We have so far only discussed the physical processes that are affected by scale-up.

The
next question is: How will these changes affect the microbial kinetics (or physiology) in
the large-scale process? Our prime concern is the concentration gradients that may occur
due to poor mixing in large-scale reactors, but also effects by shear stress may need to
be considered. In large-scale aerated reactors there will almost certainly be gradients
present, both with respect to oxygen, and, in case of fed-batch or continuous operation,
most likely also with respect to the limiting substrate. In the presence of gradients, the
overall average volumetric reaction rate vector, Qav is therefore an integral property
according to Eq. (11.29).
Thus, the entire concentration field need to be known, as well as the kinetic expression
giving the direct concentration effects on volumetric rates, as discussed in chapter 7.
Major changes of the overall metabolism may occur as a function of substrate or oxygen
concentration, e.g. in organisms exhibiting overflow metabolism or anaerobic
metabolism. This is true for both the industrially important organisms S. cerevisiae and E.
coli (see Fig 2.6 and Example 7.3). Ethanol formation in S. cerevisiae will rapidly occur if
oxygen is depleted. The intracellular response in NADH levels to a high glucose
concentration has been found to occur within a few seconds.
Microbial kinetics is, furthermore, not only determined by the local concentrations, but
also by the time history of the organisms. Cells will experience a changing environment
as they circulate in a large-scale reactor. This periodic change in extracellular conditions
may trigger regulatory phenomena, e.g. gene expression turn-on or turn-off (see Fig. 2.2).
It is for example well known that both oxygen and glucose trigger several regulatory
responses. The response time will be determined by the rate of mRNA polymerization and
the rate of translation (Konz et al., 1998). In a study by Schweder et al. 1999, seven
different mRNA levels in E. coli were studied in a scaled-down system. It was found that
the transcription of several genes, such as the proU gene, which is involved in
osmoregulation, responded within 15 s of exposure to high glucose concentration. The
rate of protein synthesis is probably somewhat lower. The peptide elongation rate has
been estimated to be between 13-16 amino acids per second in E. coli (Einsele et al.,
1978, see also Note 7 .6). For this reason, a single "dip" in oxygen concentration of short
duration does not necessarily result in a change in the overall protein synthesis pattern.
However, the effects of repeated depletions, as occuring for a cell circulating in a largescale bioreactor, are indeed difficult to predict and need to be studied experimentally
It is clearly expensive to do the experiments in the actual large-scale bioreactor, and
scale-down experiments are therefore made. Concentration gradients can be created by
making step-change experiments in a laboratory scale stirred tank reactor, or by
connecting two small reactors. Step- change experiments in one reactor can be used to
study dynamic effects of a sudden increase in glucose concentration or aerobic/anaerobic
transitions. In a sense one can say that an experimental "compartment system" is used
to mimic the large-scale reactor. A compilation of such experimental studies is given by
Lidn (2001). A very rapid mixing of glucose can be obtained in a laboratory reactor.
However, the oxygen transfer rate is not sufficiently high to enable studies of fast
dynamics related to aerobic/anaerobic transitions. A combination of a stirred tank reactor
and a plug flow reactor may in this case be a better option (George et al., 1993).
The a priori expectation is probably that gradients will have a negative effect on process
performance, this has also been reported for e.g. biomass yield. However, not all results
show a decreased performance in large-scale. The leavening capacity of Baker's yeast

was found to be higher in both a scaled-down model system and a large-scale process
compared to an ideally mixed system (George et al., 1998). Furthermore, the stability of a
heterologous protein was found to increase in a non-ideally mixed system (Bylund et al,
2000).
Also shear rates may be a concern for shear sensitive organisms. This normally does not
apply to yeast or bacteria, whereas mammalian cells or plant cells are shear sensitive
(Tanaka, 1981). The situation is complicated by the fact that the average shear rate
normally decreases during scale-up, whereas the maximum shear rate normally
increases. Again, an "oscillating environment" with respect to shear will be sensed by the
organisms during circulation.
Another factor to keep in mind is that the requirement for culture stability increases. The
actual number of generations in the large-scale process depends on the inoculation
density. However, even if a high inoculation density is used, the number of generation
from the stock culture to the final harvesting increases rather much, and possible genetic
instabilities of the production strain will therefore be more pronounced.
A final, unpleasant, surprise experienced in many large-scale processes is foaming.
Foaming is caused by surface-active components that are excreted or released through
cell breakage. Foaming is normally manageable in lab-scale experiments, but in a Iargescale reactor unexpected foaming can become a major problem.

Procesos metablicos Afectados por la Escala

Nosotros hasta ahora slo hemos hablado de los procesos fsicos que se ven
afectados por la ampliacin. La siguiente pregunta es: Cmo afectarn estos
cambios a la cintica microbiana (o fisiologa) en el proceso a gran escala?
Nuestra principal preocupacin es los gradientes de concentracin que pueden
ocurrir debido a una mala mezcla en reactores de gran escala, pero tambin
puede ser necesario considerar los efectos de la tensin de cizallamiento. En
gran escala reactores aireados habr casi seguro que los gradientes presentes,
tanto con respecto al oxgeno, y, en caso de alimentacin por lotes o la
operacin continua, muy probablemente tambin con respecto al sustrato
limitante. En presencia de gradientes, el promedio volumtrico vector global de
los tipos de reaccin, por lo tanto, qav es una propiedad integral de acuerdo
con la Ec. (11,29).
Por lo tanto, necesita todo el campo de concentracin a ser conocido, as como
la expresin cintica dando a los efectos de concentracin directos sobre las
tasas volumtricas, como se discute en el captulo 7. Los cambios importantes
del metabolismo en general pueden ocurrir como una funcin del sustrato o la
concentracin de oxgeno, por ejemplo, en los organismos exhibiendo el
metabolismo de desbordamiento o el metabolismo anaerbico. Esto es cierto
tanto para los organismos industrialmente importantes S. cerevisiae y E. coli
(vase la figura 2.6 y el Ejemplo 7.3). La formacin de etanol en S. cerevisiae se
producir rpidamente si el oxgeno se agota. La respuesta intracelular en los
niveles de NADH a una concentracin alta de glucosa se ha encontrado para
ocurrir dentro de unos segundos.

Cintica microbiana es, adems, no slo determinan las concentraciones

locales, sino tambin por la evolucin temporal de los organismos. Las clulas
experimentarn un entorno cambiante a medida que circulan en un reactor a
gran escala. Este cambio peridico en condiciones extracelulares puede
desencadenar fenmenos de regulacin, por ejemplo, la expresin de genes de
encendido o de apagado (ver Fig. 2.2). Por ejemplo, es bien sabido que tanto el
oxgeno y la glucosa gatillo varias respuestas normativas. El tiempo de
respuesta ser determinado por la velocidad de polimerizacin y la tasa de
ARNm de la traduccin (Konz et al., 1998). En un estudio realizado por
Schweder et al. 1,999, se estudiaron siete niveles de ARNm diferentes en E. coli
en un sistema a escala reducida. Se encontr que la transcripcin de varios
genes, tales como el gen proU, que est implicado en la osmorregulacin,
respondi dentro de los 15 s de exposicin a la alta concentracin de glucosa.
La tasa de sntesis de protenas es probablemente algo inferior. La tasa de
elongacin de pptidos se ha estimado entre 13-16 aminocidos por segundo
en E. coli (Einsele et al., 1978, vase tambin la nota 7 0.6). Por esta razn,
una sola "chapuzn" en la concentracin de oxgeno de corta duracin no se
traduce necesariamente en un cambio en el patrn general de la sntesis de
protenas. Sin embargo, los efectos de los agotamientos repetidas, que ocurren
como para una clula que circula en un biorreactor a gran escala, son de hecho
difciles de predecir y deben ser estudiados experimentalmente
Est claro que es caro para hacer los experimentos en el biorreactor real a gran
escala, y por lo tanto los experimentos de escala-down se hacen. Gradientes de
concentracin se pueden crear haciendo experimentos de cambio de paso en
un reactor de tanque agitado escala de laboratorio, o mediante la conexin de
dos pequeos reactores. Experimentos de cambio STEP- en un reactor se
pueden utilizar para estudiar los efectos dinmicos de un aumento repentino
en la concentracin de glucosa o transiciones aerbicas / anaerbicas. En un
sentido se puede decir que un "sistema de compartimiento de" experimental se
utiliza para imitar el reactor a gran escala. Una recopilacin de tales estudios
experimentales est dada por Lidn (2001). Una muy rpida mezcla de glucosa
puede ser obtenido en un reactor de laboratorio. Sin embargo, la tasa de
transferencia de oxgeno no es suficientemente alta para permitir estudios de
dinmica rpidos relacionados con transiciones aerbica / anaerbica. Una
combinacin de un reactor de tanque agitado y un reactor de flujo de tapn
puede en este caso ser una mejor opcin (George et al., 1993).
La expectativa a priori es, probablemente, que los gradientes tendrn un
efecto negativo en el rendimiento del proceso, esto tambin ha sido reportado
para, por ejemplo rendimiento de biomasa. Sin embargo, no todos los
resultados muestran una disminucin del rendimiento en gran escala. La
capacidad de fermentacin de la levadura de Baker se encontr que era ms
alta en tanto un sistema modelo a escala reducida y un proceso a gran escala
en comparacin con un sistema idealmente mixta (George et al., 1998).
Adems, se encontr que la estabilidad de una protena heterloga para
aumentar en un sistema no-idealmente mixta (Bylund et al, 2000).
Tambin velocidades de corte pueden ser una preocupacin para los
organismos sensibles al cizallamiento. Esto normalmente no se aplica a
levaduras o bacterias, mientras que las clulas de mamferos o clulas de

plantas son sensibles al cizallamiento (Tanaka, 1981). La situacin se complica

por el hecho de que la velocidad de cizallamiento media disminuye
normalmente durante la ampliacin, mientras que la tasa mxima de
cizallamiento aumenta normalmente. Una vez ms, un "entorno oscilante" con
respecto a trasquilar ser detectado por los organismos durante la circulacin.
Otro factor a tener en cuenta es que el requisito para la estabilidad cultura
aumenta. El nmero real de generaciones en el proceso a gran escala depende
de la densidad de inoculacin. Sin embargo, incluso si se utiliza una alta
densidad de inoculacin, el nmero de generacin a partir del cultivo de
valores para los aumentos de cosecha en lugar finales mucho, y las posibles
inestabilidades genticas de la cepa de produccin sern por lo tanto ms
pronunciada.
A final, desagradable, sorpresa experimentada en muchos procesos a gran
escala es la formacin de espuma. La formacin de espuma es causada por los
componentes de superficie que se excretan o liberados a travs de la rotura
celular. La formacin de espuma es normalmente manejable en experimentos a
escala de laboratorio, pero en un reactor de Iarge escala de formacin de
espuma inesperado puede convertirse en un problema importante.