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BIOTECNOLOGA AGRCOLA
Combustibles fsiles formados a partir del depsito de materia orgnica proveniente de
organismos fsiles. Es la unin de carbono e hidrgeno.
35.03%
24.59%
20.44%
8.48%
1.73%
6.33%
3.40%
Carbn: emisin a la atmsfera de xidos de azufre y nitrgeno y de CO 2, provocan efecto invernadero y lluvia cida.
Menor impacto ambiental, fuente de energa renovable (mayor disposicin), desarrollo agrcola
EtOH blending
Program being developed (Mxico)
No blends
Biomass energy sources
Energy crops, byproducts and residues, organic waste
Harvesting/Collecting/Provision
Pretreatament Transport Storage
Termochemical conversion
Physical Chemical
Biochemical conversion
-Carbonizacin
-Gasificacin
-Pirlisis
PRIMERA GENERACIN
Utilizando tecnologa estndar y granos originalmente destinados al consumo humano: maz, caa, soya
Se producen principalmente biodiesel, bioetanol y biogs mediante
Transesterificacin, fermentacin
Aceite de girasol, remolacha, caa, papa, maz. Con lignocelulosa es ms complicado porque la lignina es de difcil
degradacin.
Produccin
Remolacha, caa de azcar, sorgo: Azcares Fermentacin/Destilacin Etanol hidratado Deshidratacin Etanol
Grano, Etanol, DDG
Parte de la salida se retorna para incrementar el rendimiento
Produccin de biodiesel
Aceites vegetales
convencionales
Aceite de girasol
Aceite de colza (canola)
Aceite de coco
Aceite de soya
Aceite de palma
Vegetales no alimenticios.
Ventajas. Secuestro de CO2 (insumos y balances positivos en emisin de gases tipo invernadero).
2006
Biomasa: materia orgnica orgnica originada de forma inmediata de un proceso industrial.
Biomasa natural: producida en los ecosistemas naturales.
Biomasa resiudal: residuos procesos productivos en sectores agrcola, forestal e industrial.
Composicin del material lignocelulsico
Polisacridos
Hemicelulosa: formada por anhicroazcares (pentosas y hexosas) cuya funcin es la unin entre lignina y celulosa.
o Xilanos
o Glucomananos
Lignina: polmero amorfo formado por la polimerizain deshidrogenativo de unidades de fenilpropano. Se hidroliza a 600C
y es degradada por algunos hongos de pudricin blanca.
Desechos lignocelulosicos
Transesterificacin: biodiesel.
Combustin/Bioconversin: biohidrgeno.
Humificacin: biofertilizantes.
MTODOS GENERALES
Residuos de lignocelulosa son madera, grano, desechos slidos municipales, papel, etc. que mediante molido o picado
mecnico pueden ser materia prima para obtener productos de valor agregado (renovables, reciclables, biodegradables).
La idea es que mediante procesos costo-efectivos se produzca energa eficiente y ecoamigable.
Pretratamientos para la materia prima con residuos de lignocelulosa
Qumicos: agentes oxidantes, alcalinos, cidos orgnicos e inorgnicos concentrados o diluidos, procesos con
organosolventes.
Biolgicos. Hongos perfectos e imperfectos, bacterias aerobias y anaerobias, enzimas oxidativas e hidrolticas,
microorganismos modificados, procesos con bio-organosolventes.
Ms all del impacto ambiental las industrias toman en cuenta los costos derivados para decidir qu tratamiento utilizar.
Procesos de obtencin
Hidrlisis cida: desde 1819 mediante el uso de cidos sulfrico, clorhdrico, ntrico, frmico, con el inconveniente de
inhibicin de crecimeinto en condiciones cidas.
cidos concentrados: usan bajas temperaturas y es necesario neutralizar el medio previo a la fermentacin para evitar
inhibidores.
cidos diluidos: implican bajos costos de operacin, uso de altas temperaturas (240C) y dan una produccin final de
1% (p/v)
Proceso en dos etapas
1. Primera etapa: hidrlisis de hemicelulosa (170-190C).
2. Segunda etapa: hidrlisisde la celulosa (200-230C)
Deventajas: produccin de sustancias que degradan azcares, disminucin del rendimiento y efecto negativo en la
fermentacin.
Proceso CASH
Altamente efectivo en materiales con contenido de lignina 15% (rendimientos superiores al 90%)
c) Explosin con CO2
Proceso econmico.
TRATAMIENTOS QUMICOS
a) Agua caliente lquida
200C
No genera inhibicin.
b) Oxidacin hmeda
Disminucin de la cristalinidad.
Lo ideal al momento de disear un proceso es combinar los pre-tratamientos para tener el mejor rendimiento posible
Hay tres tipos de hongos que participan en la degradacin de lignina y que empezaron a estudiarse en los 70s
Hongos de pudricin blanda
Hongos de pudricin parda
Hongos de pudricin blanca (Phanerochaete chrysosporium, Pleurotus, Coriolus, Phlebia, Penyophora)
Tipos de enzimas principales: lignina peroxidasa, manganeso peroxidasa y lacasa (del rbol de la laca japons en
1900s). Tienen un metabolismo mediado por perxido de hidrgeno
27 de septiembre del 2011
1. Cultivo de tejidos en plantas tiene distintos objetivos
Vegetales (5): diagnstico de enfermedades, insecticidas naturales, tcnicas de cultivo de tejidos, mapeo
gentico, tcnicas de micro propagacin
Alimentacin (5): desarrollo de nuevos alimentos (ms funcionales, mejor distribucin), enzimologa y
bioconversin de productos (procesos industriales eficientes), aromatizantes, saborizantes y aditivos
alimentarios, nuevos mtodos de procesamiento de alimentos, nuevos alimentos por procesos fermentativos.
Usos no alimenticios (5): produccin de biomasa / fermentacin, tcnicas de propagacin forestal, tcnicas de
cultivos celulares, tcnicas enzimticas para extraer y procesar productos, expresin y extraccin de
especialidades qumicas y metabolitos de alto valor agregado (antimicrobianos, insecticidas, aditivos de
alimentos).
*Tcnica colorimtrica, extraccin por cromatografa. Aditivos, frmacos antimicrobiano, insecticida.
Se pueden usar diversos tejidos de las plantas para la extraccin de sustancias en las plantas y tambin se usan
diversos solventes para los compuestos obtenidos.
2. Cultivo de tejidos en plantas
Concepto (punto de vista): tecnologa sustentable; produccin bajo condiciones controladas para obtener un
efecto determinado. Ejemplo: cactceas
Desarrollo histrico: comenz con la teora celular, concepto darwiniano de regulacin hormonal, en 1930s:
factor de crecimiento auxinas que favorecen crecimiento; organognesis a partir de races; micro propagacin
Importancia: subsistencia, evolucin y economa. Tratar de incrementar produccin de alimentos
3. Cultivo de tejidos en plantas
rganos + tejidos + clulas + protoplastos producen o conforman las tcnicas de cultivo de tejidos
4. Conocimiento, mejora y productividad de cultivos de tejidos
Implica la aplicacin de conocimientos de las siguientes areas:
Biotecnologa vegetal
Fundamentos
Biologa molecular
Ingeniera gentica
5. Tipos de cultivo de tejidos en plantas
Liquido (tanques): mayor contacto y transferencia, clulas en suspensin, mayor produccin, diferentes
condiciones. Desventaja es que el lquido se modifica hacindose ms viscoso, por lo que las propelas gastan ms
energa al tratar de combatir la resistencia del medio (esfuerzo de corte mayor) porque es lo que ms incrementa
costos en un fermentador.
Agitado: invertir ms en el fermentador, mayor crecimiento por mayor contacto con nutrientes.
Estacionario:
Medio semislido: menos costo, pero menos produccin
6. Germoplasma
1. Cualquier parte de la planta que puede ser usada para hacer una nueva planta.
2. La variabilidad gentica intraespecfica o los materiales genticos que pueden perpetuar una especie o una
poblacin de organismos
a. Bancos creados con semillas, tallos u hojas para llevar un record y para mantener el material gentico
intacto.
b. Utiliza hoja, tallo o semilla con el fin de perpetuar la especie
c. Con los avances tecnolgicos (maz transgnico) se va perdiendo especies criollas.
7. Mtodos de conservacin
Dependen de la naturaleza del material vegetal (no se puede aplicar en todos los casos):
Duracin de ciclo de vida
Modo de reproduccin
Tamao de sus individuos
8. Mtodos de conservacin in situ y ex situ
In situ: la planta se mantiene en su hbitat natural; conservacin de especies en parques nacionales y reservas
ecolgicas. Implica espacios amplios, de donde las especies son nativas, pero la alta deforestacin y el trfico y
migracin ha minado dichas reservas.
Ex situ: mantenimiento en banco de semillas; cultivo in vitro; colecciones de plantas. El riesgo es la alta
contaminacin que se puede dar debido a la riqueza del medio donde crecen bateras y hongos
9. Bancos de semillas
Aumentar el mximo periodo de trasferencia de cultivo, es decir, hacer un nmero mnimo de pases.
11. Qu partes puedo usar en un cultivo?
Meristemos
Semillas
Embriones somticos
Protoplastos
Embriones cigticos
Temperatura
Luminosidad
Medio de cultivo
Inhibidores osmticos
Deshidratadores de tejido
Tipo de propagacin
o Deshidratacin
CRUCIAL
Cmara a 0C
Aire estril
Visual
Recultivo
Capacidad de regeneracin
Conductividad
4 de octubre de 2011
SANEAMIENTO VEGETAL: MERISTEMOS
1. Plantas libre de patgenos
Propagacin vegetativa usando semillas
-Problemas de contaminacin
-Tratamientos qumicos ineficientes
-Causa prdidas econmicas de cultivos atacados por virus aunque se vea sana porque los frutos estn infestados.
Sistemas de saneamiento
-Eliminacin de microorganismos
-Termoterapia
-Incubacin de especmenes a altas temperaturas (30-40C)
-Alta humedad
-Periodos de 20-das a meses
Tcnicas de cultivo in vitro
-Meristemos
-Termoterapia
-Uso de microinjerto: Injertar en una ms grande libre de patgenos
-Formacin de tallos adventicios
2. MERISTEMOS
Grupo de clulas indiferenciadas que retienen la capacidad de dividirse durante todo el ciclo de vida de una planta.
Micropropagacin de especies vegetales.
Explante ideal para liberar patgenos in vitro a plantas infectadas por virus, hongos o bacterias.
Ampliamente utilizados como explante para criopreservacin y conservacin de germoplasma.
Generalidades: son los responsables del crecimiento permanente de la planta
Clulas meristemticas
-Presentan las caractersticas citolgicas de las clulas indiferenciadas
-Totipotenciales, continua divisin (mitosis)
-Diferenciacin
Primarios
-Crecimiento longitudinal de la planta
-Apicales
--pice del tallo y cada rama: primordios foliares
--pice de raz principal y secundaria da como origen a la cofia
Secundarios
-Responsables del crecimiento en espesor de la planta
-Las clulas se dividen en planos periclinales/longitudinalmente
-Cmbium vascular: Origina los tejidos conductores secundarios (xilema y floema secundarios).
-Cmbium suberoso o felgeno: origina la epidermis
Florales
-Derivan de la transformacin de los meristemos apicales
-Se limitan a la produccin de rganos florales
Intercalares
-En el curso del desarrollo de la planta, persisten restos de los meristemos apicales intercalados en los tejidos maduros.
-Determinan el crecimiento del largo de tallos y races.
Diagrama
Zona de divisin celular
Zona de elongacin
Zona de diferenciacin
Tejidos permanentes
Meristemo, meristemo axilar, primordio hojas, epidermis, haz vascular, crtex, mdula
Herramienta para saneamiento de plantas infectadas
-Domo meristemtico no vascularizado para tener un nmero mnimo de patgenos, sobretodo virus.
-El nmero de partculas virales es menor.
-La velocidad de divisin celular es mayor que la velocidad de replicacin de virus.
-Identificacin y caracterizacin de los patgenos.
--Mtodos inmunolgicos: relativamente costoso.
--Injerto sobre especies marcadoras.
--Microscopa electrnica es el mtodo ms caro.
Aspectos tcnicos del cultivo de meristemos
1. Equipo
-Elementos generales para cultivo in vitro
-Lupa estereoscpica
-Instrumental de diseccin
2. Etapas del cultivo
-Eleccin del explante
--Meristemo y 2-3 pares primordios
--0.5 mm
-Esterilizacin
-Diseccin
-Transferencia al cultivo
-Regeneracin de yemas, subcultivo
-Propagacin
-Rusticacin
Alcances
-Propagacin vegetativa rpida y a gran escala.
-Uniformidad seleccionada de material clonado.
-Multiplicacin de plantas recalcitrantes a las tcnicas convencionales.
-Reduccin del tiempo de multiplicacin y espacio requerido.
-Mayor control sobre la sanidad: frutales y ornamentales.
-Conservacin de germoplasma.
-Intercambio internacional de material gentico.
Microinjertos
Desarrollada en Espaa para la obtencin de plantas de ctricos libres de virus.
Injertacin de un pice meristemtico sobre una plntula de un patrn (condiciones aspticas).
-Preparacin de patrn
--Pelado de semillas. Los embriones se siembran en medio de cultivo. Se corta el epictilo nacimiento de primeras
hojas. ---Incisin longitudinal (apertura en corteza).
--Preparacin de la pa: brotes terminales tiernos o varetas con yemas. Brota en laboratorio se toma 1/10 mm. Coloca
patrn.
--Cultivo in vitro de la planta.
--Injerto sobre un plantn de vivero. Se hace un corte en T sobre el patrn y bisel en la planta microinjertada.
Dibujo: Plntula especialmente acondicionada -> Ubicacin del pice en la plntula -> 2-4 semanas
Cultivo de anteras
-Polen inmaduro en medios adecuados para la formacin de embriones o callos.
-Descubierto en 1964 por Guha y Maheshwr.
-Arroz, tomate, tabaco, cebada, geranio
Ventajas:
-Tcnica relativamente simple.
-Fcil induccin de divisin celular.
-Obtencin de un nmero grande de haploides de forma rpida.
Desventajas
-En algunas especies las plantas obtenidas no son haploides.
-En cereales se obtienen pocas plantas normales (con clorofila) la mayora de la plantas son albinas o quimeras
(albina-normal).
-Tediosa la remocin de anteras sin ocasionarle dao a las mismas.
Dibujo: anthers cultures nutrient medium + haploid plantlet + ambryoid + callus + haplid plant
Cultivo de protoplastos
-Cultivo de clulas vegetales que han sido aisladas y desprovistas de pared celular.
-Es la parte viva de una clula vegetal (citoplasma y ncleo).
-Cultivadas en medio nutritivo pueden ser inducidas a reformar la pared celular y dividirse.
Aislamiento
Medios mecnicos
-Cortando
-Rompiendo pared celular
Digestin de la pared celular va enzimtica
-Pectinasas
-Celulasas
-Hemicelulasas
-Mezcla de ellas
Combinacin
Usos
-Estudios fisiolgicos, bioqumicos y morfognicos
-Transformacin gentica por hibridacin o fusin somtica
-Introduccin, absorcin de protenas, DNA y otras macromolculas.
-Estudio de la etiologa en virus, su absorcin, procesos inefectivos, replicacin, inespecificidad y modo de actuacin de
hongos y bacterias patgenas.
Evaluacin de toxinas
Obtencin y seleccin de clones resistentes a diversos patgenos y productos fitosanitarios para la mejora gentica.
11 de octubre de 2011
MARCADORES
Marcadores genticos
Morfolgicos
Factores ambientales: Temperatura, humedad y suelo
Nivel de la planta: Sanidad
Estado adulto
Moleculares
Fenotpicamente neutros
Mayor segregacin polimorfismo
Primeros estados
Cualquier tipo de material
poca del ao
Libre de efectos epistticos
Marcadores moleculares
Cualquier molcula de protena, RNA o DNA, para monitorear o calibrar la separacin utilizando PAGE o
cromatografa.
DNA. Cualquier fragmento que se encuentre muy cerca del gen o de la secuencia de inters y no afecte al carcter
del estudio.
Marcador gentico
Regin cromosomal o alelo que permite rastrear una regin especfica del DNA.
Extraccin
Plantaciones de rboles.
Anlisis
Marcadores moleculares
Modo de transmisin
o Herencia nuclear biparental
o Herencia nuclear materna
o Herencia materna orgnulo
o Herencia paterna orgnulo
Mtodo de anlisis
o Hibridacin
o Basado en PCR
Marcadores de DNA
Basados en PCR
o RFLP
o Nmero variable de repeticiones en tndem
RAPD
Mutacin puntual
Translocacin
Duplicacin
Insercin- delecin
Inversin
Ventajas
Altamente reproducible.
Herencia codominante.
Provee de marcadores especficos que permiten conservar el orden de genes entre organismo seleccionados.
Limitantes
PCR
Fundamento
Replicacin enzimtica.
Ventajas
Pequeas cantidades de DNA requerido.
Eliminacin de radioistopos.
Amplificacin DNA tejidos conservados.
Accesibilidad en equipo facilidad y costo.
Alto polimorfismo.
Evaluacin de mltiples genes de forma simultnea.
Marcadores
RADPs
ISSR
AFLPs
SCARs (regiones amplificadas de secuencias caracterizadas)
SAMPLs (amplificacin selectiva de los loci polimrficos)
RAF (amplificacin azarosa de los fragmentos de DNA)
DAMD (amplificacin directa con DNA microsatlites)
Ventajas: Puede ser utilizado DNA parcialmente degradado, altamente seguro y reproducible, no requiere
informacin de la secuencia de DNA del organismo bajo estudio.
Desventaja: Uso de geles de poliacrilamida con nitrato de plata (+ costo) radiactividad.
Principales caractersticas de los marcadores
Caractersti
ca
ISOE
NZIM
AS
RFLP
Bajo
Medio
Usual
mente
codom
inante
Codo
minan
te
Nivel de
polimorfism
o
que detecta
Dominancia
Numero de
loci
Abundancia
en el
genoma
Multilo
ci
Multilo
ci
Baja
Media
RA
PD
AFLP
ISSR
Me
dio
Medio
Alto
Do
min
ant
e
Mul
tilo
ci
Mu
y
alta
SELECCIN
Costo y financiamiento.
Mejoramiento vegetal
Fenotipo
Genotipo
Ambiente
o Suelo
o Nutrientes
o Temperatura
o Humedad
o Competidores
o Enfermedades
Mejoramiento convencional
o Cruzamiento
o Seleccin intra e interespecfica
o Utilizado desde la antigedad
Biotecnologa moderna
o Basada en ingeniera gentica
o Modificacin de uno o ms genes
o Plantas transgnicas
DIAGNSTICO VEGETAL
Alteracin del agrosistema
o Evolucin de las plantas
o Organismos asociados
Tcnicas de monocultivo
Codominante/domi
nante
Multiloci
Alta
Codomi
nante
Multiloc
i
Media
Diagnstico oportuno
Deteccin del agente causal
Generacin de medidas de control efectivo
Optimizacin de recursos
Reduccin de los efectos negativos del medio ambiente
Generacin de informacin de la interaccin patgeno-hospedero
TIPOS DE DIAGNSTICO
Presuntivo
o Examen del campo y alrededores.
o Identificacin de la especie o variedad enferma.
o Patrones de anormalidad, distribucin geogrfica de la enfermedad en el campo y comparacin de plantas.
o Examen de las plantas individuales, posicin de sntomas y signos.
o Prcticas agrcolas del cultivo: fertilizacin, riesgo y control qumico.
Confirmacin
o Macroscpico
Observacin de sntomas.
Requiere experiencia y conocimiento de las variables que inciden en la enfermedad, tipo de cultivo, suelo, clima y
patgeno.
o Microscpico
Medios selectivos.
Tcnicas serolgicas
Aglutinacin
Menos especfica
Precipitacin
Geles o lquidos
Ag-Ac (precipitacin)
PCR
o Deteccin de patgenos en semillas, cultivo de tejidos, deteccin de toxinas.
o Relaciones filogenticas (anlisis de biologa de las poblaciones)
RFLP
o Costosa y laboriosa
o Uso de radioistopos
RAPD