia coli e at
mesmo S. aureus. Nesta tcnica, aps homogeneizao, alquotas e ou diluies do
produto a ser analisado so transferidas para tubos de ensaios contendo o meio de cultura
apropriado e um tubo coletor de gs (tubo de Durhan). Todos os tubos so incubados, e,
em seguida, os positivos so identificados. No caso de coliformes totais e fecais,
positividade significa turvao do meio com produo de gs. Pelo nmero de tubos
positivos em cada uma das diluies empregadas, determina-se o nmero mais provvel
(NMP), tendo como base tabelas estatsticas (Tabela de Hoskins).
3.1.3.1 Tabela de Hoskins
Tabela 1: Nmero Mais Provvel (NMP) e intervalo de confiana a nvel de 95% de
probabilidade, para diversas combinaes de tubos positivos e negativos na inoculao de
pores de 10mL da amostra por tubo.

Tabela 2: Nmero Mais Provvel (NMP) e intervalo de confiana a nvel de 95% de

probabilidade, para diversas combinaes de tubos positivos e negativos na inoculao de
5 pores de 10mL da amostra por tubo.

4. MATERIAIS E MTODOS
Obteno das amostras:
gua Mineral: Sero analisadas 9 amostras (3 de cada garrafa) de 100 mL,
retiradas de garrafas de gua mineral de 1,5 L de trs diferentes marcas, compradas em
supermercados de Novo Hamburgo.
gua de distribuio pblica: Sero analisadas 9 amostras (3 de cada local) de 100
mL, obtidas em 3 diferentes locais da cidade de Novo Hamburgo.
Anlise das Amostras:
Para a coleta da gua ser utilizado um frasco estril com cerca de 100ml e
transferidos 10 ml da amostra para uma srie de trs tubos com 10 ml de caldo lauril duplo
ou caldo lactosado duplo (concentrao dupla de nutrientes) com tubo de Duran invertido.
Aps o trmino da primeira bateria de testes realizada a segunda bateria, que consiste
em transferir 1 ml da amostra de gua para trs tubos com 9ml de caldo lauril simples ou
caldo lactosado simples, com tubo de Duran. Por ltimo realizada a terceira bateria de

testes, quando transferido 0,1ml para trs tubos com 9 ml de caldo lauril simples ou caldo
lactosado simples, com tubo de Duran invertido. Incubar as trs sries de tubos em estufa
a 35C por 48 horas. Resultados: (Positivos) Tubos turvos, com formao de bolhas de gs
nos tubos de duran invertidos, indicando a presena de possveis organismos coliformes e
(Negativos) no h a formao de gs nos tubos de Duran.
Aps a confirmao de coliformes (testes positivos) necessrio identificar se um
coliforme total (microrganismos presentes nas fezes em pequenas quantidades) ou
coliformes fecais (microrganismos presentes nas fezes em grandes quantidades, como a
E. coli).
A amostra com tubos positivos deve ser transferida com uma ala de inoculao, um
tubo com 10 ml de caldo verde brilhante com tubo de Duran invertido e incubada por 24
horas a 35C. Resultados: (Positivo): Presena de gs no tubo de Duran indicativo de
Coliformes Totais e (Negativo): ausncia de gs nos tubos de Duran.
No prximo passo, os tubos positivos de caldo verde brilhante so transferidos para
um tubo com 9 ml de Caldo EC com tubo de Duran invertido por meio de uma ala de
inoculao e incubado em estufa a 44C por 24 horas. Resultados: (Positivo): Presena de
gs no tubo EC indicativo de coliformes fecais (E. coli) e termotolerantes e (Negativos):
Ausncia de gs.
Os tubos positivos de caldo EC so inoculados em um meio de cultura seletivo para
a identificao das colnias de coliformes e identificao de cepas. Geralmente os meios
mais utilizados so o gar MacConkey e gar Eosina Azul de Metileno (EMB). No gar
MacConkey as colnias de E. coli so de colorao rosa a vermelho e no meio EMB as
colnias so de colorao escura a verde brilhante.
5. RESULTADOS ESPERADOS
Devido as normas de potabilidade da gua e dos testes que devem ser conduzidos
anteriormente a distribuio e ao envase, espera-se encontrar resultados negativos ou
mnimos para as amostras testadas quanto a coliformes totais e fecais.

6. REFERNCIAS
FARACHE FILHO, A.; DIAS, M .F. Qualidade Microbiolgica de guas Minerais em Gales
de 20 Litros. Alim. Nutr. Araraquara v.19, n.3, p. 243-248, 2008.
SANTANA, A. S. et al. Qualidade Microbiolgica de guas Minerais. Cinc. Tecnol.
Aliment. Campinas, v.23, p.190-194, 2003.
ALVESA, N. C.; ODORIZZIA, A. C.; GOULART, F. C. Anlise microbiolgica de guas
minerais e de gua potvel de abastecimento, Marlia, SP. Rev. Sade Pblica, v. 36, n. 6,
p. 749-51, 2002.
RAY, B. Fundamental food microbiology. Boca Ratton: CRC Press, p. 516, 1996.
DAE Bauru. Departamento de guas e esgoto de Bauru - Principais parmetros
biolgicos.

Disponvel

em:

<http://www.daebauru.com.br/2014/agua/agua.php?

secao=qualidade&pagina=23#>. Acesso em: 11 Out. 2015.

FRANCO, B.D.G.M.; LANDGRAF, M. Microbiologia dos alimentos. Atheneu: So Paulo,
p.182, 2003.