PERFIL LEUCOCITÁRIO SEMINAL DE ACORDO COM A APTIDÃO REPRODUTIVA EM

TOUROS DE CORTE

Adriane Lermen Zart1, Carlos Eurico Fernandes2, Laryssa Junqueira Franco Campos1, Débora Naihane Alves
Sodré1, Luiz Carlos Louzada Ferreira3, Marcelo Paixão Beretta3
1
Alunas do Curso de Medicina Veterinária da FAMEZ da UFMS. E-mail: alzart@terra.com.br; laryssa.lfc@gmail.com;
debora.nas@gmail.com
2
Professor do Departamento de Patologia, CCBS, da FAMEZ da UFMS. e-mail: cefernandes@nin.ufms.br
3
Cia Pecuária Assessoria, Campo Grande, MS. E-mail: caio@ciapecuária.com.br; beretta@ciapecuaria.com.br

Resumo: O objetivo deste estudo foi estabelecer o perfil leucocitário seminal de touros de corte, relacionando
com a aptidão reprodutiva dos mesmos. Após coleta e exame de sêmen de 124 touros, os animais foram
classificados quanto à condição reprodutiva em aptos (73,3%) e inaptos (26,7%). Esfregaços dos ejaculados
foram corados com a coloração de Panótico para avaliação do perfil leucocitário avaliando-se 20 campos por
lâmina (400x). Touros inaptos apresentaram percentuais maiores de neutrófilos, linfócitos e macrófagos em
relação aos aptos. Observou-se variação no número de leucócitos de acordo com o aspecto do ejaculado, onde
touros com maior quantidade dessas células apresentaram um percentual significativamente maior de sêmen
aquoso. Com esses resultados é possível concluir que touros com baixa qualidade seminal apresentam um
maior número de células de defesa no ejaculado, podendo ser indicativo auxiliar de redução na fertilidade
potencial.

Palavras-chave: Leucócitos, Sêmen, Bovinos

Seminal Leucocytes Profiles Associated to Reproductive Conditions in Beef Bulls

Abstract: The aim of this study was to determine the seminal leukocytes profile associated with reproductive
condition in beef bulls. After breeding soundness, the bulls (n=124) were classified according seminal
evaluation in apt (73.3%) and inapt (26.7%). Samples were prepared by diff-quick stain cytology and twenty
microscopy fields/sample were evaluated (400x magnitude). Inapt bulls presented higher percentages of
neutrophilus, lynfocytes and macrophages in contrast to apt bulls. Variation in the leukocytes number was
observed in agreement with the visual semen aspect classification. Bulls with minor concentrated samples
(translucent characteristic) presented a significantly higher percentage of leucocytes. We conclude that bulls
with low seminal quality present a higher number of defense cells in the semen and this test can be useful in
the diagnostic potential fertility reduction.

Keywords: Leucocytes, Semen, Bovine

Introdução
Leucócitos, especialmente neutrófilos, macrófagos e linfócitos, são células de defesa normalmente
encontradas no sêmen, se não de todos, na maioria dos mamíferos. Porém, quando em altas concentrações
(leucocitospermia) ainda é um fator difícil de ser avaliado, já que os seus efeitos sobre a qualidade do
ejaculado são controversos (Sprecher et al., 1999). Alguns autores afirmam que a leucocitospermia leva a
efeitos negativos nos parâmetros seminais, enquanto outros não encontraram nenhuma influência dessas
células na qualidade seminal . Há, ainda, estudos que mostram um papel benéfico dos leucócitos seminais por
fazerem a fagocitose de espermatozóides anormais (Hedger, 1997).
Os leucócitos seminais podem ter várias etiologias diferentes, incluindo infecções, inflamações e
autoimunidade. Essas patologias podem estar presentes tanto nos testículos quanto nos órgãos anexos que
compõe o trato reprodutivo do macho (próstata, vesículas seminais, ducto deferente, etc), porém, muitas vezes
não relacionadas a alterações clínicas compatíveis com um quadro inflamatório ou infeccioso, (Menkveld
(2004). Nos bovinos, esses aspectos ainda não foram completamente elucidados, possivelmente haja efeito de
processos degenerativos, traumáticos ou infecciosos de caráter transitório ou permanente. Assim, torna-se
necessário que mais estudos sejam desenvolvidos nessa área, visando maior contribuição na determinação do
diagnóstico da subfertilidade ou infertilidade no touro. Nesse contexto, objetivou-se estimar o perfil
leucocitário de uma população de touros de corte por ocasião do exame andrológico, verificando sua
prevalência de acordo com a qualidade seminal.

Material e Métodos
Foram estudadas amostras de 124 touros de corte, de propriedades de Mato Grosso do Sul, com peso
variando entre 287 a 862 Kg e idade entre 2 e 10 anos. Após exame clínico geral e especial, os animais foram
submetidos à colheita de sêmen (eletro-ejaculação) e classificados quanto a condição reprodutiva em aptos
(n=91) quando apresentaram no mínimo 50% de motilidade, vigor 3 e 70% espermatozóides normais; e
inaptos (n=33), quando apresentaram valores inferiores aos reportados acima. Espermatozóides normais e
anormalidades de cabeça, fragmentação nuclear, acrossomo, peça intermediária, gota citoplasmática proximal,
cauda e cabeça isolada normal, foram quantificados pela reação de Feulgen em microscopia de contraste de
fase em 1000x (Barth & Oko, 1989). O perfil leucocitário foi estimado pela presença de neutrófilos,
macrófagos, linfócitos, eosinófilos e células de descamação em 20 campos avaliados em microscopia de
campo claro através da coloração citológica (ciclohexadieno 0,1%, azobenzenosulfônicos 0,1% e fenotiazina
0,1%) segundo Behmer et al., 2003. Os resultados observados foram submetidos à análise de variância,
modelo linear multivariado para efeito principal da condição reprodutiva (apto x inapto). A ocorrência de
leucócitos totais no sêmen de acordo com o aspecto seminal foi estimada pelo teste do Qui-quadradro.

Resultados e Discussão
A característica seminal observada em cada grupo está descrita na tabela 1. Touros inaptos
apresentaram maior proporção de leucócitos no sêmen (P<0,05) do que touros aptos (figura 1). Neutrófilos
foram as células mais presente nos ejaculados, apresentando uma taxa de 22,7 ±6,3% nos inaptos e 6,6 ±3,8%
nos aptos. Macrófagos e linfócitos apresentaram uma proporção de 11,6 ±2,8% e 6,4 ±1,1% nos touros
inaptos, respectivamente. Associado a esse resultado foi possível evidenciar uma relação significativa
(P<0,05) do número de leucócitos com o aspecto do ejaculado (figura 2). Touros com qualidade seminal
inferior apresentaram 51,7% dos ejaculados com aspecto aquoso, enquanto esse mesmo parâmetro só foi
observado em 22,6% dos animais com sêmen de boa qualidade. Neste último grupo, o aspecto leitoso foi o
predominante entre os ejaculados (45,4%).
Dois aspectos podem estar associados ao fato de touros inaptos apresentarem uma maior taxa de
células leucocitárias no sêmen. O primeiro pode ser explicado pela propriedade dessas células de produzirem
radicais livres e imunoativação durante sua permanência na mucosa do aparelho reprodutivo devido a
adversidade neste ambiente (Henkel et al., 2005; Menkveld, 2004). Em humanos essa relação está bem
estabelecida, sobretudo na presença de infecções (Sanocka et al., 2004). Resguardando as diferenças entre
espécies, possivelmente esses fenômenos também ocorram no touro, conforme os resultados observados.
Outro aspecto proposto, refere-se a observação de que os touros inaptos não apresentaram alterações clínicas
relativas a quadros de inflamação e/ou infecção genital. Assim, provavelmente o envolvimento dos processos
de quimiotaxia leucocitária e fagocitose no ambiente extra-gonadal estejam presentes diante da maior
prevalência de espermatozóides anormais e, por conseqüência, em indivíduos com menor qualidade seminal.

30
A * B
60
*
25 50
20 40
% 15 * % 30
*
10 * 20
5 10
0 0
Neutrófilo Linfócito Macrófago Aquoso Cremoso Leitoso Opalescente

Figura 1. Distribuição de leucócitos (A) e do aspecto seminal (B) de acordo com a condição
reprodutiva em touros de corte submetidos a exame andrológico. *P<0,05.
 Tabela 1. Características semanais de touros de corte de
Aacordo com a condição reprodutiva
Condição reprodutiva
Características seminais Aptos Inaptos
Turbilhonamento (0-4) 2,7 ± 0,1 a 1,0 ±0,2 b
Motilidade (%) 62,6 ±2,0 a 37,0 ±3,6 b
Vigor (1-5) 3,6 ±0,1 a
2,8 ±0,2b
Morfologia (%)*
Normais 80,4 ±1,2 a 45,7 ±2,2 b
Def. de cabeça 5,8 ±0,5 a
12,3 ±0,9 b
Fragmentação nuclear 3,0 ±1,1 a
10,7 ±2,0 b
Def. de PI 2,1 ±0,4 a
6,3 ±0,7 b
Def. de acrossomo 0,6 ±0,1 a
0,8 ±0,2 a
GCP 0,3 ±0,5 a
5,6 ±0,9 b
Def. de cauda 3,4 ±0,4 a
6,6 ±0,8 b
CIN 4,3 ±0,8 a
11,7 ±1,5 b
Perímetro Escrotal (cm) 35 ±0,6 a
31,2 ±1,0 b
ab
letras distintas entre colunas representam diferença significativa
<0,05); * estimada pela coloração de Fuelgen; Aptos, n=91; Inaptos, n=33

Conclusões
Conclui-se que presença de leucócitos no sêmen bovino está associada a baixa qualidade seminal
bem como a importantes características morfológicas e pode estar envolvida na redução do potencial
reprodutivo. O perfil leucocitário seminal pode ser um teste complementar para auxiliar no diagnóstico das
alterações reprodutivas no touro.

Agradecimentos
A FUNDECT, CNPq e PROPP/UFMS, pelo apoio financeiro e de bolsas de iniciação científica.

Literatura Citada
BARTH A.D.; OKO R.J. Abnormal morphology of bovine spermatozoa. Ames: Iowa State University
Press, 350 p. 1989.
BEHMER, O.A.; TOLOSA, E.M.C.; FRETIAS NETO, A.G; Manual de Técnicas para Histologia Normal
e Patológica. EDART, São Paulo. 241 p. 2003.
HEDGER, M.P. Testicular leukocytes: what are they doing? Reviews of Reproduction, v. 2, p. 38-47. 1997.
HENKEL, R.; KIERSPEL, E.; STALF, T.; MEHNERT, C.; MENKVELD, R.; TINNEBERG, H. R.;
SCHILL, W. B.; KRUGER, T. F. Effect of reactive oxygen species produced by spermatozoa and leukocytes
on sperm functions in non-leukocytospermic patients. Fertility and Sterility, v. 83, n. 3, p. 635-642. 2005.
MENKVELD, R. Leukocytospermia. International Congress Series, v. 1266, p. 218-224. 2004.
SANOCKA, D.; FRACZEK, M.; JEDRZEJCZAK, P.; SZUMAŁA-KAKOL, A.; KURPISZ, M. Male genital
tract infection: an influence of leukocytes and bacteria on semen. Journal of Reproductive Immunology, v.
62, p. 111–124. 2004.
SPRECHER, D.J.; COE, P.H.; WALKER, R.D. Relationships among seminal culture, seminal white blood
cells, and the percentage of primary sperm abnormalities in bulls evaluated prior to the breeding season.
Theriogenology, v. 51, p.1197-1206. 1999.