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CROMATOGRAFA

FUNDAMENTO TERICO
Las tcnicas cromatogrfcas se utilizan actualmente para la separacin, aislamiento,
purificacin e identificacin de sustancias, tanto orgnicas como inorgnicas.
Todos los mtodos cromatogrfcos se basan en las diferentes afinidades de los
componentes de una muestra por las fases inmiscibles con las que estn en contacto.
Segn sea el proceso de separacin, los mtodos cromatogrfcos se clasifican en:

1. Cromatografa de adsorcin
Las propiedades responsables de la separacin son las fuerzas de adsorcin. Si una mezcla
de sustancias disuelta en una fase se pone en contacto con otra fase, las sustancias se concentrarn
ms o menos en la superficie de la otra fase; esto se llama adsorcin. Segn las fases que
intervienen puede ser:
Cromatografa de adsorcin lquido-gas. La fase fija es un lquido y la fase mvil
un gas.
Cromatografa de adsorcin slido-gas. La fase fija es un slido y la mvil un gas.
Cromatografa de adsorcin slido-lquido. La fase fija es un slido y la mvil un
lquido. Es la ms usual, se puede hacer en columna o en capa fina.

2. Cromatografa de particin.
La separacin se basa en la distinta solubilidad de las sustancias en dos fases diferentes.
Esta diferencia de solubilidad se expresa mediante coeficientes de reparto.
Puede ser de dos tipos:
Cromatografa de particin lquido-lquido. La fase fija es la fase acuosa que est
sujeta en un slido, y la fase mvil es la orgnica. Segn el tipo de soporte, puede ser
de varios tipos:
Papel: el soporte es la celulosa.
Columna o capa fina: el soporte es silicagel, almidn, etc.
Cromatografa de particin lquido-gas. La fase fija es un lquido orgnico no
voltil soportado en un slido, y la mvil un gas inerte.

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3. Cromatografa de cambio inico
Slo se puede aplicar a sustancias con carga elctrica, intrnseca o inducida, en disoluciones
acuosas. Cuando sustancias que forman iones en disolucin acuosa se ponen en contacto con
resinas cambiadoras de iones, hay una interaccin entre las cargas de los grupos funcionales de los
cambiadores inicos y las cargas de los iones. La fuerza de atraccin vara con la fuerza inica y el
pH del medio. La fase fija son cambiadores, naturales o sintticos, y la fase mvil es la disolucin.
Los iones de mayor carga son retrasados ms durante el paso a travs de la columna y as se
verifica la separacin.

4. Cromatografa de permeacin
La separacin se basa en la diferencia de tamaos y pesos moleculares de las distintas
sustancias. Las sustancias de pequeo tamao tienden a penetrar en el interior de los poros y son
retrasadas en la elucin respecto a las ms grandes. Hay dos tcnicas:
Cromatografa de vidrio poroso.
Filtracin por gel

Tambin se realizan otros tipos de clasificaciones entre las que cabe destacar la clasificacin por
aplicaciones:
Cromatografa analtica: para identificar sustancias.
Cromatografa preparativa: para separar sustancias y aislarlas.

Cromatografa de adsorcin en columna


El equipo consta de una columna de vidrio provista de una llave en la parte inferior. Esta
columna se llena con el adsorbente adecuado, hay diferentes mtodos de llenado de las columnas,
pero es muy importante que el llenado sea perfecto, que no queden burbujas de aire porque la
separacin sera mala. El mtodo de empaquetado ms usual consiste en formar una papilla entre el
adsorbente y el disolvente adicionndola poco a poco. Una vez finalizado el empaquetamiento, se
puede proceder a la separacin.
La mezcla que se quiere aislar y purificar se disuelve en la mnima cantidad posible de
disolvente (el mismo del llenado de la columna) y se adiciona por la parte superior de la columna.
A continuacin se va pasando disolvente, para eluir las sustancias adsorbidas. Se puede usar un
nico disolvente, o mezclas de disolventes de polaridad creciente, dependiendo del tipo de
sustancias a separar. La adsorcin y la velocidad de migracin depende de:

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Polaridad del disolvente
Polaridad del producto
Actividad del adsorbente
Los disolventes ordinarios se pueden ordenar segn su polaridad creciente: ter de petrleo,
tetracloruro de carbono, ciclohexano, ter, acetona, benceno, diclorometano, cloroformo, acetato de
etilo, piridina, etanol, metanol, agua, cido actico.
La actividad de los adsorbentes aumenta en el siguiente orden: celulosa, almidn, azcar,
silicagel, sulfato calcico, fluorisil, magnesia, almina, carbn activo.
La secuencia de elucin de compuestos, en orden de elucin creciente: hidrocarburos,
olefinas, teres, compuestos halogenados, aromticos, cetonas, aldehidos, alcoholes y aminas,
cidos y bases dbiles.
Se van recogiendo las fracciones y luego se analiza el contenido de cada fraccin.

Cromatografa en capa fina cualitativa


Sirve para identificar los distintos componentes de una mezcla. Se realiza usando unas
microplacas (portaobjetos de un microscopio) que se cubren con el adsorbente adecuado al que se
aade agua para formar la papilla. Una vez extendida la papilla, se deja secar y luego se mete a la
estufa para activar el adsorbente. Una vez secas, se aplica la muestra en disolucin en la parte
inferior con un capilar. Se introduce la placa en una cubeta con el eluyente adecuado y se deja

desarrollar el cromatograma. Si los productos son coloreados, la separacin podr observarse


directamente; en caso contrario, se usan reveladores.

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Cromatografa en capa fina preparativa
Sirve para separar y aislar los distintos componentes de una mezcla. Se usan placas (20x20
cm) de cristal. El procedimiento de preparar las placas es similar al anterior. La aplicacin se hace
en forma de franja y no de punto.