Durante 25 anos, desde 1950 a 1975, a molcula de DNA foi considerada

intocvel. A partir da dcada de 70, porm, ocorreu uma verdadeira revoluo

biotecnolgica. A cincia e a tecnologia profundamente ligadas e
interdependentes, tm fornecido importantes conhecimentos sobre a vida, ao
mesmo tempo que comearam a manipul-la.
Foi possvel abrir a molcula de DNA, extrair genes e transplant-los para
outras clulas, manipular alguns desses genes milhes e milhes de vezes e
transformar, em tubo de ensaio, organismos noutros que no surgiram como
resultado de milhes de anos de evoluo. a engenharia gentica que permite
conhecer melhor algumas das doenas humanas, oferece produtos sedutores +a
indstria e quer libertara agricultura das dependncias em relao aos adubos e
as pesticidas. Parece no haver limites.

Este avano avassalador da engenharia gentica pelo nosso quotidiano

exige que se conheam algumas das suas sofisticadas e surpreendestes tcnicas.
So essas tcnicas que permitem a interveno no genoma de um organismo
construindo novos genomas por recombinao de segmentos de DNA de um
mesmo ou diferentes cromossomas. Assim, a engenharia gentica permite
conhecer melhor algumas doenas humanas, evoluir os mtodos de agricultura
relativamente aos adubos e pesticidas e permite ainda produzir produtos
sedutores indstria (os transgnicos organismos em que todas as clulas so
portadoras de material gentico estranho que lhe foi introduzido por tcnicas de
engenharia gentica).
Foi no sculo XX que foi conseguido o isolamento das enzimas de restrio.
As enzimas de restrio so produzidas por bactrias que reagem assim num
mecanismo de defesa contra os vrus. Existem dois tipos de enzimas de
restrio: do tipo I e do tipo II. Para a tcnica do DNA recombinante (tcnica
que iremos abordar) as enzimas teis so as do tipo II, uma vez que permitem
um maior controlo sobre o local de corte de uma dada enzima e as extremidades
geradas. Reconhecem e atuam sobre sequncias especificas de DNA, catalisando
a destruio de uma ligao fosfodister entre dois nucletidos consecutivos
ligados a determinadas bases, isto , fragmentam o DNA por hidrlise em locais
especficos (as zonas de restrio). A especificidade dada pela sequncia de
nucletidos que a enzima reconhece, dividindo o DNA em fragmentos menores.
Estes fragmentos contm nas suas extremidades a sequncia que foi
reconhecida pela enzima de restrio.

As extremidades podem denominar-se coesivas se estas se ligarem facilmente,

atravs da formao de pontes de hidrognio, ou no coesivas se a ligao com
estas for menos eficiente. Podemos ento dizer que as extremidades so as
pores terminais dos fragmentos de DNA originados pelo corte efetuado pelas
enzimas de restrio. Podem ligar-se, por complementaridade, a outro DNA por
ao de outras enzimas denominadas ligases do DNA. Estas catalisam o
processo que permite que fragmentos de DNA se voltem a ligar.
Algumas enzimas de restrio mais faladas so as EcoR I, Hind III, e Taq I.
Por exemplo, a enzima Taq I reconhece a poro da hlice dupla 5 TGCA 3 e s
cortar a molcula de DNA se encontrar esta sequencia de bases nas duas
cadeias e lidas sempre de 5 para 3, fazendo um corte entre o nucletido de
timina (T) e o nucletido de guanina (G) em cada cadeia.
A tcnica em que temos vindo a falar baseia-se na transferncia de genes de
uma molcula de DNA para outra, ou seja, de um organismo para outro. Por
isso, necessrio algo que leve o material gentico do genoma de onde foi
retirado (o DNA a ser clonado ou inserto) para o genoma que o vai receber. A
este transportador d-se o nome de vetor.
Existem vrios vetores (DNAs recetores): os plasmdeos das bactrias
(molculas de DNA de cadeia de cadeia dupla e circular com capacidade de
replicao autnoma no citoplasma de bactrias) e os vrus. Alguns plasmdeos
possuem genes que lhes conferem resistncia a um antibitico, o que permite
localizar as bactrias que tm o DNA recombinante. Este DNA o que resulta da
introduo artificial, de uma sequncia de DNA de um organismo no genoma de
outro a partir da ao das enzimas de restrio, ligases e vetores. A tcnica do
DNA recombinante tem sido bastante desenvolvida, visto que tem muitas
finalidades, tais como:
. A produo de insulina;
. A produo de algumas protenas do sangue;
. A produo de hormonas do crescimento;
. A produo de alguns tipos de ativadores das defesas orgnicas para o
tratamento do cancro;
. A criao de vacinas sintticas contra, por exemplo, a malria e hepatite B;
. A criao e desenvolvimento de biotecnologias para a pesquisa segura de
substncias cuja manipulao envolve alto risco biolgico;
. Teste de paternidade.

Nesta tcnica as bactrias so denominadas por clulas hospedeiras do gene a

ser copiado. As clulas hospedeiras podem ser tambm leveduras ou outras
clulas eucariticas.
Em suma, a tcnica do DNA recombinante consiste em, utilizando as
enzimas de restrio bacterianas cortar dois DNAs diferentes e, pela ao das
ligases, unir os segmentos resultantes e formar um DNA recombinante.
Recolocado na bactria, o plasmdeo recombinante duplica ao mesmo tempo que
o DNA bacteriano, permitindo a formao de novas cpias, num processo de
multiplicao apelidado clonagem molecular. Apesar de a clonagem molecular
ser eficiente, muito trabalhosa, delicada e demorada. Sendo assim, tem-se
vindo a desenvolver a tcnica do PCR (tcnica da reao em cadeia da
polimerase), tcnica que muito mais rpida para a produo de cpias de DNA.
No podemos acabar esta apresentao sem falar nos organismos
geneticamente modificados (OGM). Podem ser plantas ou animais em cujo
genoma foram introduzidos outros genes que determinam outras caractersticas.
Acerca destes levantam-se algumas questes:
. Estes organismos so prejudiciais sade humana?
. Quais os efeitos que provocam a nvel ambiental?
. Vo perturbar o equilbrio das populaes naturais?