LABORATORIO DE DIAGNOSTICO MOLECULAR DE LA UNIVERSIDAD

CATLICA DE LA SANTSIMA CONCEPCIN

DETERMINACION DE LA CARGA VIRAL DE VIRUS DE HEPATITIS C

MEDIANTE COBAS Taqman HCV Test v2.0

La prueba COBAS Taqman HCV Test v2.0 (P/N: 04861817 190, ROCHE MOLECULAR DIAGNOSTIC)
es una prueba de diagnstico in Vitro (IVD) para la determinacin cuantitativa de los genotipos 1 a
6 del ARN del virus de la Hepatitis C (HCV) en la matriz de plasma o suero humano.
El sistema High Pure System Viral Nucleic Acid Kit (P/N: 03502295 001, ROCHE MOLECULAR
DIAGNOSTIC), permite la preparacin manual de las muestras en gabinetes especialmente
acondicionados para la manipulacin de cidos nucleicos, y su posterior amplificacin y deteccin
en el analizador COBAS Taqman 48.
Se ha indicado que la deteccin y determinacin cuantitativa del ARN del HCV mediante la
amplificacin del cido nucleico a travs de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) ofrece
una medida de le viremia activa, permitiendo detectarla incluso antes de la seroconversin
inmunolgica.
La cuantificacin del ARN vrico del HCV se realiza empleando un ESTNDAR DE CUANTIFICACIN
(QS) del HCV. El estndar es un constructo de ARMORED ARN no infeccioso que contiene las
secuencias del HCV con regiones de unin de primers idnticos al ARN diana del virus y una regin
exclusiva de unin a la sonda que permite diferenciar el amplicn del estndar de cuantificacin
del HCV del amplicn de la HCV diana. Este estndar es incorporado a cada una de las muestras y
controles en un nmero conocido de copias y se somete a los mismos pasos de preparacin de las
muestras, transcripcin reversa, amplificacin por PCR y deteccin en el COBAS Taqman 48 que la
muestra diana de HCV. El analizador COBAS Taqman 48 calcula automticamente el ttulo de ARN
del HCV de las muestras comparando la seal del HCV con la seal del estndar de cuantificacin
de cada muestra y control.
Una vez completadas y superadas todas las comprobaciones, se utilizan constantes de calibracin
especficas del lote incluidas en la prueba COBAS Taqman HCV Test v2.0 para calcular el ttulo de
las muestras y controles. La prueba COBAS Taqman HCV Test v2.0 ha sido estandarizada de
acuerdo con el segundo estndar internacional de la OMS para ensayos NAT de ARN del HCV
(cdigo NIBSC 96/798) y los resultados de ttulos se expresan en unidades internacionales (UI/mL).

Lmite de deteccin
La cuantificacin del ARN viral del HCV contempla un rango de 25 UI/mL a 391.000.000 UI/mL.

Reactivos incluidos en el Kit COBAS Taqman HCV Test v2.0

HCV QS
Estndar
cuantificacin
Taqman HCV

de
COBAS

HCV H(+)C, v2.0

Control (+) alto del HCV,
v2.0

HCV L(+)C, v2.0

Control (+) bajo del HCV,
v2.0

CTM (-) C
Control
negativo
(plasma humano) de
COBAS Taqman

Tampn fosfato de sodio

EDTA
< 0.005% de ARN poli Ar (sinttico)
< 0.001% de constructo de Armored RNA que contiene las
secuencias de unin al primer del HCV y una regin
exclusiva de unin a la sonda (ARN no infeccioso en
bacterifago MS2)
Marcador de amaranto
0.1% de conservante Proclin 300
< 0.001% de constructo de Armored RNA que contiene las
secuencias de unin al primer del HCV (ARN no infeccioso
en bacterifago MS2)
Plasma humano negativo, no reactivo segn pruebas para
anticuerpos frente al HCV, anticuerpos frente al HIV-1/2,
antgeno p24 del HIV y HBsAg; ARN de HIV-1, ARN de HCV
y ADN del HBV no detectables mediante PCR.
0.1% de conservante Proclin 300
< 0.001% de constructo de Armored RNA que contiene las
secuencias de unin al primer del HCV (ARN no infeccioso
en bacterifago MS2)
Plasma humano negativo, no reactivo segn pruebas para
anticuerpos frente al HCV, anticuerpos frente al HIV-1/2,
antgeno p24 del HIV y HBsAg; ARN de HIV-1, ARN de HCV
y ADN del HBV no detectables mediante PCR.
0.1% de conservante Proclin 300
Plasma humano negativo, no reactivo segn pruebas para
anticuerpos frente al HCV, anticuerpos frente al HIV-1/2,
antgeno p24 del HIV y HBsAg; ARN de HIV-1, ARN de HCV
y ADN del HBV no detectables mediante PCR.
0.1% de conservante Proclin 300

Recoleccin de las muestras

La prueba COBAS Taqman HCV Test v2.0 debe utilizarse nicamente con muestras de suero o
plasma. La sangre debe recogerse en tubos de separacin de suero o en tubos estriles con
anticoagulante EDTA (tapa de color lavanda).
La sangre entera debe conservarse a 2-25C no ms de 6 horas. Siga las instrucciones del
fabricante de los tubos para separar el suero o el plasma de la sangre entera transcurridas 6 horas
como mximo despus de la recogida. Transfiera el suero o plasma a un tubo estril de
polipropileno.

Transporte de la muestra
El transporte de sangre entera, suero o plasma debe cumplir las reglamentaciones locales
regionales y nacionales para el transporte de agentes etiolgicos. La sangre entera debe
transportarse a una temperatura comprendida entre 2 y 25C y procesarse dentro de las 6 horas
siguientes a su extraccin. El plasma o suero pueden transportarse a una temperatura
comprendida entre 2 y 8C o congelarse a una temperatura entre -20C y -80C.

Almacenamiento de las muestras

Las muestra de suero o plasma pueden almacenarse a una temperatura comprendida entre 2 y
8C durante un periodo mximo de 3 das o congelarse a una temperatura de -70C o inferior. Se
recomienda almacenar las muestras en alcuotas de un volumen entre 800 y 900 uL en tubos de
polipropileno estriles de 2.0 mL con tapa rosca. Las muestras se suero y plasma se pueden
congelar y descongelar hasta tres veces sin que haya una prdida significativa del ARN del HCV.

Control de Calidad
En cada serie analtica se deben incluir: una rplica de cada control negativo de COBAS Taqman, el
control bajo (+) del HCV de COBAS Taqman HCV Test v2.0 y el control alto (+) del HCV de COBAS
Taqman HCV Test v2.0.
Control negativo
El control CTM (-) C debe arrojar una resultado Target not detected, es decir, el valor de
amplificacin para el ARN del HCV diana debe estar por encima del lmite para el ensayo, pero se
obtiene un valor de amplificacin vlido para el ARN del estndar de cuantificacin. Si CTM (-) C no
cumple con estos criterios, se debe repetir todo el proceso (preparacin de la muestra y controles,
amplificacin y deteccin).
Controles positivos
Los intervalos asignados para los controles HCV L(+), v2.0 y HCV H(+), v2.0 se indican en la tarjeta
de valores del ensayo de la prueba COBAS Taqman HCV Test v2.0 que se suministra con cada kit.
Si uno o los dos controles no renen estos criterios, se debe repetir todo el proceso (preparacin
de la muestra y controles, amplificacin y deteccin).

Sustancias interferentes
Se ha demostrado que niveles elevados de albmina (hasta 7000 mg/dL), bilirrubina total (hasta
24,1 mg/dL), hemoglobina (hasta 540 mg/dL), triglicridos (hasta 1432 mg/dL) y muestras clnicas
de pacientes con lupus eritematoso sistmico (hasta 780 UI/mL de anticuerpos anti-ADN dc) y
artritis reumatoide (hasta 660 UI/mL de FR) en plasma conservado en EDTA y suero NO
INTERFIEREN con la cuantificacin del ARN del HCV en esta prueba.
Los siguientes compuestos farmacolgicos en concentraciones 3 veces superiores a sus respectivos
valores de Cmax (concentraciones mximas en plasma) en plasma conservado en EDTA y suero NO
INTERFIEREN en la cuantificacin del ARN del HCV en esta prueba.

Anlogo nucletido inhibidor Anlogos

nuclesidos
de
la
de la transcriptasa reversa inhibidores
transcriptasa reversa y la
del HIV
ADN polimerasa
Tenofovir disoproxil fumarati
Lamivudina
Zidovudina
Zalcitabina
Inhibidor de fusin del HIV
Estavudina
Ribavirina
Enfuvirtide
Abacavir sulfate
Didanosina

Inhibidor de la proteasa del

HIV

Anlogos no nuclesidos Moduladores del sistema

inhibidores
de
la inmunolgico
transcriptasa reversa del HIV
Peginterfern alfa-2a
Nevirapina
Interfern alfa-2b
Efavirenz
Interfern alfa-2a

Antidepresivos

Sulfato de Indinavir
Ritonavir
Nelfinavir mesylate
Saquinavir
Amprenavir
Lopinavir/Ritonavir

Paroxentina HCl
Fluoxentina HCl
Sertralina HCl

Especificidad analtica
La especificidad analtica se evalu aadiendo microorganismos a plasma humano conservado en
EDTA y suero negativos al HCV, en busca de una posible reactividad cruzada mediante la COBAS
Taqman HCV Test v2.0 para su uso con el sistema High Pure.
Ninguno de los microorganismos con ADN o ARN negativo al HCV analizados fue positivo al ARN
del HCV.
Microorganismos analizados en busca de especificidad analtica en plasma conservado en
EDTA y suero
Virus del Nilo Occidental
Virus de la Hepatitis G
Genotipos A y B de la
Hepatitis B
Virus de la encefalitis de St.
Sthapylococcus aureus y
Virus del papiloma humano
Louis
epidermis
11, 18 y 6B
Virus del dengue 1, 2, 3, 4
Virus Epstein-Barr
Varicella Zoster
Virus de la fiebre amarilla
Propionibacterium acnes
Cndida albicans
Virus Zika
Adenovirus humano tipo 3
HTLV I/II
Virus Banzi
Citomegalovirus Davis y
Virus de la gripe B
Citomegalovirus Towne
Virus Ilheus
Virus herpes simple tipo 1,
Mycobacterium avium
MacIntyre; tipo 2, G
Virus de la encefalitis del
Virus de la hepatitis A
HIV
Valle Murray

Informes de exmenes
Las determinaciones de la cuantificacin del ARN del virus HCV sern informadas en un plazo
mximo de 15 das hbiles.
Se sugiere indicar en la solicitud de examen la hora de toma de muestra.
Para sus consultas dirigirse a:
Laboratorio de Diagnstico Molecular (L.D.M.)
Faculta de Medicina
Universidad Catlica de la SSMA. Concepcin
Alonso de Ribera #2850
Fono/FAX: (56) 41-234 5435
Email: ldm@ucsc.cl
BQ. Marcelo Bustamante Carrasco. PhD (Director de Laboratorio)
BQ. Hctor Contreras Moraga. M.Sc
Secretaria: Carolina Morales Seplveda.

Concepcin, XX de XXXXXXXXXXX de 20XX

INF: XXX/20XX

INFORME DIAGNSTICO MOLECULAR

PACIENTE

PROCEDENCIA

TIPO DE MUESTRA

FECHA MUESTRA

EXAMEN

Carga Viral del Virus de la Hepatitis C

MTODO

Cuantificacin del ARN circulante del Virus de la Hepatitis C

(HCV) mediante PCR en tiempo real (COBAS Taqman HCV
Test v2.0, Roche Diagnostics).
Rangos de cuantificacin entre 25 y 391.000.000 copias/mL

RESULTADO

Se detecta ARN circulante del HCV:

1) bajo los rangos de cuantificacin del ensayo
2) UI de ARN/mL: ; Log: .

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Dr. Marcelo Bustamante C. PhD.
Bioqumico
Director Laboratorio de Diagnstico Molecular

_____________________________
Hctor Contreras M. M.Sc.
Bioqumico
Ejecutor de la Tcnica