- CICLO: 6

- LABORATORIO
- TRABAJO GRUPAL

Profesor: duran nieva Alejandro

Curso: microbiologa (laboratorio) 1

CURSO:
TEMA:

AO DE LA INVERSIN
PRODUCTIVA Y DEL
FORTALECIMIENTO
DE LA
RHYZOBIUM
EDUCACIN

MICROBIOLOGA (LABORATORIO)

PROFESOR:

DURAN NIEVA ALEJANDRO

INTEGRANTES:
-ACOSTA CAMPOS PATRICIA M. M.
-BORROVIC GARAY DAIZY ANDREA

-CAJALEN CHUQUIYAURI LEYDI

- CIERTO HIDALGO ERIKA
-CUEVA OCAA GUADALUPE
-DE LA TORRE TEJADA VALERIA
-ESPINOZA CHAVEZ YESSICA
-FERNANDEZ OSPINO WILMER
-MORALES ESPINOZA KATHERINE

GRUPO:

JUEVES

2:00-3:30 D

2015-2

HUNUCO-PER

INDICE

CARATULA
I.
II.

INDICE-------------------------------------------------3
INTRODUCCION----------------------------------------4
OBJETIVOS
II.1.
OBJETIVO GENERAL--------------------------5
II.2.
OBJETIVOS ESPECIFICOS--------------------------5

III.

MARCO TERICO ---------------------------------------------6

III.1. DEFINICIN
III.2. LA SIMBIOSIS RIZOBIO-LEGUMINOSA
III.3. TAXONOMIA
III.4. EL PROCESO DE NODULACIN
III.5. TIPOS DE NDULOS Y ESPECIFICIDAD DE LA INTERACCIN
RIZOBIO-LEGUMINOSA
III.6. BASES MOLECULARES DE LA INTERACCIN RIZOBIOLEGUMINOSA
III.7. FUNCIONAMIENTO DEL NDULO

IV.

MATERIALES -----------------------------------------------------14
IV.1. RHYZOBIUM (FREJOL, ALFALFA,ETC)
IV.2. AGAR NUTRITIVOS
IV.3. ISOPO MICROBIOLOGICO
IV.4. MATERIALES DE LIMPIEZA

V.

METODOS------------------------------------------------16
V.1.
EXTRACCION DE NODULOS
V.2.
DESCONTAMINACION DE NODULOS
V.3.
PULVERIZACION DE NODULOS
V.4.
SIEMBRA DELRHYZOBIUM

VI.

RESULTADOS--------------------------------------------17
VI.1. RHYZOBIUM

VII.
VIII.
IX.
X.

CONCLUSIONES-------------------------------------18
RECOMENDACIONES------------------------------------19
BIBLIOGRAFIA---------------------------------------20
ANEXO----------------------------------------------21

I.

INTRODUCCIN

En el presente informe hablaremos sobre el Rhyzobium el cual hallamos en

la raz de las legumbres, esta especie es una fijadora de nitrgeno al suelo
por este proceso enriquece el rea donde es plantada.
Las leguminosas muestran una amplia diversidad en ellas encontramos
desde formas herbceas anuales hasta rboles tropicales. Muchas
leguminosas poseen la propiedad de absorber nitrgeno atmosfrico y
viabilizar la fertilidad del rea hallada. La fijacin de nitrgeno en la simbiosis
rizobio-leguminosa es de considerable importancia en la agricultura como en
enriquecedor de la fauna y flora microbiana.
El objetivo es el aislamiento, caracterizacin e identificacin de cultivos de
Rhyizobium para lo cual seguiremos diversos procesos.

II.

OBJETIVOS
GENERALES
-

El objetivo del procedimiento es el aislamiento,

caracterizacin y seleccin de Rhyzobium que nos permita
avanzar hacia una fertilizacin en el cultivo mediante la
seleccin de cepas autctonas o nodulos de Rhyzobium de
elevada eficiencia en la fijacin de nitrgeno

ESPECIFICAS
-

III.

Aislar e identificar el Rhyzobium a partir de muestras de la

raz de pallar en la cual hallamos mayor cantidad de
ndulos.
Conocer cul es el medio de cultivo necesario para el cultivo
del Rhyzobium.
Estudiar e identificar la presencia de Rhyzobium en los pelos
absorbentes.
Realizar la tcnica de siembra en estra simple para su
cultivo e identificacin en agar nutritivo.
Fotografiar cada una de los procesos a realizar

MARCO TERICO

3.1 DEFINICION:

El Rhyzobium es un de bacterias gram-negativas del suelo que fijan

nitrgeno atmosfrico. Pertenece a un grupo de bacterias fijadoras de
nitrgeno que se denominan colectivamente rizobio.
Viven en simbiosis con determinadas plantas (como por ejemplo las
leguminosas) en su raz, despus de un proceso de infeccin inducido por la
propia planta mediante la secrecin de lectina, a las que aportan el nitrgeno
necesario para que la planta viva y sta a cambio le da cobijo.
Ms especficamente, la condicin de simbiosis viene dada por la formacin
de una molcula de transporte de oxgeno, equivalente a la hemoglobina,
llamada Leghemoglobina. Slo se puede sintetizar cuando los dos
organismos se encuentran en simbiosis; por parte de la bacteria se sintetiza
el grupo Hemo de dicha molcula, y por parte de la planta se sintetiza la
apoprotena. As, mediante la nueva molcula formada, se puede llevar a
cabo el transporte de oxgeno necesario para el metabolismo de la bacteria
(y as poder fijar el nitrgeno requerido por la planta).
3.2 LA SIMBIOSIS RIZOBIO-LEGUMINOSA
El nitrgeno es muy abundante en la atmsfera, sin embargo, las plantas no
pueden utilizarlo en su forma elemental y tienen que obtenerlo del suelo
principalmente en forma de nitratos o amonio. La fijacin biolgica de
nitrgeno es un proceso clave en la biosfera, por el cual microorganismos
portadores de la enzima nitrogenasa convierten el nitrgeno gaseoso en
nitrgeno combinado. El grupo de bacterias al que se conoce colectivamente
como rizobios, inducen en las races (o en el tallo) de las leguminosas la
formacin de estructuras especializadas, los ndulos, dentro de los cuales el
nitrgeno gaseoso es reducido a amonio. Se estima que este proceso
contribuye entre el 60-80 % de la fijacin biolgica de nitrgeno. La simbiosis
es inhibida si existe un exceso de nitrato o amonio en el suelo. En esta
simbiosis en los ndulos, la planta husped obtiene nutrientes nitrogenados
de la bacteria (rizobios) y ofrece a sta una fuente de carbono y un ambiente
favorable para fijar nitrgeno. Esta simbiosis contribuye con una parte
considerable del nitrgeno combinado en la tierra y permite a las plantas
leguminosas crecer sin fertilizantes nitrogenados y sin empobrecer los
suelos.
Las leguminosas muestran una amplia diversidad tanto morfolgica como de
hbitats y ecologa, encontramos desde formas herbceas anuales hasta
rboles tropicales. Muchas leguminosas son noduladas por los rizobios. La
6

fijacin de nitrgeno en la simbiosis rizobio-leguminosa es de considerable

importancia en agricultura, porque causa un aumento significativo del
nitrgeno combinado en el suelo. Dado que la carencia de nitrgeno suele
darse en suelos desnudos y sin abonar, las leguminosas noduladas ofrecen
una ventaja selectiva en tales condiciones y pueden crecer bien en zonas
donde no lo haran otras plantas. Es por ello que leguminosas arbustivas y
arbreas se emplean como plantas pioneras en la reforestacin de zonas
ridas y semiridas. Por el inters que estas bacterias representan para la
agricultura, emplendose como inoculantes (bio-fertilizantes) para los cultivos
se han realizado investigaciones extensas sobre este sistema simbitico,
incluyendo estudios sobre la diversidad y la taxonoma de los rizobios.
Rhyzobium fue la primera bacteria producida a gran escala y se ha aadido
como inoculante durante 105 aos a diversos cultivos agrcolas, con xito en
muchos casos.
3.3 TAXONOMA
Beijerinck en 1888 obtuvo el primer cultivo bacteriano puro de un ndulo de
raz de leguminosa y lo llam Bacillus radicicola. Posteriormente, Frank
propuso el nombre Rhizobium para estos aislados. Basada en la
especificidad de los huspedes para 1929 ya se haban reconocido seis
especies: R. leguminosarum, R. trifolii, R. phaseoli, R. meliloti, R. japonicum
y R. lupini. En esta clasificacin, cada especie se compona de cepas que
compartan un grupo de leguminosas husped. Trabajos posteriores
desafiaron esta designacin de especies basada en la especificidad del
husped. En 1944 Wilson report un gran nmero de nodulaciones que
cruzaban las fronteras de las diferentes especies.En 1964 Graham y en 1968
Moffett y Golwell sugirieron revisar la taxonoma basndose en resultados de
la taxonoma numrica. Ms tarde, en 1974, Jordan y Allen dividieron estas
especies en dos grupos de acuerdo con sus tasas de crecimiento, flagelos y
reacciones cido/alcalinas en medio YMA). Adems de estas seis especies,
se incluy un grupo miscelneo designado Rhyzobium spp.
La taxonoma actual de los Rhyzobium se basa en un enfoque polifsico que
incluye morfologa, bioqumica, fisiologa, gentica y filogenia. El uso del
enfoque polifsico ha conferido a la taxonoma una base ms natural y ms
confiable.
De acuerdo con la definicin aceptada de especie en bacteriologa, cada
especie de rizobios consta de un grupo de cepas que comparten

caractersticas que las distinguen como grupo de otros grupos de bacterias.

El uso de tcnicas moleculares ha provisto de una descripcin ms precisa
para las especies. El anlisis de secuencias de los genes 16S rRNA se ha
convertido en uno de los principales criterios para la descripcin de los
gneros y las especies de rhizobios. Se considera que las cepas cuyas
secuencias del gen 16S rRNA son similares en un 97% o ms,
probablemente pertenecen a la misma especie. Las relaciones filogenticas
inferidas del parecido de las secuencias de genes de 16S rRNA tambin
constituyen la base principal para la descripcin de los diferentes gneros de
rhizobios; sin embargo, no hay un porcentaje definido para marcar las
fronteras entre gneros. No obstante, cuando las secuencias de 16S rRNA
son muy parecidas, no sirven para distinguir especies cercanamente
relacionadas y esto ocurre debido a que este gen est muy conservado entre
todos los organismos vivos. En la taxonoma de Rhizobium, la hibridacin de
ADN-ADN y otros mtodos han sido incluidos para definir especies dentro de
cada gnero. Hasta la fecha se han propuesto 6 gneros, que son:
Allorhizobium, Azorhizobium, Bradyrhizobium, Mesorhizobium, Rhizobium y
Sinorhizobium.
3.4 EL PROCESO DE NODULACIN
Se conocen bien las etapas de la infeccin y desarrollo de ndulos radicales.
Estas incluyen:
1.
Reconocimiento de la combinacin adecuada de organismos, tanto
por parte de la planta como de la bacteria, y adherencia de la bacteria a los
pelos radicales.
2.

Invasin del pelo radical y formacin de un canal (o hilo) de infeccin

3.
Desplazamiento de las bacterias hacia la raz principal a travs del
canal de infeccin.
4.
Diferenciacin de las bacterias en un nuevo tipo al que se le llama
bacteroides, dentro de las clulas de la planta, y desarrollo del estado de
fijacin de nitrgeno.
5.
Divisin de las clulas bacterianas y vegetales y formacin del ndulo
radical maduro.
A continuacin se describen estas etapas en ms detalle:

Las plantas leguminosas secretan compuestos especficos que atraen a los

rizobios. Entre estos compuestos se encuentran flavonoides y en respuesta a
ellos los rhizobios activan una serie de genes implicados en la nodulacin. El
primer paso en la formacin de los ndulos es la adherencia de la bacteria a
la planta. En la superficie del rizobio se localiza una protena especfica de la
adherencia, la ricadesina. Es una protena que se une al calcio y puede
actuar captando complejos de calcio en la superficie de los pelos radicales.
Otras sustancias, como las lectinas, que son protenas que contienen
carbohidratos, tambin cumplen una funcin en la adherencia plantabacteria. Las lectinas han sido identificadas en los extremos de pelos
radicales y en la superficie de las clulas de rizobio. Despus de la unin, los
pelos radicales se enroscan debido a la accin de sustancias especfica
secretadas por la bacteria, que se conocen como factores Nod . Algunos
pelos radicales se enroscan hasta 360 formando una estructura a la que se
llama "cayado de pastor". La bacteria penetra entonces en el pelo radical e
induce la formacin, por parte de la planta, de un tubo de composicin similar
a la pared celular, conocido como canal de infeccin, que avanza por el pelo
radical. A continuacin, la infeccin alcanza a las clulas de la raz
adyacentes a los pelos radicales, y los factores Nod estimulan la divisin de
las clulas vegetales, produciendo finalmente el ndulo. Las bacterias son
liberadas desde el canal de infeccin al citoplasma de las clulas vegetales
por un mecanismo similar al de endocitosis. Los rizobios quedan separados
del citoplasma por una membrana derivada de la planta hospedadora y que
se llama la membrana peribacteroidal (MPB). A continuacin hay una divisin
continua y sincronizada de los rizobios rodeados de MPBs. Al cesar la
divisin las bacterias se transforman en unas formaciones ramificadas,
hinchadas y deformes, llamadas bacteroides. Estos quedan rodeados,
individualmente o en pequeos grupos por la MPB. A la estructura que
contiene estos grupos de bacteroides rodeados por la MPB se les llama
simbiosomas. Los bacteroides pueden llegar a ser hasta 40 veces ms
grandes que los bacilos a partir de los que se desarrollan, y hasta varios
miles se encuentran en una sola clula vegetal. La fijacin de nitrgeno no se
inicia hasta que se han formado los bacteroides. El sistema vascular de la
planta se extiende dentro del ndulo y transporta nutrientes hacia y desde el
ndulo. Cuando el ndulo se deteriora las bacterias pasan al suelo. En
algunos casos las formas bacteroidales no tienen capacidad de divisin, pero
los ndulos contienen siempre algunos rhyzobios en estado de latencia.

Estas formas proliferan en el suelo utilizando como nutrientes algunos de los

productos del ndulo destrudo y las bacterias pueden iniciar la infeccin en
otras races o mantenerse en estado libre en el suelo.
3.5 TIPOS DE NDULOS Y ESPECIFICIDAD DE LA INTERACCIN
RIZOBIO-LEGUMINOSA
Hay que recordar que la familia de las leguminosas es enorme y diversa y
comprende alrededor de 20.000 especies. Dada esta diversidad, no es
adecuado hacer generalizaciones, hay diferentes modos de infeccin (no
siempre es a travs de canales de infeccin) y las formas y modo de
desarrollo de los ndulos pueden ser muy variadas. En general, los ndulos
se pueden dividir en dos tipos: 1) ndulos indeterminados, que contienen un
meristemo persistente resultando en formas cilindricas y a menudo y 2)
ndulos determinados que carecen de un meristemo persistente y tienen
forma redondeada.
La formacin de una simbiosis efectiva es un proceso altamente especfico,
sin embargo, el grado de especificidad vara tremendamente entre los
diferentes rizobios. As algunas cepas tienen un rango de hospedador muy
reducido como por ejemplo R. leguminosarum biovar trifolii que slo fija
nitrgeno en especies de Trifolium (trbol) o S. meliloti, que nodula especies
de los gneros Medicago, Melilotus y Trigonella. Otras por el contrario
muestran un amplio rango de hospedador, este es el caso de Rhizobium sp.
NGR234 que nodula 112 gneros incluyendo la no-leguminosa Parasponia.
3.6 BASES MOLECULARES
LEGUMINOSA

DE

LA

INTERACCIN

RIZOBIO-

El aspecto especfico en la relacin rizobio-leguminosa ha promovido gran

cantidad de estudios para identificar las seales implicadas. Se conocen las
seales que se intercambian en la etapa temprana de la interaccin mientras
que para las etapas subsiguientes (infeccin, liberacin de los bacteroides,
comienzo de fijacin de nitrgeno) se conocen algunos componentes de la
bacterias que son necesarios pero no cmo actan.
La primera seal implicada en la interaccin la provee la planta. Los rizobios
son capaces de notar la presencia de la raz de la leguminosa por medio de
molculas de bajo peso molecular (flavonoides, isoflavonoides y betanas)
secretadas por la raz.

10

Este proceso es especfico hasta cierto punto ya que las leguminosas

secretan flavonoides especficos para atraer Rhyzobium especfico.
En respuesta a la seal de la planta los rizobios responden sintetizando otras
seales especficas, los factores Nod, dirigidos hacia la planta hospedadora.
Los genes de la bacteria implicados en la sntesis de los factores Nod son los
genes nod (nodulacin). Estos genes, a excepcin de nodD, no se expresan
si no se encuentra la seal inductora adecuada de la planta. El gen nodD se
expresa constitutivamente y la protena NodD tiene la capacidad de
reconocer los flavonoides especficos secretados por la planta. Los operones
de los genes nod estn precedidos por un promotor que contiene una
secuencia consenso. A esta secuencia consenso se le llama caja de
nodulacin (o caja nod) y que es reconocida por la protena NodD. Una vez
activada por los flavonoides, la protena NodD a su vez va a activar la
transcripcin de los genes de la nodulacin mediante su unin a las cajas
nod.
La estructura del factor Nod mayoritario de S. meliloti se determin en 1990 y
desde entonces las estructuras de los factores Nod de muchos otros rizobios
se han determinado. La informacin detallada de la estructura de los factores
Nod y su biosntesis se encuentra en varias revisiones. Todos los factores de
nodulacin caracterizados tienen una estructura bsica comn que consiste
en un oligmero de N-acetil-D-glucosamina unidos por enlace 1 > 4 que
lleva unido un cido graso al nitrgeno del extremo no reductor. Debido a la
semejanza estructural del oligosacrido a quitina, polmero 1 > 4 de
glucosamina tpico de hongos y del exoesqueleto de insectos, a los factores
Nod tambin se les llama LCOs (del ingls: lipo-chitin oligosaccharides).
Las estructuras de los factores Nod producidos por los diferentes rizobios
varan en:
1) la presencia de grupos adicionales mayormente en los extremos del
oligosacrido de quitina,
2) en el tipo de cido graso presente en el extremo no reductor, y
3) en la longitud del esqueleto de oligosaccharido.

Los genes de la nodulacin se definen como aquellos genes de rizobio que

son necesarios para la nodulacin o que se expresan coodinadamente con
estos. Aunque los llamamos de modo general como genes nod, comprenden
a genes designados como nod, nol y noe. Estos genes estn generalmente
agrupados bien en plsmidos o en una regin del cromosoma.

11

Los plsmidos que llevan los genes nod se llaman simbiticos o pSym y
pueden llegar a ser tan grandes como un tercio del total del cromosoma
como en S. meliloti. En cepas de Rhizobium el tamao del pSym es menor
(200-600 kb) y cuando estas cepas se curan del plsmido simbitico ya no
son capaces de nodular mientras que la reintroduccin de un pSym
homlogo o heterlogo restaura la nodulacin. Recientemente se ha
determinado la secuencia total del plsmido simbitico de Rhizobium sp.
NGR234. En M. loti los genes nod se localizan en el cromosoma, pero se ha
demostrado que la regin del cromosoma donde se localizan junto a otros
genes necesarios para la simbiosis, puede transferirse de unas cepas a otras
en la rizosfera y es por ello que a esta regin de aprox. 500 kb se le llama
isla simbitica en analoga a las islas de patogenicidad descritas para
bacterias patgenas.
La biosntesis del esqueleto de los factores Nod es catalizada por los
productos de los genes nodA, nodB, y nodC . La protena NodC presenta
actividad N-acetilglucosamina 1 > 4 transferasa (quitina sintasa); NodB
es una deacetilasa que elimina el grupo acetilo del extremo no reductor y
NodA transfiere el cido graso a esta posicin.Existen muchos otros genes
involucrados en la modificacin especfica de la estructura bsica del factor
Nod en las diferentes especies de rizobio. Por ejemplo, nodH codifica la
sulfotransferasa que transfiere un grupo sulfato al extremo reductor de los
factores Nod, mientras que nodPQ sintetizan la forma activada del sulfato
que va a transferir NodH. Otro gen que determina rango de hopedador es
nodZ, cuyo producto es una fucosil transferasa que aade fucosa al extremo
reductor del factor Nod. Los productos de los genes nodF y nodE se
requieren para la biosntesis de cidos grasos poliinsaturados. La presencia
de stos es necesaria para la nodulacin de leguminosas del llamado "grupo
galegoide". Por otra parte, la capacidad de un determinado rizobio de
producir factores Nod con estructuras diferentes se ha relacionado con la
amplitud en el rango de hospedador.
Los factores Nod purificados son capaces de inducir en la planta reacciones
similares a las que producen los rizobios. De modo significativo, son capaces
de inducir la divisin en clulas ya diferenciadas del cortex de la planta. Es
por ello que a los factores Nod se les llama morfgenos y se ha sugerido que
su estructura pueda imitar a seales u hormonas de la propia planta, an no
identificadas.

12

3.7 FUNCIONAMIENTO DEL NDULO

La fijacin simbitica de nitrgeno en rizobio se lleva a cabo en los
bacteriodes que se encuentran en el citoplasma de las clulas del ndulo. La
enzima nitrogenasa cataliza la reaccin:
N2 + 8H+ + 8e- + 16 Mg-ATP > 2NH3 + H2 + 16 Mg-ADP + 16Pi
La nitrogenasa es un protena de gran tamao que consiste de dos
componentes, la protena homodimrica que contiene Fe y es codificada por
nifH, y la protena tetramrica que contiene Fe y molibdeno (Mo), codificada
por los genes nifD y nifK. La nitrogenasa de los ndulos radiculares posee
caractersticas similares a la enzima de las bacterias fijadoras de nitrgeno
en vida libre, incluyendo la sensibilidad al O2 y la capacidad de reducir
acetileno y N2. La formacin de H2 es parte del mecanismo de la
nitrogenasa, pero representa una prdida significativa de energa. En
algunas especies de rizobio existe una hidrogenasa (codificada por los genes
hup) que es capaz de reciclar el H2formado por la nitrogenasa, que resulta
en un uso ms eficiente de la energa. Es por ello, que se ha impulsado la
transferencia de los genes hup a todas las cepas de rizobio para la
inoculacin en el campo.
Los bacteroides dependen totalmente de la planta para obtener la energa
necesaria para la fijacin de nitrgeno. Los principales compuestos orgnicos
transportados al interior de los bacteroides a travs de la membrana
peribacteroidal son los intermediarios del ciclo del cido ctrico, en particular
los cidos de cuatro carbonos succinato, malato y fumarato. Estos cidos
son utilizados como donadores de electrones para la produccin de ATP y,
tras su conversin en piruvato, como ltima fuente de electrones para la
reduccin del N2. El primer producto estable que se obtiene de la fijacin de
N2 es el amonio, y varias pruebas indican que la asimilacin del amonio para
formar compuestos de nitrgeno orgnico en los ndulos radicales lo lleva
principalmente la planta. El amonio tambin se puede asimilar en los
bacteroides y puede ser transferido a la planta en forma de alanina.
Durante el proceso de simbiosis la planta tambin expresa protenas
especficas del ndulo a las que se llama nodulinas. Entre ellas, la
leghemoglobina tiene la funcin de aportar O2 a los bacteroides y de
controlar los niveles O2. La leghemoglobina se localiza en el citosol de las
celulas de la planta infectada por bacteroides y es la que confiere el tpico
color rojo o rosado de los ndulos funcionales
13

IV.

MATERIALES

4.1 RHYZOBIUM:

(FREJOL, ALFALFA,ETC):

4.2 AGAR NUTRITIVOS:

14

4.3 ISOPO MICROBIOLOGICO:

4.4 MATERIALES DE LIMPIEZA:

15

V.

METODOS

5.1 EXTRACCION DE NODULOS

Preparar en un vaso de precipitados los ndulos procedentes de las
leguminosas (pallares).
16

5.2 DESCONTAMINACION DE NODULOS

Lavar con agua, echar leja para que descontamine la flora adyacente y
enjuagar con abundante agua
Evitar que por algn motivo se eliminen accidentalmente los ndulos
obtenidos
5.3 PULVERIZACION DE NODULOS
Para ellos vamos a triturar con las pinzas dichos ndulos.
5.4 SIEMBRA DELRHYZOBIUM
Siembra con la ayuda del asa de siembra en agar nutritivo donde se puede
observar colonias blancas o colonias gram (-).

VI.

RESULTADOS
17

6.1 RHYZOBIUM

A MUESTRA SE OBSERVA COLONIAS Y MUCOSAS BLANCAS.

VII.

CONCLUSIONES

La capacidad fijadora de N2 de Rhyzobium en asociacin con las

leguminosas es importante en los sistemas agrcolas de produccin y

18

especialmente en la rotacin de cultivos, por lo cual es conveniente favorecer

su aplicacin generalizada, ya que la inoculacin es una opcin natural, que
no contamina el ambiente y favorece la conservacin del suelo. Por tanto el
manejo adecuado de la tecnologa de inoculantes a base de Rhyzobium
puede, por lo menos asegurar el rendimiento de las leguminosas de manera
ecolgica.

Se logr aislar los ndulos de Rhyzobium encontrados en los pelos

absorbentes de pallar.
El medio de cultivo para el sembrado y reproduccin de Rhyzobium es
el agar nutritivo
Se estudi e identifico el Rhyzobium, mediante la prctica en
laboratorio y la lectura de definiciones.
Se realiz la tcnica de estra simple; ya que es lo ms acorde para el
cultivo del Rhyzobium.
Se obtuvo las fotografas paso a paso para seguir la secuencia
adecuada y as entender el proceso.

VIII.

RECOMEDACIONES
Evaluar las sepas aisladas de las bacterias del genero rhizobium en
el suelo arcilloso y de baja fertilidad, a efecto se observa su potencial
para fijar nitrgeno atmosfrico a nivel de invernadero y ensayo de
campo.

19

Para las muestras donde no se obtuvo respuesta a la infeccin de

plantas por rhizobium, se trabaja en lugares que cumplan con las
condiciones de asepsia con el propsito de evitar contaminacin por
hongos.
Evaluar el uso de nuevas metodologas para aislar y caracterizar
rizobios, a partir de otro tipo de pruebas bioqumicas, fisiolgicas y
moleculares.
Repetir los muestreos de sitios de los cuales no se logr el aislamiento
de cepa.
Para predecir el establecimiento de Rhizobium por tipo de suelo, se
realizara un agrupamiento de morfotipos en relacin al nmero de
ndulos formados por zona y en funcin de los parmetros fsicoqumicos del suelo de las diferentes zonas.
Considerando que el aislamiento de microorganismos en medios libre
de nitrgeno (Medio Ashby), constituye un primer paso hacia la
identificacin de bacterias con capacidad para fijar nitrgeno, se debe
realizar una comprobacin de esta actividad en las 24 cepas de
Actinomicetos aislados mediante ensayos como el de la actividad
nitrogenasa al analizar la capacidad de reducir acetileno a etileno.

20

IX.

BILIOGRAFIA

X.

http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/11059/3050/1/580
73S161.pdf
http://www.lamolina.edu.pe/Investigacion/web/anales/pdf_anale
s/LX(1).pdf
https://es.scribd.com/doc/77844632/practica-9-aislamientorhizobium
https://prezi.com/eeh_fgiaoqi9/aislamiento-de-cepas-derhizobium-sp-a-partir-de-raices-de/
http://www.mag.go.cr/rev_meso/v06n01_068.pdf
file:///C:/Users/Xix/Downloads/Aislamiento%20y%20selecci
%C3%B3n%20de%20bacterias%20nativas%20(2).pdf

ANEXOS

En esta imagen podemos observar la obtencin de la ribosa en la alfalfa.

21

Como se puede observar en la imagen las flechas nos muestran el

Rhyzobium

Capturando el rhyzobium para poder sembrarlo en la placa petri podemos

observar como uno de nuestras compaeros est sembrando la ribosa en
una placa Petri.
22

En esta placa Petri podemos observar el resultado final de nuestro cultivo.

INTEGRANTES DEL GRUPO

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25