TEMA 4.

NUTRICIN Y METABOLISMO
Una caracterstica importante de las clulas es su capacidad para llevar a
cabo reacciones qumicas y organizar sus molculas para formar estructuras
especficas. La expresin final de esta organizacin es el crecimiento
(replicacin). Antes de que la clula se divida, ocurren diversas reacciones
qumicas en la ella que se denominan metabolismo:

Reacciones catablicas: liberan energa.

Reacciones anablicas: consumen energa.

Necesidades nutricionales de los microorganismos

Los elementos esenciales para las clulas son las macromolculas
(compuestas por unidades ms pequeas que se denominan monmeros) y
el agua. Por tanto, la nutricin microbiana consiste en suministrar a las
clulas los ingredientes qumicos necesarios para hacer monmeros, los
cuales son nutrientes. Los diferentes organismos existentes necesitan
diferentes tipos de nutrientes en distintas cantidades y, a veces, los
requerimientos son especficos.
Los macronutrientes se precisan en cantidades importantes. Los que se
necesitan en cantidad ms elevada son C y N. en primer lugar muchas
clulas procariotas necesitan algn tipo de compuesto orgnico como
fuente de carbono. No obstante, hay algunas procariotas que son auttrofas,
son capaces de construir todas sus estructuras orgnicas a partir del CO2
con la energa obtenida de la luz o de compuestos orgnicos. En peso seco,
la clula contiene un 50% de C, lo que demuestra que es el principal
elemento de las macromolculas. El siguiente elemento ms abundante es
el nitrgeno (alrededor del 12% en seco de la clula), pues es importante en
las protenas, en los cidos nucleicos, etc. El nitrgeno se puede encontrar
como inorgnico u orgnico, pero la mayora del mismo se encuentra como
compuestos inorgnicos (NH3, NO3-, N3). La mayora de las bacterias

utilizan el amoniaco como fuente de nitrgeno y otras muchas pueden usar

nitratos.
Otras macromolculas que se pueden encontrar son:

Fsforo (P): se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos

inorgnicos y orgnicos. La clula lo necesita para la sntesis de
cidos nucleicos y fosfolpidos.
Azufre (S): es el componente estructural de la cistena y metionina,
adems, se presenta en diversas protenas como la tiamina, la
biotina, el cido lipoico y la coenzima A.
Potasio (K): es requerido especficamente por una gran diversidad de
enzimas, como por ejemplo las implicadas en la sntesis de protenas.
Magnesio (Mg): funciona como estabilizador de los ribosomas, las
membranas celulares y los cidos nucleicos. Tambin se necesita para
la actividad de muchas enzimas.
Calcio (Ca): ayuda a estabilizar la pared bacteriana y tiene una
funcin importante en la termorresistencia de las endoesporas.
Sodio (Na): es requerido por algunos microorganismos y no por todos.
Su necesidad suele ser un reflejo del hbitat del microorganismo. Por
ejemplo, el agua de mar tiene un alto contenido en sodio y los
microorganismos marinos normalmente lo requieren para su
crecimiento.
Hierro (Fe): es fundamental en la respiracin celular y es tambin un
elemento clave para los citocromos y para las protenas que
contienen hierro y azufre implicados en el transporte de electrones.

Por otro lado, se encuentran los micronutrientes, que se encuentran en

menor cantidad que los anteriores (pero son igual de importantes); son
elementos traza. Se trata de metales (Mo, Mn, Co, Zn, Cu, Ni) y muchos de
ellos tienen una funcin estructural en varias enzimas (los catalizadores de
las clulas). Cuando se cultivan microorganismos en laboratorio, a veces, no
es necesario aadirlos a los medios de cultivo. No obstante, si un medio de
cultivo contiene sustancias muy puras, disueltas en agua destilada de
elevada pureza, puede darse una deficiencia en algn elemento traza, por
ello, se debe aadir una pequea cantidad de una solucin de metales traza
para suministrar los metales necesarios.
En cuanto a los factores de crecimiento, se trata de compuestos orgnicos
que, al igual que los micronutrientes, se necesitan en cantidades muy
pequeas y solo por algunas clulas. Los factores de crecimiento son
vitaminas, aminocidos, purinas y pirimidinas. Aunque la mayora de los
microorganismos son capaces de sintetizar estos compuestos, en algunos
casos es necesario suministrarlos en el medio de cultivo. Las vitaminas se
necesitan con mayor frecuencia.
Medios de cultivo

Se trata de las soluciones que se usan en el laboratorio para el cultivo de los

microorganismos. Contienen todos los componentes nutricionales
necesarios para soportar el crecimiento de los microorganismos.
Los medios de cultivo deben contener como mnimo:

Fuente de C: glucosa, etc.

Fuente de N: sulfato amnico, pptidos, protenas, etc.
Sales minares: sales de Ca, Mg, Fe.

Pero, a veces, pueden incluir elementos traza u oligoelementos, factores de

crecimiento y requerimientos especiales.
Tipos de medios de cultivo:
1. Composicin
a. Sintticos o definidos: se conoce la formula qumica y la
proporcin de los componentes que entran a forma parte del
medio. Por ejemplo:
Fuente de C: 2% (2 g de glucosa en 100 g del medio)
Fuente de N: 1% (1 g de sulfato amnico en 100 g del medio)
Sales (Ca, Mg, fe): 0.1%
b. Complejos: se desconoce la formula qumica y la proporcin de
algn
c.
d. componente. Por ejemplo:
Fuente de C: 2% (2 g de glucosa en 100 g del medio)
Fuente de N: 1% (1 g de sulfato amnico en 100 g del medio)
Sales (Ca, Mg, fe): 0.1%
Adicin de levaduras, casena (protena de la leche), soja y
otras sustancias muy nutritivas que no estn definidas
qumicamente.
2. Consistencia ( a T ambiente)
a. Slido: lleva los componentes nutricionales necesarios y un
agente solidificante. El que se utiliza mundialmente es el agar
(polisacrido que se extrae de las algas). Este agente
solidificante, en solucin acuosa y por encima de 48 oC forma
un slido lquido, mientras que por debajo de esa temperatura,
solidifica. El agar es inerte, no es atacable por la mayora de
los microorganismos, de manera que es difcil de degradar.
b. Semislido: igual que antes pero con una proporcin menor de
agar. Su consistencia es gelatinosa.
c. Liquido: no contiene agar
Aunque se trate del mismo medio y de las mismas condiciones
nutricionales, puede tener distinto estado fsico.
3. Relacin bacteria medio
a. Permisivos: llevan los compuestos necesarios para permitir el
crecimiento de cualquier tipo de microorganismo.
b. Selectivos: en su composicin lleva algn componente que
inhibe el crecimiento de algn tipo de microorganismo. Por

ejemplo: utilizar un antibitico para impedir el crecimiento de

bacterias Gram (+).
c. Diferenciales: permite diferenciar unos microorganismos de
otros en funcin de la actividad bioqumica o fisiolgica.
d. De enriquecimiento: facilita el crecimiento de algunos
microorganismos frente a otros. Por ejemplo:
Fuente de C: 2% (2 g de glucosa en 100 g del medio)
Sales (Ca, Mg, fe): 0.1%
No crece nada porque no hay fuente de N ya que, como se ha
dicho anteriormente, la fuente de C, la fuente de N y las sales
son componentes mnimos en el medio de cultivo. Sin
embargo, hay microorganismos que pueden crecer sin N en el
medio ya que lo pueden coger del aire. Se facilita el
crecimiento de las bacterias que son capaces de fijar N frente a
aquellas que no son capaces.
Catabolismo microbiano

En la primera etapa del catabolismo, las molculas ms grandes de

nutrientes (protenas, polisacridos y lpidos) son hidrolizadas o
descompuestas en sus partes constituyentes. Las reacciones qumicas que
tienen lugar durante esta etapa no liberan mucha energa. Los aminocidos,
los monosacridos, los cidos grasos, el glicerol y otros productos
resultantes de esta primera etapa son degradados a una serie de molculas
ms sencillas en la segunda etapa, formndose generalmente metabolitos
tales como acetilcoenzima A, piruvato y productos intermedios del ciclo de
los cidos tricarboxlicos. El proceso de la segunda etapa puede operar de
forma aerobia o anaerobia, y a menudo produce cierta cantidad de ATP as
como NADH, FADH2 o ambos. Por ltimo, durante la tercera etapa del
catabolismo se incorpora un nutriente carbonado al ciclo de los cidos
tricarboxlicos, y las molculas son oxidadas completamente a CO2 con
produccin de ATP, NADH Y FADH 2. El ciclo opera de forma aerobia y es
responsable de la liberacin de una gran cantidad de energa. Gran parte

del ATP derivado del ciclo de los cidos tricarboxlicos (y de las reacciones
de la segunda etapa) procede de la oxidacin del NADH y el FADH2 por la
cadena transportadora de electrones. El oxgeno, o a veces otra molcula
inorgnica, es el aceptor final de electrones.
Cadena de transporte de electrones
Tiene lugar en la membrana mitocondrial. Durante este paso, los iones de hidrgeno
(o un par de electrones) son transportados desde un soporte a otro y, finalmente, se utilizan
para reducir el oxgeno a agua. Durante esta transferencia de electrones, se libera gran
cantidad de energa que est en la forma de ATP, una rica molcula de energa que se puede
llamar la moneda energtica de la clula.

Balance energtico de la respiracin aerbica

El balance del ATP sintetizado durante la respiracin aerbica a partir de
una molcula de glucosa es el siguiente:

El nmero mximo terico de ATP que es posible obtener al final de la

respiracin aerbica es igual a 38.
Se obtienen 2 ATP por fosforilacin a nivel de sustrato durante la gluclisis y
2 GTP por el mismo mecanismo durante el ciclo de Krebs. El GTP es
fcilmente convertido en ATP, transfiriendo el grupo fosfato desde este
ltimo
al
GDP.
Adems, se contabilizan las molculas de ATP sintetizadas por fosforilacin
oxidativa acoplada a la cadena respiratoria: 3 ATP por cada NADH y 2 ATP
por cada FADH2 que ingresan a la cadena de transporte de electrones.
Sin embargo, en algunos casos, este balance puede verse reducido a 36
ATP. Esta merma obedece a que las coenzimas NADH producto de la
gluclisis se generan en el citosol, a diferencia de las dems coenzimas
reducidas durante la descarboxilacin del piruvato y el ciclo de Krebs, que
se encuentran en la matriz mitocondrial. Los electrones del NADH
proveniente de la gluclisis deben llegar a la matriz mitocondrial, a fin de
que puedan ser entregados a la cadena respiratoria. El pasaje de los
electrones a travs de ambas membranas mitocondriales se realiza
mediante un mecanismo denominadolanzadera, en el que los electrones
son transferidos a compuestos intermediarios y finalmente a una coenzima
ubicada en la matriz de la mitocondria. Existen distintas lanzaderas, segn
el tipo celular. En un tipo de lanzadera, el aceptor de los electrones en la
mitocondria es el NAD+; en otro tipo, el FAD. En el segundo caso, la
cantidad de ATP obtenida por fosforilacin oxidativa a partir de la gluclisis
es de 4 en lugar de 6 ATP, lo que cambia el total de 38 a 36 ATP.

Catabolismo de hetertrofos quimioorgantrofos

Aerobios estrictos: respiracin aerobia

Dcese del microorganismo al que le es imprescindible el oxgeno
libre, ya que su fuente de energa la obtiene de la respiracin
aerbica, donde se requiere oxgeno molecular como oxidante
terminal. El aceptor final es el O2.
Anaerobios facultativos: respiracin aerobia o fermentacin
Son aquellos microorganismos aerbicos que pueden desarrollarse en
ausencia de oxgeno por medio de la fermentacin.
Anaerobios: respiracin anaerobia
Es un proceso metablico que consiste en la oxidorreduccin de
diferentes compuestos. Los electrones liberados son aceptados por
molculas diferentes del oxgeno. Es decir, la respiracin anaerobia es
un proceso que se desarrolla sin oxgeno.

Bacterias anaerobias facultativas

Usos del piruvato

Respiracin anaerobia
En este proceso no se usa oxgeno, sino otra sustancia oxidante distinta
como el sulfato o el nitrato. En las bacterias con respiracin anaerobia
interviene tambin una cadena transportadora de electrones en la que se
reoxidan
los coenzimas reducidos durante
la oxidacin de
los
substratos nutrientes; es la anloga de la respiracin aerobia, ya que se
compone
de
los
mismos
elementos
(citocromos, quinonas, protenas ferrosulfricas, etc.). La nica diferencia,
por lo tanto radica, en que el aceptor ltimo de electrones no es el oxgeno.
Todos los posibles aceptores en la respiracin anaerbica tienen
un potencial de reduccin menor que el O2, por lo que, partiendo de los
mismos sustratos (glucosa, aminocidos, triglicridos), se genera
menos energa en
este metabolismo que
en
la respiracin
aerobia convencional.

No hay que confundir la respiracin anaerbica con la fermentacin, en la

que no existe en absoluto cadena de transporte de electrones, y el aceptor
final de electrones es una molcula; estos dos tipos de metabolismo tienen
solo en comn el no ser dependientes del oxgeno.
En la siguiente tabla se muestran distintos aceptores de electrones, sus
productos y algunos ejemplos de microorganismos que realizan tales
procesos:

Aceptor

Producto final

Microorganismo

Nitrato

Nitritos, xidos de
nitrgeno y N2

Pseudomonas, Bacillus

Sulfato

Sulfuros

Desulfovibrio, Clostridium

Azufre

Sulfuros

Thermoplasma

Tiosulfato

Sulfato y sulfuro

Thermotogae, Thermoana
erobacteriales

CO2

Metano

Methanococcus, Methanos
arcina, Methanopyrus

Fe3+

Fe2+

Shewanella, Geobacter, G
eospirillum, Geovibrio

Mn4+

Mn2+

Shewanella putrefaciens

Selenato

Selenito

Arsenato

Arsenito

Desulfotomaculum

Fumarato

Succinato

Wolinella
succinogenes, Desulfovibri
o, E. coli

DMSO

DMS

Campylobacter, Escherichi
a

TMAO

TMA

Clorobenz
oato

Benzoato

Desulfomonile

Utilizacin de nitrato como aceptor de electrones

Muchas bacterias anaerbicas

contienen

las enzimas nitrato-

reductasas que catalizan la reduccin de nitrato a nitrito:2

NO3- + 2e + 2H+ NO2 + H2O

No obstante, el producto resultante (nitrito) es muy txico por lo que

algunas especies de Pseudomonas y Bacillus pueden reducir el nitrato ms
all del nivel de nitrito, hasta nitrgeno:
2NO3- + 10e + 12H+ N2 + 6H2O
El resultado final, nitrgeno, es un gas inerte y no txico. Este proceso se
conoce como desnitrificacin que, si se produce en el suelo se considera
perjudicial para la agricultura ya que ocasiona la prdida de los nitratos,
necesarios para el crecimiento de las plantas.
Las bacterias reductoras de nitratos son anaerobias facultativas ya que el
uso de nitratos y nitritos como aceptores de electrones son procesos
alternativos que pueden utilizar estas bacterias para crecer en ausencia de
oxgeno. En presencia de l, aunque el nitrato est presente, la respiracin
procede enteramente a travs de la cadena aerbica de transporte de
electrones.

Utilizacin de sulfato como aceptor de electrones

La utilizacin de sulfato como aceptor de electrones es una habilidad rara,

restringida al gnero Desulfovibrio y algunas especies de Clostridium. Todas
estas bacterias son anaerbicas estrictas, de modo que la reduccin del
sulfato no es una alternativa de su metabolismo, como lo es la reduccin del
nitrato. La reaccin es la siguiente:
SO42 + 8e + 8H+ S2 + 4H2O
Las bacterias reductoras de sulfatos atacan solo unos pocos compuestos
orgnicos,

siendo

el cido

lctico y

los cidos

dicarboxlicos de

4 carbonos sus principales substratos.

Un

Utilizacin de dixido de carbono como aceptor de electrones

pequeo

grupo

de procariotas anaerobias estrictas,

las arqueas

productoras de metano, utilizan dixido de carbono como aceptor de

electrones; la reduccin da lugar a metano (CH4). El caso ms simple es la
oxidacin de hidrgeno molecular, reaccin productora de energa:
4H2 + CO2 CH4 + 2H2O
El hidrgeno no es un gas comn en la biosfera, de modo que estos
microorganismos habitan lugares muy especficos como en sedimentos
anaerobios del fondo de lagos y pantanos, o en el tubo digestivo de
los rumiantes, donde otros microorganismos producen el H 2 libre que
precisan.

Utilizacin de ion frrico como aceptor de electrones

El ion frrico (Fe3+) puede ser utilizado por varias bacterias como aceptor de
electrones, reducindolo a ion ferroso (Fe2+); este proceso lo realizan
muchos de los microorganismos que reducen nitrato. El ion frrico se halla
en el suelo y las rocas, muchas veces formando hidrxido frrico (Fe(OH)3)
insoluble; en condiciones anaerbicas, estas bacterias pueden reducirlo al
estado ferroso. El ion ferrosos es mucho ms soluble que el frrico, con lo
cual el hierro se moviliza, siendo este un primer paso importante en la
formacin de un tipo de depsito mineral llamado hierro de los pantanos.
Alternativas catablicas
Las clulas pueden generar energa mediante distintos mtodos a la
fermentacin y a la respiracin aerbica. Estos son la respiracin
anaerbica, la quimiolitotrofa y la fototrofa.

Respiracin anaerbica
Se trata de una modificacin de la respiracin en la que se usan
aceptores de electrones diferentes del oxgeno. Los aceptores de
electrones utilizados en la respiracin anaerbica son nitratos (NO3-),
hierro frrico (Fe3+), sulfatos (SO42-), carbonatos (CO32-) e incluso
algunos compuestos orgnicos. Se libera menos energa cuando se
usan estos aceptores en vez de oxgeno. Sin embargo, el uso de estos
aceptores alternativos permite a los microorganismos respirar en
ambientes que carecen de oxgeno.

Quimiolitotrofa
Se utilizan compuestos inorgnicos en vez de orgnicos. Los
organismos usan compuestos inorgnicos como donadores de
electrones. Entre los donadores inorgnicos estn el sulfuro de
hidrgeno (H2S), gas hidrgeno (H2), hierro ferroso (Fe2+) y
amoniaco (NH3). El metabolismo de los quimiolitotrofos implica
normalmente procesos de respiracin aerbica pero que usan una
fuente de energa inorgnica en vez de orgnica. Los quimiolitotrofos
tienen componentes para el transporte de electrones similares a los
de los quimiorganotrofos y originan una fuerza motriz de protones
que dirige la sntesis de ATP. La diferencia entre estos es la fuente de
C, pues los quimiorganotrofos suelen usar compuestos como la
glucosa tanto para la fuente de C como para la de energa, mientras

que los quimiolitotrofos suelen usar CO2 como fuente de C y, por

tanto, son auttrofos.

Fototrofa
Estos microorganismos utilizan la luz como fuente de energa en el
proceso llamado fotosntesis. Finalmente lo que se consigue es la
creacin de una fuerza motriz de protones que puede ser usada para
la sntesis de ATP. La mayora de los fototrofos usan la energa
conservada en el ATP para la asimilacin del CO2 como fuente de C,
para la biosntesis y son llamados fotoauttrofos. Sin embargo,
algunos fototrofos emplean compuestos orgnicos como fuente de C
y la luz como fuente de energa y se denominan fotoherotrofos.

Tipos nutricionales de microorganismos

Hetertrofos quimioorgantrofos:
Obtienen energa y carbono de compuestos orgnicos
Aceptores de electrones O2 (aerobios) u otros (anaerobios)
Auttrofos quimiolittrofos:
Obtienen energa de compuestos inorgnicos
CO2 fuente carbono
Auttrofos fotolittrofos:
Luz fuente de energa
Compuesto orgnico o CO2 como fuente de carbono

TEMA 5. CRECIMIENTO MICROBIANO Y SU CONTROL

Se suele definir el crecimiento de cualquier sistema biolgico como el
incremento ordenado de todos los elementos componentes de ese sistema,
lo cual implica un aumento de la masa celular que eventualmente conduce

a la multiplicacin celular. En organismos pluricelulares dicha multiplicacin

se traduce en un aumento del tamao del individuo, mientras que en
unicelulares que se dividen por fisin o por gemacin, lo que ocurre es un
aumento de la poblacin. El crecimiento bacteriano podemos estudiarlo
desde dos puntos de vista:
A escala individual
A escala poblacional
Fisin binaria
En la mayora de los procariotas, el crecimiento de una clula individual
continua hasta que se divide en dos clulas nuevas, es decir, se forman dos
clulas a partir de una.
Las clulas se alargan hasta
aproximadamente el doble de la
longitud de la clula ms pequea y
luego forma un tabique que acaba por
separar la clula en dos clulas hijas.
Dicho tabique se conoce como septo
y es el resultado del crecimiento
hacia dentro de la membrana
citoplasmtica y la pared celular
desde direcciones opuestas hasta que
las dos clulas hijas se separan.
Durante el ciclo de crecimiento, todos
los constituyentes celulares
aumentan, de modo que cada clula
hija recibe un cromosoma completo y
suficientes copias de todas las macromolculas, monmeros e iones
inorgnicos, como para existir como clula independiente.
El reparto del DNA replicado entre las dos clulas hijas depende de la unin
del DNA a la membrana durante la divisin y la segregacin real de las dos
copias es facilitada por la formacin del septo.
El tiempo necesario para completar un ciclo de crecimiento celular (tiempo
de generacin) en las bacterias es muy variable y depende de varios
factores, tanto nutricionales como genticos. La bacteria E. coli puede
completar un ciclo en 20 min. Hay bacterias que lo pueden hacer ms
rpidamente pero en general lo hacen ms lentamente.
Protenas Fts y el plano de la divisin celular
En el proceso de divisin celular se han identificado varias protenas
esenciales denominadas protenas Fts (Filamentous temperature sensitive).
Describen las propiedades de las clulas con mutaciones en los genes que

las codifican. Estas protenas estn distribuidas universalmente entre

procariotas y tambin se han encontrado en mitocondrias y cloroplastos.
Las protenas Fts forman en la clula
un aparato de divisin que se llama
divisoma, cuya formacin comienza
con la unin de molculas de FtsZ
formando un anillo alrededor del
cilindro celular hacia el centro de la
clula. Esta rea define el plano de
divisin celular. Las molculas de
FtsZ polimerizan hasta formar un
anillo continuo que luego atrae a
otras protenas FtsZ. El divisoma
parece dirigir la sntesis de nuevos
materiales de membrana y de pared
celular en las dos direcciones hasta
que la clula alcanza
aproximadamente el doble de su
longitud original; a continuacin
ocurre la constriccin para formar las
dos clulas hijas.

La replicacin del DNA ocurre antes de que se forme el anillo de FtsZ. El

cese de la sntesis del DNA parece ser la seal para la formacin del anillo, y
esta estructura aparece en el espacio situado entre los dos nucleoides
duplicados
A medida que progresa la elongacin celular, las dos copias del cromosoma
se separan y cada uno termina en una clula hija. Cuando ocurre la
constriccin, el anillo de FtsZ comienza a despolimerizarse y se dispara
hacia el interior de esa zona la sntesis de los materiales de la pared celular
que llegan a sellar la regin de unin de una clula con otra.
Las protenas Fts constituyen el engranaje clave en la divisin celular de
procariotas.
La protena MreB es importante ya que, al igual que la pared celular, ayuda
a mantener la estructura de algunas bacterias, es decir, determina la forma
en procariotas. Si alguna bacteria no tiene este gen, se volvera redonda, es
decir, coco, por tanto, las bacterias con forma de coco no necesitan esta
protena. Esta protena forma bandas filamentosas en espiral en el interior
de la clula.
Crecimiento de poblaciones
El crecimiento se define como un aumento en el nmero de clulas
microbianas de una poblacin; tambin puede medirse como un incremento

de la masa celular. La velocidad de crecimiento es el cambio de nmero de

clulas o de la masa celular por unidad de tiempo. El intervalo para la
formacin de dos clulas a partir de una supone una generacin, y el tiempo
transcurrido para que esto ocurra se llama tiempo de generacin. De modo
que, el tiempo de generacin es el tiempo que se requiere para que la
poblacin se duplique. Durante cada generacin, tanto el nmero de clulas
como la masa celular se duplican. El tiempo de generacin depende del tipo
de microorganismo, del medio cultivo utilizado y de las condiciones de
incubacin empleadas.
Se representa un experimento de
crecimiento iniciado con una sola clula
que tiene un tiempo de generacin de
30 min. Este modelo de incremento de
la poblacin, en el que en cada periodo
fijo de tiempo se duplica el nmero de
clulas, se denomina crecimiento
exponencial. Si se representa
aritmticamente el nmero de clulas
de un experimento en funcin del
tiempo transcurrido, se obtiene una
curva cuya pendiente aumenta
constantemente, pero de esta forma es
difcil obtener informacin sobre el
crecimiento, por ello, si se representa
en escala semilogartmica, se obtiene
una lnea recta, de manera que las determinaciones son sencillas.

Se representa el mtodo de determinacin de los tiempos de generacin (g)

de poblaciones creciendo exponencialmente. n es el nmero de
generaciones que han ocurrido en el tiempo t.

Una caracterstica del crecimiento

exponencial es que la velocidad del
aumento del nmero de clulas es
inicialmente lenta pero incrementa cada
vez ms con el tiempo, por ello, cuando un
producto no estril se deja en condiciones
que permiten el crecimiento microbiano
unas cuantas horas, durante las primeras
fases del crecimiento exponencial el efecto
no es muy relevante, pero al dejarlo durante
ms horas, el resultado es desastroso para
el producto.

La bacteria E. coli se duplica cada 20 min y

pesa entre 10-12 g. Si esto lo hace durante
48 h, su peso ser de aproximadamente 1025 T, que es 4000 veces la masa
de la tierra. Sin embargo, esto no ocurre porque la bacteria crece solo
durante una parte de su ciclo vital, pues deja de crecer cuando agote sus
nutrientes.
Curva de crecimiento
El mtodo de cultivo ms simple es el cultivo discontinuo en el que el
microorganismo crece a partir de una limitada cantidad de medio hasta que
se agota un nutriente esencial o se acumulan productos txicos hasta
niveles que inhiben el crecimiento. En un sistema discontinuo el cultivo
pasar por una serie de fases:

1. Fase de latencia: se inocula una poblacin microbiana en un medio fresco

pero el crecimiento no comienza inmediatamente ya que las clulas deben
adaptarse a las nuevas condiciones ambientales.
2. Fase exponencial: los microorganismos ya se adaptaron al medio, de
modo que cada clula se divide para formar dos, comienza a duplicarse de
forma exponencial por unidad de tiempo. Generalmente, los
microorganismos procariticos crecen ms rpido que los eucariticos; y los
eucariotas ms pequeos lo hacen ms rpido que los de mayor tamao.
3. Fase estacionaria: las bacterias no crecen de una forma indefinida sino
que sucede algo: un nutriente esencial del medio de cultivo se usa y llega a
ser un factor limitante del crecimiento, o bien, se acumulan en el medio
algunos productos de desecho hasta niveles inhibitorios que hacen que cese
en crecimiento exponencial. En esta fase, no hay aumento ni descenso neto
en el nmero de clulas. Tambin puede ocurrir que algunas clulas crecen
y otras mueren, de modo que hay un equilibrio y no hay aumento ni
disminucin en el nmero de clulas (crecimiento crptico)
4. Muerte: las clulas pueden continuar vivas y metablicamente activas
tras la fase estacionaria pero tambin pueden morir, de modo que
disminuye el nmero de las mismas. En algunos casos, la muerte se
acompaa de una lisis celular real. En esta fase, la curva tambin es
exponencial; no obstante la velocidad en este caso suele ser menor que la
velocidad de crecimiento.
Cultivo continuo
El cultivo continuo es un cultivo balanceado mantenido por tiempo
indefinido por un sistema abierto de flujo que se compone de una cmara
de cultivo de volumen constante a la que le llega un suministro de
nutrientes y de la que se eliminan o separan los productos txicos de
desecho (mediante un rebosadero).
Una vez que el sistema alcanza el equilibrio, es decir, que el nmero de
clulas y la concentracin de nutrientes en la cmara permanecen
constantes, se dice que el sistema est en estado estacionario, con las
clulas creciendo exponencialmente. Las clulas se encuentran en
crecimiento exponencial continuamente ya que no les falta ningn
nutriente.
Una de las maneras de lograr un cultivo continuo es mediante el
llamado quimiostato, a travs del cual se puede controlar de modo
independiente la densidad de la poblacin celular y la velocidad de
crecimiento del cultivo. La densidad celular en el equilibrio se controla
ajustando el factor de dilucin (D), mientras que la velocidad de crecimiento
se controla variando la concentracin del nutriente limitante en la cmara
reservorio (SR).

Recuento de bacterias

Procedimiento de recuento
microscpico
directo

utilizando una cmara de tipo Petroff-Hausseur.

Se trata de un mtodo de recuento directo, es decir, se cuenta la
muestra con el microscopio. En este caso se utilizan muestras
liquidas, por ello se emplea una cmara de recuento especial que es
un porta sobre cuya superficie de vidrio est marcada una rejilla con
pequeos cuadrados de rea conocida.
Es un mtodo rpido pero presenta las siguientes limitaciones:
o No se distinguen las clulas vivas de las muertas
o Las clulas pequeas son difciles de ver y algunas pueden
perderse en el recuento
o En ocasiones, la precisin es difcil.
o Se requiere un microscopio especial cuando las muestras no se
tien
o Mtodo no adecuado para suspensiones con baja densidad
celular
o Las clulas mviles se deben inmovilizar antes del recuento
Determinacin de clulas viables mediante recuento en placa
Se miden nicamente las clulas vivas, es decir, aquellas que son
capaces de dividirse y dar lugar a una descendencia. En este caso, se
cuenta el nmero de clulas de la muestra que es capaz de formar
colonias sobre un medio slido adecuado.
Hay dos maneras de realizar un recuento en placa para viables: el
mtodo de extensin en placa y el mtodo de vertido en placa. En el
mtodo de extensin en placa un cierto volumen de cultivo diluido no
superior a 0.1 mL (porque si no el exceso de lquido no se absorbe y
origina problemas en el recuento al favorecer la extensin y mezcla
de las colonias) se extiende sobre la superficie de una placa con
medio solido utilizando un asa estril de extensin. La placa se incuba
despus hasta que aparecen las colonias y se cuenta su nmero. Es

importante que la superficie del medio est seca de modo que el

lquido de la muestra se absorba. Por otro lado, en el mtodo del
vertido en placa se pipetea un volumen conocido (0.1-1.0 mL) de
cultivo en una placa Petri estril sobre la que se aade el medio con
agar fundido y se mezcla todo bien con suaves movimientos de la
placa sobre la superficie de la mesa antes de dejar que se solidifique.
En este mtodo, el organismo debe ser capaz de resistir la
temperatura del agar fundido a 45 oC.

En estos mtodos es importante que el nmero de colonias que

aparezcan en las placas no sean demasiado grandes, pues algunas se
podran fusionar dando estimaciones errneas. Pero tampoco debe
ser demasiado bajo para que el clculo sea estadsticamente
significativo.

Determinacin de clulas viables utilizando diluciones seriadas de la

muestra
Para obtener el nmero apropiado de colonias se diluye la muestra
con un lquido estril.
Como no se suele saber de antemano el nmero de clulas viables, se
realiza ms de una dilucin. Lo ms frecuente es realizar diluciones
decimales de la muestra.

El lquido estril a utilizar

puede ser agua pero una
solucin
salina
equilibrada o medio de
cultivo suele dar mejor
recuperacin.
El factor de dilucin es el
inverso de la dilucin.
Consiste en coger 1 mL
de la muestra inicial y
aadirlo a un tubo que
contiene 9 mL de lquido
de medio de cultivo. A
continuacin, se coge 1
mL de este tubo y se
aade
a
otro
que
contiene 9 mL de lquido
de medio de cultivo. Y
as,
sucesivamente.
Cuando se han hecho
todas las diluciones, se coge una cantidad de cada tubo y se aade a
una placa Petri distribuyndola por toda ella. Cada una de las placas
se incuba y, en el caso de E. coli, se hace a 37 oC durante 24 h
(condiciones ptimas).
Una clula bacteriana da lugar a una colonia. Conforme se va
diluyendo se tienen situaciones en las que se observan clulas
aisladas de otras y dan lugar a colonias visibles.
La ventaja de este mtodo es que solo cuantifica las clulas vivas.
Adems, es el mtodo habitual del recuento de bacterias.
Crecimiento en micelio
Es importante porque la mayora de los antibiticos son producidos por
Streptomyces.
Medida turbidimtrica del crecimiento
Una suspensin celular aparece turbia a la vista porque las clulas dispersan
la luz que atraviesa la suspensin. Cuantas ms clulas estn presentes
mayor ser la luz dispersada y, por tanto, mayor la turbidez. La turbidez
puede medirse con un fotmetro o espectrofotmetro que hacen pasar la luz
a travs de suspensiones celulares y detectan la cantidad de luz emergente
no dispersada. La diferencia entre estos dos instrumentos es que un
fotmetro utiliza un filtro simple para generar luz incidente de longitud de
onda relativamente corta, mientras que un espectrofotmetro emplea un
prisma o red de difraccin para generar luz incidente en una banda muy
estrecha de longitudes de onda. Las longitudes de onda ms utilizadas para
medir la turbidez son 540 nm (verde), 600 nm (naranja) y 660 nm (rojo).

Se realizan las medidas de turbidez mediante un fotmetro o mediante un

espectrofotmetro. La clula fotoelctrica mide la luz incidente no
dispersada por las clulas en suspensin y da lecturas de densidad ptica o
unidades fotomtricas.
Para obtener la curva estndar se relaciona alguna medida directa del
nmero de clulas (microscpica o recuento de viables) o de la masa (peso
seco) con la medida indirecta obtenida por turbidez. Esta curva de
calibracin puede contener datos del nmero de clulas o de la masa
celular, permitiendo la estimacin de estos parmetros a partir de una
simple lectura de la turbidez.

Factores que influyen en el crecimiento de las bacterias

Temperatura
Es un factor importante. A temperaturas muy altas o muy bajas los
microorganismos no crecern.
A medida que se eleva la temperatura, las reacciones qumicas y
enzimticas de la clula son ms rpidas y el crecimiento se acelera.
Sin embargo, por encima de una cierta temperatura algunas
protenas particulares pueden sufrir daos irreversibles. En

consecuencia, dentro de un cierto margen, un aumento de

temperatura supone un incremento en el crecimiento y en el
metabolismo hasta un punto en que tienen lugar las reacciones de
inactivacin. Por encima de este punto, las reacciones celulares caen
rpidamente a cero.
Entonces, para cada
organismo existe una
temperatura mnima (por
debajo de ella no es posible
el crecimiento), una
temperatura optima (a la
que se produce el
crecimiento ms rpido) y
una temperatura mxima
(por encima de la cual no es
posible el crecimiento).
Estas tres temperaturas se
denominan cardinales y
dependen de cada tipo de organismo y de los factores de al ambiente
como la composicin del medio.
Cabe destacar que la temperatura ptima siempre est ms cerca de
la mxima que de la mnima.
En funcin de estos puntos cardinales, las bacterias se clasifican:
o Psicrfilos. Son bacterias amantes del fro y se encuentran en
los polos, de manera que las temperaturas ptimas son bajas.
o Mesfilos. Se trata de bacterias amantes de lo medio, de
manera que las temperaturas ptimas son moderadas. Se
encuentran en animales de sangre caliente y en medios
acuticos y terrestres de latitudes templadas y tropicales.
o Termfilos. Son bacterias amantes de la temperatura y las
temperaturas ptimas son altas. Se trata de enzimas muy
resistentes al calor.
o Hipertermfilos. Son bacterias amantes de las temperaturas
elevadas y las temperaturas ptimas son muy elevadas. Se
encuentran en fuentes termales, gisers y fuentes
hidrotermales submarinas.

pH
Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el
crecimiento y normalmente posee un pH ptimo bien definido.
Existen dos agrupaciones:
o Acidfilos. Se trata de organismos que crecen mejor a bajo pH.
Los hongos son ms acidofilos que las bacterias. Tambin
existen bacterias que son acidfilas estrictas incapaces de
crecer a pH neutro.
Cuando el pH es neutro, la membrana citoplasmtica de las
bacterias muy acidfilas se disuelve y las clulas se lisan, por
ello, para que dicha membrana sea estable, se requieren
elevadas concentraciones de iones hidrgeno.
o Alcalfilos. Se trata de organismos que presentan un pH ptimo
de crecimiento muy elevado. Generalmente se encuentran en
hbitat muy bsicos como lagos sdicos y suelos muy
carbonatados.

Algunos microorganismos pueden vivir a pH muy alto o muy bajo. El

pH intracelular est prximo a la neutralidad.

Concentracin salina
Los microorganismos se agrupan en distintos grupos en funcin de
este parmetro:
o No halfilos. Estos microorganismos apenas aguantan la
presencia de sal, de modo que cuando no pueden soportar ms
cantidad de sal, dejan de crecer.
o Halotolerantes. Toleran la sal hasta un 6%. El agua de mar
contiene un 3%.
o Halfilos. Son amantes de la sal y la aguantan hasta un 15%
aproximadamente.
Discretos: 1 6%
Moderados: 6 15%
o Halfilos extremos. Son microorganismos que crecen en
ambientes muy salinos por encima del 15% NaCl, por debajo
de este valor no crecen. Estos se encuentran normalmente en
las salinas. Para su crecimiento ptimo se requiere 15 30% de
NaCl.
Muchas bacterias constan de solutos compatibles de tipo polimrico
que ellas sintetizan o degradan para aumentar o disminuir la presin
osmtica interior con respecto a la exterior para equilibrar el interior y
el exterior. No alteran el metabolismo. La mayora son carbohidratos
como sacarosa, trealosa, etc.

Relacin de los microorganismos con O2

Hay microorganismos que viven en presencia de oxgeno y otros que
viven en ausencia del mismo. El oxgeno es poco soluble en agua y
puede consumirse rpidamente debido a las actividades respiratorias
de los microorganismos en los hbitat acuticos y hmedos
(especialmente cuando contienen abundancia de materia orgnica).
Por ello, existen en el planeta abundantes hbitat microbianos
anxicos (libres de O2), como los fangos y otros sedimentos, pantanos
y cinagas, suelos forestales inundados y muchos otros ambientes.
En
estos
hbitat
anxicos
proliferan
microorganismos,
particularmente procariticos. Los microorganismos son muy variados
en cuanto a la necesidad o tolerancia de oxgeno:

o
o

o
o

Aerobios. Crecen en presencia de oxgeno en concentraciones

normales (21% del aire) o en concentraciones ms elevadas.
Microaerfilos. Se trata de aerobios que pueden usar el O 2 solo
cuando est presente a niveles ms bajos que el aire, debido a
su limitada capacidad para respirar o a causa de que existe
alguna molcula sensible al oxgeno, por ejemplo alguna
enzima lbil.
Aerobios facultativos. Pueden crecer tanto en condiciones
aerbicas como anaerbicas.
Anaerobios. No pueden respirar O2.
Anaerobios aerotolerantes. Toleran el oxgeno y crecen
en su presencia aunque no pueden usarlo.
Anaerobios estrictos. Son inhibidos o incluso mueren en
presencia de oxgeno, lo que puede ser debido a que son
incapaces de eliminar algunos productos txicos que se
originan en el metabolismo del oxgeno.

Para el crecimiento de muchos microorganismos aerbicos es

necesario suministrar una fuerte aireacin. Esto se debe a que el O 2
es poco soluble en agua y el utilizado por los organismos durante el
crecimiento no se reemplaza lo suficientemente rpido por difusin a
partir del aire. Por tanto, es deseable la aireacin forzada de los
cultivos, bien sea por agitacin de los matraces o tubos o mediante
burbujeo de aire esterilizado a travs del medio mediante un tubo
fino de vidrio o un disco poroso. Normalmente, los aerobios crecen
mejor con aireacin forzada que cuando se suministra O 2 por simple
difusin.
Formas txicos del oxgeno
Se trata de la reduccin
del O2 por la adicin
secuencial de cuatro
electrones.
Los
intermediarios que se
forman son reactivos y
txicos para la clula.

A partir de la reduccin de O 2 a H2O, se producen productos laterales

que son formas altamente txicas como el anin superxido (O 2-), el
perxido de hidrgeno (H2O2) y el radical hidroxilo (OH). El
superxido es muy reactivo y puede oxidar prcticamente cualquier
compuesto orgnico de la clula, como las macromolculas. Los
perxidos pueden daar los componentes celulares, pero
generalmente no son tan txicos para la clula como el anin
superxido o los radicales hidroxilo. Estos ltimos son los ms

reactivos de todas las especies txicas del oxgeno y pueden oxidar

instantneamente cualquier sustancia orgnica de la clula.
A partir del H2O2 se forman pequeas cantidades de OH, pero como
los perxidos no se acumulan en la clula, esta fuente de radicales
hidroxilo prcticamente se elimina.
Enzimas que destruyen formas txicas de oxgeno

Las catalasas y las peroxidasas atacan al perxido de hidrgeno; el

segundo difiere del primero porque requiere un reductor,
normalmente NADH, para originar H2O como producto. Las
superxido dismutasas son protenas que contienen metales,
fundamentalmente cobre y zinc, manganeso o hierro. La funcin
conjunta de la superxido dismutasa y de la catalasa puede convertir
el superxido en oxgeno. La superxido reductasa cataliza la
reduccin por un electrn de O 2 a H2O2 utilizando citocromo C
reducido
como
donador
de
electrones.
Mtodo de ensayo de la presencia
de
catalasa
en
un
cultivo
microbiano. Un asa de cultivo
cargada con clulas recogidas de la
superficie de un cultivo slido se mezcla con una gota de agua
oxigenada al 30% sobre un portaobjetos. La inmediata aparicin de
burbujas indica la presencia de catalasa.
Las burbujas proceden del O2 generado en la reaccin:
H2O2 + H2O2 2 H2O + O2
Crecimiento de microorganismos frente al oxigeno
(a) Aerobio estricto. Este tipo de microorganismo est en contacto con el
aire y solo crecen en la superficie, por eso penetra slo una corta distancia
en el tubo.

(b) Anaerobio. Son sensibles al oxgeno, slo

crecen lejos de la superficie ya que no estn
en contacto con el aire.
(c) Aerobio facultativo. Crecen tanto en
presencia como en ausencia de oxgeno y
por ello, crecen por todo el tubo.
(d) Microaerfilos. Crecen en la zona prxima
al O2 pero no en contacto directo.
(e) Anaerobios aerotolerantes. Crecen por
todo el tubo ya que el O2 no les importa.
Control del crecimiento microbiano
El control puede efectuarse limitando el crecimiento de los
microorganismos, proceso llamado inhibicin; o destruyendo los organismos
por esterilizacin, muerte o eliminacin de todos los organismos viables de
un medio de cultivo. Los agentes que destruyen o matan las bacterias son
bactericidas.
Si se desea esterilizar una poblacin microbiana, se tardar ms a bajas
temperaturas que a temperaturas elevadas. Por tanto es necesario ajustar
el tiempo y la temperatura para conseguir la esterilizacin para cada serie
especifica de condiciones. El tipo de calor tambin es importante: el calor
hmedo tiene mayor poder de penetracin que el calor seco y produce una
reproduccin ms rpida del nmero de organismos vivos a una
temperatura determinada.
El tiempo requerido para reducir 10 veces la densidad de poblacin a una
determinada temperatura, se denomina tiempo de reduccin decimal. En el
margen habitual de temperaturas usado en la preparacin de alimentos, la
relacin entre el tiempo de reduccin decimal y la temperatura es
exponencial, entonces cuando se representa el logaritmo del tiempo frente
a la temperatura se obtiene una lnea recta. La pendiente de la recta
proporciona una medida de la sensibilidad del organismo al calor en las
condiciones empleadas y la grfica puede usarse para calcular los tiempo
del proceso para conseguir la esterilizacin.
El tiempo de muerte trmica es el tiempo que se necesita para matar todas
las clulas a una temperatura determinada. Esto se hace simplemente
calentando las muestras de una suspensin celular durante diferentes
periodos de tiempo, mezclando las suspensiones calentadas con medio de
cultivo e incubando. Si todas as clulas estn muertas, no se observa
crecimiento en las muestras incubadas.

Tipos de esterilizacin

Esterilizacin por calor seco. Es un proceso que se utiliza para

esterilizar materiales y utensilios, de manera que se someten a 180
oC durante dos horas en un horno Pasteur y, as, se produce la
muerte celular.
Esterilizacin por calor hmedo. Se utiliza para esterilizar medios de
cultivo, tampones, etc. Se realiza en un autoclave que es un
dispositivo sellado que permite la entrada de vapor de agua bajo
presin. El procedimiento consiste en aumentar la presin por encima
de la atmosfrica (1.1kg/cm2) y as alcanzar una temperatura de 121
oC. A esta temperatura el tiempo de esterilizacin es de 10 a 15 min.
Filtracin. Hay materiales
que
pueden
ser
desnaturalizados
a
altas
temperaturas, por ello se
utiliza este proceso. Un filtro
es un dispositivo con poros
demasiado pequeos para
que
pasen
los
microorganismos
pero
suficientemente
grandes
para permitir el paso de un
lquido o un gas.
Radiaciones.
Se
utiliza
principalmente
para
esterilizar
y
descontaminar suministros mdicos (suministros quirrgicos,
materiales de laboratorio de un solo uso, medicamentos e injertos de
tejidos) y en la industria de alimentos durante cortos periodos de
tiempo. Los dos istopos radiactivos ms empleados son 160Co y 137Cs;
son relativamente baratos producidos por fisin nuclear.
Compuestos qumicos: xido de etileno. Se utilizan para esterilizar
algunos componentes de tipo quirrgico as como materiales
termosensibles de laboratorio como material plstico.

Control qumico del crecimiento

Un agente antimicrobiano es un compuesto qumico, natural o sinttico, que
mata o inhibe el crecimiento de los microorganismos. Puede actuar de tres
maneras:

Bacteriosttico.
Agente
que inhibe el crecimiento
pero
las
clulas
no
mueren.
Bactericida. Agente que
mata las clulas pero no
dan lugar a la lisis o rotura
de ellas.
Bacterioltico. Agente que
provoca la muerte celular
por lisis, la rotura celular
se
detecta
por
un
descenso en nmero de
clulas o en la turbidez,
tras aadir el agente.

Desinfectante y antisptico
Un desinfectante es un compuesto qumico capaz de matar las formas
vegetativas de los microorganismos pero no necesariamente las esporas (la
esterilizacin mata tambin a las esporas). Un desinfectante mata
microorganismos y se usa en objetos inanimados.
Por otro lado, los antispticos son agentes qumicos que pueden ser
utilizados tpicamente, es decir, sobre la piel; por tanto, un desinfectante
que puede ser utilizado sobre la piel. Un antisptico mata o inhibe el

crecimiento de los microorganismos y pueden aplicarse sobre tejidos vivos

dada su escasa toxicidad para ellos.
Agentes quimioteraputicos
Son compuestos qumicos que pueden utilizarse por va interna para
controlar el crecimiento de microorganismos y as, controlarse las
enfermedades infecciosas. Caractersticas:

Selectividad. Capacidad de inhibir las bacterias u otros agentes

patgenos sin afectar al hospedador, es decir, atacar especficamente
al microorganismo que se desea eliminar y que no tenga ningn
efecto sobre nuestras clulas.

Carencia de toxicidad. Es decir, que no tenga efectos secundarios

aunque todos lo tienen de manera que hay que hacer un equilibrio
entre el dao que producira el agente y el dao que tiene el
paciente.

Los agentes quimioteraputicos se agrupan en dos categoras generales:

Agentes sintticos. Se obtienen mediante sntesis qumica.

Antibiticos. Se producen debido a un microorganismo que acta
frente a otros.
Semisintticos. Parte de la molcula es natural y otra parte es
modificada por sntesis qumica.

Mecanismo de accin de los agentes quimioteraputicos

Algunos antibiticos nicamente actan en una determinada parte de las
clulas:

Cuantificacin de la actividad antimicrobiana

La actividad antimicrobiana se mide determinando la cantidad ms pequea
que se necesita de un agente para inhibir el crecimiento de un organismo
control, valor llamado concentracin mnima inhibitoria (CMI). Para
determinar este parmetro, se prepara una serie de tubos de cultivo, cada
uno conteniendo un medio con una concentracin diferente del agente, y
despus se inocula la serie de tubos. Tras la incubacin, se observa si ha
habido crecimiento (turbidez) en los tubos. El tubo que contiene la menor
concentracin de agente que inhibe completamente el crecimiento del
organismo usado como referencia define la CMI.
Evaluacin de un antibitico mediante
el mtodo de dilucin en tubo, que
permite determinar la CMI. Se prepara
una
serie
de
tubos
con
concentraciones
crecientes
del
antibitico en el medio de cultivo; se
inoculan todos los tubos y se incuban.
El crecimiento (turbidez) tiene lugar
en los tubos con concentraciones del
antibitico inferiores a la CMI.

Otro procedimiento comnmente utilizado en el estudio de la accin

antimicrobiana es el mtodo de difusin en agar.

Se prepara una placa Petri con un

medio
con
agar
inoculado
uniformemente (en csped) con el
microorganismo a ensayar. Cantidades
conocidas del agente antimicrobiano se
aaden a discos de papel de filtro que
se colocan en la superficie del agar.
Durante la incubacin, el agente
difunde desde el papel de filtro al agar;
la concentracin del agente disminuye
a medida que aumenta la distancia al
papel de filtro. A una determinada
distancia del disco se alcanza la CMI. A
partir de ese punto hay crecimiento,
pero en las proximidades del disco no
lo hay. Se crea entonces una zona de
inhibicin; el dimetro de la zona es
proporcional
a
la
cantidad
de
antimicrobiano aadido al disco, la
solubilidad del agente, el coeficiente de
difusin y la eficacia del agente.
Este mtodo se utiliza normalmente para ensayar la sensibilidad a los
antibiticos en patgenos.