Determinacin de los parmetros de un sistema

biolgico
En los captulos 3 y 4 se establecieron los principios fenomenolgicos
algebraicos utilizados en el diseo de los reactores bioqumicos .se hizo la
distincin entre los factores de naturaleza puramente fsica y aquellos de
naturaleza puramente biolgica, y se prest atencin al hecho de que en
algunos casos los unos interaccionan con los otros.
Lo significativo de esta situacin radica en la posibilidad de que los distintos
fenmenos puedan ser estudiados y cuantificados en fermentadores de
laboratorio, que difieren en escala y configuracin del proceso final. Adems
existe la posibilidad de aislar y estudiar algunos de los parmetros en ausencia
de la conversin bioqumica o biolgica pretendida. Si, por ejemplo, la
configuracin deseada consiste en un fermentador tubular conteniendo
partculas esfricas inertes estacionarias cubiertas por una pelcula
biolgicamente activa, entonces estn implicados factores que caen dentro de
cada una de las anteriores categoras. La ecuacin (3.7) representa la ecuacin
de diseo requerido para esta configuracin, mientras que la cintica
microbiana la describe la ecuacin (4.60) y la velocidad global de la reaccin
viene dada por la ecuacin (3.12). As:
N=

k1
C ,
k2

R p= A p

(5.1)

1 1
+
k1 h
k2

( )

CL

(5.2)

y
K (1) A s Z
C0
=exp
Ci
u

),

(5.3)
Dnde:
1 1
+
k1 h
k2

( )

K (1) =

La longitud del reactor Z, la concentracin de entrada

(5.4)

Ci y el tamao de la

partcula pueden seleccionarse arbitrariamente as como la velocidad

u , el

sistema microbiano y la mezcla nutriente. El propsito de la descripcin diseo

dada por las ecuaciones (5.1), (5.2), y (5.3) es relacionar al mismo tiempo de

una manera cuantitativa las distintas variables dependientes intermediarias que

posteriormente caracterizan la mecnica del fluido y el fenmeno biolgico. De
estos parmetros adicionales los principales son los coeficientes de velocidad
biolgica k 1 y k 2 y el coeficiente de transferencia de materia en fase
liquida h. los primeros representan parmetros puramente biolgicos, y el
ultimo, siempre que el espesor de la pelcula biolgica permanezca lo
suficientemente pequeo respecto al tamao de la partcula, un parmetro
puramente fsico. Bajo estas circunstancias los dos tipos de parmetros
pueden determinarse independientemente uno del otro.
Resulta que en este ejemplo los parmetros puramente bilgicos pueden
determinarse en cualquier configuracin del fermentador experimental
conveniente, mientras que aquellos factores influenciados por el modelo del
flujo del lquido solo pueden ser determinados satisfactoriamente en un
dispositivo que exhiba un alto grado de similitud geomtrica con la
configuracin del fermentador deseada.
Por otra parte si fuera necesario tener disponible un conocimiento detallado del
espesor de la pelcula biolgica para fijar la cintica microbiana (vase el
captulo 4), entonces este conocimiento solo podra conseguirse con un modelo
experimental que fuera geomtricamente similar a la configuracin del
fermentador deseada y en el que tuviera lugar la conversin microbiana
buscada. Esta situacin es debida a que el espesor de la pelcula biolgica en
estado estacionario representa un equilibrio entre el crecimiento, la eliminacin
de microorganismos arrastrados por el fluido y las propiedades adherentes de
los microorganismos.
Los parmetros biolgicos implicados en el diseo de un fermentador pueden
deducirse a partir de las ecuaciones de velocidad biolgica dadas en el captulo
4. Estas contienen:
1. parmetros independientes de la mecnica del fluido
(a) los coeficientes de velocidad biolgica
(b) los coeficientes de rendimiento

k1 , k2 , k3 ;

S 0 K 0 etc.;

(c) las densidades microbianas en hmedo y seco

0 , d , w .

2. parmetros de pendientes de la mecnica del fluido

(a) tamao del floculo

V p/ A p

(b) espesor de la pelcula biolgica L.

5.1 coeficientes de velocidad bilgica
Puesto que la ecuacin de la velocidad bilgica es de naturaleza general, es
decir, se puede aplicar tanto a floculos como a pelculas biolgicas, surge la

oportunidad de utilizar experimentos que impliquen cualquiera de estas

geometras para determinar los coeficientes de la velocidad biolgica k 1 ,
k 2 y k 3 . Por eso la geometra seleccionada para la masa microbiana en los
estudios de laboratorio no necesitara ser la misma que la del proceso industrial
considerado. Ahora bien, debe de apreciarse que una similitud superficial entre
el modelo del laboratorio y la planta industrial puede conducir fcilmente a
errores en la aplicacin de los resultados experimentales. Esta situacin surge
a causa de los problemas asociados con la mezcla completa, la reproduccin
de las condiciones ambientales y el tamao caracterstico de la masa
microbiana en la planta industrial.
La principal dificultad experimental en la determinacin de los coeficientes de
velocidad biolgica surge en la medida del tamao caracterstico apropiado, es
decir, L para las pelculas y V p / A p para los floculos.
5.1.1 experimentos con floculos microbianos
Experimentos discontinuos
El experimento clsico en el estudio de los procesos de la velocidad
microbiolgica utiliza un fermentador discontinuo de mezcla completa. En este
experimento las concentraciones de masa microbiana, de los sustratos y de los
productos se controlan durante un periodo de tiempo y proporcionan la curva
de crecimiento caracterstica ilustrada en la figura 5.1. Inicialmente, se
prepara una solucin nutriente estril y se inocula con una pequea cantidad
de los microorganismos considerados; le sigue un periodo de aclimatacin
conocido como fase latente, tras la cual se forman microorganismos
adicionales y productos bioqumicos a velocidades variables que son debidas a
la desaparicin del sustrato. El agotamiento final produce una situacin en la
que la velocidad de respiracin endgena esta en exceso respecto a la
velocidad de creacin de nuevas clulas viables (Lamanna y mallette, 1965).
En reacciones aerobias, el experimento se controla ms convenientemente
midiendo el consumo de oxigeno con un respiro metro de Warburg (figura 5.2)
(Aiba et al., 1965) o uno de los respirometros automticos desarrollados ms
recientemente (Abson et al., 1967). Las concentraciones microbianas pueden
determinarse por medidas de turbidez y curvas de calibrado apropiadas que
relacionan la turbidez con el peso seco (Mallette, 1969).
La ecuacin de velocidad biolgica es aplicable a la fase de crecimiento,
aunque la fase muerte puede ser interpretada como una variacin en los
k 2 , ya que, como se discuti
coeficientes de velocidad biolgica k 1 y
previamente, incluyen en sus definiciones [ecuaciones (4.49) y (4.51)] el
nmero de microorganismos viables en toda el rea a.

Figura 5.1. Curva de crecimiento

Figura 5.2. Aparato de Warburg

Durante la fase de crecimiento un balance de materia en la masa microbiana

durante el incremento de tiempo, t , da,
M|(t + t ) M |(t )=S 0 K 0 RM t ,
Donde

(5.5)

M (t ) es la masa de microorganismos por unidad de volumen del

fermentador en el tiempo t, R es la velocidad de desaparicin de sustrato por

unidad de masa de microorganismos y S 0 K 0 es el coeficiente de
rendimiento.
En la ecuacin (5.5) R incluye una resistencia a la difusin en fase liquida. Por
razones que sern discutidas posteriormente (capitulo 6) puede omitirse esta

resistencia, es decir C C , y la velocidad de desaparicin del sustrato

puede obtenerse a partir de la ecuacin de velocidad bilgica (tabla 4.5)

haciendo C =C .
Tomando lmites en la ecuacin (5.5) se obtiene:
1 dM
=S0 K 0 R ,
M dt
(5.6)
O
ln

M2
=S0 K 0 R (t 2t 1 ) ,
M1

(5.7)

Siempre que R permanezca aproximadamente constante en el intervalo

(t 2t 1 ) . En la ecuacin (5.7) M 1 y M 2 representan la masa microbiana

en el fermentador para los tiempos

t1

t 2 ; generalmente

t2 > t1

M2 > M1 .
A causa de la naturaleza semilogartmica de la ecuacin (5.7) la fase de
crecimiento de un experimento intermitente tambin se conoce como fase
logartmica.
La ecuacin (5.6) requiere una determinacin experimental del tamao
caracterstico ( V p / A p ) , un parmetro que pueda (a) variar a lo largo del
experimento y (b) exhibir una distribucin para cualquier tiempo. Estas
dificultades pueden salvarse si se suministra un gradiente hidrodinmico
suficiente de forma que el tamao de las partculas sea lo suficientemente
pequeo para que sea aplicable la ecuacin (4.62). En estas circunstancias la
ecuacin (5.6) se reduce a:
S0 K 0 k1C
k3 C
1 dM
=
=G max .
M dt
0 (1+k 3 C)
1+k 3 C ,

(5.8)
Puesto que l tamao caracterstico no est contenido en esta ecuacin, se
sigue que es innecesaria una determinacin experimental y que las
complejidades inherentes a una distribucin de tamaos caractersticos se han
eliminado, incluso considerando que tal distribucin exista dentro del aparato.
As, la ecuacin (5.8), en conjuncin con las curvas de crecimiento obtenidas
experimentalmente, conduce a los coeficientes de velocidad biolgica k 1 y
k3 .
Es necesario normalmente llevar a cabo una serie de experimentos a diferentes
concentraciones de sustrato iniciales para cubrir el intervalo de C requerido.
Los datos experimentales resultantes se expresan a menudo como
grficamente (figura 5.3) en trminos de:
=f ( C ) ,
Donde
=

1 dM
M dt .

Estos datos pueden ajustarse a una curva (Wilkinson, 1961) mediante la

ecuacin (5.8), es decir, la ecuacin (5.9) puede escribirse:

=G max.

k3 C
1+ k 3 C ,

(5.10)

Donde
Gmax. =

S0 K 0k 1
,
k3 C

(5.11)

Williams (1969) ha analizado y estudiado distintos mtodos alternativos de

ajuste de curvas apropiados para usarse con las ecuaciones de la forma de la
(5.10).
La forma ms conveniente de determinar valores numricos aproximados de
Gmax y k 3 es trazar una curva con los datos experimentales como en la
figura 5.3 y considerar de la ecuacin (5.10), que
max . G max . ,

(5.12)

Figura 5.3. Mtodo para obtener valores aproximados de

k1

y k3 .

Y
k3 =

Donde

es el valor de C cuando

1
= max.
2

Esto puede verse fcilmente a partir de la ecuacin (5.10).

max .
k 3 C
=
=Gmax .
2
1+k 3 C ,

(5.14)

C =

1 2Gmax .
1
k 3 max .

(5.15)

O, a partir de la ecuacin (5.12),

C=

1
k3 .

El coeficiente de velocidad biolgica

Gmax .

k1

puede determinarse a partir de

Siempre que se disponga de informacin sobre el coeficiente de

rendimiento S 0 K 0 y de la densidad microbiana

0 .

Aunque un experimento intermitente es relativamente fcil de realizar en

comparacin con un experimento continuo, con las dificultades de
procesamiento de los daros resultantes ocurre lo contrario. Esto puede
apreciarse en la ecuacin (5.9), la cual precisa una diferenciacin grafica o
numrica de los datos experimentales. Estos daros pueden ser escasos o
dispersos, factores que conducen a inexactitudes substanciales en cada uno de
los procedimientos. En estas circunstancias es aconsejable utilizar el mtodo
basado en una forma integrada de la ecuacin (5.9).
Para un sistema asociado con un crecimiento simple [ecuacin (4.67)] la masa
microbiana producida est relacionada con el sustrato consumido por

( M M i )=S 0 K 0 ( C iC ) ,
Donde

Mi

Ci

(5.16)

representan las concentraciones iniciales de masa

microbiana de sustrato.
La combinacin de las ecuaciones (5.8) y (5.16) seguida de integracin y
ordenamiento, conduce a:
G k
S0 K0
1 M
1 M i
ln
= max . 3
ln
t M i S 0 K 0 + k 3 ( S0 K 0 +k 3 ) t
M ,
(5.17)
Donde

=S0 K 0 C i + M i .

Las ecuaciones equivalentes para

C(i)

P(i)

se dan en la pgina 135. En

la ecuacin (5.17) M representa la concentracin de la masa microbiana para

cualquier tiempo, t, en relacin con la concentracin de masa microbiana M i

para cualquier tiempo designado arbitrariamente como tiempo cero. Las

ecuaciones (5.8), (5.16) y (5.17) representan un problema de valor inicial y el
tiempo t=0 puede seleccionarse para que corresponda a cualquier posicin en
la fase exponencial (vase figura 5.1).
Puesto que la ecuacin (5.17) es de la forma
y=abx ,

(5.18)

Donde
1 M
y= ln
t Mi ,

a=

b=

G max. k 3
S0 K 0 +k 3 ,

S0 K 0
S0 K 0 +k 3 ,

1 M i
x= ln
t
M ,

El conocimiento de M (t), M i ,

Ci

y S0 K 0

lineal de los datos experimentales que conduce a

a k1

permite una representacin

a

ya

posteriormente

y k3 .

As los datos experimentales de una fermentacin intermitente puede

expresarse como una relacin lineal si se representan en trminos de:
1 Mi
1 M i
ln
=g ln
t
M
t
M

).

(5.19)
La ecuacin (5.17) ha sido utilizada por Knowles et. al., (1965) y por Gates y
Marlar (1968). Los primeros investigadores desarrollaron un procedimiento
iterativo numrico para establecer el modelo de sistemas de nitrificacin
inmediatamente despus de la inoculacin, es decir, en un tiempo en que no se
dispona realmente de un valor exacto de M i y Gates y Marlar (1968) usaron
una tcnica iterativa grafica para calcular

S 0 K 0 adems de k 1

y k3 .

En contraste, Edwards y Wilkes (1968) desarrollaron un mtodo emprico para

ajustar a una nueva curva datos obtenidos en experimentos discontinuos, que
no cumplen la ecuacin (4.62) y que cubren sistemas ms complejos que los
sistemas asociados con un crecimiento simple. El mtodo incluye las fases de
latencia y de respiracin endgena.
(a) limitaciones de los datos de un fermentador discontinuo. una de las
principales limitaciones del experimento discontinuo radica en la dificultad para

extenderlo a la determinacin de

k 2 , puesto que esto requiere un

conocimiento experimental detallado de la distribucin de tamaos de partcula.

Adems, los requerimientos respecto al gradiente hidrodinmico para conseguir
un tamao de partcula suficientemente grande, para determinar k 2 , estn
en conflicto con las exigencias para conseguir una mezcla completa y grandes
coeficientes de transferencia de materia en fase liquida.
Para la determinacin de cualquiera de los coeficientes de un sistema biolgico
el experimento discontinuo tiene una desventaja fundamental relacionada con
la acumulacin de productos durante un periodo del experimento. Las
situaciones anlogas en la qumica fsica y qumica de los enzimas han llevado
al estudio de las velocidades iniciales de reaccin, pues solo bajo estas
condiciones puede ser completamente predeterminado el entorno de la
reaccin (Laidler, 1958). Desafortunadamente, con las reacciones microbianas
es difcil una organizacin similar del procedimiento experimental debido a la
existencia de cierta fase latente indeterminada, que existe tras la inoculacin.
La variacin de los coeficientes de rendimiento (seccin 4.4) y los conocidos
cambios en las caractersticas bioqumicas de los microorganismos a lo largo
de la curva de crecimiento (figura 4.3) son una indicacin de la magnitud de
esta desventaja. En cuanto a la determinacin detallada de ,los parmetros del
sistema biolgico, el experimento discontinuo es de utilidad limitada excepto
para los sistemas asociados al crecimiento simple.
(b Relacin entre el tiempo de duplicacin y los parmetros del sistema
biolgico. Un parmetro utilizado en microbiologa (tabla 1.3) para propsitos
de comparacin y clasificacin, es el tiempo de duplicacin, es decir, el
tiempo requerido para duplicar la masa de una cepa dada de microorganismos.
Esto puede relacionarse con la ecuacin de la velocidad bilgica reordenando
la ecuacin (5.7):
t d=

ln 2
ln2
=
S0 K 0 R G ,

(5.20)

El tiempo de duplicacin depende entonces del tamao caracterstico y de la

concentracin de sustrato. Sin embargo, a concentraciones suficientemente
altas del sustrato limitante, es aplicable la ecuacin (4.64), entonces:
t d=

k 3 0 ln 2 ln 2
=
k 1 S 0 K 0 G max . .

(5.21)

En estas circunstancias el tiempo de duplicacin se convierte en un

parmetro significativo y se basa simplemente en la velocidad de produccin
mxima de masa microbiana.
Experimentos continuos

Operar en un fermentador de mezcla completa bajo condiciones continuas

tiene la ventaja importante de proporcionar un entorno constante a los
microorganismos. La constitucin de este entorno est determinada en gran
parte por la composicin y el caudal del medio alimentado al fermentador. Para
un flujo estacionario y de composicin constante, las concentraciones en el
fermentador, especialmente las del sustrato (C), microorganismos (M), y
productos bioqumicos (P), alcanzan valores constantes, es decir,
independientes del tiempo. La mezcla completa del contenido del fermentador
hace que las composiciones de salida sean idnticas a aquellas que
permanecen dentro del fermentador (capitulo 2 y 3).
Un balance de materia global [ecuacin (3.1)] para los microorganismos
conduce a:
S 0 K 0 RMV =FM ,
(5.22)
Donde F es el caudal volumtrico de entrada al fermentador, V es el
volumen de lquido en el fermentador y R es la velocidad de
desaparicin de sustrato por unidad de masa de microorganismos.
En el caso de que el tamao del floculo microbiano sea
suficientemente pequeo, la velocidad de consumo del sustrato
vendr dada por la ecuacin (4.62). la combinacin de la ecuacin
(4.62) con la (5.22) proporciona una relacin entre la concentracin
de sustrato en el fermentador y el caudal:9
C=

k1
k F
F
3
VS 0 K 0 0 V 0 K 0 V

(5.23)
Para un sistema asociado con un crecimiento simple, las
concentraciones de producto y de masa microbiana se relacionan con
la ecuacin (5.23) mediante (vase seccin 4.4).
M =S0 K 0 (C 1C) ,
(5.24)
P=Pi + S p K p (C 1C) .
(5.25)
Las ecuaciones (5.23), (5.24) y (5.25) estn expresadas
esquemticamente en la figura 5.4 con C, M y P como funcin de F/V.
F w /0
en esta figura el fenmeno de arrastre se muestra para
V .

La figura 5.4 indica que la regin de concentracin mnima de

producto cae muy cerca del caudal de arrastre, que es el intervalo
de caudales para los que Herbert (1958) ha recomendado, por
razones de operacin estable, un control bajo condiciones
turbidostaticas (vase seccin 2.3). Los datos experimentales
obtenidos en esta regin se aproximan a los datos de velocidad
inicial.
La ecuacin (5.23) puede reordenarse para dar

1
V
=Gmax. k 3 k 3 ,
C
F
(5.26)
Donde
Gmax. =

S0 K 0k 1
k 3 0 .

(5.11)
Una representacin de

1/ C

en funcin de

1/(F /V )

proporciona

una lnea recta, como se indica en la figura 5.5 y de esta pueden

obtenerse Gmax. y k 3 . un problema que surge cuando se procesan
los datos de esta forma radica en el hecho de que para cubrir un
intervalo razonable de valores de 1/C debe llevarse a cabo un
nmero significativo de experimentos en la regin donde C es
pequea y difcil de determinar con exactitud razonable.
Un problema prctico posterior implicado en este procedimiento
radica en los pequeos caudales requeridos para que no excedan al
arrastre cuando se utiliza un pequeo fermentador de laboratorio.
Esta situacin se agrava para sistemas anaerobios por las
relativamente bajas velocidades de crecimiento implicadas. En el
punto de arrastre la concentracin de sustrato en el fermentador C
se hace igual a la concentracin de entrada (figura 5.4) y como
F
(
w /0) puede calcularse a
consecuencia el caudal de arrastre

partir de la ecuacin (5.23) haciendo C igual

decir,

Ci

y reordenando, es

S 0 K 0 k 1 Ci
0 (1+ k 3 C i ) ,

F w/ 0=V

(5.27)
O bien,
F w/ 0=V S 0 K 0 Rmax .

k 3 Ci
1+k 3 C i ,

(5.28)
Figura 5.4. Concentraciones en un fermentador contino de tanque
agitado

Rmax .

Donde

Rmax . =

es la velocidad mxima de consumo de sustrato;

k1
0 k 3 .

(5.29)
La ecuacin (5.28) indica que el caudal de arrastre depende de la velocidad
de crecimiento mxima

entrada

Gmax .

C
( i) , incluso para valores grandes de la concentracin de

entrada.
F w/ 0 V S 0 K 0 Rmax . =V Gmax . .
(5.30)

y de la concentracin de sustrato a la

As el intervalo de caudales permitidos,

0< F < F w/ 0 , depende del

sistema sustrato microbio considerado y de volumen del fermentador.

Figura 5.5. Determinacin de los coeficientes de la ecuacin (5.26)

5.1.2 experimentos con pelculas microbianas
Condiciones no aspticas
El aparato desarrollado para el estudio, bajo condiciones no aspticas, del
crecimiento de microorganismos en forma de una capa adherida a una
superficie soporte mecnica se denomina reactor de pelcula biolgica
(Atkinson et al., 1967,1968). En este reactor se pone en contacto una
pelcula en flujo laminar con una pelcula microbiolgica de espesor dado (L)
(figuras 5.6 y 5.7). Este espesor se mantiene esencialmente constante por
disposicin de la superficie soporte en forma de una reja

Figura 5.6. Reactor de pelcula biolgica (dispuesto para estudios

anaerobios): 1 superficie de reaccin; 2 vertedor de madera; 3 mezclador y
des aireador.
Figura 5.7. Modelo de reactor de pelcula biolgica

De profundidad L, y permitiendo a los microorganismos desarrollarse dentro

de la reja (figura 4.5). Como resultado del crecimiento, la masa microbiana
sobrepasa la reja y el exceso se elimina peridicamente a mano. Esto es
necesario para que el flujo del lquido este distribuido perfectamente a
travs de la pelcula biolgica y para que fluya de forma rectilnea por la
superficie. El conseguir un modelo de flujo casi perfecto es necesario para
que la resistencia difusional en fase liquida pueda describirse en trminos
matemticos con exactitud. Para alcanzar esta situacin se necesitan
diversas innovaciones experimentales, y estas estn descritas por Daoud
(1969).
Cuando la velocidad de reaccin es de primer orden, la descripcin
matemtica del rendimiento de un reactor, incluyendo la difusin en fase
liquida, viene dada por

C0
DZ
=g , 2
Ci
us

(5.31)

k (1)
D

(5.32)
Donde

C0

a la salida, us

Ci
y

son las concentraciones de los reactantes a la entrada y

son la velocidad en la superficie de la pelcula liquida

y el espesor, D es la difusividad del reactante en fase liquida, Z es la

longitud del reactor y

k (1) es un coeficiente de velocidad de primer orden.

Los datos numricos correspondientes a la ecuacin (5.31) se vern en la

figura 5.8.

Por otra parte, cuando se aplica la ecuacin (4.61), no puede existir

resistencia dimensional en fase liquida y un balance de materia global
conduce a

Q p ( CiC 0 ) =

k1 L
Z
k3

(5.33)
Donde

Qp

es el caudal de humectacin y Z es la longitud de la superficie

biolgicamente activa.
Las 2 ecuaciones (5.31) y (5.33) estn descritas en la figura 5.9 para un
sistema sutrato-microbio dado en funcin de

C0
=g(Ci ) .
Ci

(5.34)
Puede verse que la ecuacin (5.31) es independiente de la concentracin de
entrada y que la ecuacin (5.33) toma la forma de una hiprbola.
Los experimentos en los que la nica variable es la concentracin de
entrada podran, para un espesor de pelcula biolgica constante, conducir a
resultados de la forma indicada

Figura 5.8. Datos correspondientes a la ecuacin (5.31) (Atkinson et al.,

1968).