Universidad Nacional De

Trujillo
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGA Y
PARASITOLOGA

CURSO: BIOTECNOLOGA

TEMA: SEMINARIO 1: DESARROLLO Y MANEJO DE INCULOS

DOCENTE:

CICLO:

Dra. EVA VILLANUEVA TARAZONA

GRUPO:

TRUJILLO PER

2015
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SEMINARIO 1: Desarrollo y manejo de inculos

I.

INTRODUCCIN
La preparacin del inculo implica el desarrollo de una poblacin de
microorganismos, desde su estado de conservacin hasta obtener una suspensin de
microrganismos viales y aptos para reproducirse y producir metabolitos a escala
industrial.
Si el nmero de clulas no es el adecuado, la produccin no ser ptima Adems,
si crece en condiciones diferentes a como crecer despus (industrialmente), existir
una fase de latencia en el fermentador, reduciendo la rentabilidad.
Los mtodos para la preparacin del inculo tienen dos finalidades: Obtener el
mximo de viabilidad de los microorganismos as como evitar que pierdan las
caractersticas para producir los metabolitos de inters.
El manejo de un cultivo microbiolgico involucra las siguientes etapas;
aislamiento del microorganismo, la conservacin del microorganismo,la preparacin
del medio de cultivo en el que se desarrolla, la preparacin del inoculo, el
escalamiento y la produccin industrial.Cada una de estas partes es importante, y un
descuido en alguna de ellas puede conducir todo el proceso al fracaso.
El aislamiento de un microorganismo con caractersticas especficas es una labor
ardua y costosa. muchos microorganismo son irremplazables, pues han sido obtenidos
por procedimientos empricos: no existe un mtodo bien definido par obtener la cepa
nuevamente, en caso de perderla. Ademas, la modificacin de un microorganismo
para variar sus caractersticas hace que sea muy inestable y suceptible de perderlas
con facilidad.
Actualmente,

el aislamiento

se realiza en

condiciones cada

vez mas

estandarizadas y repetibles, y se recurre al mejoramiento gentico de las cepas para

obtener cualidades especiales, tales como una mayor productividad de biomasa o de
sustancias de inters
Cuando el microorganismo se a aislado, debe ser conservado: se le aplica un
mtodo que garantice la estabilidad a travs del tiempo de las propiedades que lo
hacen valioso. El estudio de los requerimientos nutricionales permite realizar una
adecuada formulacin del medio de cultivo por utilizar, para que el microorganismo se
desarrolle y produzca los metabolitos de inters.

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Una vez definido el medio de cultivo, es necesario preparar el inculo, a partir del
microorganismo que se encuentra en conservacin; finalmente, se lleva a cabo el
proceso a escala industrial.

II.

DEFINICIN1
Un inculo microbiano es una preparacin solida o lquida la cual contiene una
gran cantidad de microorganismos, como bacterias y hongos. Estos microorganismos
se encuentran activados, es decir son viables y estn listos para ser, como su
nombre lo dice, inoculados en un medio de cultivo o en un biorreactor. Los inculos
pueden ser de un solo microorganismo especfico para un tipo de sustrato o
ambiente, o puede ser una mezcla de microorganismos que trabajan en conjunto en
aguas residuales o en lodos.
Su modo de preparacin requiere de tres pasos esenciales:
a) El primer paso es la recuperacin de la cepa microbiana o el aislamiento de la
misma si es que se encuentra en un ambiente donde existan otros
b)

microorganismos.
El segundo paso consiste en cultivar el microorganismo en un medio slido
como mtodo de pre-cultivo, esto con el fin de que el microorganismo se

adapte a este tipo de crecimiento.

c) El tercer paso es el crecimiento en un medio lquido para preparar al inculo
para poder pasarlo a un biorreactor.
Un proceso de fermentacin consiste en cuatro pasos: Propagacin de los cultivos,
fermentacin, procesos de separacin y purificacin y finalmente un tratamiento de
efluentes.
En la primera etapa la propagacin de cultivos interviene el desarrollo del inculo, lo
que se realiza en el laboratorio y que comienza generalmente en un tubo de ensayo
que contiene un repique reciente del microorganismo o un tubo liofilizado. Este
material microbiolgico seleccionado constituye el punto de partida con el cual se debe
aumentar la cantidad del mismo mediante sucesivos pasajes en frascos de volmenes
crecientes que son generalmente operados en agitadores o en cmaras de cultivo,
esto se realiza hasta obtener el volumen adecuado para ser ingresado en el
biorreactor.

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III.

CARACTERSTICAS DE LOS INCULOS

El inculo se refiere a la cantidad de microorganismo o clulas capaces de

garantizar el desarrollo adecuado del bioproceso deseado.
Las caractersticas adecuadas para que un inculo cumpla su papel son las
siguientes:

Un inculo adecuado debe tener la capacidad de crecer e invadir

rpidamente el sustrato, sobre todo en substratos pasteurizados.

El inoculo implica el desarrollo de una poblacin de microorganismo desde
su

estado

de

conservacin

hasta

obtener

una

suspensin

de

microorganismos viables y aptos para reproducirse y producir metabolitos a

escala industrial.
La cepa o cultivo a utilizar debe ser genticamente estable.
La cepa o cultivo debe estar libre de contaminantes.
El microorganismo a usar debe ser de fcil conservacin

de sus caractersticas.
El inoculo puede ser un consorcio de diversas especies microbianas, como

sin

prdida

las que se encuentran en lodos aerobios (aguas residuales).

IV.

ETAPAS DE LA PREPARACIN DE INCULOS

A. REACTIVACIN DE LAS CEPAS: El cultivo preservado se reactiva en medio
lquido o slido. Segn sea el medio de preservacin se requerir tiempo de
recuperacin del cultivo, la forma de recuperar la cepa depende del mtodo de
conservacin utilizado.
B. CRECIMIENTO EN MEDIO SLIDO O LIQUIDO: Una vez preparada la
suspensin de microorganismos, se toma una asada (muestra) y se siembra en
un medio de cultivo slido o en un medio lquido.

C. CRECIMIENTO DE MICROORGANISMO EN UN MEDIO DE CULTIVO

LQUIDO: Se toma una azada del crecimiento de microorganismos en medio
slido y se introduce en matraces Erlenmeyer de 100 250 ml de capacidad, que
contienen un medio de cultivo liquido (en una cantidad que vara del 10 al 20% de
su capacidad). Sucesivamente se ir incrementando el volumen del recipiente de

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cultivo, para conseguir la velocidad de crecimiento adecuada. Es vital ir

incrementando el volumen para escala industrial se alcancen resultados ptimos.

V.

CRITERIOS PARA LA OBTENCIN DE UN BUEN INOCULO

A. CANTIDAD Y CONCENTRACIN DE MICROBIO
La cantidad de inculo que se prepara y se agrega en la mayora de los
casos es el 10% del volumen total de trabajo: si se va a trabajar con un
volumen total de un litro se debe preparar 100 mililitros de inculo. En el caso
de que el volumen requerido sea muy grande, el inculo se debe preparar en
varias etapas.
Durante la preparacin del inculo, se recomienda mantener condiciones
estrictas de higiene y esterilidad en los equipos as como hacer varias
pruebas de pureza, porque el cultivo se puede contaminar en el paso de una
etapa a otra.
La concentracin de microorgansimos es un parmetro vital, pues
suministra datos no solo relacionados con la curva de crecimiento del
microorganismo, sino con la cantidad de microorganismos con la que se debe
iniciar un proceso. Cundo el producto deseado es la biomasa, la
concentracin de micoorganismos representa la eficiencia del proceso. Si el
inters va dirigido hacia los metabolitos, el parmetro es una medida indirecta
de su produccin.
Existen varios mtodos para medir la concentracin de microorganismos
los ms comunes son:

Determinacin de nmero de clulas por unidad de rea: Se

aplica cuando los microorganismos son unicelulares, se realiza

por conteo utilizando un microscopio.

La determinacin de la masa celular: Se emplea para
microorganismos que crecen en forma micelial, la masa celular se

determina por peso seco

La determinacin de la densidad celular: Se utiliza la tcnica de
espectrofotometra.

B. CONDICIONES AMBIENTALES

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El medio ambiente en el que crece el microorganismo va a determinar su

adecuado desarrollo. El pH, la temperatura y la presencia de oxgeno son los
parmetros ambientales ms importantes cuando se pretende utilizar un
microorganismo industrialmente.1

pH
En general, las bacterias se desarrollan con preferencia en medios neutros
o ligeramente alcalinos (pH 6.5-7.5) y la mayora tolera variaciones de pH

entre 5 y 9.
Temperatura
Es uno de los factores de mayor influencia en el crecimiento bacteriano.
Cada bacteria presenta una temperatura mnima para poder crecer, una
temperatura ptima en la que el crecimiento es ms rpido y una
temperatura mxima ms all de la cual se le hace imposible crecer.
Este mbito de temperatura en el cual pueden crecer las diferentes
bacterias permite dividirlas en tres grupos: sicrfilas, que presentan una
temperatura ptima baja; las mesfilas, cuya temperatura ptima es

moderada; y las termfilas, que tienen una temperatura ptima alta.

Necesidades de oxigeno
Algunas bacterias requieren de oxgeno para poder vivir, mientras que
otras son capaces de desarrollarse en su ausencia, y an ms, les puede
resultar txico. De acuerdo a ello se pueden diferenciar 4 grupos:
Aerobias, que requieren oxigeno
Anaerobias, que se desarrollan en ausencia de oxgeno
Anaerobias facultativas, que pueden desarrollarse tanto en presencia
como en ausencia de oxgeno
Microaeroflicas, las cuales se desarrollan solo cuando la presin
parcial de oxigeno es inferior a la del aire

VI.

USO DE INCULOS EN PROCESOS INDUSTRIALES Y/O AMBIENTALES2

Los microorganismos que sintetizan productos tiles para el hombre
representan, como mximo, unos pocos centenares de especies de entre las ms de
100000 descritas en la Naturaleza. Los pocos que se han encontrado con utilidad
industrial son apreciados por elaborar alguna sustancia que no se puede obtener de
manera fcil o barata por otros mtodos.
A. Levaduras

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Las levaduras se vienen utilizando desde hace miles de aos para la

fabricacin de pan y bebidas alcohlicas. La levadura que sin duda fue la
primera y an hoy en da sigue siendo la ms utilizada por el hombre es
Saccharomyces cerevisiae de la que se emplean diferentes cepas para la
fabricacin

de

cerveza,

vino,

sake,

pan

alcoholes

industriales.

Kluyveromyces fragilises una especie fermentadora de la lactosa que se

explota en pequea escala para la produccin de alcohol a partir del suero
de la leche. Yarrowia lipolytica es una fuente industrial de cido ctrico.
Trichosporum cutaneum desempea un importante papel en los sistemas de
digestin aerbica de aguas residuales debido a su enorme capacidad de
oxidacin de compuestos orgnicos, incluidos algunos que son txicos para
otras levaduras y hongos, como los derivados fenlicos.
B. Hongos filamentosos
Los hongos tienen una gran importancia econmica, no tan slo por su
utilidad, sino tambin por el dao que pueden causar. Los hongos son
responsables de la degradacin de gran parte de la materia orgnica de la
Tierra, una actividad enormemente beneficiosa ya que permite el reciclaje de
la materia viva. Por otro lado, los hongos causan gran cantidad de
enfermedades en plantas y animales y pueden destruir alimentos y
materiales de los que depende el hombre.
Los efectos perjudiciales de los hongos estn contrarrestados por su
utilizacin industrial. Los hongos son la base de muchas fermentaciones
como la combinacin de soja, habichuelas, arroz y cebada que dan lugar a
los alimentos orientales miso, shoyu y tempeh. Los hongos son tambin la
fuente de muchos enzimas comerciales (amilasas, proteasas, pectinasas),
cidos orgnicos (ctrico, lctico), antibiticos (penicilina), quesos especiales
(Camembert, Roquefort) y, evidentemente, de las setas.
C. Bacterias
Entre las especies bacterianas de inters industrial estn las bacterias del
cido actico, Gluconobacter y Acetobacter que pueden convertir el etanol
en cido actico. El gnero Bacillus es productor de antibiticos
(gramicidina, bacitracina, polimixina), proteasas e insecticidas. Del gnero
Clostridium cabe destacar Clostridium acetobutylicum que puede fermentar
los azcares originando acetona y butanol. Las bacterias del cido lctico
incluyen, entre otras, las especies de los gneros Streptococcus y
Lactobacillus que producen yogur. Corynebacterium glutamicum es una

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importante fuente industrial de lisina. El olor caracterstico a tierra mojada se

debe a compuestos voltiles (geosmina) producidos por Streptomyces
aunque su principal importancia radica en la produccin de antibiticos como
anfotericina B, kanamicina, neomicina, estreptomicina,
D. La industria farmacutica ha utilizado siempre diferentes organismos para
obtener

medicamentos.

Actualmente

se

realizan

campaas

de

experimentacin de productos obtenidos a partir de diferentes seres de los

ocanos o de las selvas. Uno de los peligros de la prdida de la
biodiversidad

es

que

desaparezcan

organismos

que

podran

proporcionarnos nuevos remedios contra diferentes enfermedades.

Los medicamentos ms importantes producidos por microorganismos son
los antibiticos, sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento de
otros microorganismos y que han reducido la peligrosidad de muchas
enfermedades infecciosas.
En la siguiente relacin vemos algunos de los antibiticos ms
habituales, su espectro de utilizacin y su modo de accin:

Ampicilina: Bacterias gram +

celular.
Bacitracina: Bacterias gram +. Interfiere sntesis de pared celular.
Cefalosporina C: Bacterias gram +. Interfiere sntesis de pared celular.
Penicilina G: Bacterias gram +.Interfiere sntesis de pared celular.
Cloranfenicol: Amplio espectro. Interfiere sntesis de protenas.
Tetraciclina: Amplio espectro. Interfiere sntesis de protenas.
Estreptomicina: Bacterias gram + y gram -. Interfiere sntesis de

protenas.
Eritromicina: Bacterias gram + y Rickettsias. Interfiere sntesis de

protenas.
La produccin de vitaminas ocupa un segundo puesto en las ventas

y gram -. Interfiere sntesis de pared

totales de las industrias farmacuticas. Algunas vitaminas se sintetizan

artificialmente; sin embargo, otras (B12, riboflavina) son demasiado
complicadas para su sntesis qumica y se obtienen a partir de cultivos de
microorganismos.

VII.

APLICACIONES PRCTICAS

Uso de los inoculantes comerciales para semillas

En la industria de los alimentos: panadera, lcteos y otros.

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VIII.

Para la elaboracin de procesos fermentativos

En la comercializacin como cultivos liofilizados

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Hernndez A. y col. Microbiologa Industrial. Edit. EUNED. San Jos, Costa
Rica. 2003.
2. Hernndez Alicia, Alfaro Ileana y Arrieta Ronald. Microbiologa Industrial.
EUNED. 2003 ISBN: 978-9968-31-255-4
3. Enlaces web: http://biotecindustrial.blogspot.pe/

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X. PROPUESTA DE UN ESQUEMA DE TRABAJO PARA

DESARROLLAR INCULOS

1.
Reactivacin
2. Crecimiento
del
microorganismo
en medio slido o

3. Crecimiento del
microorganismo en
un medio de cultivo
liquido

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