DEPARTAMENTO CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA

CARRERA DE INGENIERA AGROPECUARIA

SANTO DOMINGO.

Asignatura:

Microbiologa.

Estudiantes:

Alfonso Avila.
Dennis Macas.
Carlos Vera.
Cristina Carceln

Nivel:

Tercero B

Docente:

Ing. Gustavo Nez J. M.Sc

Prctica: N2
Grupo: 1
Fecha: 09/11/2015
Tema: Esterilizacin.

Perodo
Octubre 2015 Febrero 2016

I.

INTRODUCCIN.

La eficacia de un proceso de esterilizacin depende de cmo se realice el proceso en s y

de mltiples factores relacionados con el objeto: estructura fsica, nivel de
contaminacin inicial, de limpieza, compatibilidad con el proceso de esterilizacin, tipo
de envoltorio, etc. Todas las fases de un proceso de esterilizacin limpieza, preparacin
del equipo, esterilizacin, almacenaje y transporte deben validarse y controlarse.
(Hidalgo, 2004)
La esterilizacin implica la destruccin de todos los microorganismos, incluyendo los
esporos. La desinfeccin supone la destruccin de los microorganismos vegetativos que
pueden causar enfermedades o en el contexto de las industrias de alimentos, los que
pueden producir alteraciones, la desinfeccin no mata necesariamente a los esporos.
(Montufar, 2001)
Pueden alterar y condicionar el proceso de esterilizacin y derivar al fracaso del mismo.
La presencia de protenas protege a los microorganismos frente a la accin de los
agentes esterilizantes, especficamente los qumicos. Con el fin de eliminar la materia
orgnica y reducir la carga microbiana y garantizar con ello la eficacia del proceso de
esterilizacin, el material debe descontaminarse previamente mediante una limpieza
exhaustiva. Algunos autores demuestran que despus de una limpieza minuciosa de
material de difcil acceso contaminado artificialmente fibroscopios, agujas espinales se
logra una reduccin microbiana de entre un 99.90% y un 99.99%. (Montufar, 2001)
II.

OBJETIVOS:

2.1 OBJETIVO GENERAL

Conocer las tcnicas y principios de esterilizacin de materiales, instrumentos y otros
insumos de laboratorio.
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
Cumplir las recomendaciones de utilizacin de las tcnicas de esterilizacin especficas
para cada elemento. .
Operar adecuadamente los equipos destinados a la esterilizacin en laboratorio

III.

REVISION DE LITERATURA.

3.1 Esterilizacin
La esterilizacin es un proceso a travs del que se logra la destruccin total de los
microorganismos viables presentes en un determinado material.
La esterilizacin microbiolgica Puede desarrollarse a travs de diferentes mtodos
qumicos y fsicos. Una alternativa frecuente es someter aquello que se quiere esterilizar
a altas temperaturas que causen la muerte de los microorganismos. (Silniz., 2010)

3.2 CLASIFICACIN DE LOS MTODOS DE ESTERILIZACIN

Agentes fsicos El calor se puede aplicar como

agente esterilizante de dos formas: el calor
hmedo el cual destruye a los microorganismos
por desnaturalizacin de las protenas y el calor
seco que destruye a los microorganismos por
oxidacin de sus componentes celulares. As
tenemos que las radiaciones ionizantes se pueden
utilizar para la esterilizacin de materiales
termolbiles, como por ejemplo materiales plsticos, y las radiaciones no ionizantes,
como la luz ultravioleta, puede ser empleada en el control (Silniz., 2010)de reas
cerradas.
Agentes mecnicos La filtracin permite la remocin de todos los microorganismos
presentes en un lquido o un gas retenindolos sobre la superficie de un material.
(Silniz., 2010)
Agentes qumicos Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes
esterilizantes porque tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas
capaces de daar los componentes celulares de los microorganismos (protenas,
membranas, etc.) (Silniz., 2010)

3.3Medios de cultivos:
El agar sangre es un medio de aislamiento especialmente diseado para facilitar el
crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positvas y todas las especies
encontradas en muestras de origen clnico. Contiene una mezcla de peptonas
particularmente

adaptada

al

cultivo

de

microorganismos

exigentes

La presencia de sangre permite la determinacin de la hemlisis, criterio bsico en la

orientacin hacia la identificacin bacteriana. (Arroyo, 2013)
Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperacin de
enterobacterias y bacilos Gramnegativos entricos relacionados. Contiene sales biliares
y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacteriasGram positivas y de algunas Gram
negativas exigentes. (Arroyo, 2013)
Agar Mueller-Hinton Es un medio de cultivo rico, diseado especialmente para hacer
ensayos de sensibilidad y recomendado por el Comit de la Organizacin Mundial de la
Salud sobre estandarizacin de pruebas de susceptibilidad. (Arroyo, 2013)
Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperacin de
enterobacterias y bacilos Gram negativos entricos relacionados. Contiene sales biliares
y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram
negativas exigentes. La lactosa es la nica fuente de carbono. El indicador es el rojo
neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de
rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitacin de las sales
biliares por la gran cantidad de cidos formados, lo que se observa fcilmente en el
medio por la aparicin de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no
fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. (Arroyo, 2013)
Agar glucosa de Sabouraud Este medio fue desarrollado para el cultivo de hongos
patgenos, especialmente de los productores de micosis superficiales. En la actualidad
se recomienda slo para el aislamiento primario de dermatfitos, con el agregado de
cicloheximida y cloranfenicol. (Arroyo, 2013)
Medio de cultivo Agar de Dextrosa y Papa es de la marca DIBICO, y es conocido
como PDA por sus siglas en ingles, tiene la infusin de papa como fuente de almidones
y la dextrosa son la base para el crecimiento de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5)
evita el crecimiento de las bacterias. Cuando se va a usar para el recuento de hongos y

levaduras, agregar al medio de cultivo una

vez esterilizado y enfriado aproximadamente
a 45C, 14 ml de una solucin estril de cido
tartrico al 10% para obtener un pH
aproximado de 3.5. Sembrar el medio de
cultivo por estra en la superficie o adicionar
la muestra para la tcnica de vaciado en
placa. Incubar hasta 7 das a temperatura
ambiente. (Arroyo, 2013)
IV.
MATERIALES Y EQUIPOS.
Equipos
Estufa de esterilizacin
Cmara de flujo laminar
Autoclave
Cocineta elctrica
Parrilla de agitacin.
Materiales

Probetas
Vasos de precipitados
Barrilla de ajitacion
Caja petri
Barrilla magnetica de agitacin .
Termometro
Papel de encapuchado.

Reactivos e insumos

V.

PDA.
Alcohol.
Leche fresca.
Agua destilada.

PROCEDIMIENTO.

Como primer paso se conoce las tcnicas correspondientes para proceder a una
esterilizacin adecuada por lo cual se realiza los pasos correspondientes:
1.
2.
3.
4.
5.

Limpiar las cajas Petri de manera que no tenga ninguna suciedad.

Tener abierto el papel estraza.
Ubicar la caja Petri en el centro del papel estraza.
Realizar los dobles correspondientes.
Ubicar en la estufa esterizadora.

Como segundo proceso se procede a la elaboracin del PDA para ser ubicado en la
autoclave para preparar el medio de cultivo y la pasterizacin de la leche.
La pasterizacin de la leche se la hizo con 10 litros para ello para que cumpla un
buen proceso debe de llegar a los 75C, medidos con u termmetro de laboratorio,
luego se pasa por una fuente fra se adiciona las bacterias saprofitas Gram + que
ayudan a la elaboracin de yogur, luego de 24 horas se aplica el saborizante
Para la elaboracin del medio de cultivo se llena un vaso de precipitacin con 240
ml de agua destilada a 80C cuando ya est lista se aplica 9,36 gramos de PDA
manteniendo la temperatura caliente, para que se convierta en una mescla uniforme
se utiliz una varilla magntica para que la mescla sea sin desgate fsico y sea
contante hasta terminar el proceso donde los grumos de PDA sean disueltos. Al tener
el medio de cultivo listo del vaso de precipitacin se distribuy de manera
homognea al nmero grupos en laboratorio para que sean utilizados en las cajas
Petri.
VI.

RESULTADOS.

Con la presente prctica se pudo realizar un correcto encapuchado de cajas Petri con
el papel estraza para que puedan ser ubicados en la estufa completando con el
proceso de esterilizacin.
Se realiz un medio de cultivo para microorganismos ente este caso con PDA, para
luego ser ubicados en la autoclave para que sea esterilizado.
Se hizo una buena pasterizacin de la leche con todos los requisitos posibles para un
buen proceso a 75 C.
VII.

CONCLUSIONES.

Se conoci las tcnicas de preparacin, conservacin, y uso de los

medios de cultivo para el crecimiento y desarrollo de microorganismos
existentes en el ambiente.

La tcnica de esterilizacin de cajas Petri fue la ms adecuada siguiendo

los pasos del docente del rea.

Las tcnicas de dispensacin de medios de cultivos en cajas petri se

aprendi con xito los procedimientos adecuados.

Se prepar medio de cultivo con PDA.

El procedimiento de pasterizacin fue el ms correcto posible.

VIII. Recomendaciones.
Pesar bien los medios de cultivos para mezclar con el agua ya que el exceso o el
escs del medio no formara un medio de cultivo ptimo.
Esterilizar bien los envases de vidrio que contienen los medios de cultivos para
evitar inconvenientes con la pureza del medio de cultivo
Tener a disposicin los implementos adecuados de higiene tales como
mascarillas, guantes etc.

Tener mucho cuidado al momento de manipular las herramientas o aparatos

destinados a la esterilizacin

Al momento de ingresar a la cmara de flujo laminar saber cubrir bien las cajas
con el medio de cultivo , ya que podremos contaminar fcilmente la muestra
IX.
BIBLIOGRAFA
Arroyo, P. (2013). Medios de Cultivos. /asignatura.us.es/.
Hidalgo, T. (2004). Esterilizacion. Recuperado el 31 de 10 de 2015, de
http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part6/6.pdf
Montufar, S. (2001). Medios de esterilizacin. Esterilizacin.

Silniz., B. P.-U. (2010). Metodologa de esterilizacin en el laboratorio

microbiolgico. Madrid.: Reduca.

X.

ANEXOS

ARIAS 2015

XI.

CUESTIONARIO.
Cul es la temperatura adecuada para la pasterizacin de la leche?
75 C