1- Objetivos:

Aprender a identificar a las bacterias de acuerdo a las

reacciones metablicas que tienes frente a los diferentes
reactivos y medios de cultivo ( uso de las pruebas
bioqumicas para la identificacin de microorganismos)
Entender los principios bioqumicos de las pruebas.

2- Fundamento:

Hidrolisis de la urea: Determinar si la bacteria degrada la

Urea a partir de las enzimas hidroliticas ureasas. La urea
(H2N-CO-NH2) se escinde en 2NH3+CO2. La sustancia
producto de la hidrolisis va alcalinizar el medio haciendo
virar el reactivo indicador rojo de fenol a un rojo grosella.

La hidrlisis de la urea se lleva a cabo por medio de la siguiente

reaccin:

La ureasa es una enzima que existe de forma natural que

cataliza la hidrlisis de la urea en cido carbnico inestable.
La descomposicin rpida del cido carbnico ocurre sin
catlisis enzimtica para formar dixido de carbono y
amoniaco. El amoniaco es probable que escape de la
atmosfera a menos que reaccione con agua para formar
amonio.
Hidrolisis de la gelatina: Esta prueba se utiliza para
determinar la capacidad de un microorganismo para producir
enzimas proteolticas que lican la gelatina (gelatinasas).
Hidrolisis del almidn: Las bacterias pueden usar
alimentos macromoleculares; para ello, es necesario una
hidrlisis extracelular preliminar, igual que sucede en los
animales superiores. Las distintas bacterias elaboran para
este fin una cierta variedad de enzimas extracelulares que
se segregan al medio. El objetivo de esta prctica es
comprobar qu bacterias producen amilasa y son por tanto
capaces de utilizar el almidn como nutriente.

 Prueba xido - Fermentativa o de Hugh-Leifson:

Estudia si el microorganismo es capaz de metabolizar un
hidrato de carbono por via oxidativa o por va fermentativa.
3- Marco teorico:

Hidrolisis de la urea: Para esta prueba es necesario el caldo urea.

El caldo urea es un medio muy pobre y bastante tamponado que
permite determinar la presencia de la actividad de la enzima
hidrolitica ureasa, cuya actividad provoca la degradacin de la
alcalinizacin. Este cambio de pH es detectado por cambio de color
del indicador azul de bromotimol desde el verde original al azul
intenso . Tambin es vlido usar el reactivo indicador Rojo de fenol el
cual vira por la alcalinizacin del medio a un rojo grosella.
Prueba de la gelatina: La gelatina tiene la propiedad de precipitar
cuando se
aaden metales pesados, los microorganismos que
degradan la gelatina es porque segregan enzimas hidroliticas
transformndose esta protena en peptonas haciendo perder la
capacidad de precipitar los metales pesados.
Prueba de la hidrolisis del almidon: Las bacterias pueden usar
alimentos macromoleculares; para ello, es necesario una hidrlisis
extracelular preliminar, igual que sucede en los animales superiores.
Las distintas bacterias elaboran para este fin una cierta variedad de
enzimas extracelulares que se segregan al medio. El almidn es un
carbohidrato complejo que es degradado por microorganismos que
contienen amilasas. Las molculas de yodo estn atrapadas dentro
de la hlice no ramificada de unidades de glucosa de la cadena de
amilosa para formar un compuesto de inclusin azul. Si la red se
desintegra como ocurre durante la hidrlisis del almidn y las
dextrinas por definicin se produce una mezcla de dos molculas de
polisacridos poliglucosa: amilosa lineal que solo da glucosa con la
hidrlisis se denomina glucosn.
Prueba de oxidacin fermentativa: Es una prueba que indica del
tipo de metabolismo energtico: respiratorio (O) o fermentador (F).
Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulacin
de cidos con un indicador cido-base (azul de bromotimol). La
bacteria se inocula con el hilo recto (por picadura) y se incuba en
condiciones aerobiosis (sin parafina) y de anaerobiosis (con parafina,
tubo cerrado), simultneamente. Las bacterias que respiran

aerobiamente crecen en la superficie del medio del tubo abierto.

Transforman la glucosa en CO2, la superficie del medio se ver
ligeramente amarilla (por la formacin de cido carbnico originado
al reaccionar el CO2 con el agua del medio). En el tubo cerrado el
cultivo se mantiene azul-verdoso. Las bacterias
fermentadoras producen cidos a partir de la glucosa. Viran el cultivo
del tubo cerrado a amarillo; en el tubo abierto se inicia el viraje en el
fondo, pero transcurridas 24 horas los cidos pueden difundir por
todo el medio virndolo a amarillo.
4- Parte experimental:

HIDROLISIS DE LA UREA

Esta prueba
no reacciono
la cepa que
se uso fue
Staphylococcu
s aureus
HIDROLISIS DE LA GELATINA

Produce cidos por:

TUBO ABIERTO (O)
TUBO CERRADO (F)
Respiracin
Ligeramente amarillo en superficie
Verde
Fermentacin
Amarillo
Amarillo
No produce cidos
Verdeo o azulado
Verde o azulado