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UNIVERSIDADE FEDERAL DA GRANDE DOURADOS

FACULDADE DE CINCIAS BIOLGICAS E AMBIENTAIS


VI TURMA DE BIOTECNOLOGIA
DISCIPLINA DE GENTICA GERAL

CITOGENTICA DE PLANTAS

Acadmicos:

Lucas

Pires

Guarnier, Rafael Correia da


Silva

Ramir

Bavaresco

Junior. Prtica turma P2.


Relatrio

apresentado

para

complementar a avaliao da
disciplina de Gentica geral,
solicitado

pela

Prof.

Alexia Barufatti. Grisolia.

DOURADOS/MS

Dr.

Sumrio
Introduo...................................................................................................... 3
Objetivo.......................................................................................................... 4
Materiais........................................................................................................ 4
Procedimentos................................................................................................ 4
Resultados...................................................................................................... 5
Discusso....................................................................................................... 6
Concluso....................................................................................................... 7
Referncias..................................................................................................... 8

Introduo
Durante o seu desenvolvimento as clulas passam por vrias etapas
cclicas. Este ciclo celular dividido em duas fases: interfase e diviso celular:
mitose (diviso de clulas somticas onde as clulas filhas recebem o conjunto
de informaes genticas idnticas ao da clula me) ou meiose (diviso de
clulas gamticas onde tem o incio com uma clula diploide e trmino com
quatro clulas haploides geneticamente diferentes entre si).
A interfase a fase mais demorada, mesmo no sendo o momento em
que a clula est em diviso, muitos eventos importantes esto acontecendo
em seu interior. As etapas da interfase so: G1, fase de crescimento celular. S,
o principal evento a duplicao do material gentico. G2, conhecida como
fase de preparao, pois ocorre a sntese de molculas e organelas
importantes no processo de diviso celular.
O encerramento da ltima etapa da interfase o que da incio primeira
etapa da mitose, conhecida como prfase, que a etapa mais longa da mitose,
pois o DNA condensado, os centrolos migram para os polos da clula e h o
desaparecimento da carioteca e do nuclolo. A etapa seguinte prfase a
metfase, nela o fuso acromtico liga-se aos centrmeros dos cromossomos,
que j esto em seu encurtamento mximo e, por isso, forma-se a placa
equatorial, onde os cromossomos ficaro dispostos voltados para o centro do
plano com os braos voltados para fora.
Na anfase, fase seguinte, ocorre a fragmentao dos centrmeros, com
isso, h a separao das cromtides, cada uma delas passando a formar um
cromossomo, neste momento ocorre o encurtamento das fibras do fuso
acromtico, havendo, ento, a ascenso polar. Em seguida, com a telfase, a
cromatina vai descondensar e alongar os cromossomos, o fuso acromtico ir
se dissolver e a membrana nuclear reaparecer dispondo-se em volta dos
cromossomos.

Objetivo
Coletar e tratar razes de cebola e us-las para obteno de metfase
que podero ser posteriormente utilizadas para anlise cariotpicas.

Materiais

Razes de cebola;
Gilete;
Lmina e lamnula;
Papel filtro;
Seringas com agulhas;
Tubos de ensaio;
Lamparinas;
Orcena actica 2%;
Soluo de 8-hidroxiquinolena (8HQ).

Procedimentos
1. Coleta de razes: Colocou-se as sementes de cebola para germinar, as razes
foram coletadas quando atingiram cerca de trs centmetros de comprimento;
2. Pr-tratamento: Interrompeu-se a diviso celular no processo de metfase
para obteno dos cromossomos de cebola, tratando as razes com 8hidroxiquinolena durante 24 horas. As razes foram fixadas em etanol:cido
actico na proporo 3:1 durante o perodo de 12 a 24 horas. Em seguida a
soluo foi substituda por um novo carnoy e guardou-se o material na
geladeira;
3. Fixao: Mergulhou-se as razes em Carnoy 3:1 por 2 a 20 horas a
temperatura ambiente;
4. Colorao: Retirou-se as razes previamente fixadas (j preparadas e
bloqueadas de mitose), enxugou-se ligeiramente as razes e colocou-se as
mesmas em um tubo de ensaio com orcena actica a 2%. Aqueceu-se o tubo
aberto na chama da lamparina a lcool at que o corante comece a borbulhar.
Retirou-se o tubo rapidamente da chama, deixando o material esfriar no
corante por cerca de 20 minutos com o tubo fechado.
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5. Preparao da lmina: Colocou-se uma raiz numa lmina limpa, seccionou-se


a poro apical da raiz. Acrescentou-se uma gota do corante no aquecido e
cobriu-se com uma lamnula limpa. Bateu-se levemente com uma agulha de
ponta rombuda por cima da lamnula contra a lmina, diretamente sobre o
material, fez-se isso para o total espalhamento das clulas de cada fragmento.

Resultados
A. O mtodo de colorao utilizado foi eficiente?
Foi, os cromossomos foram corados com orcena actica 2% e
carmim. Entretanto o melhor resultado foi obtido com a colorao
com orcena actica 2%.

Figura 1-A e 1-B. Cromossomos condensados em clulas da raiz de


Allium cepa corados com orcena actica 2%.
B. Foram obtidas metfases com cromossomos sem sobreposio
e com boa morfologia?
Em algumas clulas os cromossomos estavam sobrepostos,
entretanto, houve casos em que a sobreposio no prejudicou a
viso dos mesmos, sendo possvel observ-los com boa morfologia,
como no caso da Figura 1-B.
C. Caso contrrio, seria possvel melhorar o espalhamento e a
nitidez das figuras metafsicas?
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Sim, basta espalhar bem as clulas da raiz da cebola, isso deve


ser feito com algum objeto firme, como por exemplo, uma agulha de
ponta rombuda como explicado no procedimento de nmero 5,
Preparao da lmina.

Discusso
1. Qual a importncia do fixador?
O fixador extremamente importante para que as clulas cessem
suas atividades vitais, causando o menor impacto possvel. Ajuda na
fixao dos corantes no material gentico.
2. Como agem os bloqueadores de diviso celular? Qual foi o
utilizado nesse experimento?
Nessa aula prtica foram utilizados a colchicina e 8HQ (8hidroxiquinolena), ambos so agentes antimitticos, sendo a colchicina
por inibir a formao das fibras do fuso e a 8HQ responsvel por inativar
o fuso mittico.

3. Como se d a colorao dos cromossomos pelo reativo de Schiff?


uma tcnica clssica que oferece bons resultados e dispensa a
retirada da lamnula. A intensidade da colorao, nesse caso, depende
muito das condies de fixao e hidrlise. Quando essas condies so
bem controladas, a intensidade de colorao dos ncleos diretamente
proporcional quantidade de DNA que eles apresentam. Por isso, essa
colorao utilizada para medir a quantidade de DNA nuclear.
4. Como voc usaria o conhecimento obtido nessa aula?
O conhecimento obtido nessa aula serve para compreender as
caractersticas e morfologia dos cromossomos. Permitiu observar de
forma mais real e satisfatria a quantidade de cromossomos em clulas
da raiz de cebola. Em resumo, os conhecimentos obtidos serviro de
base para futuras anlises envolvendo o caritipo de plantas e outros
seres vivos.
Pergunta extra: Quantos cromossomos h na cebola (Allium cepa)?
A cebola possui 16 cromossomos e na imagem observada em aula
prtica, observou-se mais que 16 cromossomos, pode ser que havia outra
clula sobreposta visualizada ou alguma outra situao adversa para tal
incoerncia nos resultados.

Concluso
Essa prtica foi satisfatria, pois foi possvel aprender mais sobre as
caractersticas qumicas do mesmo e observar a morfologia dos cromossomos.
Sendo possvel assim, futura anlise de caritipo.

Referncias
1. SNUSTAD, D. P.; SIMMONS, M. J.; Principles of Genetics, 6 ed. Hoboken:
John Wiley & Sons, 2012. 767p.
2. REECE, I., CAMPBELL, J. B. II., NEIL, A. Biology. 9 ed. Pearson Education,
San Francisco, 2011. 1472p.
3. <http://www.ensp.fiocruz.br/portal-ensp/_uploads/documentospessoais/documento-pessoal_52172.pdf> Acesso em 01 de fevereiro de
2016.