Obtencion de Biopolimero A Partir de Dioxido No Se Que

OBTENCIN DE PELCULAS POLIMRICAS BASADAS EN DIXIDO DE
SILICIO ENCAPSULADO EN UNA MATRIZ DE QUITOSANO Y GLICEROL

ORGNICO A TRAVS DEL MTODO DE EVAPORACIN LENTA PARA
APLICACIONES BIOMDICAS
WILSON FERNANDO PANTOJA YELA

OSCAR MAURICIO VELEZ TABARES
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE OCCIDENTE

FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERA BIOMDICA
SANTIAGO DE CALI
2011
OBTENCIN DE PELCULAS POLIMRICAS BASADAS EN DIXIDO DE

SILICIO ENCAPSULADO EN UNA MATRIZ DE QUITOSANO Y GLICEROL
ORGNICO A TRAVS DEL MTODO DE EVAPORACIN LENTA PARA
WILSON FERNANDO PANTOJA YELA

OSCAR MAURICIO VELEZ TABARES
Proyecto de Grado para optar al ttulo de

Ingeniero Biomdico
Director
CLARA EUGENIA GOYES LOPEZ
Dra. Ing. con nfasis en Ingeniera de Materiales
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE OCCIDENTE

FACULTAD DE INGENIERA
PROGRAMA DE INGENIERA BIOMDICA
SANTIAGO DE CALI
2011
Nota de aceptacin:
Aprobado por el comit de grado en

cumplimiento de los requisitos
exigidos
por
la
Universidad
Autnoma de Occidente para optar
al ttulo de Ingeniero Biomdico.
Ingeniero Mauricio Barrera

Jurado
Ingeniero Jos Mina

Jurado
Santiago de Cali, 23 de Febrero de 2012

3
Culmina una de las etapas ms esperadas e importantes de mi vida en la que

agradezco y dedico a Dios, por haberme permitido llegar hasta este punto y
haberme dado salud para lograr mis objetivos, adems de su infinita bondad y
amor.
A mi padre Mario Vlez, por los ejemplos de constancia y perseverancia que lo

caracterizan y que me ha inculcado siempre, por el valor mostrado para salir
adelante y por su cario; a mi madre Martha Lucia Tabares, por haberme
apoyado en todo momento, por sus valores, por la motivacin y constantes
consejos, que me han permitido ser una persona de bien, pero ms que nada,
por su amor.
A mis familiares; a mi to Bernardo, a mi to Orlando, a mi to Guillermo, a mi

ta Yolanda, a mi hermana Lina, a mi sobrino Juan, a mi prima Katherine, a mi
prima Juliana que me acompaa desde el cielo, a mis abuelos y bisabuelos que
en paz descansen, a todos ellos y muchos otros miembros de mi gran familia
que si nombrara sobrepasaran esta y muchas pginas ms, que participaron
directa o indirectamente en la elaboracin de esta tesis, por ser el ejemplo de
una familia unida y llena de valores de la cual aprend demasiado.
Gracias a ustedes!
A mis maestros; por su gran apoyo y motivacin para la culminacin de

nuestros estudios profesionales y para la elaboracin de esta tesis.
A mis amigos; que nos apoyamos mutuamente en nuestra formacin

profesional y que hasta ahora, seguimos siendo amigos y compartiendo
grandes aventuras, sonrisas y triunfos: Diana Marcela Riascos, Loly Ardila,
Diana Araujo, Heydy Mosquera, a Jorge Derazo, Bryan Pillimurt. A mi
compaero de tesis Fernando Pantoja por su gran amistad y su perseverancia
participando de forma directa en la elaboracin de este trabajo de grado.
Oscar Mauricio Vlez
A DIOS.
Por sus infinitas bendiciones, gracias por permitirme llegar hasta esta instancia
de mi vida, gracias por cada minuto, hora y das que me has permitido
conocerte y dar fe que eres un Dios vivo.
A MIS PADRES.
SONIA YELA ROMO y WILSON PANTOJA ACOSTA quienes me ensearon a

valorar cada instante de mi vida, me ensearon a luchar por lo que quiero y
puedo lograr, gracias por darme su amor, cario y apoyo incondicional, gracias
por sus consejos. Sin ustedes, todo esfuerzo seria en vano porque son mi
razn de ser y existir. GRACIAS POR DARME LA VIDA!
A MI FAMILIA.
Gracias por su apoyo incondicional, mis abuelos: Aura, Rubiela, Gerardo,

Marco Polo. Mis bisabuelos: Elvira, Lina, Herman (que Dios los tenga en su
gloria). Mis tos: Harolth (gracias por su apoyo y comprensin), Helena, lvaro,
Henry (q.e.p.d), Nelsa, Omaira, Patricia, Aylem, Edwar, Lipcio, Zenaida. Mis
hermanas: Sahira, Camila. Mis primos: Sebastin, Esteban, Mara, Dayana,
Lislihe, Linda, Mafe, Jess, ngela, Julieth, Jhon, Luisa, Magda, Ana, Jairo.
Roberto (gracias por su cario y apoyo). Andrea (gracias por su amor, apoyo,
compaa, y a su familia gracias)
A MIS AMIGOS.
Gracias por su compaa y su amistad incondicional, lvaro, Giovanny, Martin,

Marcela, Diana, Loly, Heidy, Oscar quien me brindo su amistad y fue parte de
este logro.
Wilson Fernando Pantoja Yela
AGRADECIMIENTOS
Expresamos nuestros ms sinceros agradecimientos a todos aquellos que, de

alguna u otra manera, contribuyeron en la realizacin del presente trabajo.
Profesora Clara Eugenia Goys Lpez, Doctora en Ingeniera de Materiales de
la Universidad del Valle, integrante del Grupo de Investigacin de Materiales
Avanzados para Micro y Nano Tecnologa IMAMNT de la Universidad
Autnoma de Occidente, Directora del Trabajo de Grado.
Profesora Luz Elena Vinasco, estadstica, Magister en Ciencias Agrarias de la
Universidad del Valle, profesora de la Pontificia Universidad Javeriana Cali.
Profesor Faruk Fonthal Rico, Doctor en Ingeniera Electrnica de la Universidad
Rovira i Virgili - Espaa, Director del Grupo de Investigacin de Materiales
Avanzados para Micro y Nano Tecnologa IMAMNT de la Universidad
Autnoma de Occidente.
Profesora Paola Andrea Neuta Arciniegas, Bacteriloga de la Universidad del
Valle, Directora del Programa de Ingeniera Biomdica de la Universidad
Profesor Oscar Checa, Doctor en fsica de la Universidad del Valle, profesor
hora ctedra de la Universidad Autnoma de Occidente.
Ingeniero Heberth Gonzalez, Ingeniero elctrico, Coordinador de laboratorios
de la Facultad de Ingeniera de la Universidad Autnoma de Occidente.
Ingeniero David Fernndez, Magster en Ingeniera Industrial de la Pontificia
Universidad Javeriana de Cali, Ingeniero Mecatrnico de la Universidad
Jennifer Lucum Vargas, Laboratorista Clnico de la Universidad del Valle,
encargada del Laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad
Jos Pereira, Asistente de Laboratorio de Materiales de la Universidad
CONTENIDO
GLOSARIO
19
RESUMEN
24
INTRODUCCIN
26
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
29
2. OBJETIVOS
31
2.1. OBJETIVO GENERAL

2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS
31
31
3. JUSTIFICACIN
32
4. ANTECENDENTES
33
4.1. QUITINA
4.2. CAMPOS DE APLICACIN DEL QUITOSANO
4.3. PELCULAS DE QUITOSANO
4.4. GLICEROL
4.5 DIXIDO DE SILICIO
4.6 MTODO DE EVAPORACIN LENTA
4.7 COMPORTAMIENTO MATERIALES POLMERICOS
33
34
38
38
39
40
40
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
42
5.1. ESTANDARIZACIN DEL MTODO PARA OBTENCIN

DE PELCULAS POLIMRICAS A PARTIR DE GLICEROL
ORGNICO Y QUITOSANO
5.2 PROCESOS REALIZADOS, EQUIPOS Y MATERIALES
UTILIZADOS PARA LA FABRICACIN Y CARACTERIZACIN
DE LAS PELCULAS POLIMRICAS
5.2.1 Diseo experimental
5.2.2 Etapa 1: Medicin de glicerol orgnico
5.2.3 Etapa 2: Medicin de quitosano
5.2.4 Etapa 3: Preparacin de acido actico al 1%
5.2.5 Etapa 4: Disolucin del quitosano
5.2.6 Etapa 5: Mezcla de quitosano diluido con glicerol
orgnico de maz
orgnico vegetal
7
42
42
45
46
47
49
51
52
54

orgnico de grasa animal
5.2.9 Etapa 8: Depsito de mezclas en tubos de ensayo
5.2.10 Etapa 9: Centrifugado de la mezcla
5.2.11 Etapa 10: Depsito de mezclas en moldes de tefln
5.2.12 Etapa 11: Cubrimiento de mezcla con campana de acrlico
5.2.13 Etapa 12: Evaporacin de mezcla a temperatura ambiente
5.2.14 Etapa 13: Secado de la mezcla a 40 C
5.3. PRUEBAS DE RESISTENCIA MECNICA PARA
ESTANDARIZACIN DE MTODO DE OBTENCIN
DE PELCULAS POLIMRICAS CON LAS
CARACTERSTICAS ADECUADAS PARA
5.4. ENCAPSULAMIENTO DEL DIXIDO DE SILICIO
EN LA MATRIZ POLIMRICA QUE PRESENT
LAS MEJORES CARACTERSTICAS DE
RESISTENCIA MECNICA
5.5. TCNICA PARA EL DIAGNOSTICO CITOTXICO
5.5.1. Viabilidad celular
5.6. PRUEBAS DE MICROSCOPA ELECTRNICA DE
BARRIDO EN LAS PELCULAS POLIMRICAS (SEM)
5.6.1 Preparacin de las muestras
5.6.2 Proceso llevado a cabo para las pruebas de Microscopia
Electrnica de Barrido a las pelculas polimricas
54
55
57
58
58
60
61
62
66
69
69
72
73
75
6. ANLISIS Y RESULTADOS
77
6.1. OBTENCIN DE LAS PELCULAS POLIMRICAS

6.1.1. Obtencin de quitosano lquido
6.1.2. Obtencin de soluto a partir de quitosano diluido y glicerol
6.1.3. Obtencin de pelculas polimricas de quitosano
y glicerol, a travs del mtodo de
evaporacin lenta
6.2. RESULTADO DISEO EXPERIMENTAL
6.3. ANLISIS Y DETERMINACIN DE PROPIEDADES MECNICAS
6.4. OBTENCIN DE PELCULAS POLIMRICAS
QUITOSANO, GLICEROL DE MAZ Y SiO2
6.5. ANLISIS DE CITOTXICIDAD
6.6. ANLISIS DE MICROSCOPA ELECTRNICA DE BARRIDO
6.6.1 Muestras recubiertas con oro en la Cmara
de Vacio Denton Vacuum
6.6.2 Resultados obtenidos para las pruebas de
Microscopa Electrnica de Barrido
77
77
77
7. CONCLUSIONES
77
78
81
91
92
103
103
103
105
8. RECOMENDACIONES
107
GRUPOS DE INVESTIGACIN
109
BIBLIOGRAFA
110
ANEXOS
113
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Equipo utilizado para medir las proporciones de glicerol

utilizadas micropipeta (A), Deposito de proporcione s de glicerol en
recipientes (B)
47
Figura 2. Quitosano utilizado (A), Paleta para tomar el polvo de

quitosano y recipiente para depositarlo (B), Pesa con campana
para medir el quitosano (C), cantidad exacta de quitosano obtenida
a partir de los clculos, observada en el indicador digital
de la pesa (D).
48
Figura 3. Acido actico al 100% (A), agua destilada (B)
49
Figura 4. Baker mezcla de agua destilada y acido actic o al 100% (A)

Acido actico al 1% (B)
50
Figura 5. Deposito de quitosano en Baker con agitador magntico (A),

mezcla de acido cido actico con quitosano (B), plancha de agitacin
magntica (C), Agitacin de las mezclas a 7000 RPM (D)
51
Figura 6. Mezcla de quitosano y acido actico despus de
transcurridas 6 horas de agitacin (A)
52
Figura 7. Proceso para agregar glicerol a quitosano diluido

concentracin glicerol de maz alta (A), muestras de quitosano y
glicerol de maz en las tres concentraciones en proceso de
agitacin (B)
53
Figura 8. Mezcla de quitosano y glicerol de origen vegetal

concentracin glicerol de origen vegetal alta (A), muestras de
quitosano y glicerol de origen vegetal en las tres concentraciones en
proceso de agitacin (B).Figura 10. Tcnicas de caracterizacin del
recubrimiento
54
Figura 9. Mezcla de quitosano y glicerol de grasa animal

concentracin glicerol de grasa animal alta (A), muestras
de quitosano y glicerol grasa animal en las tres concentraciones
en proceso de agitacin (B)
55
Figura 10. Medicin con pipeta de 12,7 ml de cada tipo de glicerol

en su diferente concentracin para depsito en tubos de
ensayo (A), deposito de mezclas en tubos de ensayo (B),
10
tubos de ensayo con mezclas (C)
57
Figura 11. Centrifuga empleada para dicho proceso (A), ubicacin

de los tubos de ensayo en la centrifuga (B), parmetros establecidos
y proceso de centrifugado (C)
58
Figura 12. Modelo CAD de los moldes a obtenerse (A), Maquinado de

tefln para obtencin de moldes (B), Moldes de tefln (C), Deposito
de la mezcla en moldes de tefln (D), Mezcla depositada (E)
59
Figura 13. Cubrimiento de los moldes con la campana de acrlico (A)
60
Figura 14. Nivelador (A), Ubicacin de los moldes con las

mezclas (B), Estado de las mezclas despus de transcurrido
el tiempo establecido (C)
61
Figura 15. Horno (A), Estado de las mezclas despus de

transcurridas 46 horas en el horno a 40 C (C)
62
Figura 16. rea establecida por la norma ASTMD882-10

para pruebas de resistencia mecnica en polmeros
63
Figura 17. Maquina universal de ensayos INSTRON (A),

Distancia entre grips de la maquina universal INSTRON (B)
64
Figura 18. Bosquejo de pelcula polimrica obtenida para

las pruebas de resistencia mecnica
64
Figura 19. Ubicacin de la pelcula polimrica en la maquina

universal INSTRON (A)
65
Figura 20. Proceso para determinacin de propiedades

mecnicas de la pelcula polimrica (A)
66
Figura 21. Manipulacin del dixido de silicio (A), Calibracin

de la balanza de precisin (B), Deposito del dixido de silicio
en la balanza (C), Peso del dixido de silicio (D)
67
Figura 22.
Agitacin de la mezcla de quitosano, gl icerol
y dixido de silicio (A)
68
Figura 23.
Pelculas de quitosano, glicerol y

11
dixido de silicio encapsulado (A)
68
Figura 24. Extraccin de sangre por venopuncin (A),

tubo con sangre (B), tubos con sangre de los distintos
pacientes (C)
70
Figura 25. Autoclave (A), implementos en proceso de

esterilizacin (B)
71
Figura 26. Sangre centrifugada (A), separacin de cadena

de linfocitos (B), tubo de ensayo despus de lavado de
linfocitos (C), preparacin del antibitico (penicilina y
gentamicina) (D), Mezcla de linfocitos, antibitico y RPMI (E),
Deposito de la pelcula polimrica en la mezcla de linfocitos,
antibitico y RPMI (F), Muestras en cmara de CO2 (G)
71
Figura 27. Principio de funcionamiento del SEM, segn

componentes
73
Figura 28. Cmara de Vacio Denton Vacuum
74
Figura 29. Muestras de pelculas polimricas listas para

ser introducidas a la Cmara de Vacio Denton Vacuum
para el proceso de recubrimiento con oro
74
Figura 30. Microscopio Electrnico de Barrido JEOL JSM-6490LV
75
Figura 31. Ubicacin de las muestras en Electrnico de Barrido

JEOL JSM-6490LV
75
Figura 32. Pelculas polimricas transcurrido el tiempo de

secado (A), Pelcula polimrica obtenida (B)
78
Figura 33. Grficos de contorno humedad Vs concentracin

para obtener cantidad optima de glicerol a utilizar para la
fabricacin de pelculas polimricas con alta deformacin
79
Figura 34. Proporciones porcentuales optimas de los reactivos

empleados para la fabricacin de pelculas polim ricas
81
Figura 35. Curva de tensin Vs deformacin para las pruebas de

resistencia mecnica de la piel
84
12
Figura 36. Histograma de los 3 promedios obtenidos para

las pruebas de deformacin a las cuales fueron sometidas
las pelculas polimricas de quitosano y glicerol de maz en
sus tres concentraciones (baja, media y alta)
84

las pelculas polimricas de quitosano y glicerol vegetal en
sus tres concentraciones (baja, media y alta)
85

las pelculas polimricas de quitosano y glic erol grasa animal
en sus tres concentraciones (baja, media y alta)
85
Figura 39. Histograma de los 3 promedios obtenidos para las

pruebas de tensin a las cuales fueron sometidas las pelculas
polimricas de quitosano y glicerol de maz en sus tres
concentraciones (baja, media y alta)
86
Figura 40. Histograma de los 3 promedios obtenidos para las

pruebas de tensin a las cuales fueron sometidas las pelculas
polimricas de quitosano y glicerol vegetal en sus tres
concentraciones (baja, media y alta)
86

las pruebas de tensin a las cuales fueron sometidas las
pelculas polimricas de quitosano y glicerol grasa animal
en sus tres concentraciones (baja, media y alta)
87
Figura 42. Grafico de esfuerzo vs deformacin para la pelcula

polimrica de quitosano y glicerol de maz bajo (A), Grafico
de esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica de quitosano
y glicerol de maz medio (B), Grafico de esfuerzo vs deformacin
para la pelcula polimrica de quitosano y glicerol de maz alto (C), Grafico
de esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica de quitosano y
glicerol vegetal bajo (D), Grafico de esfuerzo vs
deformacin para la pelcula polimrica de quitos ano y glicerol
vegetal medio (E), Grafico de esfuerzo vs deformacin para la
pelcula polimrica de quitosano y glicerol vegetal alto (F),
Grafico de esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica
de quitosano y glicerol de grasa animal bajo (G), Gra fico de
13
esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica de quitosano

y glicerol de grasa animal medio (H), Grafico de esfuerzo vs
deformacin para la pelcula polimrica de quitosano y glicerol
de grasa animal alto (I)
88
Figura 43. Histograma que representa el mdulo de Young vs

concentracin de glicerol
90
Figura 44. Matriz de conteo cmara de newbauer (A), Linfocitos

viables (B) y (C), linfocito no viables (D)
92
Figura 45. Control positivo pelcula polimrica, quitosano y

glicerol maz (A), Muestra UNO Pelcula polimrica, quitosano,
glicerol maz y dixido de silicio en baja proporcin (B), Muestra
DOS Pelcula polimrica, quitosano, glicerol maz y dixido de
silicio en media proporcin (C), Muestra TRES Pelcula polimrica,
quitosano, glicerol maz y dixido de silicio en alta proporcin (D),
Control negativo caucho (E)
96
Figura 46. Barras porcentuales de linfocitos viables y no viables

expuestos al control positivo (pelcula polimrica de quitosano y
glicerol maz), durante los 3 das
97

expuestos al control muestra uno (quitosano, glicerol de maz y
dixido de silicio en baja proporcin), durante los 3 das
98

expuestos al control muestra dos (quitosano, glicerol de maz y
dixido de silicio en mediana proporcin), durante los 3 das
98

expuestos al control muestra tres (quitosano, glicerol de maz y
dixido de silicio en alta proporcin), durante los 3 das
99

expuestos al control negativo (caucho) durante los 3 das
99
Figura 51. Porcentaje de viabilidad celular para cada una de las

muestras transcurridos los tres das de conteo
Figura 52. Muestras recubiertas con oro en la Cmara
14
102
de Vacio Denton Vacuum
103
Figura 53. Imagen de Microscopia Electrnica de Barrido para

pelicula polimerica de quitosano, glicerol maiz alta concentracion
y dioxido de silicio en baja concentracion (0,25%) (A), Imagen de
Microscopia Electrnica de Barrido para pelicula polimerica de
quitosano, glicerol maiz alta concentracion y dioxido de silicio en
media concentracion (0,5%) (B), Imagen de Microscopia Electrnica
de Barrido para pelicula polimerica de quitosano, glicerol maiz alt a
concentracion y dioxido de silicio en alta concentracion (0,75%) (C)
104
15
LISTA DE CUADROS
Cuadro 1. Aplicaciones del quitosano en diversos campos
35
Cuadro 2. Procesos, reactivos y equipos utilizados para la

elaboracin de las pelculas polimricas
42
Cuadro 3. Tipos de material, presentacin y uso de cada compuesto
44
Cuadro 4. Concentracin de glicerol utilizado
46
Cuadro 5. Cantidad y concentracin de los materiales empleados

para la obtencin del acido actico al 1 %
50
Cuadro 6. Proporcin de acido actico al 1 % y quitosano

empleados para la preparacin de la mezcla
51
Cuadro 7. Proporciones de glicerol de maz y quitosano

diluido en acido actico empleadas para la mezcla
53
Cuadro 8. Proporciones de glicerol vegetal y quitosano diluido

en acido actico empleadas para la mezcla
54
Cuadro 9. Proporciones de glicerol animal y quitosano diluido

en acido actico empleadas para la mezcla
55
Cuadro 10. Receta o concentraciones adecuadas para la fabricacin

de las pelculas polimricas de quitosano y glicerol de maz, obtenidas
a partir del desarrollo del diseo experimental
56
Cuadro 11. Distribucin de la mezcla en tubos de ensayo
80
Cuadro 12. Proporciones porcentuales optimas de los reactivos

empleados para la fabricacin de pelculas polimricas
81
Cuadro 13. Datos promedio de esfuerzo porcentual y deformacin

obtenidos para las pelculas polimricas
82
Cuadro 14. Comparacin entre datos de deformacin y tensin

obtenidas con las pruebas de resistencia mecnica de las pelculas
polimricas de quitosano y glicerol de maz con datos de deformacin
y tensin de pelculas polimricas ya existentes
83
Cuadro 15. Matriz de conteo celular del cultivo de linfocitos
16
(conteo cada 24 horas)
91
Cuadro 16. Receta o concentraciones adecuadas para la fabricacin

de las pelculas polimricas de quitosano, glicerol de maz y SiO 2
94
Cuadro 17. Estadstica de linfocitos viables para cada muestra

durante los tres das
100
Cuadro 18. Estadstica de linfocitos no viables para cada muestra

durante los tres das
100
Cuadro 19.
Comparacin estadstica para determinacin de
viabilidad celular
101
17
LISTA DE ANEXOS
ANEXO A. Norma ASTMD82-10
112
ANEXO B. Material safety data sheet (msds) dixido de silicio (SiO2)
123
ANEXO C. Formulario de consentimiento informado
128
ANEXO D. Procedimiento de la tcnica azul de tripn para evaluar

biocompatibilidad celular
133
ANEXO E. Certificado de calidad glicerina, laboratorio de ensayos

biodiesel, operado por sgs Colombia S.A
135
ANEXO F. Certificado de anlisis quitosano, sigma aldrich, bm science

and service ltda
136
18
GLOSARIO
ACIDO ACTICO: es un lquido higroscpico, que solidifica a 16,6 C, incoloro

y de olor punzante (a vinagre). Es soluble en agua, etanol, ter, glicerina,
acetona, benceno, y tetracloruro de carbono. Es insoluble en sulfuro de
carbono. Se obtiene por oxidacin, a partir de alcohol etlico.
AGUA DESTILADA: es aquella que como todo tipo de agua su composicin se
basa en la unidad de molculas H2O, solo que se le han eliminado las
impurezas e iones mediante la destilacin.
ANTIBACTERIANO: quimioterpico que acta inhibiendo la actividad de la
topoisomerasa, enzima que produce el superenrollamiento de la cadena del
DNA bacteriano.
APSITO: los apsitos son vendajes especiales que bloquean los grmenes y
mantienen el sitio del catter seco y limpio
ASTM D882-10: mtodo de prueba estndar para las propiedades de traccin
de Lminas de plstico.
AUTOCLAVADO: proceso mediante el cual, por medio de la presin y
temperaturas elevadas se destruyen grmenes patgenos.
AZUL DE TRIPN: indicador o colorante implementado en procesos de
evaluacin de biocompatibilidad con tcnicas de viabilidad celular.
BIOCOMPATIBILIDAD: propiedad de los materiales para interactuar con un
medio fisiolgico, sin generar alteraciones o una respuesta inmunolgica.
BIODEGRADABLE: sustancia que puede ser descompuesta con cierta rapidez
por organismos vivientes, los ms importantes de los cuales son bacterias
aerobias. Sustancia que se descompone o desintegra con relativa rapidez en
compuestos simples por alguna forma de vida como: bacterias, hongos,
gusanos e insectos.
BIOMATERIAL: material diseado para ser implantado o incorporado dentro
de un sistema vivo, con el objeto de sustituir o regenerar tejidos vivientes y sus
funciones.
CEA: autoinjerto epitelial cultivado.
CITOTXICIDAD: poder destructor con respecto a las clulas. Su destruccin
puede ser provocada por anticuerpos activos en presencia de complemento,
contra clulas determinadas; o directamente por clulas agresivas, linfocitos
(linfocito s K) o macrfagos: en este caso se trata de citotxicidad por
mediacin celular.
19
COLGENO: es una protena fibrosa que forma el tejido conectivo, y que en

los mamferos y aves constituye una proporcin muy importante de las
protenas totales, del orden de un cuarto del total, lo que la hace la mayoritaria.
COMPUESTO: es una sustancia formada por la unin de dos o ms elementos
de la tabla peridica. Una caracterstica esencial es que tiene una frmula
qumica.
CRUSTCEO: animal invertebrado con respiracin branquial que tiene dos
pares de antenas y el cuerpo cubierto por un caparazn duro y flexible.
DESACETILACIN: eliminacin de un grupo acetilo (COCH3) de una
molcula. Es una reaccin importante en varios ciclos bioqumicos, incluyendo
el ciclo de Krebs.
DIXIDO DE SILICIO: es una sustancia amorfa que se produce sintticamente
mediante un proceso de hidrlisis en fase de vapor, que da slice pirognica,
mediante un proceso hmedo, que da slice precipitada, gel de slice, o slice
hidratada.
DERMIS: la dermis es la capa de piel situada bajo la epidermis y firmemente
conectado a ella. A la cara interna de la membrana basal de la epidermis se le
une la dermis.
ELASTICIDAD: se refiere a la capacidad de un slido de volver a su forma
original cuando es deformado.
EPIDERMIS: la epidermis es la capa ms externa de nuestra piel. Se sita
encima de la dermis y est formada casi exclusivamente por clulas epiteliales
del tipo queratinocitos.
ESFUERZO MECNICO: es el resultado de la divisin entre una fuerza y el
rea en la que se aplica.
EVAPORACIN: la evaporacin es un proceso fsico en el que un lquido o un
slido se convierten gradualmente en gas.
GLICEROL: tambin conocido como glicerina o 1, 2,3 propanotriol, es un
compuesto alcohlico con tres grupos OH (hidroxilos). Posee un aspecto de
lquido viscoso, no tiene color, pero si un caracterstico olor, adems de un
sabor dulzn. Adems el glicerol es un compuesto higroscpico, lo que quiere
decir que tiene la capacidad de ceder o absorber la humedad presente en el
medio ambiente que lo rodea.
20
GLUCOSAMINA: es un amino azcar que acta prominentemente como

precursor de la sntesis bioqumica en la glicosilacin de las protenas, participe
en la formacin de los cartlagos, articulaciones, tendones y de los ligamentos.
HIDROGEL: son sistemas en estado coloidal con apariencia slida.
HIGROSCPICOS: todos los compuestos que atraen agua en forma de vapor
o liquido de su ambiente.
HOMOGENEIDAD: mezcla de varias sustancias que da como resultado una
sustancia de estructura y composicin uniforme.
IN-VITRO: se refiere a una tcnica para realizar un determinado experimento
en un tubo de ensayo, o generalmente en un ambiente controlado fuera un
organismo vivo.
LINFOCITO: leucocito de pequeo tamao, de ncleo esfrico y escaso
citoplasma, que se halla en la linfa y en la sangre y cuya funcin es reconocer a
los antgenos y sintetizar anticuerpos.
MATRIZ: conjunto de elementos qumicos del mismo tipo que comparten un
nombre comn.
MODULO DE YOUNG: es un parmetro que caracteriza el comportamiento de
un material elstico, segn la direccin en la que se aplica una fuerza. Este
comportamiento fue observado y estudiado por el cientfico ingls Thomas
Young.
MSDS: material safety data sheet
NANOFIBRA: es una nica y revolucionaria tecnologa de tejido que es cientos
de veces ms finos que un cabello humano.
NANMETRO: es la unidad de longitud que equivale a una milmillonsima
parte de un metro. Recientemente la unidad ha cobrado notoriedad en el
estudio de la nanotecnologa.
N-ACETILGLUCOSAMINA: es una de las formas de glucosamina, un reactivo
que se encuentra naturalmente en el cuerpo, puede provenir de fuentes
naturales como conchas exteriores de mariscos, as como fuentes sintticas.
Glucosamina como un suplemento alimenticio se utiliza para la osteoartritis,
dolor de rodilla, dolor de espalda, prdida de peso y glaucoma.
PARTCULA: elemento ms pequeo en que puede dividirse una sustancia sin
alterar sus propiedades fsicas y qumicas.
21
PLASTIFICANTE: un plastificante es una sustancia que cuando se aade a un

material, normalmente a un plstico, da como resultado un producto flexible y
ms fcil de manejar.
POLIHIDROXIALCOHOL: cadenas carbonadas en las que los carbonos
presentan un grupo OH y un radical H.
POLMERO: los polmeros son macromolculas (generalmente orgnicas)
formadas por la unin de molculas ms pequeas llamadas monmeros. La
materia est formada por molculas que pueden ser de tamao normal o
molculas gigantes llamadas polmeros. Los polmeros se producen por la
unin de cientos de miles de molculas pequeas denominadas monmeros
que forman enormes cadenas de las formas ms diversas
POLISACRIDO: son compuestos formados por la unin de muchos
monosacridos. Pertenecen al grupo de los glcidos y cumplen la funcin tanto
de reserva energtica como estructural. Los polisacridos son polmeros cuyos
monmeros son los monosacridos que se unen repetidamente mediante
enlaces glucosdicos, formando cadenas en su estructura molecular.
PRE SPUTTERING: mtodo preliminar a un proceso asistido por plasma
para tratamientos superficiales y limpieza de entornos.
PSEUDOPLASTICIDAD: comportamiento en el cual los materiales polimricos
ven reducida su viscosidad al aumentar la velocidad de deformacin. Es
marcada dependiendo la distribucin de pesos moleculares y de la estructura
del polmero. Se puede explicar en base a la formacin y ruptura de
interacciones entre las molculas del polmero y al desenmaraamiento de las
mismas.
PUNTO DE RUPTURA: deformacin mxima del material.
QUEMADURA: una quemadura es una lesin en los tejidos cutneos,
generalmente ocasionada por un exceso de calor. La gravedad de una
quemadura depende de la profundidad del compromis o tisular. Las
quemaduras pueden dividirse en tres categoras: se hace referencia a ellas
como quemaduras de primero, segundo y tercer grado.
QUITINA: polisacrido que constituye el material principal del que est formado
el esqueleto externo de los artrpodos. La quitina est formada por hidrato de
carbono nitrogenado, es de color blanco e insoluble en agua; la quitina se
puede encontrar en el esqueleto de los cangrejos.
QUITOSANO: es un polisacrido lineal compuesto de cadenas distribuidas
aleatoriamente de -(1-4) D-glucosamina (unidades deacetiladas) y N-acetil-Dglucosamina (unidad acetilatada). Derivado de la quitina.
22
REGENERACIN: capacidad que poseen ciertos organismos vivos para

restaurar un tejido perdido o lesionado o de hacer crecer nuevamente una parte
de su cuerpo perdida por causa accidental o fisiolgica.
REPETITIVIDAD: pruebas llevadas a cabo al mismo material, usando el mismo
equipo en el mismo da.
REPRODUCIBILIDAD: comparacin de dos valores cercanos para el mismo
material operando diferente equipo en diferentes das.
SILICIO: es un elemento qumico metaloide, nmero atmico 14 y situado en el
grupo 4 de la tabla peridica de los elementos formando parte de la familia de
los carbonoideos de smbolo Si. Es el segundo elemento ms abundante en la
corteza terrestre (27,7% en peso) despus del oxgeno.
SUERO BOBINO FETAL: sustancia rica en componentes protenicos que sirve
para el enriquecimiento de medios de cultivo, implementada en procesos de
separacin celular.
SUSTRATO: material base que se ve expuesto a transformaciones fsicoqumicas superficiales, este puede ser de tipo metlico, cermico, polmero o
compuesto.
TEFLN: el tefln es un polmero muy resistente que fue descubierto por
casualidad en el ao 1938 por un trabajador de la empresa Du Pont llamado
Roy J. Plunkett,. El tefln es resistente a temperaturas muy altas e impide
adems sustancias se adhieran a la superficie de este.
TEJIDO: un tejido es un conjunto de clulas similares que suelen tener un
origen embrionario comn y que funcionan en asociacin para desarrollar
actividades especializadas.
TENSIN: es la fuerza interna aplicada, que acta por unidad de superficie o
rea sobre la que se aplica. Tambin se llama tensin, al efecto de aplicar una
fuerza sobre una forma alargada aumentando su elongacin.
TRACCIN: esfuerzo a que est sometido un cuerpo por la aplicacin de dos
fuerzas que actan en sentido opuesto, y tienden a estirarlo.
LCERA: una lcera es toda lesin de la piel o membrana mucosa con forma
crateriforme (forma de un crter, al perderse parte del tejido) y con escasa o
nula tendencia a la cicatrizacin.
VIABILIDAD CELULAR: ensayo preliminar a la implementacin de la tcnica
de citotoxicidad, el cual evala la calidad de las clulas que estarn expuestas
a un material en prueba.
23
RESUMEN
En el presente estudio se obtuvieron pelculas polimricas, basadas en la

combinacin de quitosano, glicerol orgnico y nanopartculas de dixido de
silicio, a travs del mtodo de evaporacin lenta, con el propsito de que
puedan ser usadas para una posible aplicacin en Ingeniera de tejidos. El
procedimiento utilizado arroja como resultado, que en condiciones ambientales
y usando una campana acrlica para cubrir las muestras, se presenta un
adecuado secado del compuesto. En funcin de lograr un procedimiento que
conduzca a una exploracin ms precisa en la fabricacin de nuevos
materiales, en este estudio se realiz un diseo experimental mediante el
diseo factorial 3, superficies de respuesta y optimizacin simultanea de varias
variables, buscando maximizar las propiedades mecnicas del compuesto.
Para ello a travs de este diseo se tuvieron como base 2 factores, en este
caso concentracin de glicerol y tipo de glicerol, por lo cual se llevaron a cabo 9
experimentos con 5 replicas obteniendo as 45 muestras finales 1. En este
sentido, se logr obtener los valores ptimos para la combinacin de los
reactivos que garantice que el compuesto cuente con las propiedades
mecnicas deseadas (alto grado de deformacin y buena resistencia) para las
posibles aplicaciones biomdicas que se pretende.
El mtodo de evaporacin lenta permiti obtener pelculas polimricas

delgadas de aproximadamente 100 m de espesor, a partir de la combinacin
de quitosano con tres tipos de glicerol de origen orgnico, maz, vegetal y grasa
animal, a diferentes concentraciones. Todas las muestras (en total 45 segn el
diseo realizado) fueron sometidas a pruebas de traccin para determinacin
de sus propiedades mecnicas bajo la Norma ASTM D882-10. Mediante estas
pruebas se comprob la plasticidad de las pelculas y el punto de ruptura
mediante la curva de esfuerzo y deformacin, determinando que la mayor
plasticidad la poseen las pelculas polimricas con mayor concentracin de
glicerol y la mayor resistencia mecnica la obtienen las pelculas polimricas
con menor concentracin de glicerol.
A las pelculas polimricas que obtuvieron la mejor combinacin de los

reactivos arrojada por el diseo experimental, en funcin de sus mejores
propiedades mecnicas, se les realiz un encapsulamiento con nanopartculas
de dixido de silicio (12 nm) a diferentes concentraciones. El dixido de silicio
es un derivado del silicio abundante en la piel de los seres humanos, que
otorga propiedades humectantes y antibacterianas a las pelculas, para la
posible aplicacin en regeneracin de tejidos. En este sentido, se evalu la
1
FERNANDEZ, D. VINASCO, L.E. Estudio del mtodo de evaporacin lenta para la

fabricacin de pelculas polimricas basadas en quitosano y glicerol orgnico. Pontificia
Universidad Javeriana. 2011. Santiago de Cali. Colombia.
24
biocompatibilidad de las pelculas polimricas dopadas con dixido de silicio, a

travs de una prueba de viabilidad celular (citotoxicidad) , obteniendo un 79%
de aceptacin de las pelculas polimricas con el entorno fisiolgico.
Palabras Clave: pelcula, polmero, quitosano, glicerol, dixido de silicio,

evaporacin lenta, tejidos, compuesto, diseo, reactivos, deformacin,
resistencia, espesor, orgnico, ruptura, regeneracin, antibacteriana,
biocompatibilidad, citotoxicidad.
25
INTRODUCCIN
En la investigacin biomdica se presenta un gran inters por la aplicacin que

tienen los biomateriales. Una de las reas ms importantes en las que
actualmente se estn llevando a cabo estudios cientficos, es en Ingeniera de
Tejidos, en la cual se busca emplear polmeros con propiedades de
biocompatibilidad y biodegradabilidad para la regeneracin de tejidos.
Uno de los biopolmeros ms empleados en ingeniera de tejidos es el

quitosano, el cual es un biopolmero derivado de la quitina que se extrae del
caparazn de los crustceos. El quitosano posee propiedades de
biocompatibilidad, biodegradabilidad y toxicidad nula; tiene diversos campos de
aplicacin y tambin es usado en el tratamiento de la regeneracin tisular
debido a que posee caractersticas humectantes y antibacterianas 2.
La unin del quitosano con un plastificante da como resultado una pelcula con
una gran resistencia mecnica y gran maleabilidad, la cual puede ser empleada
como apsito para la piel por sus propiedades de biocompatibilidad. De los
plastificantes conocidos el ms empleado para lograr obtener una pelcula con
estas caractersticas y esta contextura es el glicerol orgnico 3. A diferencia de
otros polmeros biodegradables el glicerol posee propiedades favorables
debido a su alta biocompatibilidad y biodegradabilidad. Este material es un
polihidroxialcohol ampliamente utilizado en las industrias qumica, farmacutica
y cosmtica en virtud de sus propiedades: Humectante, antisptica,
higroscpica y espesante. El glicerol puede ser obtenido de diversas fuentes,
es obtenido de palmas, caa de azcar y otras fuentes orgnicas. Tomando en
consideracin el aumento del precio de las materias primas utilizadas
tradicionalmente para su obtencin, se impone la bsqueda de nuevas y
variadas fuentes4.
KONG, M., CHEN, X., XING, K,. JIN PARK, H. Antimicrobial properties of chitosan and mode
of action. PR China, 2010. p. 53.
3
MARTNEZ CAMACHO A.P, CORTEZ ROCHAA M.O., EZQUERRA BRAUERA J.M.,
GRACIANO VERDUGO A.Z., RODRIGUEZ FLIXA F., CASTILLO ORTEGA M.M., YPIZ
GMEZ M.S., PLASCENCIA JATOMEAA M. Journal of Carbohydrate Polymers. 82, 2010. p.
305 315.
4
KONG, M., CHEN, X., XING, K,. JIN PARK, H.. Op.cit., p. 53.
26
En el presente proyecto tambin ha sido importante buscar la maximizacin de

las propiedades mecnicas, y dar a las pelculas, propiedades antibacterianas
y de humectacin. En este sentido el glicerol y el quitosano se mezclarn con
nano partculas de dixido de silicio SiO2, el cual es un compuesto que se halla
presente en elevada proporcin en la epidermis, la dermis y el cabello para
incrementar la resistencia qumica de la queratina. Este material juega un papel
muy importante en el ser humano, pues desempea distintas acciones en tre las
cuales se destacan: accin reestructurante/hidratante, accin citoestimulante, y
la accin antiinflamatoria5.
En este estudio, los autores pretenden una exploracin innovadora en donde

se desea encapsular nanopartculas de SiO 2 en una matriz polimrica,
esperando que su accin humentante, y dems propiedades puedan hacer
parte de una pelcula polimrica que pueda usarse para cubrir la piel.
Empleando el dixido de silicio en esta presentacin, se est dando un gran
avance en el estudio de ingeniera de tejidos para las ciencias biomdicas. El
uso de nanoparticulas permite la creacin de materiales tiles/funcionales,
mediante el control de la materia, observando diversos resultados y grandes
aportes para las ciencias medicas como lo es la liberacin de frmacos con
materiales en la escala del nanometro 6.
Por otro lado, tanto el glicerol, como el quitosano y el dixido de silicio son
sustancias que estn presentes en la piel, ayudndola a mantenerse resistente,
humectada y libre de bacterias. Al presentarse algn tipo de accidente que
afecte la dermis, se ven afectadas las estructuras de sta, presentndose
perdida de muchos de sus componentes. Uno de los accidentes ms
frecuentes son las quemaduras, que pueden suceder por diversos factores. Las
quemaduras son tratadas con mtodos comunes, empleando para la
recuperacin de la zona afectada, suministro de lquidos, aplicacin de
medicamentos y utilizacin de vendajes.
Buscando que la recuperacin de las zonas afectadas sea rpida y factible, el
propsito de este proyecto es combinar estos tres biomateriales quitosano,
glicerol y SiO2, con lo cual pretendemos obtener una pelcula polimrica co n
ALCALDE, M.T., DEL POZO, A. Silicio como activo en cosmtica, Unidad de tecnologa
farmacutica. Facultad de farmacia. Universidad de Barcelona. 2008
6
FALKE, G. ATALA, A. Reconstruccin de tejidos y rganos utilizando ingeniera tisular, Citado
el
13
octubre
de
2011.
Disponible
en:
www.sap.org.ar/staticfiles
archivos/2000/arch00_2/00_103_115.pdf
27
caractersticas de resistencia mecnica y maleabilidad apropiadas que pueden

ser empleadas como apsitos en la piel y as facilitar la regeneracin de tejidos.
28
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En los pases tercermundistas las quemaduras son un grave problema de salud

pblica, por lo que prima la prevencin; sin embargo el tratamiento y su
posterior rehabilitacin dependen de los recursos que posea la vctima. En
Colombia se estima que del ao 2005 al 2010, cada fin de ao se ven
afectadas 471 personas por quemaduras que requieren atencin mdica y un
tratamiento quirrgico dado su gravedad, segn cifras del Ministerio de la
Proteccin social7.
Para el tratamiento de las quemaduras, en la actualidad, se emplean diversos

mtodos, entre los cuales se conoce un proceso de rehabilitacin a travs de la
insercin de tejidos o injertos de piel de alta tecnologa y membranas artificiales
que consiste en la extraccin de nuevos tipos de injertos de piel. Existe una
tcnica conocida como CEA (del ingls "cultured epithelial autograft" o
autoinjerto epitelial cultivado), la cual usa clulas vivientes de la piel del
paciente quemado para crecer nuevas clulas en pelculas u hojas en un
laboratorio8.
En nuestro pas es muy poco empleado dicho mtodo, pero de igual forma se
llevan a cabo diversos tratamientos para lograr la recuperacin de los pacientes
con quemaduras. Dichos procedimientos consisten en el lavado, desinfeccin y
aplicacin de medicamentos en las zonas afectadas. Sin embargo con la
implementacin de estos tratamientos, el tiempo para la recuperacin del tejido
en la zona afectada es prolongado y los resultados no siempre son los
esperados.
Finalmente esta propuesta de investigacin propone dar respuesta a la

siguiente pregunta: cul es la combinacin de glicerol y quitosano que puede
dar como resultado una pelcula polimrica con resistencia mecnica apropiada
para una posible aplicacin en regeneracin de tejidos , as como tambin cmo
COLOMBIA. MINISTERIO DE LA PROTECCION SOCIAL, censo quemados 2005 - 2010. [ en

lnea]
[consultado
10
agosto
de
2011]
Disponible
en
internet
en
http://www.cali.gov.co/publicaciones.php?id=36203.
8
ORTIZ RAMOS, J. SIERRA SNCHEZ, A. Quemaduras en el tercer mundo (tratamiento de
quemados con recursos limitados). III Congreso nacional de enfermera de quemados y ciruga
plstica, Zaragosa, 2008.
29
resulta su biocompatibilidad al adicionarse al material, nanopartculas de

dixido de silicio?.
30
2. OBJETIVOS DEL PROYECTO.
2.1 OBJETIVO GENERAL
Optimizar la resistencia mecnica de una pelcula basada en quitosano y

glicerol orgnico, encapsular dixido de silicio a esta y comprobar viabilidad
celular para posible aplicacin en regeneracin de tejidos.
2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
Fabricar pelculas polimricas a travs del mtodo de evaporacin lenta a

partir de la mezcla de quitosano y glicerol orgnico.
Determinar las propiedades mecnicas de las pelculas polimricas con el
mtodo estndar para pruebas de traccin de plsticos ASTM D882 -10.
Fabricar pelculas encapsulando dixido de silicio en la matriz polimrica
que haya obtenido las mejores propiedades mecnicas.
Determinar la viabilidad celular de las pelculas polimricas que presenten la
mejor resistencia mecnica, mediante la tcnica de citotoxicidad.
Llevar a cabo pruebas de microscopia electrnica de barrido en las
pelculas polimricas.
31
3. JUSTIFICACIN
Es comn hoy en da el uso de biomateriales en tratamientos mdicos,

principalmente en tratamientos para pacientes que han sufrido quemaduras,
con lo cual se pretende disminuir el riesgo de infeccin y mini mizar el tiempo de
recuperacin9. En este sentido, es de mucha importancia realizar estudios para
identificar la frecuencia de personas con quemaduras que requieren el uso de
tratamientos.
Para la mayora de las personas que sufren de quemaduras graves o leves,

les es ms factible el acceso a obtener un sustituto, ya que es menos costoso
que los tratamientos que existen hoy en da. Entre stos ltimos tratamiento se
pueden mencionar por ejemplo: los injertos, donde la piel se toma de otra parte
del cuerpo, otra persona o un animal como un cerdo y se une al rea quemad a
para remplazar la piel daada. Tambin en algunos pases cultivan piel a partir
de fragmentos de prepucio de bebs circuncidados, para reparar las heridas y
regenerar la dermis de quienes han sufrido quemaduras10.
Con la realizacin del presente proyecto se abre un gran campo en la

investigacin en ingeniera de tejidos y la estandarizacin del proceso de
obtencin de pelculas polimricas, las cuales beneficiaran a los pacientes
afectados por quemaduras en acceder a un tratamiento eficiente y de menor
costo comparado con los tratamientos actuales basados en quitosano.
Si bien an no est claro el precio al consumidor, se estima que esta piel

artificial o pelculas provenientes de quitosano costarn cerca de 60.450 pesos
colombianos /cm, un valor muy inferior a las pelculas sintticas importadas
que se comercializan actualmente a precios diez veces superior 11. Los
materiales implementados para la obtencin de las pelculas polimricas de
este proyecto tienen bajo costo, y fcil acceso ya que provienen de recursos
naturales.
9
VALDEZ, B. SCHORR, M. VALDEZ, E. CARRILLO, M. Revista Biomateriales para la

rehabilitacin del cuerpo humano, 2009.
10
CRDENAS, Galo. Tratamientos de paciente, 2008. [ en lnea] [consultado 13 junio de 2011]
Disponible en internet: http://www.quitoquimica.cl/tratamiento.html.
11
FERNNDEZ, Roberto. Novedoso parche a base de caparazones de crustceos. en: Diario
crnica. Chile. concepcin, 19 de junio del 2007.
32
4. ANTECEDENTES
Debido a la ubicacin geogrfica de nuestro pas, en las costas encontramos

gran cantidad de crustceos. Por eso contamos con grandes industrias
comercializadoras de dicho producto, las cuales procesan este tipo de alimento
para llevarlo al mercado. En dicho proceso se extrae el caparazn de los
crustceos, el cual es desechado por la industria en nuestras costas,
acumulndose en enormes basureros que constituyen un serio residuo
contaminante, representando un impacto ambiental negativo.
La industria camaronera no puede hacer caso omiso de las tendencias

mundiales en cuanto a la incorporacin de la normativa ISO 14000. Este
cambio en el procesamiento del recurso, ha trado consigo un incremento en la
cantidad de desechos. Cabezas y exoesqueletos son depositados en
vertederos de basura a cielo abierto o en el mar, constituyendo una fuente de
contaminacin ambiental. Se estima que los desechos de camarn constituyen
alrededor del 30% en peso del recurso; en 1994 se produjeron 990 ton de
desechos y en 1995 1.090 ton 12.
Se han llevado a cabo estudios que demuestran que estos residuos contienen
un polmero natural denominado quitina, sustancia que tiene apr oximadamente
200 usos en la industria medicinal, farmacutica, alimenticia, agrcola,
tratamiento de efluentes, entre otras 13.
4.1 QUITINA
La quitina es un biopolmero de N-acetilglucosamina y residuos de glucosamina

que se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza, y constituye la
segunda sustancia ms abundante, despus de la celulosa. Es un polisacrido
12
LEMUS CENTES, Juan Fernando. Obtencin y uso de quitosano para tratamientos drmicos
a partir de exoesqueleto de camarn, Facultad de Ingeniera. Universidad Rafael Landvar,
Octubre de 2007.
13
CAPRILE, Mara Daniela. Obtencin y Utilizacin de Quitina y Quitosano a partir de
desechos de Crustceos. 2007. Tesis. Bahia Blanca, Espaa. p. 84.
33
no txico y biodegradable que forma una sustancia cornea y es el principal

constituyente de exoesqueleto de insectos, crustceos y arcnidos.
Mediante la desacetilacin extensiva de la quitina se obtiene el quitosano el

cual es un polisacrido de cadena lineal poco frecuente en la naturaleza. Entre
las principales caractersticas del quitosano, se puede citar las siguientes 14:
-Promueve la prdida de peso (absorbe y compacta las grasas)

-Control del colesterol
-Promueve la recuperacin de ulceras y lesiones
-Accin antibacterial
-Acta como anticido
-Inhibe la formacin de placa en los dientes
-Ayuda al control de la presin sangunea
-Previene la constipacin
-Endurece los huesos (aumenta el contenido de calcio)
-Reduce los niveles sanguneos de acido rico
-Accin anti tumores.
4.2 CAMPOS DE APLICACIN
El quitosano es un polmero empleado en diversos campos por su versatilidad

a diversas aplicaciones, su no toxicidad y su biodegradabilidad. En el cuadro 1
se muestran algunos de los campos de aplicacin del quitosano.
Actualmente la ingeniera de tejidos cobra gran importancia a nivel mundial, por
ello se estn realizando investigaciones ms exhaustivas a cerca de las reas
de aplicacin del quitosano, llevando a cabo estudios en el uso de dicho
polmero para tratamientos drmicos a partir del exoesqueleto del camarn 15.
14
15
ORTIZ RAMOS. Op.cit.,

CAPRILE. Op.cit., p. 82.
34
Cuadro 1: Aplicaciones del quitosano en diversos campos

CAMPOS DE
APLICACIN
USOS
Tratamiento
de
aguas y efluentes
Industriales.
Remocin de iones metlicos y pesticidas: remocin de fenoles,

radioistopos, PCBs y colorantes, recuperacin de materiales slidos de
la industria alimenticia (protenas, polisacridos, etc).
Fabricacin
papel
Tratamiento de superficies, papel
de
Fotogrfico
Medicina
Gasas, algodn, contenedor artificial de sangre, control de colesterol,

inhibidor tumoral, membranas, inhibicin de placas dentarias,
cicatrizacin de heridas, piel artificial, tratamientos de enfermedades
seas, lentes de contacto, membranas de dilisis, bolsas de sangre,
anticoagulante.
Cosmtica
Maquillaje, esmalte de uas, locin de bao, cremas, dentfrico.
Biotecnologa
Inmovilizacin de enzimas y clulas, separacin de protenas,

cromatografa, recuperacin celular.
Agricultura
Recubrimientos de semillas y frutas (film), fertilizante, fungicida,

antivirsico.
Alimenticia
Remocin de colorantes, conservantes, estabilizante de color, exaltador

del sabor natural, preservante, antioxidante, emulsionante, aditivo de
alimentos para animales.
La quitina y el quitosano son obtenidos a partir de desechos de crustceos, lo

cual es motivo de estudio desde los puntos de vista cientfico, social,
econmico y ambiental, impulsando a la formacin de industrias que obtienen y
comercializan quitosano; una de las primeras industrias con este propsito fue
fundada en Argentina16.
16
SNCHEZ B. ANDRS, caracterizacin y utilizacin de hidrogeles de quitosano obtenidos a

partir de camarn langostino (pleuroncodes planipes) para el crecimiento de fibroblastos
humanos. Trabajo de grado para optar Ingeniera biotecnolgica. Costa rica.: Escuela de
Biologa 2006. 13 p.
35
A partir del descubrimiento de este polmero y de las fuentes de las cuales

proviene, se inicia con la investigacin de diversas aplicaciones. Las
aplicaciones en el campo cientfico y del rea de la medicina, impulsaron los
estudios para la utilizacin del quitosano en hidrogeles para el crecimiento de
fibroblastos en humanos, con esta investigacin se caracteriz aron fsica y
qumicamente el quitosano del camarn langostino Pleuroncodes planipes de
grado tcnico y purificado. Se comprob la efectividad del hidrogel con una
porosidad determinada en el crecimiento de fibroblastos humanos 17 .
Otro de los mtodos por los cuales fueron caracterizados este tipo de
hidrogeles obtenidas a partir del quitosano fue la radiacin Gamma, lo cual
permite presenciar la interaccin entre las cadenas de quitosano y el poli (vinil
acetato) o PVA en los hidrogeles. El quitosano en solucin disminuye
rpidamente su peso molecular, por efecto de la radiacin gamma, mientras
que el PVA en solucin acuosa forma hidrogeles luego de ser irradiadas a
dosis mayores de 5 kGy. Sin embargo, las mezclas de quitosano y PVA forman
hidrogeles en los cuales estos polmeros no se degradan significativamente y,
al contrario, forman hidrogeles estables. Se presentan evidencias que sugieren
que las cadenas de PVA y quitosano estn entrecruzadas covalentemente.
Esto se explica en trminos de probabilidad de reaccin de los radicales
formados por radiacin gamma 18.
La capacidad del quitosano de formar pelculas o soportes ha encontrado

muchas aplicaciones, dentro de los campos de Ingeniera de Tejidos y
liberacin de frmacos, gracias a sus excelentes propiedades mecnicas como
a su baja tasa de biodegradacin. Los soportes de quitosano pueden servir
para mantener, reforzar y en algunos casos organizar la regeneracin tisular;
como matriz puede ser utilizada para liberar materiales bioactivos o influenciar
directamente el crecimiento celular 19.
17
BERGER, J. REIST, M. MAYER, J.M. FELT, O. Structure and interactions in chitosan

hydrogels formed by complexation or aggregation for biomedical applications. European Journal
of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. School of Pharmacy, University of Lausanne,
Lausanne, Switzerland.
18
CARHUAPOMA BERNAB, WILSON. CONTRERAS, JULIO SANTIAGO. Revista
iberoamericana de polmeros. Vol. 6(4), diciembre de 2005.
19
SNCHEZ B. ANDRS, caracterizacin y utilizacin de hidrogeles de quitosano obtenidos a
partir de camarn langostino (pleuroncodes planipes) para el crecimiento de
fibroblastos.Escuela de biologa. Cosa Rica 2006. 13 p.
36
Uno de los problemas ms frecuentes y en los cuales se ha empleado el

quitosano para su tratamiento son las quemaduras. Estas son lesiones de la
piel, de sus anexos y hasta de los msculos y tendones del organismo. Es tas
son producidas por agentes fsicos y qumicos en sus diversas formas. Las
quemaduras por calor involucran el calentamiento de los tejidos sobre un nivel
donde ocurre dao irreversible de stos. La lesin tisular es proporcional al
contenido de calor del agente quemante, tiempo de exposicin y conductividad
de calor de los tejidos involucrados. La piel de nuestro organismo, posee una
alta conductividad especfica al calor, con una baja irradiacin trmica, por lo
tanto, la piel se sobrecalienta rpidamente y se enfra lentamente. Como
resultado, el dao trmico persiste luego de que el agente se haya extinguido o
haya sido removido. La gravedad de la quemadura depende de la profundidad ,
la extensin y localizacin20.
A medida que avanzan las investigaciones con el quitosano se ha encontrado

que posee propiedades regenerativas y por ende diversas aplicaciones
clnicas. Seung- Yu Shin en el ao 2005, en un experimento realizado en
humanos, demostr que las membranas de Quitosano con tecnologa de
nanofibra podan incrementar la regeneracin sea sin presentar ningn signo
de reaccin inflamatoria. Lo anterior abre una puerta para utilizar estas
nanofibras en regeneracin sea guiada. En el mismo ao Eun-Kyoung Pang
concluye que al aplicar quitosano al 0.1% en una esponja de colgeno se
incrementa la sntesis de colgeno tipo I y se facilita la diferenciacin de clulas
osteognicas; en estas condiciones existe un significativo potencial para
acelerar la regeneracin sea de calota craneana en ratas con defectos seos
extensos. Un ao despus Hua Liu afirma que si se aplica quitosano formando
parte de un sustituto seo una mezcla constituida por Quitosano, cido ctrico,
glucosa como fase lquida, y fosfato triclcico en polvo, se podra obtener una
pasta con consistencia de masilla con buena bioactividad y citocompatibilidad
que podra tener positivas aplicaciones 21.
La implementacin de quitosano en problemas drmicos, es una de las
principales aplicaciones que se estn llevando a cabo en el mbito mdico.
Lograr mantener una perfecta hidratacin en la piel cuando se presentan daos
en la piel es uno de los principales objetivos para lograr su rpida recuperacin.
Es por ello que incluir partculas de otro tipo de material, que al combinarlo con
el quitosano, permita una satisfactoria recuperacin, sera de gran importancia
y un logro mayor en el rea de la salud, pues el nmero de pacientes con
problemas drmicos causados por enfermedades o accidentes es elevado.
20
PIRIZ CAMPO, Rosa. Quemaduras. EN: Enfermera Mdico-Quirrgica, 2003, p 1124-1126.

JORQUERA, RODRIGO. JORQUERA, ORLANDO. Quitosano: un Material con Propiedades
Regenerativas y su Aplicacin Clnica. Universidad de chile. Octubre de 2008.
21
37
A continuacin se presentan con ms detalle otros materiales empleados para

la fabricacin de las pelculas polimricas de este proyecto.
4.3 PELCULAS DE QUITOSANO
El quitosano se encuentra entre los materiales utilizados para la formacin de

pelculas, debido a sus propiedades filmogenicas, compatibilidad,
biodegradabilidad, inocuidad y bajo costo. Los estudios realizados a estas
pelculas, comprenden la evaluacin del color, espesor, propiedades
mecnicas. Tambin se ha analizado la permeabilidad al oxigeno, dixido de
carbono y al agua22. Las pelculas de quitosano tienen excelentes propiedades
mecnicas que dependen en gran medida del peso molecular, de su grado de
cristalinidad y el contenido de humedad de las mismas. Son delgadas,
elsticas, resistentes y tienen una excelente adhesin en di ferentes tipos de
superficie. Poseen valores medios o moderados de permeabilidad al agua y
actan como barrera al oxigeno 23.
4.4 GLICEROL
El glicerol es un plastificante, el cual ha sido utilizado durante mucho tiempo

como preservante en aloinjertos de piel, sin embargo sus cualidades
antibacteriales no han sido totalmente documentadas. Posee grandes
caractersticas que permiten la rpida y homog nea regeneracin de piel sobre
quemaduras superficiales, de segundo y de tercer grado 24.
La capacidad regenerativa sobre heridas de gran rea, donde se encuentran

comprometidas extremidades, cabeza y torso, tienen un gran desempeo
curativo al utilizar Glicerol, sin embargo en la palma de la mano y el pie,
quemaduras en pliegues corporales o lugares de extremo mov imiento no
22
RUIZ, Jacquelina Ofelia. Caracterizacin reolgica de emulsiones en agua estabilizadas con

goma de mezquite y quitosano y su efecto en la permeabilidad de pelculas. Tesis de maestra.
Mexico: Universidad Autnoma Metropolitana, 2004. p 57.
23
ZAMUDIO, P. Caracterizacin estructural de pelculas elaboradas con almidn modificado
de pltano y quitosano. Tesis de doctorado en ciencias en desarrollo de productos biticos.
Yautepec, Mexico. Instituto Politcnico Nacional. 2008. p 39.
24
RAVISHANKER R., BATH A.S., ROY R. Journal Of Burns. 29, 2008. p. 369 374.
38
permiten una buena regeneracin, pues la pelcula o membrana de glicerol no

se adhiere en su totalidad. En muchos casos, donde la quemadura es de gran
nivel, la aplicacin de las pelculas o membranas de Glicerol se debe realizar
en dos o ms ocasiones con el fin que el tejido absorba cada vez las
caractersticas regenerativas y curativas hasta lograr la sanacin completa de
la herida25.
El glicerol puede ser obtenido de distintas fuentes, tanto orgnicas como

sintticas. El glicerol utilizado en esta investigacin proviene de fuentes
orgnicas como plantas, vegetales y grasa animal, abundante en la naturaleza
por lo cual es de fcil acceso y de bajo costo.
4.5 SiO2 (DIXIDO DE SILICIO)
El dixido de silicio (derivado del Si) es un componente del tejido conectivo, es

importante para la constitucin de la piel y anejos (uas, cabello), mucosas y
huesos, activa la formacin de colgeno. Tambin forma parte de pulmones,
ganglios linfticos y glndulas suprarrenales, aumenta la capacidad de
resistencia mecnica de los tejidos, est relacionada con el metabolismo
clcico e interviene con otras sustancias en la absorcin de calcio de los
alimentos, y estimula la fagocitosis en la defensa frente a las infecciones. El
SiO2, es el remedio principal de la supuracin, fstulas seas, caries y orzuelos,
indicada en enfermedades de uas y cabellos y raquitismo, adenitis e
induraciones ganglionares, procesos de cicatrizacin trpida, alteraciones
vasculares de distensin (varices, hemorroides), activa la resor cin de
hematomas y derrames, reduce los niveles sanguneos de cido rico, y para
hacer frente al aspecto avejentado y sudoracin nocturna, desnutricin y poca
resistencia26.
En los ltimos aos, el aprovechamiento de los residuos agroindustriales ha
tomado gran importancia en la bsqueda de nuevas alternativas no
convencionales como lo es la biotransformacin, involucrando organismos
vivos tales como cianobacterias, diatomeas, esponjas, hongos, plantas, etc.
Los residuos agroindustriales contienen una cantidad sustancial de silicio en
estado amorfo, el cual puede ser transformado a nanoparticulas de slice
cristalino lo que le da una potencial aplicacin comercial, la sntesis de
nanoparticulas de silicio puede llevarse a cabo a partir de anlidos de la
25
26
RAVISHANKER. Ibid., p. 374

ALCALDE, M.T., DEL POZO, A.. Op.cit., p. 53.
39
especie Eisenia foetida empleando tres diferentes residuos agroindustriales:

cascarilla de arroz, pulpa de caf y bagazo de caa como sustratos; estos
residuos son sometidos a un proceso de vermicompostaje obteniendo un
producto slido (humus y huminas) el cual es calcinado para posteriormente
extraer nanoparticulas de oxido de silicio cristalino 27.
4.6 MTODO DE EVAPORACIN LENTA
El proceso de secado de los polmeros para la elaboracin de pelculas

delgadas lleva el nombre de mtodo de evaporacin lenta. El mtodo de
evaporacin lenta es uno de los mtodos ms usados para la preparacin,
obtencin, crecimiento y fabricacin de elementos, pelculas, cristales,
nanoestructuras y molculas pequeas. El mtodo lleva su nombre debido a la
descripcin especifica de su proceso, el cual se conoce tambin como
Evaporacin Lenta del disolvente, en donde en un ambiente controlado se
deja en reposo la muestra a tratar con el fin que las sustancias y/o reactivos
susceptibles a la evaporacin, desaparezcan en un lapso tambin controlado28.
4.7 COMPORTAMIENTO DE LOS MATERIALES POLIMRICOS
La plasticidad es un fenmeno que muestran ciertos materiales que se

comportan como slidos elsticos, almacenando una cierta cantidad de
energa, que cuando son sometidos a un esfuer zo se deforman continuamente
como un fluido, siendo el esfuerzo una funcin no lineal. La pseudoplasticidad
es una propiedad de los polmeros, producida por el desenmaraamiento y
alineacin de las cadenas polimricas, que produce una mayor separacin
entre ellas, siendo el resultado en ambos efectos un descenso en la viscosidad
del fluido.
27
ESPINDOLA GONZALEZ, M.ESTEVEZ, A.L. MARTINEZ HERNANDEZ, V.M. Obtencin y

caracterizacin microestructural de nanoparticulas de SiO2 a partir de cascarilla de arroz, pulpa
de caf y bagazo de cana empleando bioprocesos a base de anelidos. Mxico. Universidad
Nacional Autnoma de Mxico. Tesis. p.1
28
ESPITIA M., MUOZ BRAVO J.E., VARGAS C., ALMANZA O. Revista Colombiana de
Fsica. 41, 2009. p. 360 364.
40
La curva esfuerzo vs deformacin define la ductilidad de un material, que es la

capacidad para fluir,
es decir, la capacidad para alcanzar grandes
deformaciones sin romperse. La fragilidad se define como la negacin de la
ductilidad. Un material poco dctil es frgil. La proporcionalidad entre el
esfuerzo y la deformacin, por la ley de Hooke permite definir el mdulo de
Young o mdulo de elasticidad29.
La curva de esfuerzo vs deformacin representa una deformacin elstica, por

lo cual se tiene un comportamiento elstico no lineal. Inicialmente se reduce el
mdulo de elasticidad por el desenroscado de las cadenas. Sin embargo una
vez extendidas las cadenas ocurre una deformacin elstica adicional al
estirarse los enlaces, con un mdulo de elasticidad ms elevado.
29
ASKELAND, D. Ciencia e ingeniera de los materiales. Tercera edicin, Universidad de

Missouri, editorial Thomson. p. 131.
41
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
5.1. ESTANDARIZACIN DE MTODO PARA OBTENCIN DE PELCULAS

POLIMRICAS A PARTIR DE GLICEROL ORGNICO Y QUITOSANO
A partir de la combinacin de glicerol orgnico, quitosano y nano partculas de

dixido de silicio, se obtuvieron pelculas polimricas a travs del mtodo de
evaporacin lenta. Se determin a travs de un diseo experimental mediante
el diseo factorial 3 superficies de respuesta y optimizacin simultnea de
varias variables. Para ello a travs de este diseo se tuvieron como base 2
factores, en este caso concentracin de glicerol y tipo de glicerol, por lo cual se
llevaron a cabo 9 experimentos con 5 replicas obteniendo as 45 muestras
finales, para obtener como resultado la proporcin adecuada de cada uno de
los componentes de la mezcla, as como tambin, los tiempos y procesos que
deben llevarse a cabo para tener las pelculas con las caractersticas
adecuadas para la aplicacin biomdica deseada.
5.2. PROCESOS REALIZADOS, EQUIPOS Y MATERIALES UTILIZADOS

PARA LA FABRICACIN Y CARACTERIZACIN DE LAS PELCULAS
POLIMRICAS
Para la fabricacin de las pelculas polimricas, fue necesario llevar a cabo

diversos procesos, en los cuales se cont con equipos y materiales destinados
a llevar a cabo cada una de las etapas. En el cuadro 2 se muestran los
procesos, equipos y materiales implementados para la fabricacin del
compuesto.
Cuadro 2: Procesos, reactivos y equipos utilizados para la elaboracin de

las pelculas polimricas
PROCESO
EQUIPO
MATERIAL
Medicin de glicerol a
utilizarse.
Micro pipeta
Glicerol orgnico de tres

tipos (animal, vegetal y
de maz)
Medicin de quitosano a
utilizarse.
Balanza de precisin
(gramos)
Quitosano
Preparacin de acido
Beaker 500 ml
cido actico al 100% y
42
Cuadro 2 (continuacin)
actico al 1%
agua destilada
Disolucin de quitosano
Beaker 200 ml
cido actico al 1% y
quitosano
Mezcla de quitosano
diluido con glicerol
orgnico maz.
Beaker 200 ml
Quitosano diluido y
glicerol de maz
Mezcla de quitosano
orgnico vegetal.
Beaker 200 ml
Quitosano diluido y
glicerol vegetal
Mezcla de quitosano
orgnico grasa animal.
Beaker 200 ml
Quitosano diluido y
glicerol de grasa animal
Deposito de mezclas en
tubos de ensayo.
Tubo de ensayo
Mezcla de quitosano y
glicerol
Centrifugado de mezcla
Centrifuga refrigerada
Hettich Universal 32 y
tubos de ensayo
glicerol
Deposito de mezcla en
moldes de tefln
Moldes de tefln y tubos

de ensayo
glicerol
Cubrimiento de mezcla
con campana de acrlico
Campana de acrlico y
moldes de tefln
glicerol
Evaporacin de mezcla
a temperatura ambiente
Campana de acrlico y
moldes de tefln
glicerol
Secado de mezcla a
40C
Horno y moldes de
tefln
glicerol
Pruebas de resistencia
Maquina Universal de
mecnica
para ensayos INSTRON 3366
estandarizacin
de
mtodo de obtencin de
pelculas
polimricas
con
elasticidad
y
resistencia alta para la
aplicacin biomdica.
Encapsulamiento
del
Moldes de tefln,
43
Pelculas polimricas de
quitosano y glicerol
orgnico.
Quitosano, acido
dixido de silicio en la
matriz polimrica que
present las mejores
caractersticas
de
resistencia mecnica.
balanza de precisin,
pipetas, micro pipetas,
plancha de agitacin,
Beaker, tubos de
ensayo, centrifuga,
horno, campana de
acrlico.
actico, glicerol maz,

dixido de silicio.
Tcnica
para
el
diagnostico cito txico
(Viabilidad celular).
Centrifuga, autoclave,
Baker, tubos de ensayo,
tubos de petri, cmara
de CO2, horno, jeringas.
Sangre, RPMI, azul de

tripn, penicilina,
gentamicina, pelculas
polimricas, suero fetal
bovino, histopaque,
consentimiento
informado.
Pruebas de microscopia
electrnica de barrido en
las pelculas polimricas
(sem).
Microscopio electrnico
de barrido JEOL JSM6490LV, Camara de
Vacio DENTON
VACUUM.
Pelculas polimricas,
oro.
En el cuadro 3 se presentan los materiales empleados para la fabricacin de

las pelculas polimricas, la presentacin fsica de cada compuesto y el uso
para el cual se destinan.
Cuadro 3: Tipos de material, presentacin y uso de cada reactivo
MATERIAL
Quitosano
ALDRICH
Chemistry.
Glicerol USP
TIPO DE
MATERIAL
Polmero
PRESENTACIN
Plastificante
Liquido
Solido (Polvo)
44
USO DEL
MATERIAL
Mezclado
con
glicerol,
acta
como puente para
facilitar
la
regeneracin
celular y como
matriz de soporte
para
el
encapsulamiento
del dixido de
silicio.
Empleado para la
Dixido de silicio
(SiO2)
Aerosil
Cermico
Nano partculas
(Polvo)
mezcla
con
quitosano,
encargado de dar
la
consistencia
plstica
al
material.
Adicionado a la
mezcla
de
quitosano
y
glicerol,
busca
dar propiedades
antibacterianas y
humectantes
al
compuesto.
5.2.1 Diseo experimental. Para la fabricacin de las pelculas de quitosano,

glicerol y dixido de silicio y la y maximizacin de las propiedades mecnicas
del compuesto, fue necesario llevar a cabo un diseo experimental mediante
diseo factorial 3 (2 factores: Tipo de glicerol y concentracin, con 3 niveles de
prueba) superficies de respuesta y optimizacin simultanea de varias variables,
con lo cual se obtuvo la combinacin optima de quitosano y glicerol para la
obtencin de las pelculas polimricas.
El diseo experimental se lleva a cabo con procesos en los que se deben

considerar diversas caractersticas (variables) para lograr productos con mejor
calidad, mediante herramientas estadsticas, se optimizan simultneamente
todas las respuestas de inters.
Se fabricaron 45 muestras considerando las proporciones como baja (1%),
media (4%) y alta (7%), las cuales se llevaron a una matriz experimental, en
donde se llev un orden de la cantidad de glicerol depositado para cada
muestra, y en qu lugar del molde de tefln se depositaria.
A continuacin se presentan las etapas llevadas a cabo para la fabricacin de

las pelculas polimricas.
45
5.2.2. Etapa 1: Medicin de glicerol orgnico. Para la elaboracin de las

pelculas polimricas, as como para otorgar una textura elstica, se usaron
como plastificantes, tres tipos de gliceroles, de origen vegetal, de grasa animal
y de maz.
La cantidad de glicerol a utilizarse se tom en 3 proporciones distintas al 1%, al

4% y al 7%. Teniendo en cuenta que el molde en el cual se depositaron las
mezclas tiene un espesor de 5 mm, y la cantidad de mezcla que all ser
disuelta es de 12,70 ml, se procede a calcular la cantidad de glicerol a
implementarse para cada una de las proporciones (1%, 4% y 7%). Para
calcular la cantidad de glicerol dependiendo la proporcin baja (1%), media
(4%) o alta (7%), se implementa la siguiente ecuacin matemtica:
[1]
Utilizando la Ecuacin 1, se obtuvo la cantidad de glicerol implementada para
las proporciones al 1%, 4% y 7%, en la tabla (tabla 4), se observa la cantidad
destinada para cada una de las mezclas.
Las tres distintas proporciones de glicerol se consideran con el fin de obtener la

mezcla ms ptima, adems observar cul de estas brinda la mejor flexibilidad
y la mejor resistencia a las pelculas a partir del tipo de glicerol y de la
proporcin utilizada.
A continuacin en el cuadro 4 se presentan las concentraciones de glicerol
empleadas para la fabricacin de las pelculas.
Cuadro 4: Concentraciones de glicerol utilizado
Concentracin
(%)
Glicerol grasa
animal (ml)
Glicerol vegetal
(ml)
Glicerol de maz
(ml)
0,127
0,127
0,127
0,508
0,508
0,508
0,889
0,889
0,889
46
En la Figura 1, se muestran los equipos utilizados para la medicin del glicerol

empleado para la fabricacin de las pelculas polimricas.
Figura 1: Equipo utilizado para medir las proporciones de glicerol utilizadas
micropipeta (A), Deposito de proporciones de glicerol en recipientes (B),
laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma de Occidente
Cali.
5.2.3. Etapa 2: Medicin de quitosano. El quitosano empleado viene en una

presentacin en polvo, marca ALDRICH chemistry de origen Irlands, por
cantidad de 100 g. Para saber la cantidad necesaria de quitosano a emplear
para fabricar las pelculas, se llev a cabo el clculo segn la ecuacin de
proporcin peso volumen. Segn el nmero de moldes que se tienen (24)
cada uno con una capacidad de 12,70 ml. En este sentido se concluye que se
debe obtener al final una cantidad de la mezcla equivalente a 304,8 ml con el
fin de suplir la capacidad de los moldes de tefln. Para conocer la cantidad de
Quitosano a utilizar se debe realizar la suposicin inicial de trabajar con 304,8
ml de acido actico as:
[2]
Segn la ecuacin 2 para obtener una mezcla al 1% utilizando 304,8 ml de

acido actico se necesitan 3,048 g de quitosano.
47
Con la cantidad de quitosano a utilizarse ya calculada se procede a pesa r la

proporcin necesaria obtenida a partir de la ecuacin de proporcin peso
volumen
En la Figura 2 se muestra el quitosano y los implementos empleados para el

pesaje de dicho compuesto.
Figura 2: Quitosano utilizado (A), Paleta para tomar el polvo de quitosano y

recipiente para depositarlo (B), Pesa con campana para medir el quitosano (C),
cantidad exacta de quitosano obtenida a partir de los clculos, observada en el
indicador digital de la balanza (D), laboratorio de Ciencias Biomdicas de la
Universidad Autnoma de Occidente Cali.
Para la fabricacin de las pelculas, es necesario contar con que el quitosano

se encuentre en forma lquida, para ello es necesario conseguir su disolucin,
la cual se lleva a cabo mezclando este con acido actico a una concentracin
adecuada. A continuacin se presenta la etapa en la cual se logra la disolucin
del quitosano.
48
5.2.4. Etapa 3: Preparacin de acido actico al 1%. Como reactivo inicial se

us acido actico al 100%. Para la disolucin del quitosano, se debe tener
acido actico al 1%, es por ello que fue necesario diluir el acido actico en
agua destilada para obtener as acido actico al 1%.
En la Figura 3 se muestran los reactivos empleados para la obtencin del acido

actico al 1%.
Figura 3: Acido actico al 100% (A), agua destilada (B), laboratorio de Ciencias
Biomdicas de la Universidad Autnoma de Occidente Cali.
Para la obtencin del acido actico al 1%, se implemento la Ecuacin 3 para

tener conocimiento de la cantidad de agua destilada necesaria para disminuir el
% de concentracin del acido de 100% a 1%.
[3]
Se prepararon 500 ml de acido actico al 1%, para estos 500 ml de acido

actico al 1% contamos con 5 ml de acido actico al 100% y 495 ml de agua
destilada.
49
En el cuadro 5, se presentan los materiales, cantidades y concentraciones

empleados para la obtencin del acido actico al 1 %.
Cuadro 5: Cantidad y concentracin de los materiales empleados para la

obtencin del acido actico al 1 %
MATERIAL
CANTIDAD
CONCENTRACIN
Acido actico
5 ml
100%
Agua destilada
495 ml
Total acido actico diluido
500 ml
1%
En la figura 4 se muestran las mezclas llevadas a cabo para la obtencin del

acido actico al 1 %.
Figura 4: Baker mezcla de agua destilada y acido actico al 100% (A) Acido
actico al 1% (B), laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad
Autnoma de Occidente Cali.
50
5.2.5. Etapa 4: Disolucin de quitosano. El polvo de quitosano, debe ser

diluido, pues para la obtencin de las pelculas se debe contar con materiales
lquidos. Para ello se requiere la mezcla de los 3,048 gr, con los 500 ml de
acido actico al 1%.
En el cuadro 6 se muestran las proporciones de los compuestos, acido actico

al 1 % y quitosano para la mezcla.
Cuadro 6: Proporcin de acido actico al 1 % y quitosano empleados para

la preparacin de la mezcla
Beaker 1
Beaker 2
Beaker 3
Beaker 4
Beaker 5
Beaker 6
Total
Acido
actico al
1%
83,300 mL
83,300 mL
83,300 mL
83,300 mL
83,300 mL
83,300 mL
500 mL
Quitosano
0,508 g
0,508 g
0,508 g
0,508 g
0,508 g
0,508 g
3,048 g
En la Figura 5 se muestran imgenes de los procedimientos llevados a cabo y

los equipos utilizados para la disolucin del quitosano.
Figura 5: Deposito de quitosano en Baker con agitador magntico (A), mezcla

de acido cido actico con quitosano (B), laboratorio de Ciencias Biomdicas
de la Universidad Autnoma de Occidente Cali.
51
Despus de transcurridas 6 horas de agitacin de la mezcla, se observa un

lquido viscoso, lo que indica que la mezcla esta lista para el siguiente
procedimiento.
En la Figura 6 se muestra el estado final del quitosano diluido en el acido

actico al 1 % transcurridas 6 horas de agitacin.
Figura 6: Mezcla de quitosano y acido actico despus de transcurridas 6

horas de agitacin (A), laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad
5.2.6. Etapa 5: Mezcla de quitosano diluido con glicerol orgnico de maz.

En el cuadro 7 se muestra la concentracin de glicerol de maz en sus tres
proporciones baja, media y alta, y la concentracin de quitosano diluido en
acido actico, empleados para la mezcla por un tiempo de 6 horas del polmero
con el plastificante (quitosano y glicerol).
52
Cuadro 7: Proporciones de glicerol de maz y quitosano diluido en acido

actico empleadas para la mezcla
Concentracin baja
de glicerol (1 %)
Concentracin media
de glicerol (4 %)
Concentracin alta
de glicerol (7 %)
MATERIALES
Beaker 1
Beaker 2
Beaker 3
Quitosano diluido
83,808 mL
83,808 mL
83,808 mL
Glicerol de maz
0,127 mL
0,508 mL
0,889 mL
En la figura 7 se muestran las imgenes de los equipos y procesos llevados a

cabo para la mezcla de glicerol de maz y quitosano diluido.
Figura 7: Proceso para agregar glicerol a quitosano diluido concentracin

glicerol de maz alta (A), muestras de quitosano y glicerol de maz en las tres
concentraciones en proceso de agitacin (B), laboratorio de Ciencias
53
5.2.7. Etapa 6: Mezcla de quitosano diluido con glicerol orgnico vegetal.

En el cuadro 8 se muestra la concentracin de glicerol vegetal en sus tres
proporciones baja, media y alta, y la concentracin de quitosano diluido en
con el plastificante (quitosano y glicerol vegetal).
Cuadro 8: Proporciones de glicerol vegetal y quitosano diluido en acido

MATERIALES
Concentracin baja
de glicerol (1 %)
Concentracin media
de glicerol (4 %)
Concentracin alta
de glicerol (7 %)
Quitosano diluido
83,808 mL
83,808 mL
83,808 mL
Glicerol vegetal
0,127 mL
0,508 mL
0,889 mL
En la Figura 8 se muestran las imgenes de los equipos y procesos llevados a

cabo para la mezcla de glicerol vegetal y quitosano diluido.
Figura 8: Mezcla de quitosano y glicerol de origen vegetal concentracin

glicerol de origen vegetal alta (A), muestras de quitosano y glicerol de origen
vegetal en las tres concentraciones en proceso de agitacin (B), laboratorio de
Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma de Occidente Cali.
5.2.8. Etapa 7: Mezcla de quitosano diluido con glice rol orgnico grasa
animal. En el cuadro 9 se muestra la concentracin de glicerol animal en sus
tres proporciones baja, media y alta, y la concentracin de quitosano diluido en
54
con el plastificante (quitosano y glicerol animal).
Cuadro 9: Proporciones de glicerol animal y quitosano diluido en acido

Concentracin baja
de glicerol (1 %)
Concentracin media
de glicerol (4 %)
Concentracin alta
de glicerol (7 %)
MATERIALES
Beaker 1
Beaker 2
Beaker 3
Quitosano diluido
83,808 mL
83,808 mL
83,808 mL
Glicerol animal
0,127 mL
0,508 mL
0,889 mL
En la figura 9 se muestran las imgenes de los equipos y procesos llevados a

cabo para la mezcla de glicerol animal y quitosano diluido.
Figura 9: Mezcla de quitosano y glicerol de grasa animal concentracin

glicerol de grasa animal alta (A), muestras de quitosano y glicerol grasa animal
en las tres concentraciones en proceso de agitacin (B), laboratorio de
Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma de Occidente Cali.
5.2.9. Etapa 8: Depsito de mezclas en tubos de ensayo. Transcurridas las

2 horas de agitacin de cada uno de los tres tipos de glicerol en sus tres
respectivas concentraciones (baja, media y alta), se paso a envasar estas
mezclas en tubos de ensayo. Para cada uno de las concentraciones se
implementaron 5 tubos de ensayo. En casa tubo de ensayo se d epositaron 12,7
ml de la mezcla.
55
En el cuadro 10 se muestra la distribucin de la cantidad de la mezcla de

glicerol y quitosano diluido en los 9 tubos de ensayo.
Cuadro 10: Distribucin de la mezcla en tubos de ensayo
Tipo de
glicerol
Concentracin
Proporcin
mezcla para
cada tubo
Tubos
implementados
Cantidad
total de
mezcla
Maz
Baja
12,7 ml
63,5 ml
Maz
Media
12,7 ml
63,5 ml
Maz
Alta
12,7 ml
63,5 ml
Vegetal
Baja
12,7 ml
63,5 ml
Vegetal
Media
12,7 ml
63,5 ml
Vegetal
Alta
12,7 ml
63,5 ml
Animal
Baja
12,7 ml
63,5 ml
Animal
Media
12,7 ml
63,5 ml
Animal
Alta
12,7 ml
63,5 ml
Como se observa en casa uno de los tubos quedo 12,7 ml de cada tipo de
glicerol en sus tres distintas concentraciones.
En la figura 10 se observan los equipos y el proceso llevado a cabo para la

medicin y el depsito de la mezcla de glicerol y quitosano diluido en los tubos
de ensayo.
56
Figura 10: Medicin con pipeta de 12,7 ml de cada tipo de glicerol en su

diferente concentracin para depsito en tubos de ensayo (A), deposito de
mezclas en tubos de ensayo (B), tubos de ensayo con mezclas (C), laboratorio
de Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma de Occidente Cali.
5.2.10. Etapa 9: Centrifugado de la mezcla. Posterior al depsito de las

mezclas en los tubos de ensayo, se procede a ubicar estos en la centrifuga a
una velocidad de 3500 RPM durante un tiempo aproximado de 8 minutos; este
proceso se lleva a cabo con el fin de eliminar molculas de aire que forman
burbujas en la mezcla, lo cual puede ocasionar inconsistencias en la estructura
de las pelculas al secarse.
57
Para cada proceso de centrifugacin se emplearon 4 tubos de ensayo,

ubicados de forma uniforme, tratando de equilibrar los pesos, para ello todos
los tubos deben poseer el mismo nivel de mezcla.
El proceso de centrifugacin fue llevado a cabo 11 veces, hasta que todas las
mezclas depositadas en los tubos de ensayo fueran procesadas.
En la Figura 11 se muestra el equipo (centrifuga), y los parmetros

establecidos en este equipo para el proceso de centrifugado de las muestras.
Figura 11: Centrifuga empleada para dicho proceso (A), ubicacin de los tubos
de ensayo en la centrifuga (B), parmetros establecidos y proceso de
centrifugado (C), centrifuga refrigerada universal 32 R, laboratorio de Ciencias
5.2.11. Etapa 10: depsito de mezcla en moldes de tefln. Finalizado el

proceso de centrifugado de la mezcla, procedemos a depositar el contenido de
los tubos de ensayo en los moldes de tefln. Estos moldes de tefln fueron
obtenidos a partir de un proceso de maquinado, llevado a cabo en el laboratorio
de manufactura de la Universidad Autnoma de Occidente, las medidas
establecidas para dichos moldes tienen un rea de 100 mm de largo y 20 mm
de ancho las cules son las proporcionadas para llevar a cabo pruebas con
materiales polimricos.
58
Los moldes de tefln, deben ser lavados y secados al aire, no debe secarse
con paos, papel o algn tipo de material que pueda dejar residuos
ocasionando inconsistencias en la mezcla. La mezcla se verti de manera
homognea sobre el molde logrando as que esta quede esparcida por toda la
superficie.
En la Figura 12 se muestra el modelo CAD, el proceso de maquinado del tefln

y los moldes de tefln obtenidos despus del maquinado segn las medidas
especificadas.
Figura 12: Modelo CAD de los moldes a obtenerse (A), Maquinado de tefln
para obtencin de moldes (B), Moldes de tefln (C), Deposito de la mezcla en
moldes de tefln (D), Mezcla depositada (E), laboratorio de Ciencias
Biomdicas y Laboratorio de Proceso de Manufactura de la Universidad
B
E
5.2.12. Etapa 11: Cubrimiento de mezcla con campana de acrlico. Ya

depositadas las mezclas en los moldes de tefln, se procede a cubrir est as con
una campana de acrlico. Para ello se ubican los moldes con la mezcla en el
lugar destinado para estas, evitando as que estas sean movidas, estas son
ubicadas en un lugar con temperatura promedio de la temperatura ambiente
(24C). Cubrir las mezclas con la campana evita que impurezas caigan sobre
estas adems de mantener una humedad relativa e del 60 % en el lugar.
59
En la Figura 13 se observa la campana de acrlico con la cual fueron cubiertas

las muestras, para evitar as el paso de impurezas a estas y para el control de
la humedad.
Figura 13: Cubrimiento de los moldes con la campana de acrlico (A),

Cali.
5.2.13. Etapa 12: Evaporacin de mezcla a temperatura ambiente.

Cubiertas ya las mezclas con la campana de acrlico, se dejan estas all a
temperatura ambiente con humedad relativa del 60%, durante un tiempo
establecido de 96 horas aproximadamente. Las mezclas no deben ser movidas
del lugar en el cual fueron ubicadas inicialmente, no se debe retirar la cubierta
de acrlico en ningn momento antes de transcurrido el tiempo ya establecido,
adems de tener en cuenta que estas deben ser niveladas al momento en el
cual se ubican en el lugar que se establezca, esto debe hacerse con ayuda de
un medidor de nivel, logrando que estas queden a un mismo nivel para no
ocasionar alteraciones en la estructura del producto que se obtendr.
En la Figura 14, se muestra el dispositivo empleado para nivelar las muestras,

se observan tambin la forma en la cual quedaron ubicadas las muestras en el
lugar de reposo.
60
Figura 14: Nivelador (A), Ubicacin de los moldes con las mezclas (B), Estado
de las mezclas despus de transcurrido el tiempo establecido (C), laboratorio
de Ciencias Biomdicas y Laboratorio de Proceso de Manufactura de la
A
B
5.2.14. Etapa 13: Secado de la mezcla a 40C. Transcurridas 96 horas de

secado a temperatura ambiente de las mezclas en los moldes de tefln, se
procede a ubicar los moldes con las mezclas en un horno a un a temperatura
de 40 C por un tiempo aproximado de 48 horas. Con esta temperatura se logra
que finalmente la mezcla culmine con su periodo de evaporacin, obtenindose
as un material uniforme similar a un plstico conocidas con el nombre de
pelculas polimricas.
61
Figura 15: Horno (A), Estado de las mezclas despus de transcurridas 46

horas en el horno a 40 C (C), Laboratorio de Ciencias Biomdicas de la
5.3. PRUEBAS DE RESISTENCIA MECNICA PARA ESTANDARIZACIN

DE MTODO DE OBTENCIN DE PELCULAS POLIMRICAS CON LAS
CARACTERSTICAS ADECUADAS PARA APLICACIONES BIOMDICAS
Para la determinacin de las propiedades mecnicas de las pelculas se utiliz

la norma o mtodo estndar para pruebas de traccin de plsticos ASTMD
882-10. Esta norma aporta la informacin necesaria para el anlisis correcto.
Esta informacin incluye medida requerida para las probetas, la forma de las
probetas, caractersticas ambientales adecuadas para llevar a cabo las
pruebas, el mtodo a utilizar y la distancia inicial de los grips o mordazas de la
maquina universal INSTRON.
La norma ASTMD882-10 determina que las probetas deben ser de forma

rectangular con 100 mm de largo por 20 mm de ancho. En la Figura 16 se
muestra el rea establecida por la norma ASTMD882-10 para polmeros.
62
Figura 16: rea establecida por la norma ASTMD882-10 para pruebas de

resistencia mecnica en polmeros.
Con la informacin proporcionada por la norma, se procede a la preparacin de

los equipos necesarios para las pruebas de resistencia mecnica. Para ello se
toma una medida inicial de los grips o mordazas de la maquina universal
INSTRON que es de aproximadamente 50 mm entre grip y grip.
En la Figura 17 se observa la maquina universal de ensayos INSTRON que fue

empleada para realizar las pruebas de resistencia mecnica a las pelculas
polimricas, tambin se muestra la ubicacin de la pelcula en los grips de la
maquina.
63
Figura 17: Maquina universal de ensayos INSTRON (A), Distancia entre grips
de la maquina universal INSTRON 3066 (B), laboratorio de Materiales de la
Ya establecida la distancia entre los grips de la maquina universal INSTRON,

se toman las pelculas polimricas y se deja un espacio libre en estas de 50
mm, divididos 25 mm en cada extremo de la pelcula los cuales van ubicados
en cada grip.
En la Figura 18 se observa la medida de la pelcula polimrica obtenida, as

como la distancia que sujetan los grips de la maquina universal de ensayos
INSTRON los extremos de la pelcula, para llevarse a cabo las pruebas.
Figura 18: Bosquejo de pelcula polimrica obtenida para las pruebas de

resistencia mecnica.
64
En la Figura 19 se puede observar la ubicacin adecuada de las pelculas en la

maquina universal INSTRON para las pruebas de resistencia mecnica.
Figura 19: Ubicacin de la pelcula polimrica en la maquina universal

INSTRON 3366 (A), laboratorio de Materiales de la Universidad Autnoma de
Occidente Cali.
Con la pelcula ya ubicada de forma adecuada en la maquina universal

INSTRON, se establece una velocidad de 50 mm/min y una frecuencia de
datos de 10 puntos por segundo que se van a tomar, con el transcurso del
proceso. Estos puntos de muestreo arrojan las graficas de esfuerzo con
respecto a la deformacin de las pelculas. Este software tambin arroja una
tabla que contiene la carga mxima (KN), deformacin porcentual en la carga
mxima (%), tensin en la carga mxima (MPa), mdulo de Young (Mpa) y
deformacin en la carga mxima (mm/mm).
En la Figura 20 se muestra el equipo para el establecimiento de los parmetros

para la toma de datos durante la prueba para determinacin de resistencia
mecnica de las pelculas.
65
Figura 20: Proceso para determinacin de propiedades mecnicas de la

pelcula polimrica (A), laboratorio de Materiales de la Universidad Autnoma
de Occidente Cali.
5.4. ENCAPSULAMIENTO DEL DIXIDO DE SILICIO EN LA MATRIZ

POLIMRICA QUE PRESENT LAS MEJORES CARACTERSTICAS DE
RESISTENCIA MECNICA
Obtenida la mezcla ptima de quitosano glicerol, se procedi a hacer cinco

replicas de dicha combinacin. Para la fabricacin de estas cinco replicas, fue
necesario repetir el proceso establecido inicialmente para la obtencin de las
pelculas polimricas. Transcurrido el tiempo de mezcla del quitosano con el
glicerol, se aadi a la mezcla 0,38 g de dixido de silicio (equivalente al 0,5%
de la mezcla) el cual tiene un tamao de partcula de 12 nanmetros. La
proporcin adecuada del dixido de silicio se obtuvo utilizando la Ecuacin 4.
[4]
Para el pesaje y la manipulacin del dixido de silicio, fue necesario tener en
cuenta el Material Safety Data Sheet (MSDS) de este componente.
En la Figura 21 se observa el proceso llevado a cabo para el pesaje de 0,38 g

de dixido de silicio, para ser depositados a la mezcla.
66
Figura 21: Manipulacin del dixido de silicio (A), Calibracin de la balanza de

precisin (B), Deposito del dixido de silicio en la balanza (C), Peso del dixido
de silicio (D), laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma
de Occidente Cali.
Adicionado el dixido de silicio a la solucin de quitosano y glicerol, se contina

con la agitacin por un tiempo prolongado de 3 horas. Transcurrido el tiempo
de agitacin, se retiraron las mezclas del agitador y se procedi a depositar
estas en tubos de ensayo para llevar a cabo el proceso de centrifugado,
repitiendo el mismo ciclo mencionado en la fabricacin inicial de las pelculas.
En la Figura 22 se muestra el proceso de mezclado del dixido de silicio con la

disolucin (quitosano - glicerol).
67
FIGURA 22: Agitacin de la mezcla de quitosano, glicerol y dixido de silicio

(A), laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma de
Occidente Cali.
Ya centrifugadas las mezclas, se vierten en los moldes de tefln, se cubren c on

la campana acrlica y se repite el mtodo de evaporacin lenta ya mencionado
y trabajado anteriormente en el proceso de la fabricacin de las pelculas.
En la Figura 23 se muestran las pelculas polimricas obtenidas a partir de la

mezcla de quitosano y glicerol con dixido de silicio encapsulado.
Figura 23: Pelculas de quitosano, glicerol y dixido de silicio encapsulado (A),

Cali.
68
5.5. TCNICA PARA EL DIAGNSTICO CITOTXICO
5.5.1. Viabilidad celular. Esta es una prueba experimental de respuesta

inmediata en corto tiempo que usa azul de tripn como medio de tincin; de
este modo se mide la biocompatibilidad de los materiales a travs del
seguimiento del comportamiento de las clulas (linfocitos) al ser expuestas a
dichos materiales durante un periodo de 3 das consecutivos. Se evalan
aspectos que relacionan la membrana citoplasmtica en cuanto a su
rompimiento y cambio de morfologa en el momento en que el colo rante
penetra la clula, para luego determinar ndices de viabilidad celular 30,31.
Para llevar a cabo el procedimiento para determinacin de viabilidad celular,

fue necesaria la extraccin de sangre por venopuncin, por lo cual fue
indispensable contar con pacientes y para ello se tiene un consentimiento
informado que se encuentra en el anexo C, el cual debe ser diligenciado
cuando se llevan a cabo pruebas e investigaciones con seres humanos.
Para tener una mayor claridad del procedimiento llevado a cabo para las
pruebas de determinacin de viabilidad celular puede observarse el anexo D,
en el cual se encuentra consignado de forma detallada el protocolo
experimental.
El anlisis de citotoxicidad se realiz para 5 muestras, tomando un material

biocompatible como control positivo, 3 pelculas polimricas con diferentes
concentraciones de dixido de silicio y un material no biocompatible que se
utiliz como control negativo (caucho). Estos controles tanto positivo como
negativo se utilizan como punto de referencia para el anlisis y la comparacin
de los resultados.
En la Figura 24 se muestra el procedimiento llevado a cabo para la extraccin

de la sangre, con la cual se llev a cabo el procedimiento para la determinacin
de viabilidad celular de las pelculas.
30
GALEANO, A., GUTIRREZ T., Estandarizacin de dos tcnicas para evaluar actividad y
iabilidad celular in vitro en repuesta a biomateriales. Tesis. Universidad Autnoma de
Occidente. 2009.
31
LERMA FABIAN., PLAZAS GERMAN., diseo de una monocapa para recubrimientos con
material W-DLC y Si-DLC en aplicaciones biomdicas. Tesis. Universidad Autonoma de
Occidente. 2010.
69
Figura 24: Extraccin de sangre por venopuncion (A), tubo con sangre (B ),
tubos con sangre de los distintos pacientes (C), extraccin de sangre por
venopuncin, Laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma
de Occidente Cali.
Para llevar a cabo el procedimiento para la determinacin de viabilidad celular,

deben ser esterilizados los implementos a utilizarse en la autoclave.
En la Figura 25, se observa el equipo utilizado para la esterilizacin de los

implementos empleados para el proceso de determinacin de viabilidad celular.
70
Figura 25: Autoclave (A), implementos en proceso de esterilizacin (B),

Cali.
En la Figura 26, se muestran algunas imgenes del proceso llevado a cabo

para la determinacin de la viabilidad celular, mediante pruebas de
citotoxicidad a travs del cultivo de linfocitos.
Figura 26: Sangre centrifugada (A), separacin de cadena de linfocitos (B),

tubo de ensayo despus de lavado de linfocitos (C), preparacin del antibitico
(penicilina y gentamicina) (D), Mezcla de linfocitos, antibitico y RPMI (E),
Deposito de la pelcula polimrica en la mezcla de linfocitos, antibitico y RPM I
(F), laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma de
Occidente Cali.
71
5.6. PRUEBAS DE MICROSCOPA ELECTRNICA DE BARRIDO EN LAS

PELCULAS POLIMRICAS (SEM)
Obtenida ya la matriz polimrica con el dixido de silicio encapsulado, se

procedi a realizar pruebas de Microscopia Electrnica de Barrido, para la cual
se utiliz el Microscopio electrnico de barrido JEOL JSM-6490LV del
Laboratorio de la Escuela de Materiales de la Universidad del Valle. Estas
pruebas se llevaron a cabo con el fin de determinar la homogeneidad y
porosidad de las pelculas.
La tcnica de Microscopia Electrnico de Barrido (SEM), es una tcnica que

permite la observacin y caracterizacin superficial de materiales inorgnicos y
orgnicos, entregando informacin morfolgica del material analizado. A partir
de l, se producen distintos tipos de seal que se generan desde la muestra y
se utilizan para examinar muchas de sus caractersticas. Con la utilizacin de
esta tcnica, se pueden realizar estudios de los aspectos morfolgicos de
zonas microscpicas de los distintos materiales con los que trabajan los
investigadores de la comunidad cientfica y las empresas privadas, adems del
procesamiento y anlisis de las imgenes obtenidas 32.
La imagen entregada por el SEM se genera por la interaccin de un haz de

electrones que "barre" un rea determinada sobre la superficie de la muestra 33.
En la Figura 27, puede observarse el principio de funcionami ento segn los

componentes del Microscopio Electrnico de Barrido.
32
ZEGARRA, M. MONTESINOS, S. Trabajo de tesis, aplicaciones de microscopia electronica

de barrido (sem) y analisis de fractura de una aleacin de cu 10 a1, Universidad de Chile,
2009.
33
ORTZ, A. BRIANO, M. GALVN, R. Tesis, El microscopio electrnico de barrido un
instrumento til para la ciencia, Universidad Autnoma de Aguascalientes. 2010.
72
Figura 27: Principio de funcionamiento del SEM, segn componentes.
Fuente: http://www.mty.itesm.mx/dia/deptos/im/m00-862/Lecturas/SEM_ICP.pdf
5.6.1. Preparacin de las muestras. Para llevar a cabo las pruebas de

Microscopia de Barrido Electrnico, fue necesario recubrir con una o varias
capas de oro a las pelculas polimricas, ya que los polmeros no son
materiales conductores por lo cual los electrones no pueden moverse a travs
de estos.
Este proceso se realiz en una cmara de vacio Denton Vacuum, la cual

calienta el oro a altas temperaturas hasta evaporarse, logrando as que las
pelculas polimricas sean recubiertas por este material.
En la Figura 28 puede observarse el equipo empleado para llevar a cabo el

recubrimiento de las pelculas polimricas con oro.
73
Figura 28: Cmara de Vacio Denton Vacuum, Laboratorio Escuela de

Materiales, Universidad del Valle.
Las muestras fueron ubicadas sobre una probeta, para as ser llevadas a la
Cmara de Vacio donde se realiz el proceso de recubrimiento con oro. En la
Figura 29 se presentan las muestras listas para ser recubiertas.
Figura 29: Muestras de pelculas polimricas listas para ser introducidas a la

Cmara de Vacio Denton Vacuum para el proceso de recubrimiento con oro,
laboratorio Escuela de Materiales, Universidad del Valle.
Finalmente fueron introducidas las muestras en la cmara de vacio Denton

Vacuum, para ser recubiertas con oro. Este proceso tiene una duracin de
aproximadamente 15 minutos.
74
5.6.2. Proceso llevado a cabo para las pruebas de Microscopia Electrnica

de Barrido a las pelculas polimricas. Posterior al recubrimiento de las
muestras con las capas de oro, estas fueron llevadas al Microsco pio
Electrnico de Barrido JEOL JSM-6490LV. En la Figura 30, se muestra el
Microscopio Electrnico de Barrido empleado para las pruebas.
Figura 30: Microscopio Electrnico de Barrido JEOL JSM-6490LV, Laboratorio

Escuela de Materiales, Universidad del Valle.
Las pelculas fueron colocadas en el interior del Microscopio Electrnico de

Barrido a una distancia de 1 cm del foco del can, para llevar a cabo as un
buen anlisis de la muestra y obtener las imgenes adecuadas. En la Figura
31, puede observarse la ubicacin de la muestra en el interior del Microscopio
Electrnico de Barrido
Figura 31: Ubicacin de las muestras en el Microscopio Electrnico de Barrido

JEOL JSM-6490LV, laboratorio Escuela de Materiales, Universidad del Valle.
75
Introducidas las muestras en el Microscopio Electrnico de Barrido, se

corrobora que la distancia entre las muestras y el foco del can sea la
adecuada, se procede a cerrar la cmara donde se ubicaron estas y se lleva a
cabo un proceso de vaco. Terminado el vacio en la Cmara del Microscopio,
se configuran los parmetros respectivos para la visualizacin que se desee,
as como la potencia del equipo la cual da la resolucin de las imgenes
obtenidas.
Establecidos as los parmetros del Microscopio Electrnico de Barrido, se

inicia con el proceso para la toma de imgenes microscpicas de las pelculas
polimricas de quitosano, glicerol de maz en alta concentracin y dixido de
silicio en sus tres concentraciones baja, media y alta.
76
6. ANLISIS Y RESULTADOS
6.1. OBTENCIN DE LAS PELCULAS POLIMRICAS
6.1.1. Obtencin de quitosano liquido. Transcurridas seis horas de agitacin

de la mezcla quitosano acido actico se observ una disolucin total del
quitosano, obteniendo as un liquido viscoso y homogneo.
6.1.2. Obtencin de soluto a partir de quitosano diluido y glicerol. Una vez

depositado el glicerol a la mezcla y transcurridas dos horas de agitacin, se
obtuvo una mezcla con una mayor viscosidad, sin embargo se observan
partculas de aire en la mezcla, las cuales se eliminaron mediante un proceso
de centrifugado de la solucin.
6.1.3. Obtencin de pelculas polimricas de quitosano y glicerol, a travs

del mtodo de evaporacin lenta. Transcurrido el segundo da posterior al
depsito de la mezcla en los moldes de tefln, se observa una disminucin en
el volumen inicial del compuesto, de ms o menos 1 mm. Al cuarto da se
observ una composicin ms rgida y una disminucin considerable en su
volumen. Culminado el tiempo de reposo a temperatur a ambiente, y posterior a
ser expuestas a una temperatura controlada de 40 C, se observa un secado
total de la mezcla, teniendo como resultado una pelcula de aproximadamente
100 micrmetros de espesor y su comportamiento y apariencia similar a la de
un plstico.
En la Figura 32, se muestran las pelculas polimricas de quitosano y glicerol

obtenidas a travs del mtodo de evaporacin lenta transcurrido el tiempo de
secado a temperatura ambiente y a 40 C.
77
Figura 32: Pelculas polimricas transcurrido el tiempo de secado (A), Pelcula

polimrica obtenida (B). Laboratorio de Ciencias Biomdicas de la Universidad
6.2. RESULTADOS DISEO EXPERIMENTAL
Partiendo del desarrollo del diseo experimental mediante diseo factorial 3

superficies de respuesta y optimizacin simultanea de varias variables, se
obtuvo las cantidades ptimas de los reactivos que componen las pelculas
polimricas. Se llev a cabo el anlisis de las propiedades mecnicas de 45
muestras,
teniendo as que la concentracin y el tipo adecuado de
plastificante, es el glicerol de maz en alta concentracin (7%), equivalente a
0,889 mL, el cual es agregado a la proporcin de quitosano diluido equivalente
a 83,808 mL.
Gracias a la deformacin obtenida para la pelcula polimrica de quitosano y

glicerol de maz en alta concentracin, se determin a travs de un grafico de
contorno de humedad Vs concentracin la cantidad optima de glicerol
(plastificante), para la fabricacin de las pelculas con una alta deformacin.
En la figura 33 se observa el grafico de contorno de humedad Vs concentracin
para la pelcula polimrica que obtuvo la deformacin ms alta (311,667%).
78
Figura 33: Grficos de contorno humedad Vs concentracin para obtener

cantidad optima de glicerol a utilizar para la fabricacin de pelculas polimricas
con alta deformacin.
Como se observa en la figura 33, se tiene que con una humedad de

aproximadamente 60% y una deformacin aproximada a 312% la obtenida por
las pruebas de resistencia mecnica de la pelcula polimrica de quitosano y
glicerol de maz en alta concentracin, que la concentracin de glicerol optima
79
para obtener esta deformacin a esta humedad es de 6,96 aproximadamente

7%. Gracias a estos grficos de contorno se pudo determinar la concentracin
de glicerol apropiado para la receta de la fabricacin de las pelculas
polimricas que fue de 7% (0,889 mL).
En el cuadro 11, se muestra la receta o las concentraciones optimas obtenida a

partir del desarrollo del diseo experimental.
Cuadro 11: Receta o concentraciones adecuadas para la fabricacin de

las pelculas polimricas de quitosano y glicerol de maz, obtenidas a
partir del desarrollo del diseo experimental
Temperatura
24C 3C
Humedad relativa
60% 5%
Quitosano
3,048 g
Tipo de Glicerol
Maz
Concentracin glicerol
0,889 mL
Tiempo de agitacin quitosano
6 horas
Velocidad agitacin quitosano
7000 RPM
Tiempo agitacin glicerol
2 horas
Velocidad agitacin glicerol
7000 RPM
Velocidad centrifugado del compuesto
3500 RPM
Tiempo centrifugado
8 minutos
Tiempo reposo de las pelculas
4 das
Tiempo secado al horno
2 das
Temperatura del horno
40C
Se puede observar en la Figura 34 las proporciones porcentuales obtenidas

para los reactivos empleados en la fabricacin de las pelculas polimricas.
80
Figura 34: Proporciones porcentuales optimas de los reactivos empleados para

la fabricacin de las pelculas polimricas.
Para la fabricacin de una matriz polimrica basada en Quitosano y Glicerol en

este caso de maz en alta concentracin, se obtuvo a partir del diseo
experimental las proporciones porcentuales para los reactivos con los que se
fabrican las pelculas polimricas que se muestran en el cuadro 12.
Cuadro 12: Proporciones porcentuales ptimas de los reactivos

empleados para la fabricacin de las pelculas polimricas
Material
Concentracin (mL) Concentracin (%)
Quitosano
83,808
98,95
Glicerol de Maz (Alto)
0,889
1,05
6.3. ANLISIS Y DETERMINACIN DE PROPIEDADES MECNICAS
El proceso llevado a cabo para la determinacin de las propiedades mecnicas

de las pelculas polimricas, se realiz en la maquina universal de ensayos
INSTRON 6633, la cual arrojo datos de esfuerzo y deformacin para cada una
de las muestras con el glicerol en distintas concentraciones.
81
En el cuadro 13, se muestran los datos de esfuerzo y deformacin obtenidos a

travs de un promedio de los datos arrojados para cinco 5 muestras. Los
resultados que se presentan son: deformacin porcentual (%) y tensin en la
carga mxima (MPa) y los tratamientos incluyen la utilizacin a baja, mediana y
alta proporcin de los tres distintos gliceroles usados.
Cuadro 13: Datos promedio de esfuerzo porcentual y deformacin

obtenidos para las pelculas polimricas
Muestras
Deformacin promedio % en la
carga mxima (%)
Tensin promedio en la
carga mxima (MPa)
Quitosano glicerol maz

bajo
38,067 24
0,548 0,05

medio
110,556 24
0,128 0,05

alto
311,667 24
0,249 0,05
Quitosano glicerol
vegetal bajo
37,033 24
0,505 0,05
Quitosano glicerol
vegetal medio
104,000 24
0,151 0,05
Quitosano glicerol
vegetal alto
257,333 24
0,179 0,05
Quitosano glicerol grasa

animal bajo
37,961 24
0,141 0,05

animal medio
129,375 24
0,134 0,05

animal alto
219,000 24
0,147 0,05
Se tiene as que la mejor deformacin porcentual que es el dato que ms

interesa por las propiedades elsticas que presenta el material debido a la
aplicacin como apsito sobre la piel, por lo cual el material debe ser elstico y
adaptarse a cualquier superficie del cuerpo humano, la presenta la pelcula
polimrica de quitosano y glicerol de maz en alta concentracin.
82
En el cuadro 14 se muestran los datos obtenidos para las pruebas de tensin y

deformacin de las pelculas polimricas de quitosano y glicerol de maz, y los
datos de tensin y deformacin obtenidos para pelculas polimri cas ya
existentes.
Cuadro 14: Comparacin entre datos de deformacin y tensin obtenidas

con las pruebas de resistencia mecnica de las pelculas polimricas de
quitosano y glicerol de maz con datos de deformacin y tensin de
pelculas polimricas ya existentes
Muestra
Deformacin promedio
en la carga mxima (%)
Tensin promedio en la
carga mxima (MPa)

alto
311,667 24
0,249 0,05
Muestra
Deformacin en la carga
mxima (%)
Tensin en la carga
mxima (MPa)
Quitosano almidn
150,000 18,5
2,8 0,3
La pelcula de quitosano almidn, presenta una deformacin de 150,000

18,5% y una tensin de 2,8 0,3 MPa 34.
La deformacin obtenida para la pelcula de quitosano y glicerol de maz es

mayor a la obtenida para la pelcula de quitosano y almidn.
Si se observan las caractersticas mecnicas de la piel se tiene que la
deformacin aproximada de esta es de 60 % y una tensin aproximada de 3
Mpa.
En la figura 35 se observa la curva de las propiedades mecnicas d e la piel.
34
Zarizky, M. Quitosano y almidn, pelculas polimricas, Revista Centro de Investigacin en

criotecnologia, Argentina, 2009.
83
Figura 35: Curva de tensin Vs deformacin para las pruebas de resistencia

mecnica de la piel.
Mater, M, U.P.M, Propiedades mecnicas de la piel. Piel y membranas, Espaa, 2009.
En la Figura 36 se muestra un histograma de los 3 promedios obtenidos para

las pruebas de deformacin a las cuales fueron sometidas las pelculas
polimricas de quitosano y glicerol de maz en sus tres concentraciones (baja,
media y alta).
Figura 36: Histograma de los 3 promedios obtenidos para las pruebas de

deformacin a las cuales fueron sometidas las pelculas polimricas de
quitosano y glicerol de maz en sus tres concentraciones (baja, media y alta).
350
300
250
200
150
100
50
0
Deformacin
porcentual (%)
Maiz bajo
Maiz
medio
Maiz alto

polimricas de quitosano y glicerol vegetal en sus tres concentraciones (baja,
media y alta).
84

quitosano y glicerol vegetal en sus tres concentraciones (baja, media y alta).
350
300
250
200
De formac in
porc e ntual (%)
150
100
50
0
ve ge tal
b ajo
ve ge tal
me dio
Ve ge tal
alto

polimricas de quitosano y glicerol grasa animal en sus tres concentraciones
(baja, media y alta).

quitosano y glicerol grasa animal en sus tres concentraciones (baja, media y
alta).
300
250
200
150
De formac in
porc e ntual (%)
100
50
0
G. A nimal G. A nimal G. A nimal
b ajo
me dio
alto

las pruebas de tensin a las cuales fueron sometidas las pelculas polimricas
de quitosano y glicerol de maz en sus tres concentraciones (baja, media y
alta).
85

tensin a las cuales fueron sometidas las pelculas polimricas de quitosano y
glicerol de maz en sus tres concentraciones (baja, media y alta).

las pruebas de tensin a las cuales fueron sometidas las pelculas polimri cas
de quitosano y glicerol vegetal en sus tres concentraciones (baja, media y alta).

glicerol vegetal en sus tres concentraciones (baja, media y alta).

las pruebas de tensin a las cuales fueron sometidas las pelculas polimricas
de quitosano y glicerol grasa animal en sus tres concentraciones (baja, media y
alta).
86

glicerol grasa animal en sus tres concentraciones (baja, medi a y alta).
Con los datos de deformacin porcentual (%) y tensin en la carga mxima

(MPa), se procede a graficar las curvas de esfuerzo vs deformacin que
pueden observarse en la Figura 42.
87
Figura 42: Grfico de esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica de

quitosano y glicerol de maz bajo (A), Grfico de esfuerzo vs deformacin para
la pelcula polimrica de quitosano y glicerol de maz medio (B), Grfico de
esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica de quitosano y gli cerol de
maz alto (C), Grfico de esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica de
quitosano y glicerol vegetal bajo (D), Grfico de esfuerzo vs deformacin para
la pelcula polimrica de quitosano y glicerol vegetal medio (E), Grfico de
esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica de quitosano y glicerol
vegetal alto (F), Grfico de esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica
de quitosano y glicerol de grasa animal bajo (G), Grfico de esfuerzo vs
deformacin para la pelcula polimrica de quitosano y glicerol de grasa animal
medio (H), Grfico de esfuerzo vs deformacin para la pelcula polimrica de
quitosano y glicerol de grasa animal alto (I)
88
Figura 42 (continuacin)
Las curvas de esfuerzo deformacin, obtenidas a travs de las pruebas de

resistencia mecnica para las pelculas polimricas en la maquina universal de
ensayos INSTRON 3366, muestran un comportamiento pseudoplstico comn
en los polmeros caracterstico de un elastmero. En las curvas se evidencia
una deformacin no lineal cuando las pelculas son sometidas a una carga,
esto se debe a que las cadenas comienzan a desenroscarse hasta quedar
extendidas. Posterior a esto, las pelculas continan con una deformacin
elstica hasta donde los enlaces empiezan a estirarse y ocurre un
encuelllamiento donde el rea se disminuye, logrando una deformacin
adicional hasta la ruptura total de sus enlaces.
89
Gracias a esto se pudo determinar que a una alta concentracin de glicerol se

tiene una mayor deformacin elstica comparada con las deformacin de las
pelculas polimricas de quitosano y almidn y una menor resistencia a la
tensin, y por el contrario a baja concentracin de glicerol, se tiene una menor
plasticidad con una alta resistencia a la tensin.
Debido a la aplicacin a la cual va orientada esta investigacin, se determin

que la ptima relacin fue quitosano glicerol maz alto que se muestra en la
Figura 28-C. Esta muestra present una deformacin promedio de 311,667 %
con una tensin promedio en la carga mxima de 0,249 MPa.
El mdulo de Young, relaciona el esfuerzo con la deformacin unitaria que

experimenta un objeto al ser sometido a cargas externas. En la Figura 43 se
muestra un resumen de los resultados del mdulo de Young obtenido para
cada uno de los tipos de glicerol en sus diferentes concentraciones, empleados
para la fabricacin de las pelculas polimricas.
Figura 43: Histograma que representa el mdulo de Young vs concentracin

de glicerol.
En la Figura 43, se observa que a mayor concentracin de glicerol el mdulo de

Young tiende a disminuir; por el contrario a menor concentracin de glicerol el
mdulo de Young aumenta.
90
6.4. OBTENCIN DE LAS PELCULAS POLIMRICAS QUITOSANO,

GLICEROL DE MAIZ Y SIO2
Conociendo que las pelculas polimricas con mejores caractersticas de

resistencia mecnica fueron las obtenidas mediante la combinacin de
quitosano y glicerol de maz en alta concentracin, se tiene la receta o
combinacin adecuada para la fabricacin de las pelculas polimricas de
quitosano glicerol de maz y SiO2, que puede observarse en el cuadro 15.
Cuadro 15: Receta o concentraciones adecuadas para la fabricacin de

las pelculas polimricas de quitosano, glicerol de maz y SiO 2
Temperatura
24C 3C
Humedad relativa
60% 5%
Quitosano
3,048 g
Tipo de Glicerol
Maz
Concentracin glicerol
0,889 mL
Tiempo de agitacin quitosano
6 horas
Velocidad agitacin quitosano
7000 RPM
Tiempo agitacin glicerol
2 horas
Velocidad agitacin glicerol
7000 RPM
Dixido de Silicio
0,38 g
Tiempo de agitacin SiO2
3 horas
Velocidad de agitacin SiO2
7000 RPM
Velocidad centrifugado del compuesto
3500 RPM
Tiempo centrifugado
8 minutos
Tiempo reposo de las pelculas
4 das
Tiempo secado al horno
2 das
Temperatura del horno
40C
91
6.5. ANLISIS DE CITOTOXICIDAD
Llevado a cabo el procedimiento para la determinacin de la viabilidad celular

de las muestras, se obtuvo un ptimo resultado, despus del anlisis realizado
a travs del microscopio. En la Figura 44, se muestran los linfocitos
encontrados en las matrices de conteo, transcurridos los das, observando
linfocitos viables y no viables.
Figura 44: Matriz de conteo cmara de newbauer (A), Linfocitos viables (B) y
(C), linfocito no viables (D), Supervivencia celular (linfocitos), laboratorio de
Ciencias Biomdicas de la Universidad Autnoma de Occidente Cali
A travs de un cultivo de linfocitos llevado a cabo en el Laboratorio de ciencias

biomdicas de la Universidad Autnoma de Occidente, se pudieron obtener
una serie de imgenes. El proceso de cultivo fue llevado a cabo durante 4 das,
en los cuales cada 24 horas se realizaba un conteo obteniendo imgenes de
este, observando de esta manera los linfocitos viables y no viables en cada
cuadrante de la matriz de conteo.
92
En el cuadro 16 se muestra la matriz obtenida para el conteo de linfocitos

durante los 3 das de prueba, para la determinacin de viabilidad celular.
93
Cuadro 16: Matriz de conteo celular del cultivo de linfocitos (conteo cada 24 horas)
TIEMPO
MUESTRA
0H
0H
0H
0H
0H
TOTAL
24 H
24 H
24 H
24 H
24 H
TOTAL
48 H
48 H
48 H
48 H
48 H
TOTAL
72 H
72 H
72 H
72 H
72 H
TOTAL
No Muestra
NO muestra
NO muestra
NO muestra
NO muestra
Positivo
SiO2 bajo
SiO2 medio
SiO2 alto
Negativo
Positivo
SiO2 bajo
SiO2 medio
SiO2 alto
Negativo
Positivo
SiO2 bajo
SiO2 medio
SiO2 alto
Negativo
CUADRANTE
1
84
43
65
61
20
273
92
40
56
62
23
273
71
23
45
61
36
236
90
67
67
43
16
270
CUADRANTE
2
60
74
30
25
32
221
47
62
37
21
35
202
56
34
45
23
24
182
54
76
33
46
34
226
CUADRANTE
3
34
87
26
67
35
249
87
34
54
54
27
298
45
56
61
24
45
231
67
37
22
54
32
179
94
CUADRANTE
4
54
76
32
65
24
251
67
56
30
57
14
265
65
43
45
23
18
194
56
76
65
56
20
275
TOTAL
232
280
153
218
111
994
293
192
177
194
99
955
237
156
196
131
123
843
267
256
187
199
102
1011
VIABLES NO VIABLES
232
280
153
218
111
994
288
178
170
178
1
815
213
121
131
78
2
545
213
178
119
129
0
639
0
0
0
0
0
0
5
14
7
16
98
140
24
35
65
53
100
298
54
78
68
70
102
372
Material positivo: Pelcula polimrica de quitosano y glicerol orgnico de maz

en alta proporcin. La pelcula polimerica de quitosano y glicerol es un material
biocompatible, con un porcentaje de compatibilidad con el entorno fisiolgico de
78,9 %35.
SiO2 bajo: Pelcula polimrica de quitosano, glicerol orgnico de maz en alta

proporcin y dixido de silicio en baja proporcin.
SiO2 medio: Pelcula polimrica de quitosano, glicerol orgnico de maz en alta

proporcin y dixido de silicio en media proporcin.
SiO2 alto: Pelcula polimrica de quitosano, glicerol orgnico de maz en alta

proporcin y dixido de silicio en alta proporcin.
Material Negativo: Caucho.
En la matriz de conteo celular de linfocitos presentada en Tabla 14, se llev a

cabo un conteo cada 24 horas, depositando los datos de los linfocitos
encontrados en cada cuadrante, obteniendo as un total de linfocitos viables y
no viables.
El anlisis de los linfocitos viables y no viables se llev a cabo para 5 muestras,

el control positivo que es la pelcula polimrica de quitosano y glicerol de maz.
La muestra uno, compuesta de quitosano, glicerol de maz y dixido de silicio
en baja proporcin, la muestra dos, compuesta de quitosano, glicerol de maz
y dixido de silicio en media proporcin, la muestra tres, compuesta de
quitosano, glicerol de maz y dixido de silicio en alta proporcin, y por ultimo
35
Zinels, J. Revista Iberoamericana de polmeros Volumen 8, enero de 2007 ,: Materials

Science : Materials in Medicine
95
contamos con el control negativo que en el caso de la investigacin fue

implementado un caucho.
En las imgenes mostradas en la Figura 45 se observan los materiales

utilizados para las pruebas de toxicidad.
Figura 45: Control positivo pelcula polimrica, quitosano y glicerol maz (A),
Muestra UNO Pelcula polimrica, quitosano, glicerol maz y dixido de silicio
en baja proporcin (B), Muestra DOS Pelcula polimrica, quitosano, glicerol
maz y dixido de silicio en media proporcin (C), Muestra TRES Pelcula
polimrica, quitosano, glicerol maz y dixido de silicio en alta proporcin (D) ,
Control negativo caucho (E), Laboratorio de Ciencias Biomdicas de la
96
Fue tomado como control positivo del experimento, la pelcula polimrica de

quitosano y glicerol de maz, pues se reporta en la literatura una
biocompatibilidad optima, para posibles aplicaciones biomdicas36.
EL material implementado como control negativo fue el caucho, pues no se

tienen reportes de la biocompatibilidad del material, obteniendo como resultado
mediante el anlisis de toxicidad llevado a cabo que el material no presenta
viabilidad celular ante el cultivo de linfocitos.
En la Figura 46, se muestra el resultado obtenido en porcentaje de linfocitos

viables y no viables expuestos a la pelcula de quitosano y glicerol maz.
Figura 46: Barras porcentuales de linfocitos viables y no viables expuestos al

control positivo (pelcula polimrica de quitosano y glicerol maz), durante los 3
das.

viables y no viables expuestos a la pelcula de quitosano y glicerol maz y SiO2
en baja concentracin.
36
KEAN T, THANOU M, Biodegradation, biodistribution and toxicity of chitosan, Western

Reserve University, Orthopaedics Department, Cleveland, Ohio, Contents lists available at
ScienceDirect.
97

control muestra uno (quitosano, glicerol de maz y dixido de silicio en baja
proporcin), durante los 3 das.

viables y no viables expuestos a la pelcula de quitosano y glicerol maz y SiO 2
en mediana concentracin.

control muestra dos (quitosano, glicerol de maz y dixido de silicio en mediana
98

viables y no viables expuestos a la pelcula de quitosano y glicerol maz y SiO2
en alta concentracin.

control muestra tres (quitosano, glicerol de maz y dixido de silicio en alta

viables y no viables expuestos al control negativo (caucho).

control negativo (caucho) durante los 3 das.
99
En el cuadro 17, se muestran los porcentajes de linfocitos viables durante los

tres das de conteo.
Cuadro 17: Porcentaje de linfocitos viables para cada muestra durante los
tres das
POSITIVO
SiO2 BAJO
SiO2 MEDIO
SiO2 ALTO
NEGATIVO
% DIA
UNO
98,30
92,70
96,00
91,80
1,01
% DIA
DOS
89,90
77,70
66,90
60,00
1,62
% DIA
TRES
79,80
69,53
63,70
72,10
0,00
En el cuadro 18, se muestran los porcentajes de linfocitos no viables durante

los tres das de conteo.
Cuadro 18: Porcentaje de linfocitos no viables para cada muestra durante

los tres das
POSITIVO
SiO2 BAJO
SiO2 MEDIO
SiO2 ALTO
NEGATIVO
% DIA
UNO
1,70
7,30
4,00
8,20
98,99
% DIA
DOS
10,10
22,30
33,10
40,00
98,38
% DIA
TRES
20,20
30,47
36,30
27,90
100,00
Para la determinacin de la viabilidad celular se tomaron los resultados

obtenidos para los linfocitos sometidos a cada una de las muestras en los tres
das, obteniendo un total de clulas viables y un porcentaje para cada una de
ellas, como se observa en la tabla 15. El porcentaje de clulas viables fue
obtenido mediante la relacin entre el total de linfocitos viables para cada una
100
de las muestras, incluyendo los dos controles y el total de linfocitos contados

en los tres das. Este clculo se llevo a cabo mediante la ecuacin 5.
[5]
En cuadro 19, se muestran los porcentajes de viabilidad celular para cada una
de las muestras y el nmero de linfocitos viables y no viables.
Cuadro 19: Comparacin estadstica

celular
MUESTRA
POSITIVO
SiO2 BAJO
SiO2 MEDIO
SiO2 ALTO
NEGATIVO
LINFOCITOS
VIABLES
714
477
420
385
3
para determinacin de viabilidad
TOTAL
LINFOCITOS
797
604
560
524
324
% VIABILIDAD
CELULAR
89,58
78,97
75,00
73,47
0,92
Llevando a cabo la comparacin de los datos obtenidos en el porcentaje de

viabilidad celular, se determina que posee un mejor comportamiento al ser
expuestas a un medio fisiolgico in vitro la muestra de quitosano, glicerol maz
en alta concentracin y dixido de silicio en baja concentracin ( SiO2 BAJO), ya
que present un alto porcentaje de viabilidad celular en las pruebas de
citotoxicidad.
En la Figura 51, se muestran los porcentajes de viabilidad celular para cada

una de las muestras, transcurrido el tiempo de conteo.
101
Figura 51: Porcentaje de viabilidad celular para cada una de las muestras
transcurridos los tres das de conteo.
102
6.6 ANLISIS DE MICROSCOPA ELECTRNICA DE BARRIDO EN LAS

PELCULAS POLIMRICAS (SEM)
6.6.1. Muestras recubiertas con oro en la Cmara de Vacio Denton

Vacuum.
Transcurridos aproximadamente 15 minutos de haber sido
introducidas las pelculas polimricas en la Cmara de Vacio, fueron retiradas
observando las capas de oro que recubren a la muestra como se observa en la
Figura 52.
Figura 52: Muestras recubiertas con oro en la cmara de Vacio Denton

Vacuum, Laboratorio Escuela de Materiales, Universidad del Valle.
6.6.2. Resultados obtenidos para las pruebas de Microscopia Electrnica

de Barrido. Recubiertas las pelculas polimricas con oro, fueron procesadas
en el Microscopio Electrnico de Barrido, para llevar a cabo un anlisis
morfolgico de las muestras a travs de las imgenes resultantes de las
pruebas. En la Figura 53, se muestran las imgenes obtenidas para el anlisis
llevado a cabo en las pelculas polimricas de quitosano, glicerol de maz en
alta concentracin y dixido de silicio en las tres concentraciones (baja, media
y alta).
103
Figura 53: Imagen de Microscopia Electrnica de Barrido para pelicula

polimerica de quitosano, glicerol maiz alta concentracion y dioxido de silicio en
baja concentracion (0,25%) (A), Imagen de Microscopia Electrnica de Barrido
para pelicula polimerica de quitosano, glicerol maiz alta concentracion y
dioxido de silicio en media concentracion (0,5%) (B), Imagen de Microscopia
Electrnica de Barrido para pelicula polimerica de quitosano, glicerol maiz alta
concentracion y dioxido de silicio en alta concentracion (0,75%) (C),
Microscopio Electrnico de Barrido JEOL JSM-6490LV, Escuela de materiales
de la Universidad del Valle.
En la Figura 53, se muestran las imgenes obtenidas para las pruebas de

Microscopa Electrnica de Barrido, observando que no se presentan fracturas
en la estructura de las pelculas, por el contrario sus superficies presentan
homogeneidad y tampoco se observan porosidades. Esta estructura hace que
el material tenga caractersticas adecuadas para la aplicacin que se desea,
pues se requiere que el material dure algn tiempo en la piel del individuo sin
presentar fracturas.
104
7. CONCLUSIONES
En esta investigacin se obtuvieron pelculas polimricas basadas en dixido

de silicio encapsulado en una matriz de quitosano y glicerol orgnico a travs
del mtodo de evaporacin lenta, las cuales fueron caracterizadas mediante
distintas tcnicas. A partir de este estudio, podemos concluir lo siguiente:
Empleando el mtodo de evaporacin lenta se obtiene un secado uniforme

de los materiales, dando como resultado una pelcula consistente.
Para lograr la uniformidad de las muestras a travs del mtodo de

evaporacin lenta, es necesario determinar un tiempo de reposo y posterior
a este, establecer un tiempo a temperatura controlada.
Para lograr la uniformidad de las pelculas a travs del mtodo de

evaporacin lenta, se requiere que estas sean cubiertas c on una campana
acrlica para controlar las variables de humedad y temperatura, evitando
impurezas y alteracin en su estructura.
La humedad, la temperatura y el tiempo son factores ambientales que

deben ser controlados para la fabricacin de las pelcul as.
Para la estandarizacin del mtodo de obtencin de pelculas polimricas

se llev a cabo un diseo experimental de superficie de respuestas y
optimizacin simultnea de variables, que arroj el valor ptimo de
concentracin de glicerol dando un 7 % (0,889 mL) para la fabricacin de
las pelculas polimricas.
La deformacin alcanzada por la pelcula es directamente proporcional a la

alta concentracin de glicerol e inversamente proporcional a la resistencia a
la tensin.
Se puede modificar las propiedades de las pelculas polimricas, variando la

concentracin del glicerol.
105
Llevado a cabo el anlisis de las propiedades mecnicas de las pelculas

polimricas, se observ que el glicerol de maz presenta el ms alto grado
de deformacin (311,667%).
Como resultado del anlisis de las propiedades mecnicas de las pelculas

a travs de la Maquina universal de ensayos INSTRON, se obtuvo que el
glicerol de maz en alta concentracin present una def ormacin promedio
de 311,667 %. Este resultado permite que las pelculas sean elsticas, lo
que facilita su adaptacin a la forma de los zonas a las cuales vayan a ser
aplicadas.
Las pruebas de resistencia mecnica realizadas a las pelculas polimricas

arrojaron curvas de esfuerzo deformacin con un comportamiento
pseudoplstico caracterstico de los polmeros.
Llevado a cabo el proceso de mezcla del glicerol y quitosano, es necesario

realizar un proceso de centrifugado de dicho compuesto, para evitar as que
molculas de oxigeno causen porosidad en l as pelculas ocasionando
alteracin en las propiedades mecnicas de estas.
La concentracin baja de dixido de Silicio SiO 2 posee una mayor

compatibilidad con el entorno fisiolgico, obteniendo como resultado para
ello un 78,97 % de linfocitos vivos al tercer y ltimo da de conteo.
Con los resultados obtenidos de las pruebas de Microscopia Electrnica de

barrido se pudo concluir que las pelculas poseen una superficie totalmente
homognea y no tienen ningn tipo de porosidad.
106
8. RECOMENDACIONES
Los implementos a utilizarse para la fabricacin de las pelculas deben estar

totalmente limpios, pues las impurezas pueden alterar la estructura y las
propiedades mecnicas de estas.
El tiempo de agitacin de los reactivos debe ser controlado y de

aproximadamente 6 horas, a una velocidad constante de 7000 RPM.
La mezcla de quitosano y glicerol debe ser centrifugada, posterior al

proceso de mezclado, esto con el fin de eliminar las molculas de oxigeno
que alteran las propiedades fsicas y mecnicas de las pelculas.
Es necesario limpiar los moldes de tefln con alcohol, y secarlos al

ambiente, esto se hace para desinfectar y evitar que impurezas que puede
contener el implemento que se use para el secado se adhieran al tefln.
Es necesario nivelar el lugar en el cual se van a dejar las pelculas durante

el tiempo necesario establecido para la evaporacin y secado de la mezcla.
La mezcla debe dejarse a temperatura ambiente durante cuatro das, y

posterior a este tiempo debe colocarse en un horno a una temperatura
constante de 40 C durante tres das.
La mezcla debe ser cubierta con una campana acrlica durante el tiempo de
secado a temperatura ambiente, esto con el fin de evitar que caigan
impurezas a estas, y mantener una humedad controlada.
Para la realizacin de las pruebas de resistencia mecnica, en la Maquina

universal de ensayos INSTRON, se recomienda colocar en los extremos de
107
la pelcula a analizarse cintas a una distancia de 25 mm del borde externo

hacia el interior. Esto para facilitar el agarre de los grips a la pelcula, y
evitar as tambin que se adhiera la pelcula a estos.
El dixido de silicio es un compuesto que en alta concentracin es nocivo

para la salud, es por ello que se recomienda el uso de tapabocas y guantes
para la manipulacin de este.
El pesaje del dixido de silicio debe hacerse en una balanza con campana,
para evitar que las partculas del compuesto salgan y se dispersen por el
aire.
Se sugiere utilizar la Tcnica de Microscopia Electrnica de Transmisin en

futuros desarrollos, con el fin de verificar la dispersin homognea de las
nanopartculas en el compuesto.
Para el proceso de agitacin de los reactivos en la plancha de agitacin, es

necesario cubrir los Baker con papel parafina, esto para evitar que
impurezas caigan en la mezcla.
Para las pruebas de citotoxicidad se recomienda esterilizar todos los

implementos a utilizarse.
La manipulacin final de las pelculas polimricas debe hacerse de forma

controlada y con la mayor asepsia
posible, para evitar posibles
contaminaciones con partculas ajenas al material.
108
GRUPOS DE INVESTIGACION
Miembros del Semillero de Biomateriales del Grupo de Investigacin de

Materiales Avanzados para Micro y Nano Tecnologa IMAMNT, Universidad
109
BIBLIOGRAFIA
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recubrimientos con material W-DLC y Si-DLC en aplicaciones biomdicas.
Tesis. Universidad Autonoma de Occidente. 2010.
MARTINEZ CAMACHO A.P. CORTEZ ROCHA M. EZQUERRA BRAUERA

J.M., GRACIANO VERDUGO A.Z., RODRIGUEZ FLIXA F., CASTILLO
ORTEGA M.M., YPIZ GMEZ M.S., PLASCENCIA JATOMEAA M. Journal of
Carbohydrate Polymers. 82, 2010. p. 305 315.
MING KONG, XI GUANG CHEN, KE XING, HYUN JIN PARK, Antimicrobial

properties of chitosan and mode of action. PR China, 2010. p. 53.
ORTZ, A. BRIANO, M. GALVN, R. Tesis, El microscopio electrnico de

barrido un instrumento til para la ciencia, Universidad Autnoma de
Aguascalientes. 2010.
ORTIZ RAMOS, J. SIERRA SNCHEZ, A. Quemaduras en el tercer mundo
(tratamiento de quemados con recursos limita dos). III congreso nacional de
enfermera de quemados y ciruga plstica, Zaragosa, 2008.
111
SNCHEZ B. ANDRS, caracterizacin y utilizacin de hidrogeles de

quitosano obtenidos a partir de camarn langostino ( pleuroncodes planipes)
para el crecimiento de fibroblastos humanos. Trabajo de grado para optar
Ingeniera biotecnolgica. Costa rica.: Escuela de Biologa 2006. 13 p.
VALDEZ, B. SCHORR, M. VALDEZ, E. CARRILLO, M. Revista Biomateriales

para la rehabilitacin del cuerpo humano, 2009.
ZEGARRA, M.
MONTESINOS, S. Trabajo de tesis, aplicaciones de
microscopia electronica de barrido (sem) y analisis de fractura de una aleacin
de cu 10 a1, Universidad de Chile, 2009.
112
ANEXOS
ANEXO A. Norma astmd82-10
113
114
115
116
117
118
119
120
121
122
ANEXO B. Material safety data sheet (msds) dioxido de silicio (SiO2)
123
124
125
126
127
ANEXO C. Formulario de consentimiento informado
TTULO: OBTENCIN DE PELCULAS POLIMRICAS BASADAS EN

DIXIDO DE SILICIO ENCAPSULADO EN UNA MATRIZ DE QUITOSANO Y
GLICEROL ORGNICO A TRAVS DEL MTODO DE EVAPORACIN
LENTA PARA APLICACIONES BIOMDICAS.
PROTOCOLO No: 00001.
INVESTIGADORES: Oscar Mauricio Vlez Tabares y Wilson Fernando Pantoja

Yela.
DIRECCIN: Facultad de Ingeniera, Departamento de Ingeniera Biomdica,
Universidad Autnoma de Occidente
INTRODUCCIN: Los investigadores han determinado que Ud. rene los
requisitos principales para participar en el estudio de esta investigacin. La
siguiente informacin describe el estudio a realizar y su funcin como
participante en este. Un investigador del grupo explicar los procedimientos y
atender cualquier duda acerca de este formulario. Lea detenida y
cuidadosamente este documento.
OBJETIVO DEL ESTUDIO: En este estudio se determinar la viabilidad celular
de las pelculas polimricas de quitosano, glicerol de maz y dixido de silicio
con la sangre que Ud. ofrece como muestra para las pruebas de citotxicidad.
DESCRIPCIN DEL ESTUDIO Y PROCEDIMIENTOS: La muestra de sangre
ser extrada, marcada y manipulada nicamente por la persona que ha sido
asignada para tal funcin.
Este estudio se llevara a cabo con la participacin de 5 personas mayores de

edad; 1 hombre y 4 mujeres.
Luego de haber sido Ud. seleccionado a partici par en el estudio, ser expuesto
a una extraccin de sangre por venopuncin realizada por personal calificado,
la cual ser depositada y almacenada luego para su conservacin.
128

EXTRACCIN DE SANGRE PERIFRICA POR VENOPUNCIN:
El donante no debe presentar alguna enfermedad infecciosa o contagiosa que

active el sistema inmune dentro de los 60 das previos a la extraccin.
Se obtendrn 10mL de sangre por venopuncin, una vez aceptado y firmado el
consentimiento informado por parte del donante
PREPARACIN DE MUESTRAS DESPUS DE CENTRIFUGACIN

(SEPARACIN Y LAVADOS):
En un tubo de ensayo de 20mL colocar 10mL de histopaque marca Sigma Aldrich ref. 1077, aadir en la superficie del histopaque los 10mL de sangre
perifrica obtenidos. Centrifugar los tubos a 400 gravedades durante 30
minutos a temperatura ambiente (27C) con el objetivo de separar las cadenas
de linfocitos.
Con una micropipeta se extrae el anillo de clulas (linfocitos) que queda en la

interface entre el sangre y el histopaque del tubo ( aproximadamente 800L),
tratando de arrastrar la menor cantidad posible de reactivo.
Adicionar a cada tubo 3800L de medio de cultivo RPMI 1640 enriquecido, con
5% de suero fetal bovino equivalente a 190L; realizar una disociaci n (mezclar
los linfocitos con el medio) para luego llevar a un primer lavado en
centrifugadora a 250 gravedades (2.190rpm), por 10 minutos a 27C.
Retirar el sobrenadante de cada uno de los tubos y realizar un segundo lavado

en centrifugadora con las mismas especificaciones que el anterior.
PREPARACIN DE MUESTRAS PARA CONTEOS PRE Y POS:
Retirar el material precipitado (linfocitos) en cada tubo. Preparar una solucin

compuesta de 20mL de RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal al
10% que equivale a 2mL, penicilina 50g/mL equivalente a 1000L y
gentamicina 10g/mL que equivale a 200L; esta solucin se divide por igual
en el numero de muestras que se requiera, luego se disocia nuevamente la
cantidad de linfocitos agregada junto con la solucin para iniciar el primer
conteo.
129
Se extrae 100L del cultivo y se mezclan en un tubo eppendorf que contiene

100L de azul de tripn al 4% dejndolos reposar durante 5min mximo (el azul
de tripn se prepara con 100mL de agua autoclavada por 30min, agregando
0.04g de azul de tripn en polvo); se retira una cantidad adecuada de la mezcla
del cultivo con el tinte, y se coloca en la cmara de newbauer con la
micropipeta en ambas matrices de evaluacin, para proceder al conteo con el
microscopio en escalas 40X y 100X, centrndose en los recuadros de las
esquinas de la matriz.
El cultivo que se est incubando en la cmara de CO 2 se pone en contacto con

las pelculas polimricas y se deja cultivando durante 24 horas, para luego
hacer el conteo con el mismo procedimiento que se desarrollo anteriormente
utilizando el tinte azul de tripn, en las mismas cantidades y bajo las mismas
condiciones en la cmara de newbauer.
A continuacin, debe replicarse este paso despus de 48 y 72 horas bajo las

mismas condiciones sobre la cmara de newbauer; para luego comparar con el
primer conteo.
RIESGOS Y MOLESTIAS: la recoleccin del material sanguneo para este
estudio en general no implica riesgos. Sin embargo, se le explicarn las
molestias, riesgos razonables y previsibles de la participacin.
ALTERNATIVAS: la participacin en este estudio no es obligatoria. Puesto que

Ud. Podr decidir si quiere o no hacerlo, en caso que crea que le genere algn
tipo de riesgo.
POSIBLES BENEFICIOS PARA LOS PARTICIPANTES: no hay garanta de
que Ud. personalmente recibir un beneficio por participar en este estudio; su
participacin en esta investigacin proporcionar informacin acerca de la
viabilidad celular de las pelculas polimricas con el entorno fisiolgico, estos
resultados podran beneficiar a otros.
COSTOS: La participacin en esta investigacin, procedimientos y controles

que se le realizaran a las muestras, no representar ningn costo para el
participante.
No existe ninguna forma de compensacin o

tiempo dedicado en la investigacin.
130
retribucin monetaria por el
COMPENSACIN POR EFECTOS COLATERALES RESULTANTES DEL

ESTUDIO: Si Ud. sufre algn dao o enfermedad directa por la toma de la
muestra de sangre como resultado de su participacin en la investigacin, los
investigadores cubrirn los gastos para su tratamiento.
La firma de este consentimiento no implica su renuncia a ninguno de los

derechos previstos por la normativa vigente para el caso de daos relacionados
con su participacin en este estudio.
CONFIDENCIALIDAD: Los registros de su participacin en esta investigacin

se mantendrn confidenciales en la medida permitida por las leyes locales. Los
encargados del estudio, y directores del mismo podrn inspeccionar y tendrn
acceso a los datos confidenciales que lo identifican a Ud. por su nombre. Los
Comits de tica/Docencia e Investigacin son comits que evalan los
estudios para garantizar que se protejan los derechos y el bienestar de los
participantes y que la investigacin se lleve a cabo ticamente. Dada la
necesidad de entregar informacin a estos organismos, no puede garantizarse
una absoluta confidencialidad. Ud. no ser identificado en ninguna publicacin
de los datos. Al firmar este formulario de consentimiento, Ud. autoriza a los
investigadores revelar sus registros mdicos relacionados con la investigacin
a las personas arriba mencionadas.
A QUIN DIRIGIR LAS PREGUNTAS RELATIVAS A ESTE ESTUDIO: Ud.

Tiene el derecho de hacer preguntas sobre el estudio que se va a realizar en
cualquier momento. El encargado del estudio ser informado acerca de toda
nueva informacin relativa a su seguridad.
Si tiene alguna pregunta relativa a este estudio o si presenta un dao o

enfermedad relacionado con la investigacin, contacte a los investigadores
Oscar Mauricio Vlez Tabares 3173480751 y/o Wilson Fernando Pantoja Yela
3122869273.
PARTICIPACIN VOLUNTARIA Y DERECHO DE NEGARSE O RETIRARSE:

Su participacin en este estudio es voluntaria. Ud. podr negarse o
descontinuar su participacin en cualquier momento durante el estudio, sin
penalidad ni prdida de beneficios.
DESCONTINUACIN DE SU PARTICIPACIN: Su participacin podr ser

descontinuada por los investigadores, sin su consentimiento si Ud. deja de
reunir los criterios o no cumple con las instrucciones del estudio que se le
indicaron en cuanto a su cuidado o con los requerimientos del estudio, si sufre
un dao relacionado con el estudio, o por cualquier otro motiv
131
DECLARACIN DE CONSENTIMIENTO INFORMADO:
Yo, ________________________________________________, identificado

con la cdula No. ____________________de__________, he comprendido
toda la informacin que se me suministr acerca de mi participacin en este
estudio. He tenido la oportunidad de comentar dicha informacin y hacer
preguntas. Todas ellas han sido respondidas a mi satisfaccin. Acepto de plena
voluntad participar en este estudio. Recibir una copia firmada de sta
declaracin de consentimiento informado.
La decisin de aceptar participar en este estudio de investigacin no anula
ninguno de sus derechos en el caso de negligencia u otra responsabilidad legal
de las personas involucradas en este estudio.
Autorizo a que se revelen los registros de los resultados a los directores de la
investigacin.
__________________________
Nombre del paciente
___________________________
Fecha/hora de firma
___________________________
Firma de la persona que
obtiene el consentimiento
___________________________
Fecha/hora de firma
__________________________
Firma del Testigo
___________________________
Fecha/hora de firma
132
ANEXO D. Procedimiento de la tcnica azul de tripn para evaluar

biocompatibilidad celular
EXTRACCIN DE SANGRE PERIFRICA POR VENOPUNCIN:
Obtener 10ml de sangre por venopuncin, previo consentimiento informado del

donante de la muestra; se debe tener en cuenta que el donante no debe
presentar alguna enfermedad infecciosa o contagiosa que a ctive el sistema
inmune dentro de los 60 das previos.
PREPARACIN DE MUESTRAS
(SEPARACIN Y LAVADOS):
DESPUS
DE
CENTRIFUGACIN
En un tubo de 20ml colocar 10ml de histopaque marca Sigma-Aldrich ref. 1077

y luego aadir en la superficie del histopaque los 10ml de sangre perifrica
obtenidos. Centrifugar los tubos a 400 gravedades durante 30 minutos a
temperatura ambiente (27C) con el objetivo de separar los linfocitos.
Extraer con una micropipeta el anillo de clulas (linfocitos) que queda en la

interface entre el suero y el histopaque del tubo (aproximadamente 800 l),
tratando de arrastrar la menor cantidad posible del reactivo.
Aadir a cada tubo 3800l de medio de cultivo RPMI 1640 enriquecido, con 5%
de suero fetal bovino equivalente a 190l; realizar una disociaci n (mezclar los
linfocitos de forma homognea con el medio) para luego llevar a un primer
lavado en centrifugadora a 250 gravedades (2.190rpm), por 10 minutos a 27C.
Retirar el sobrenadante de cada uno de los tubos eppendorf y realizar un
segundo lavado en centrifugadora con las mismas especificacion es que el
primero.
PREPARACIN DE MUESTRAS PARA CONTEOS PRE Y POS:
Retirar el material precipitado (linfocitos) en cada tubo eppendorf. Preparar una

solucin compuesta de 20ml de RPMI 1640 suplementado con suero bovino
fetal al 10% que equivale a 2ml, penicilina 50g/ml equivalente a 1000l y
gentamicina 10g/ml que equivale a 200l; esta solucin se divide por igual en
el numero de muestras que se requiera, luego se disocia nuevamente la
cantidad de linfocitos agregada junto con la solucin para iniciar el primer
conteo. Se hace la extraccin de 100l del cultivo y se mezclan en un tubo
133
eppendorf que contiene 100l de azul de tripn al 4% dejndolos reposar

durante 5min mximo (el azul de tripn se prepara con 100ml de agua
autoclavada por 30min, agregando 0.04g de azul d e tripn en polvo); se retira
una cantidad adecuada de la mezcla del cultivo con el tinte, y se coloca en la
cmara de newbauer con la micropipeta por ambas matrices de evaluacin,
para proceder al conteo con el microscopio en escalas 40X y 100X,
centrndose en los recuadros de las esquinas de la matriz.
Posteriormente el cultivo que se est incubando en la cmara de CO 2 se pone

en contacto con el material a evaluar y se deja cultivando durante 24 horas,
para luego hacer el conteo con el mismo procedimiento que se desarrollo
anteriormente utilizando el tinte azul de tripn, en las mismas cantidades y bajo
las mismas condiciones en la cmara de newbauer.
A continuacin, debe replicarse este paso despus de 48 y 72 horas despus

bajo las mismas condiciones sobre la cmara de newbauer; para luego
comparar con el primer conteo.
134
135
136

Obtencion de Biopolimero A Partir de Dioxido No Se Que

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OBTENCIN DE PELCULAS POLIMRICAS BASADAS EN DIXIDO DE

SILICIO ENCAPSULADO EN UNA MATRIZ DE QUITOSANO Y GLICEROL

WILSON FERNANDO PANTOJA YELA

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE OCCIDENTE

OBTENCIN DE PELCULAS POLIMRICAS BASADAS EN DIXIDO DE

WILSON FERNANDO PANTOJA YELA

Proyecto de Grado para optar al ttulo de

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE OCCIDENTE

Aprobado por el comit de grado en

Ingeniero Mauricio Barrera

Ingeniero Jos Mina

Santiago de Cali, 23 de Febrero de 2012

Culmina una de las etapas ms esperadas e importantes de mi vida en la que

A mi padre Mario Vlez, por los ejemplos de constancia y perseverancia que lo

A mis familiares; a mi to Bernardo, a mi to Orlando, a mi to Guillermo, a mi

A mis maestros; por su gran apoyo y motivacin para la culminacin de

A mis amigos; que nos apoyamos mutuamente en nuestra formacin

Oscar Mauricio Vlez

SONIA YELA ROMO y WILSON PANTOJA ACOSTA quienes me ensearon a

Gracias por su apoyo incondicional, mis abuelos: Aura, Rubiela, Gerardo,

Gracias por su compaa y su amistad incondicional, lvaro, Giovanny, Martin,

Wilson Fernando Pantoja Yela

Expresamos nuestros ms sinceros agradecimientos a todos aquellos que, de

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

2.1. OBJETIVO GENERAL

5.1. ESTANDARIZACIN DEL MTODO PARA OBTENCIN

5.2.8 Etapa 7: Mezcla de quitosano diluido con glicerol

6.1. OBTENCIN DE LAS PELCULAS POLIMRICAS

Figura 1. Equipo utilizado para medir las proporciones de glicerol

Figura 2. Quitosano utilizado (A), Paleta para tomar el polvo de

Figura 3. Acido actico al 100% (A), agua destilada (B)

Figura 4. Baker mezcla de agua destilada y acido actic o al 100% (A)

Figura 5. Deposito de quitosano en Baker con agitador magntico (A),

Figura 7. Proceso para agregar glicerol a quitosano diluido

Figura 8. Mezcla de quitosano y glicerol de origen vegetal

Figura 9. Mezcla de quitosano y glicerol de grasa animal

Figura 10. Medicin con pipeta de 12,7 ml de cada tipo de glicerol

tubos de ensayo con mezclas (C)

Figura 11. Centrifuga empleada para dicho proceso (A), ubicacin

Figura 12. Modelo CAD de los moldes a obtenerse (A), Maquinado de

Figura 13. Cubrimiento de los moldes con la campana de acrlico (A)

Figura 14. Nivelador (A), Ubicacin de los moldes con las

Figura 15. Horno (A), Estado de las mezclas despus de

Figura 16. rea establecida por la norma ASTMD882-10

Figura 17. Maquina universal de ensayos INSTRON (A),

Figura 18. Bosquejo de pelcula polimrica obtenida para

Figura 19. Ubicacin de la pelcula polimrica en la maquina

Figura 20. Proceso para determinacin de propiedades

Figura 21. Manipulacin del dixido de silicio (A), Calibracin

Pelculas de quitosano, glicerol y

dixido de silicio encapsulado (A)

Figura 24. Extraccin de sangre por venopuncin (A),

Figura 25. Autoclave (A), implementos en proceso de

Figura 26. Sangre centrifugada (A), separacin de cadena

Figura 27. Principio de funcionamiento del SEM, segn

Figura 28. Cmara de Vacio Denton Vacuum

Figura 29. Muestras de pelculas polimricas listas para

Figura 30. Microscopio Electrnico de Barrido JEOL JSM-6490LV

Figura 31. Ubicacin de las muestras en Electrnico de Barrido

Figura 32. Pelculas polimricas transcurrido el tiempo de

Figura 33. Grficos de contorno humedad Vs concentracin

Figura 34. Proporciones porcentuales optimas de los reactivos

Figura 35. Curva de tensin Vs deformacin para las pruebas de