Manual Parasitologia I

UNIVERSIDAD SALAZAR
LIC. EN QUIMICA FARMACEUTICA

BIOLOGICA
PARASITOLOGIA
MANUAL DE PRCTICAS
DE LABORATORIO
MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA

4to. SEMESTRE DE LA LIC. EN QUIM. FARMACEUTICA BIOLOGICA
INDICE
CONTENIDO
PAGINA
PRACTICA No.1:
TOMA DE MUESTRA PARA EXAMEN PARASITOSCOPICO14
PRACTICA No. 2
PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA
EL DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO-HECES...21
PRACTICA No. 3:
COPROPARASITOSCPICO INMEDIATO CON
COLORANTES VITALES...28
PRACTICA No. 4:
MTODO DE CONCENTRACIN POR FLOTACION DE
FAUST...32
PRACTICA No. 5: METODO DE CONCENTRACION

POR SEDIMENTACIN DE RITCHIE.35
PRACTICA No. 6: MTODO DE DILUCION DE STOLL.39

PRACTICA No. 7: METODO CUANTITATIVO DE FROTIS
GRUESO KATO...43
PRACTICA No. 8: METODO DE GRAHAM
(RASPADO PERIANAL)46
PRACTICA No. 9: MTODO DE HARADA MORI.48
PRACTICA No. 10: METODO DE BAERMAN....52

PRACTICA No. 11: ESTUDIO DE AMIBAS DE
VIDA LIBRE ..54
PRACTICA No 12: ESTUDIO DE PROTOZOARIOS
CILIADOS INTESTINALES....57
.
PRACTICA No. 13: ESTUDIO DE PROTOZOARIOS
CILIADOS EN CAVIDADES..60
PRACTICA No. 14: ESTUDIO DE EXPECTORACION
PARA LA BUSQUEDA DE PARASITOS PULMONARES..63
PRACTICA No. 15 ESTUDIO DE PLASMODIUM....67

PRACTICA No. 16 COLORACION DE HEMATOXILINA

FERRICA DE HEIDENHAIN.69
PRACTICA No. 17: TCNICA DE ZIEHL NEELSEN
(MODIFICADA PARA OBSERVAR COCCIDIAS:
CRIPTOSPORIDIUM).71
DEL IESCH
MISION:
Formar al ser humano, fomentando el desarrollo de actitudes, valores,
habilidades y conocimientos en pertinencia y vinculados con el entorno
econmico, social, poltico y cultural que demanda nuestra regin y el pas.
VISION:
Ser una institucin integrada a los sectores productivos y sociales que conjunte
actividades docentes e investigacin con el servicio y mejora de nuestro estado y
pas acorde al proceso de globalizacin actual, fomentando excelencia y calidad.

DE LA CARRERA
MISION.
FORMAR PROFESIONALES EN QUMICO FARMACUTICO BILOGO CON
CAPACIDAD PARA LA PRODUCCIN DE BIENES Y SERVICIOS PARA LA
SALUD
Y
PARA
REALIZAR
ACTIVIDADES
DE
INTERVENCION,
INVESTIGACION Y DOCENCIA QUE RESPONDAN A LAS NECESIDADES
INDIVIDUALES Y COLECTIVAS QUE DEMANDA NUESTRA REGIN Y PAS,
CON UNA VISIN INTEGRAL DEL SER HUMANO Y CON ALTO SENTIDO DE
RESPONSABILIDAD Y HUMANISMO.
VISION.
SER UNA LICENCIATURA CON ALTO NIVEL ACADMICO Y
AMPLIO
RECONOCIMIENTO SOCIAL, LDER EN LA FORMACIN DE PROFESIONALES
QUMICO FARMACUTICO BILOGO; INTEGRADA A LOS SECTORES
PRODUCTIVOS Y SOCIALES QUE VINCULE ACTIVIDADES DE DOCENCIA,
INVESTIGACION Y SERVICIO, ACORDE AL PROCESO DE GLOBALIZACIN
ACTUAL, FOMENTANDO LA EXCELENCIA Y LA CALIDAD EN SU QUEHACER
DIARIO.
PERFIL DEL EGRESADO

El egresado de la carrera de la Qumica Farmacutica Biolgica deber poseer los
conocimientos, habilidades y aptitudes para servir a la sociedad
responsablemente, contribuyendo as al desarrollo de su entorno regional, con
nuevas habilidades en la prctica profesional como la seleccin, anlisis e
interpretacin de la informacin, la generacin de conocimientos, la disposicin al
aprendizaje continuo y la formacin necesaria para la toma de decisiones. Formar
egresados capaces tcnicamente para instrumentar acciones y proyectos que le
permitan ingresar en el nuevo mundo laboral, con destrezas para hacer frente a
los nuevos retos desarrollando la interdisciplinariedad con un espritu crtico
proactivo y con conciencia social. Adems de tener una slida preparacin

cientfica y un adiestramiento tcnico y profesional actualizado, pudiendo
acrecentar el conocimiento y enriquecer y proteger los valores universales.
INTRODUCCION
La Parasitologa Clnica es una importante rama de la Infectologa; sin embargo,
no se la considera en toda su magnitud en el mbito asistencial, a pesar de ser
cada vez mayor el nmero de personas parasitadas.
De acuerdo con la experiencia, muchos pacientes no son diagnosticados, luego de
un diagnstico correcto se los medica inadecuadamente, o no se piensa que los
parsitos pueden ser la causa de determinados sntomas o estados patolgicos.
6
Es importante resaltar los principales sntomas y el diagnstico diferencial de las

parasitosis.
Aprender y conocer que los parsitos pueden atacar todos los
sistemas, demuestra que su importancia trasciende las conocidas
enteroparasitosis.
El parasitismo es una modalidad de asociacin que ha evolucionado con bastante
xito; los organismos que han optado por esta forma de vida tienen, en general un
potencial bitico mayor. Incluso su argumenta que existen ms parsitos, como
especies y como individuos, en relacin a seres de vida libre, ya que son raros los
ltimos que no albergan una o ms especies de parsitos.
La prevalencia de las parasitosis est estrechamente vinculada a diferenciales
climticos, fenmenos demogrficos y al desarrollo socioeconmico de las
diferentes zonas del planeta. No es de extraar que los protozoos y helmintos
patgenos sean parte de la vida cotidiana en los trpicos, sin ser privativos de
ellos.
PARASITISMO
Para comprender esta asociacin es necesario comprender los factores
ecolgicos para relacionarlos con la poblacin de organismos parasitarios,
considerndolos como centro de un ecosistema, al que denominaremos
microsistema microambiente. Por otro lado, el husped (en medicina, el hombre)
es considerado como substrato endobitico en relacin con los parsitos.
Existen diversos tipos de parasitismos. Cuando el parsito no penetra en el
husped; pero si se alimenta de l, como lo hacen algunos hematfagos, se le
conoce como ectoparsito. Un ectoparsito puede serlo en forma intermitente,
cuando se acerca al husped para alimentarse y lo abandona, tan solo para volver
al mismo y otro husped en su siguiente ingesta; y en cuando lo haga durante
todo su ciclo biolgico o en una etapa del mismo, ser permanente (piojos) o
temporal (miasis, puliasis).
El endoparsito: es el que penetra en el husped. Por el lugar o localizacin en

el husped se caracteriza como parsito de intestino o cavidades, o bien parsito
tisular, siendo este ltimo intra - o extracelular, segn se encuentre dentro (virus,

Neisseria gonorrhoeae, Histoplasma Capsulatum, Plasmodium vivax, etc.) o fuera

de clula (Clostridium perfringens, Entamoeba histolytica). Es parsito obligado
cuando no tiene capacidad de vivir fuera de esta condicin, Leishmania donovani.
El parsito accidental: es aquel que siendo normalmente un organismo de vida
libre, se encuentra accidentalmente en un husped, pero puede sobrevivir en
estado parasitario.
El parsito facultativo: es el que puede tener uno a varios ciclos de vida libre,
siempre y cuando se encuentre en un ambiente favorable; como el Strongyloides
stercoralis.
Los parsitos proceden de organismos de vida libre, en muchos casos conservan
an la morfologa semejantes aquellos; aunque se hayan operado cambios
importantes acordes con su ecologa actual (anatmicos, qumicos y fisiolgicos);
comprendiendo as los cambios evolutivos conceptos como:
Parsito Monognico: Es aquel que presenta alteraciones en su

multiplicacin.
Parsito Heterogenico: Es aquel que presenta variantes en su
multiplicacin: como tener reproduccin sexual y asexual (Plasmodium,
Toxoplasma).
Parsito Dignico: Presenta varios estadios de multiplicacin larval
(Trematodos).
En cuando al nmero de huspedes el parsito puede ser monoxeno o

heteroxeno, segn parasiten uno o varios huspedes (dos ms),
respectivamente.
Parsito estenoxeno: Es aquel cuya selectividad de husped es tan

marcada que en muchos ejemplos, ste no tolera o acepta ms que una
especie, sin la cual el parsito desaparecera (especies humanas de
Plasmodium).
Parsito Eurgeno: Cuya selectividad es tan amplia, es el que puede
adaptarse y sobrevivir en una gama muy extensa de especies de
huspedes como Trichinella spiralis.

En algunos parsitos, la especificidad del husped les obliga a no aceptar

cualquier especie, ya que stos no tienen la capacidad para establecerse en un
husped extrao, sea que fallen los factores de ataque o sobren los de defensa
del husped. Otros en cambio no discriminan al husped, pues son capaces de
vencer cualquier barrera que las distintas especies de husped les antepongan.
Los parsitos tambin pueden tener especificidad de tejidos y no gustar ms que
de un rgano especifico; aunque aceptan cualquier cosa, y lo mismo es un rgano
que otro; por esta razn se localizan slo en una o en cualquier regin del
husped.
En cuando a los huspedes, estos pueden ser definitivos, intermediarios
especifico, inespecfico (accidental o tangencial) y espurio.
Un husped definitivo es aquel que alberga al parsito madura y le facilita la
reproduccin sexual. El hombre es husped definitivo de Taenia saginata, el
husped intermediario, por el contrario, es aquel que alberga las formas maduras
de un parsito y facilita la reproduccin asexual cuando sta la tiene (l hombre
para Plasmodium).
Husped Especfico: Es aquel que rene las condiciones ptimas para el

desarrollo y establecimiento de un parsito.
Husped Inespecfico: Es aquel que aunque no rene las condiciones
ptimas para un parsito, si le permite sobrevivir al menos temporalmente o
todo un ciclo biolgico.
Husped Espurio: Por no ser adecuado, resulta ser un husped falso, que
tan solo permite la entrada del mismo, pero el invasor est destinado a
morir dentro del husped.
Cuando la relacin husped parsito presenta variantes, debe considerarse a la

Poblacin de parsitos como un deme. Un deme es una poblacin natural dentro
de las especies de un parsito; existen distintos tipos de deme como:
Nosodeme: Hay variantes clnicas en las manifestaciones patolgicas

provocadas por una misma especie; estas variante patolgicas pueden
presentarse segn la distribucin geogrfica; por ejemplo el Kala Azar,
presenta variantes clnicas entre los tipos hindes, mediterrneos, sudans,
chinos y americanos; as pues , se puede decir que Leishmania donaban
(protozoo causante de la enfermedad ) tienen cinco nosodemes.
Los Serodemes; Son variantes inmunolgicas (sexolgicas) que pueden

tener una especie de parsito. Actualmente son muy importantes para la
clasificacin de las especies de Leishmania.
Cuando el parsito se comporta en forma indistinta dentro de las diversas
especies de husped que puede parasitar, a esta poblacin la describiremos como
xenodeme.
Cuando existen diferencias anatmicas, fisiolgicas o sexolgicas de una especie

segn su distribucin geogrfica, utilizamos el trmino topodeme.
Portador es aquel que tiene una infeccin sin manifestaciones clnicas, ya sea
porque sta sea ligera o como resultante de la inmunidad por exposiciones
previas, pero l es incapaz de eliminar al parsito. El portador por lo tanto sirve de
fuente de infeccin.
Es aqu donde radica la gran importancia del Qumico Farmacutico Biolgico, ya
que es el profesional encargado de buscar e identificar los distintos parsitos que
podemos encontrar en las muestras de los pacientes, ya que la gran mayora de
los parsitos solamente pueden ser identificados por la observacin al
microscopio, es entonces que esta disciplina esta muy ligada al profesional que la
desempea; pues no existen equipos automatizados que hagan la identificacin
de estos.
Durante la formacin de los estudiantes de la carrera de Qumica farmacutica
biolgica, esta materia es pieza fundamental para su desarrollo profesional, y para
ayudar al resto del personal de salud a la bsqueda del mejor tratamiento para los
pacientes, lo que redundara en la disminucin de enfermedades parasitarias en
nuestro entorno social.

10
REGLAMENTO DEL LABORATORIO MULTIDISCIPLINARIO

GENERALES:
El presente reglamento tiene como objetivo establecer las normas y conductas
que deben presentar catedrticos, alumnos y laboratorista en el transcurso de las
prcticas, para establecer los parmetros de calificaciones asignadas a los
alumnos.
CAPITULO I
DEL LABORATORISTA
Artculo 1
El laboratorista permanecer en el laboratorio en el horario que le

corresponde.
Tendr listo el material (cristalera, instrumental, reactivos y equipos) para
las prcticas dentro del laboratorio, de acuerdo a lo solicitado por el
profesor, con tres das de anticipacin por lo menos.
Entregar con debida cortesa, el material a los alumnos y a los profesores
durante el tiempo estipulado para cada sesin de laboratorio.
El material ser entregado durante los primeros 15 minutos.
Recibir y revisar que el material y el equipo estn en buen estado y en
perfectas condiciones de limpieza.
Auxiliar a los profesores en la preparacin de soluciones u otros reactivos
que se requieran para el desarrollo de la prctica.
Orientar a los estudiantes en el manejo y cuidado del equipo.
Tendr al da los inventarios fsicos, de cristalera, instrumental, reactivos y
equipo de laboratorio a su cargo y los entregar a fin de semestre a la
Coordinacin de la materia
11
Mantendr el equipo en su sitio procurando su correcta utilizacin y bajo

controles de seguridad.
Ser el responsable absoluto de que el equipo de laboratorio este en
perfecto estado de uso (limpio, funcionando, etc.)
Controlar el regreso de material, equipo, etc., en el tiempo estipulado.
En casos estrictamente necesarios, se quedar unos minutos ms para
facilitar la prctica.
Al final del semestre le entregar a los alumnos un comprobante de No
Adeudo de material de Laboratorio.
Est prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio.
CAPITULO II
DE LOS ALUMNOS
Artculo 2
El alumno deber llegar puntual a la hora correspondiente de la prctica.
Se le dar una tolerancia mxima de 10 minutos, transcurrido ese tiempo,
no podr ingresar al laboratorio.
Es indispensable el uso de la bata dentro del laboratorio, no se permite el
uso de filipina.
Est prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio, cualquier
incurrimiento en lo antes mencionado anular el derecho a realizar la
prctica.
Entrando al laboratorio, el alumno deber entregar los requisitos de la
prctica a realizar de lo contrario se anular dicha prctica.
Se deber entregar un Reporte de Prctica 8 das despus de haberla
realizado. El contenido del mismo ser indicado por el catedrtico.
El alumno deber cumplir con al menos el 80% de asistencias en el
laboratorio durante todo el ciclo escolar, para evitar la baja del curso
prctico.
El Material biolgico necesario para la realizacin de las prcticas ser
proporcionado por los alumnos, el incumplimiento de esta disposicin
anular el derecho a realizar la prctica.
El alumno deber solicitar el material de laboratorio con un mximo de 3
das de anticipacin, mediante un vale a los laboratorista, de lo contrario
perder el derecho de realizar la prctica.

12
Cualquier material que resulte daado durante la realizacin de la prctica

deber ser repuesto por el alumno a ms tardar en 8 das, de lo contrario
perder el derecho de realizar la siguiente prctica y su calificacin de ese
mes ser anulada.
La calificacin de laboratorio constituir el 20% de la calificacin global de
la materia.
El alumno presentar un examen terico de la prctica, durante el
transcurso de la realizacin de la misma.
La calificacin de cada prctica estar integrada por el reporte, la
evaluacin terica de la prctica y el desempeo durante la misma.
La calificacin mnima aprobatoria es de 6.0
Es requisito indispensable aprobar la teora para validar la calificacin del
Laboratorio.
Los alumnos que reprueben ms del 20% del total de las prcticas, se
vern obligados a presentar un Examen terico-prctico Final del
Laboratorio, como requisito indispensable para poder tomar en cuenta el
porcentaje correspondiente al Laboratorio para la calificacin final de la
materia.
CAPITULO III
DE LOS PROFESORES
Artculo 3
El profesor deber llegar 10 minutos antes del inicio de la prctica para
verificar el orden y funcionamiento del material de laboratorio que se
emplear en el desarrollo de la misma.
La calificacin de laboratorio constituir el 20% de la calificacin global de
la materia.
El alumno presentar un examen terico de la prctica, durante el
transcurso de la realizacin de la misma.
La calificacin de cada prctica estar integrada por el reporte, la
evaluacin terica de la prctica y el desempeo durante la misma.
La calificacin mnima aprobatoria es de 6.0
Los alumnos que reprueben ms del 20% del total de las prcticas, se
vern obligados a presentar un Examen terico-prctico Final del
Laboratorio, como requisito indispensable para poder tomar en cuenta el
13
porcentaje correspondiente al Laboratorio para la calificacin final de la

materia.
Esta prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio.
Las calificaciones mensuales debern entregarse al profesor titular a ms
tardar 5 das antes de la aplicacin del examen mensual.
Se debern entregar al profesor 10 reactivos referentes a lo revisado
durante el mes para su inclusin en el examen mensual terico, a ms
tardar 5 das antes de la aplicacin de este,
Se deber proporcionar junto con las calificaciones, la relacin de alumnos
que adeudan material, as como las inasistencias para su contabilizacin.
REGLAS DE SEGURIDAD
1. Uso obligatorio de bata blanca manga larga cerrada totalmente dentro del
laboratorio de Parasitologa.
2. Uso de guantes y cubrebocas, as como de lentes protectores para evitar
contaminacin alguna de las mucosas.
3. La mesa de trabajo de cada equipo, deber estar limpia y en orden. Al inicio
y al final de cada sesin de prctica deber limpiar est con agua y jabn,
posteriormente con cloro diluido.
4. Deber tambin llevar una toalla o franela, jabn en polvo y un escobilln
para lavar el material al final de cada prctica.
14
5. Se deben evitar desplazamientos innecesarios de las muestras por otras

reas del laboratorio para evitar contaminaciones.
6. Queda estrictamente prohibido comer, fumar, correr, aplicarse cosmticos,
fumar, dentro del laboratorio para evitar contaminaciones.
7. En cada sesin de prctica las mochilas debern quedar bajo la mesa de
trabajo o en un lugar especial, no sobre las mesas para evitar
aglomeraciones.
8. Deber llevar a cada sesin prctica una bitcora de trabajo donde deber
hacer todas las anotaciones pertinentes de lo observado que le servir para
hacer su reporte prctico.
9. Utilice los recipientes adecuados para depositar los residuos peligrosos
biolgico infecciosos (RPBI), que se generen durante la realizacin de la
prctica. No tirar nada dentro de los lavabos, lo que no sea RPBI se
desecha en la basura de uso comn (municipal).
10. Al finalizar la prctica deber hacer entrega del material limpio y seco.
PRACTICA No.1: TOMA DE MUESTRA PARA EXAMEN PARASITOSCOPICO

OBJETIVOS:
Aprender cuales son las diferentes muestras que podemos encontrar y
utilizar para la bsqueda de parsitos.
Identificar los distintos tipos de recoleccin de muestras dependiendo de
estado de estas y que parasito buscamos.
Conocer los tiempos y la manera en que se deben enviar y transportar las
muestras al laboratorio.

15
INTRODUCCION:
Regularmente en el rea de Parasitologa, las muestras ms analizadas para
demostrar la presencia de parsitos intestinales del hombre son las heces
fecales, sin embargo, existen otros parsitos cuya presencia se puede evidenciar
en muestras biolgicas como: bilis, jugo duodenal, esputo, secrecin, biopsia o
frotis perianal, no obstante estas pruebas se harn tomando en cuenta los
antecedentes clnicos especficos del paciente.
A continuacin, se detallaran y dar referencia a los diversos aspectos con los
cuales debern proceder las muestras a analizar con fines parasitolgicos para
obtener resultados reproducibles y de esta manera ayudar eficazmente al mdico
en el diagnostico, pronostico, y tratamiento del paciente.
HECES FECALES SLIDAS
Condiciones del paciente :
Durante al menos tres das previos a la prueba el paciente deber evitar
tomar medicamentos (antiparasitarios, antibiticos, antidiarreicos, laxantes o
purgantes en caso de ser necesario debern emplearse un purgante salino,
como sulfato de sodio o fosfato y carbonato de sodio. Por ningn motivo
debern emplearse aceites minerales o compuestos de bismuto o magnesio, ya
que las gotas o cristales procedentes de ellos pueden confundirse con algunos
parsitos o enmascarar su presencia.
Recipiente de recoleccin :
Frasco estril de boca ancha, con tapa de rosca.
Cantidad de muestra requerida: 3-6 grs.

Toma de muestra :
La muestra deber ser recolectada de la siguiente manera:
Con una abatelenguas tome directamente de la cavidad anal un
volumen de heces aprox. entre 3 -6 grs. (equivalente al tamao de
una nuez )
16
NOTA: Evite la contaminacin de la muestra con orina, papel higinico. Jabn,

agua o tierra.
Transfiera las heces obtenidas al contenedor estril.
Cierre el envase hermticamente de forma inmediata para evitar
contaminaciones bacterianas
. A continuacin identifique. el frasco con una etiqueta autoadhesiva
llenndola claramente con su nombre, apellidos, edad, fecha y hora
de recoleccin.
NOTA: Pegue la etiqueta al frasco NUNCA en la tapadera.
Finalmente lleve la muestra al laboratorio lo ms pronto

posible.
NOTA: Cuando la muestra va a demorar en llegar al laboratorio varias horas o
das, se recomienda adicionarle liquido fijador y/o conservador (formalina al
10%, por ejemplo )
NOTA: Para aumentar la eficacia de la prueba se recomienda que para
estudios parasitoscoscopicos se recolecten un total de tres muestras en 3 das
consecutivos ya que la expulsin de parsitos puede ser intermitente.
Criterios de rechazo :
Que el paciente no haya tomado la muestra respectivamente de forma
adecuada.
Que la muestra haya sido llevada al laboratorio con ms de 1 hr de
haber sido tomada o no haya sido adecuadamente conservada.
Que el paciente este recibiendo tratamiento antiparasitario.
HECES FECALES DIARREICAS

17
Cantidad de muestra requerida: 10 ml (un volumen similar al de un cuchara

sopera)
NOTA: Estas muestras deben procesarse de inmediato (30 minutos como mximo
despus de la deposicin) en caso contrario se debe adicionarse algn
conservador e indicarlo en la etiqueta de identificacin pues de no reexaminarse
dentro de un margen de tiempo prudencial pues al acidificarse muchos grmenes
patgenos se lisan.
RASPADO PERIANAL
La toma de muestras deber realizarse preferentemente por la noche o a
primera hora de la maana antes de que el paciente orine, defeque o se bae
(lo ideal es hacer la toma antes de levantarse de la cama).
NOTA: Es imprescindible el uso de guantes desechables durante la toma de
la muestra y el lavado cuidadoso de las manos tras su realizacin.
Portaobjetos con cinta adhesiva.
Toma de muestra :
1.
Se toma un abatelenguas cubierto de cinta

adhesiva transparente, de manera que la superficie engomada quede
expuesta hacia fuera.
2. A continuacin, se coloca al paciente en posicin BOCA ABAJO donde
la regin perianal quedara ampliamente expuesta para realizar varias
aplicaciones con el abatelenguas alrededor de esta zona; con la
finalidad, de que los huevos que se encuentren presentes queden
adheridos a la superficie engomada.
3. Finalmente se pega la muestra la cinta adhesiva sobre una de las caras
del porta objetos (con lo que se recolecto hacia abajo) y se observa al
microscopio.

18
JUGO DUODENAL Y YEYUNAL

Algunos parsitos colonizan el intestino delgado durante alguno de sus estadios,
Permaneciendo habitualmente en el rea yeyunal y siendo infrecuentemente
detectados en las heces durante estas fases. Este es el caso de los trofozoitos de
Giardia lamblia y las larvas de Strongyloides sp.
NOTA: Los conductos biliares desembocan en duodeno, por lo que tambin
pueden hallarse huevos de parsitos procedentes del hgado o del rbol biliar en
el jugo duodenal y yeyunal.
Toma de muestra :
Las muestras de jugo duodenal y yeyunal suelen obtenerse mediante sonda
gstrica o bien durante un procedimiento endoscpico, por el mdico tratante, las
cuales tras una adecuada identificacin, debern ser enviadas rpidamente al
laboratorio y procesadas inmediatamente.
Cantidad de muestra requerida : 1-2 ml
ESPUTO
El paciente deber recolectar la muestra de esputo en ayunas a primera hora de

la maana; para lo cual, deber enjuagarse previamente la boca solamente con
agua para eliminar bacterias que se encuentren en boca y lengua que pudieran
ser parte de la flora normal.
NOTA: Se recomienda que el paciente no est ingiriendo
medicamentos.

19

Toma de muestra :
Para recolectar la muestra el paciente deber toser profundamente (lo mas
que pueda) y depositar el esputo obtenido en un recipiente estril.
NOTA: Si el paciente no puede expectorar,

existen diversas tcnicas
encaminadas a favorecer la obtencin del esputo;
La induccin de la tos por inhalacin con vaporizador.
Lavado bronquial, aspiracin mediante aguja transtorcica, o biopsia de
pulmn.
Cantidad de muestra requerida : 1- 2 ml
Criterios de rechazo :
Que la muestra sea saliva.
Que la muestra tenga menos de 25 leucocitos, y ms de 10 clulas
epiteliales por campo (aumento X 100) .(ya que indicara que la muestra no
fue adecuadamente tomada
ENVIO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

Las muestras deben mantenerse en un ambiente fresco y lejos de la luz solar, se
deben evitar las temperaturas extremas o el desecamiento, deben contener
cantidades ptimas y estar en frascos o contenedores rotulados y en algunos
casos necesarios en soluciones conservadoras.
Condiciones de envo de la muestra segn el tipo y tiempo de demora en llegar al
laboratorio para el diagnostico parasitolgico presuntivo de:

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TIEMPO QUE DEMORA

EN
LLEGAR
AL
LABORATORIO
TIPO
DE
MUESTRA
<24 HRS
> 24 HRS
AGENTES PARASITARIOS
HECES
FORMADAS
T
ambiente
E. histoltyca, Giardia ,
Quistes de Balantidium coli.
Formalina 10 %
Criptosporidium,
Isospora
belli.
,
PAF; PVA
(no
muy
comunes
en
personas
Medio de transp
inmunocompetentes)Trichuris, Ascaris, Necator,
: Cary Blair
Ancylostoma etc.
HECES
DIARREICA
S
T
ambiente
Formalina 10 % Trofozoito de Balantidium coli etc.
ESPUTO ,
SECRECI
N BILIAR .
T
ambiente
Formalina
%
10 Pneumocistis ,
Paragonimus, Fasciola heptica, Giardia.
CONTENID
O
DUODENAL
T
ambiente
Formalina
%
10 Giardia, Strongyloides, Paragonimus, Fasciola,

Ancylostoma, Necator etc.

21
FROTIS
PERIANAL
T
ambiente
T ambiente
SECRECIO
N VAGINAL
T
ambiente
Frotis
lamina
Huevos de :
Enterobius vermicularis
Ascaris lumbricoides,
Taenia sp.
Hymenolepis nana.
en
Trichomona vaginalis.
LCR.
Naegleria, Acanthamoeba y Balamuthia
SANGRE
Tripanosoma, Plasmodium, Leishmania
BIOPSIA DE
4C
TEJIDOS
Formol 10 %
Trichinella spiralis (triquinoscopia)
CUESTIONARIO:
1. Por qu es importante un buen manejo de las muestras para la
identificacin de parsitos?
2. Aparte de las heces fecales, diga en que otras muestras se pueden
identificar parsitos de importancia mdica?
3. Realice un esquema de la formacin de las heces en el aparato digestivo y
diga que ocurre en cada parte de este.
4. Diga porque despus de cierto tiempo de recolectada la muestra, esto
puede ser causa de rechazo.
5. Aparte del tiempo, que otras caractersticas se consideran causas de
rechazo.
6. Qu otros datos considera importante que debemos preguntar al paciente
al momento de tomar una muestra para obtener un buen diagnostico?
BIBLIOGRAFIA:
Tay J., Velasco O., Lara R., Gutirrez M., 2002. Parasitologa Mdica. 7.
Edicin. Mndez editores. Mxico D.F.
22
Romero Cabello R. 2007. Microbiologa y parasitologa humana. 3. Edicin.

Editorial panamericana. Mxico D.F.
Beaver P. C., Jung R. C., Cupp E. W., 2003. Parasitologa clnica de Craig y
Faust. 3. Edicin. Masson Doyma. Mxico D.F.
PRACTICA No. 2 PROCEDIMIENTOS DE

DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO-HECES
LABORATORIO
PARA
EL
OBJETIVO:
Conocer las partes que componen un examen coproparasitoscopico.
Identificar las diferencias existentes entre muestras fecales y como ayudan
estas a la identificacin de parsitos.
Conocer que medicamentos afectan a la coloracin de las heces fecales.
INTRODUCCION
Las enfermedades parasitarias contribuyen de forma importante a los problemas
Mdicos, econmicos y sociales existentes en el mundo.
El diagnostico de las enfermedades parasitarias se establecen de ordinario por la
23
demostracin morfolgica de los parsitos o la respuesta inmune a ellos. El

diagnostico correcto requiere que:
a) El mdico considere que un parsito puede ser la causa de la enfermedad.
b) Se obtengan las muestras adecuadas y se transporten de modo correcto al
Laboratorio.
c) El laboratorio examine de modo competente los especmenes.
d) Los resultados del laboratorio sean debidamente comunicados al mdico.
e) Estos resultados sean interpretados de forma correcta y aplicados al cuidado
del paciente.
Es importante tener un conocimiento bsico del ciclo natural de la enfermedad
para fijar el enfoque diagnstico. Los parsitos pueden causar enfermedad clnica
cuando sus formas diagnosticas todava no estn presentes en el sitio usual.
I.
EXAMEN DIRECTO MACROSCOPICO
FUNDAMENTO: Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas

de los parsitos adultos, enteros o fraccionados, as como los cambios en las
caractersticas organolpticas de las heces eliminadas (color, presencia de sangre
y/o moco, consistencia etc.).
MATERIAL
Suero fisiolgico
Aplicador
Pinza de metal
Coladera deMANUAL
plstico
o mallaDE PARASITOLOGIA
DE PRCTICAS
metlica.
24
PROCEDIMIENTO:
1. Observar cuidadosamente las caractersticas organolpticas de la muestra
a analizar con la finalidad de determinar su :
CONSISTENCIA:
COLOR:
Deber ser pastosa y dura

Marrn oscuro (Ver Anexo)
OLOR:
Caracterstico ,puede mostrarse ftido (anomala)
MOCO:
SANGRE
La presencia de moco nos indica gastritis, ulcera o

amibiasis.
La sangre nos indica hemorragia intestinal por
ulceras perforadas intoxicacin con medicamentos
o cidos, hemorroides y en ocasiones amibiasis
2. Despus de ello, es necesario agregar suero fisiolgico a la muestra (en

cantidad suficiente) para homogeneizarla.
3. Finalmente las heces debern ser cuidadosamente pasadas a travs de un
tamiz con la finalidad de aislar gusanos cilndricos, anillados o aplanados
que pudieran encontrarse en las heces,
RESULTADOS.
Se informar detalladamente aquellas caractersticas macroscpicas observadas
durante el anlisis coproparasitoscopico as como se deber hacer referencia en
su caso el aislamiento de algn gusano durante el tamizado especificando su
especie.
SIGNIFICADO CLINICO DEL COLOR DE LAS HECES
El color de las heces proporciona una significativa informacin al qumico clnico ,
ya que con solo realizar un detallado anlisis macroscpico de estas , le puede
25
orientar en gran parte para detectar alguna patologa, disfuncin orgnica,

hemorragia, o bien hacer de su conocimiento el tipo de alimentacin o ingestin
de algn medicamento que este presentando el paciente en ese momento .
El color anormal ayuda al mdico a seleccionar las pruebas tanto qumicas como
microbiolgicas necesarias para llegar finalmente a extender
un
buen
diagnostico, pronostico y plan de tratamiento adecuados para el paciente.
A continuacin se har referencia a los colores ms comunes que pueden
presentar las heces fecales ya sea por alguna patologa o bien por algn otro
factor externo:
COLOR
AMARILLO VERDOSO
AMARILLENTAS
YEMA DE HUEVO
BLANQUECINAS O GRISACEAS
(ACOLIA)
VERDOSAS
NEGRO
SIGNIFICADO
Diarrea abundante.
Se presentan en las diarreas de fermentacin
y en las esteatorreas.
Heces procedentes de un trnsito acelerado a
partir de las partes ms altas del
Intestino delgado.
Heces caractersticas de las ictericias
obstructivas y de la fase aguda de las
Hepticas,.
NOTA: La ingestin de papilla de bario puede
producir el mismo efecto.
Diarrea abundante.
Tambin se presentan en las diarreas
duodenales.
Por otra parte se pueden presentar por una
ingestin excesiva de vegetales cloroflicos los
cuales darn un tono verdoso a las heces,
En los lactantes son frecuentes las diarreas
verdes, pero es normal que en los nios
criados al pecho las deposiciones se tornen
verdes al contacto del aire.
Heces que proceden generalmente de una
hemorragia del aparto gastrointestinal alto
(>100 ml de sangre).
Sin embargo tambin se pueden presentar
cuando se ingiri una elevada proporcin de
carnes en la dieta, cerezas, o alimentos con
colorante artificial.

26
ARCILLA
MARRON INTENSO
ROJIZA
(MELENA)
Heces caractersticas
de un bloqueo del
conducto biliar comn.
Probable
hemorragia
del
aparato
gastrointestinal bajo (por ejemplo: tumores,
hemorroides, fisuras, procesos inflamatorios).
Rojizas, irregularmente, son las deposiciones
que contienen sangre no transformada, de
*MUESTRA FRESCA
origen DE
bajo (hemorroides, tumores de colon
distal,
etc.).
HECES
Unas
heces
rojizas
tambin
pueden
presentarse por la ingestin abundante de
betabel o tomate.
DIARREICASQUE PROVOCAN CAMBIOS EN LALIQUIDAS

MEDICAMENTOS
COLORACIN DE LAS
HECES:
Negro: Sales de hierro, Sales de bismuto, carbn.
SIN Verde:: cloruro
CON de mercurio, indometicina,
:
SIN calomel.
CON
Verde a azul:
ditiazanina.
MOCO
MOCO
MOCO
MOCO
Marrn: antraquinonas.
EXAMEN EN
Rojo: fenolftalena, pamoato de pirivino, tetraciclinas en jarabe,
CENTRIFUGAR
FRESCO
bromosulfalena.
MEZCLAR
Amarillo: santonina, antibiticos.
Y
Claro a blancuzco: bario, anticidos.
CENTRIFUGAR
: rojizo: fenazopiridina.
Naranja
POSITIVO
NEGATIVO
Rosa a rojo a negro: anticoagulantes dosis excesivas, salicilatos.
SEDIMENT
**TROFOZOITOS:
E.histolytica
Como
se pude observar la historia clnicaOdel paciente, los antecedentes dietticos
Giardia lamblia
y Balantidium
el tratamiento bajo el cual se encuentre el paciente, son aspectos sumamente
SEDIMENT
importantes
que debe saber el Qumico clnico para
poder
distinguir
coli
QUISTES
anormalidades importantes en las heces fecales de simples interferencias.
O
Balantidium
FROTIS DEL SEDIMENTO
coli
Giardia lamblia
OOQUISTES:
POSITIVO
NEGATIVO
Criptosporidiu
m
I. belli
B, hominis
Cyclosporidium
HEMATOXILINA
ZIEHL-NEELSEN
BAERMAN
LARVAS:
S, stercolaris
27
FERRICA O
Larvas
HUEVOS:
Coccidios
TRICROMICA
DE LA LIC. EN QUIM.
FARMACEUTICA BIOLOGICA
H, nana 4to. SEMESTRE
Strongyloides
til para Ooquistes de
**
Trofozoito de Entamoeba
Quistes de G,lamblia
I, belli
II.
EXAMEN MICROSCPICO:

28
COPROPARASITOSCOPICO DIRECTO
FUNDAMENTO:
El examen de las heces es til en la deteccin temprana de hemorragias ocultas,
carcinomas, para detectar esteatorreas o problemas de mala absorcin,
infecciones bacterianas o parasitarias, infestacin parasitaria, colitis ulcera,
ictericia obstructiva y otros padecimientos.
El adulto sino defeca por trmino medio con una frecuencia variable de dos a tres
veces a la semana, siendo la media comn de una vez al da. Las heces tienden a
ser blandas y voluminosas cuando se sigue una dieta alta en vegetales, escasa y
seca con comidas en que se ingiere mucha carne. Dos tercios del peso de las
heces corresponden a su contenido en agua y un tercio se puede atribuir a
bacterias, material indigerible, tal como la celulosa, y a clulas de descamacin.
PREPARACIN.
Este mtodo permite buscar principalmente en muestras frescas, la presencia de
formas evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico
(trofozoitos,
quistes de protozoos: Entamoeba histolytica, Giardia lamblia (duodenales),
Balantidium coli, etc., as como larvas o huevos de helmintos: Strongyloides
stercolaris, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Paragonimus, Fasciola
heptica, etc.)
MATERIAL y EQUIPO
Aplicadores de madera
Portaobjetos de 25 X 76 mm
Cubreobjetos de 22 X 22 mm
Solucin salina isotnica
Lugol
Microscopio
METODO:
a) En un portaobjetos limpio y desengrasado, se colocan separadamente, una
gota de solucin salina y otra de lugol.
29
b) Con el aplicador de madera se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces 8 en

muestras con sangre y moco elegir esa parte para estudiar) y se mezcla con la
solucin, con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos
gruesos, procurando hacer una suspensin no un frotis.
c) Colocar el cubreobjetos.
d) Repetir estas operaciones en la gota de lugol.
e) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X. No es recomendable usar
objetivo de inmersin (100 x), pues se puede ensuciar el microscopio. Recorrer
la lamina siguiendo un sentido direccional, ejemplo: de derecha a izquierda, o
de arriba abajo.
NOTA: Con el suero fisiolgico, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se
observan en forma natural, y con lugol, las estructuras internas, ncleos y
vacuolas.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Se informar detalladamente la presencia de alguna forma parasitaria observada
durante el anlisis coproparasitoscopico, indicando su especie y estado evolutivo
(trofozoito, quiste en caso de un protozoo) (huevo, larva en caso de un helminto)
CUESTIONARIO:
1.
2.
3.
4.
Qu alimentos pueden interferir en un anlisis coproparasitoscopico?

Por qu es importante la presencia de moco en las muestras?
Qu nos indica la presencia de sangre en las heces?
Qu nos indica la presencia de heces diarreicas? a que nivel de aparato
digestivo ocurre esa adicin o mala absorcin de agua?
BIBLIOGRAFIA:
30
PRACTICA No. 3: COPROPARASITOSCPICO INMEDIATO CON

COLORANTES VITALES.
OBJETIVO:
Aprender a diferenciar los parsitos de acuerdo a sus caractersticas
morfolgicas y tintoriales.
Identificar las pruebas tintoriales especificas para cada parasito de acuerdo
a las partes que se colorean.
Identificar porque algunas pruebas tintoriales se pueden modificar para la
bsqueda de algunos parsitos.
FUNDAMENTO: Este mtodo nos permite diferenciar correctamente los diferentes

protozoos basndose en las caractersticas morfolgicas de cada uno de ellos
observando sus ncleos, endosomas, etc.mediante la utilizacin de los colorantes
vitales (azul de metileno, rojo Congo, eosina, verde de malaquita, verde de Janus,
Safranina).
Los cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen
afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a
las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo
verdoso. El permanganato de potasio, empleado como contraste, evita la
fluorescencia inespecfica. Todos los microorganismos cido-alcohol resistentes,
incluyendo los esporozoarios parsitos, se tien con estos colorantes.
Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramina es que luego los frotis
pueden ser reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente
31
sobre la tincin con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersin. De

esta forma, los resultados positivos pueden ser confirmados con las coloraciones
tradicionales, que adems permiten la diferenciacin morfolgica.
El fluorocromo naranja de acridina se une al cido ncleico ya sea en su forma
nativa o desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el
color de la fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la concentracin.
El naranja de acridina ha sido empleado como colorante vital, que da una
fluorescencia verde si el microorganismo est vivo y rojo si est muerto. De todos
modos, como el colorante se intercala en el cido nucleco, el germen viable se
inactivar poco tiempo despus de la tincin. El uso de naranja de acridina para
detectar la presencia de bacterias en los hemocultivos ha sido ampliamente
aceptado. De hecho, un gran cantidad de estudios han demostrado que la tincin
de hemocultivos con naranja de acridina es tan sensible como el subcultivo ciego
para la deteccin inicial de hemocultivos positivos.
Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos
(cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren
la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin
con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistente. Las
micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parsitos coccdeos
como Criptosporidium se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol
resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para
que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.
Se ha desarrollado una coloracin de cido-alcohol resistencia modificada que
diferencia las especies de Nocardia (bacterias ramificadas filamentosas cuyas
paredes celulares contienen cidos-grasos de unos 50 tomos de carbono), de los
actinomicetos (muy semejantes pero no cido-alcohol resistentes). Nocardia spp
son decoloradas por la mezcla cido-alcohol estndar pero no por un tratamiento
ms suave con cido sulfrico 0,5 a 1%. Estos microorganismos se denominan
cido-alcohol resistentes parciales o dbiles.
El frotis se tie durante unos 5 min con Carbol fucsina aplicando calor suave.
Lavar con agua. Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de HCl concentrado.
Lavar y teir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y
secar.
Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calco flor
aumentando considerablemente su visibilidad en los tejidos y otras muestras.
32
Segn fue descrito por Hageage y Harrington, este colorante se emplea en lugar
de KOH al 10% para el examen inicial de los materiales clnicos. Tambin se
emplea para aumentar la visualizacin de los elementos morfolgicos de los
cultivos puros de los hongos. En algunos laboratorios ha suplantado al azul de
lactofenol en muchas aplicaciones. Los organismos fluorescen con luz blancoazulada o verde manzana, segn la fuente luminosa que se utilice
MATERIAL y EQUIPO
Portaobjetos de 25 X 76 mm.
Puente de tincin
Lmpara de alcohol
Azul de metileno al 3.5%
Agua destilada
Microscopio
METODO:
33
a) En un portaobjetos se coloca una gota de azul de metileno al 3.5%

b) Se toma una porcin pequea de heces fecales con un aplicador y se
realiza una suspensin homognea con el colorante.
c) Se deja actuar el colorante por 3 minutos o bien se flamea pero sin que
hierva la muestra, slo hasta la emisin de vapores. Observar al
microscopio con objetivos de 10X y 40X.
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio
evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso
de helmintos)
CUESTIONARIO:
1. Por qu es importante la coloracin de parsitos?
2. Diga cul es el colorante ms usado para estudios de parsitos.
3. Si nosotros no teimos las muestras fecales, y si solo usamos solucin
salina para resuspender Qu interferencias de importancia podramos
tener? afectara esto a nuestro apoyo diagnostico?
4. Por qu cree que algunas tcnicas tintoriales son tambin usadas para el
diagnostico de bacterias y hongos?
5. Por qu se les llama colorantes vitales?
BIBLIOGRAFIA:

34

PRACTICA No. 4: MTODO DE CONCENTRACIN POR FLOTACION DE

FAUST
OBJETIVOS:
Aprender la tcnica de flotacin de Faust, en qu consiste y como se lleva a

cabo.
Identificar las distintas formas parasitarias que podemos observar.

35
Ver la importancia de esta tcnica para la mejor obtencin de quistes y

huevecillos.
FUNDAMENTO: Se basa en que los quistes y/o huevos de los parsitos flotan en
la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya
densidad es 1180. Es til para la bsqueda de quistes y/o huevos de parsitos y
excepcionalmente se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad del
sulfato de zinc y usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra.
Las tcnicas de Flotacin, Sedimentacin y Conteo son algunos de los mtodos
utilizados para la determinacin de parsitos intestinales como parte del
diagnstico de protozoarios, trematodos, cestodos, nematodos y artrpodos en
animales domsticos y silvestres.
El diagnstico en esta rea es una herramienta importante en Patologa Clnica,
debido a la necesidad de realizar diagnsticos integrales en los animales, ya sea
individual o de grupo.
Una de las ms conocidas es la tcnica de Flotacin en sulfato de zinc (tcnica de
Faust). Para realizar este mtodo se necesita la solucin de Faust (333 grs. de
sulfato de Zinc) diluido en un litro de agua destilada.
Este es un mtodo combinado de sedimentacin y flotacin. Se debe utilizar
coladores de mallas finas para eliminar los elementos toscos del contenido fecal;
una vez colado se coloca 3 grs de heces en un recipiente con agua potable, se
mezcla bien, se deja sedimentar por aproximadamente 30 minutos a 1 hora;
eliminar el sobrenadante, se utiliza el sedimento, 2 a 3 ml que se coloca en un
tubo de ensayo, se llena con la solucin de Faust, mezclar bien y tapar con papel
de parafina, llevando a centrifugar por 5 minutos a 1000 RPM y los huevos
flotarn.
Con la ayuda de un anza de metal se toman 2 a 3 gotas de la superficie que
contienen los huevos de los parsitos, se cubre con un cubre objeto y se observa
al microscopio.

36
MATERIAL y EQUIPO
Vaso de precipitado de 50 ml
Tubos de ensaye de 15 X 100 mm
Gradilla
Embudo de polietileno
Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado
Asa de alambre terminada en crculo de 3 a 5 mm
de dimetro y formando ngulo recto con el resto
del alambre.
Solucin de Sulfato de Zinc 1.180 Baum
Lugol
Microscopio
Centrfuga
METODO:
a) Se hace una suspensin homognea con 1 g de materia fecal y 10 ml de
agua.
b) Se filtra la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo,
colectando el filtrado directamente en el tubo.
c) Se centrifugan los tubos a 2000 rpm durante 1 min.
d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con agua. Se
centrfuga nuevamente, repitiendo la misma operacin hasta que el
sobrenadante se observe limpio.
e) Se decanta el ltimo sobrenadante, se resuspende el sedimento y se
agrega Sulfato de Zinc 1.180 Baum y se centrfuga a 2000 rpm durante 1
min.
f) Con el asa se recoge la muestra de la pelcula superficial que se encuentra
en el menisco, dos o tres ocasiones y se deposita sobre el portaobjetos; se
37
aade una gota de lugol, se mezcla con el ngulo del cubreobjetos y se

cubre con el mismo.
g) Se observa la preparacin con objetivos de 10 X y 40 X.
de helmintos)
CUESTIONARIO:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Cules son las fases principales de los parsitos?

Por qu cree que es importante la tcnica de Faust?
Qu es el sulfato de Zinc y para que nos sirve en esta tcnica?
A que se le llaman protozoarios?
Qu son los helmintos y como se dividen estos?
Por qu es importante la identificacin de los helmintos en los humanos?
Qu otros huspedes pueden tener los helmintos?
BIBLIOGRAFIA:

38
PRACTICA No. 5: METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACIN DE

RITCHIE
OBJETIVOS:
Lograr la concentracin de quistes y huevecillos para su identificacin.
Aprender a concentrar muestras para su posterior transporte y

almacenamiento antes de examinarse, cuando tenemos demasiada carga
de trabajo.
Comparar esta tcnica con otras para la mejor identificacin de quistes y

huevecillos.
FUNDAMENTO: Se basa en la concentracin de los quistes y huevos por

sedimentacin mediante la centrifugacin, con la ayuda de formol y ter para
separar y visualizar los elementos parasitarios.
Unas ventajas que tiene este mtodo es concentrar y no deformar las formas
parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada
antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una tcnica para evaluacin
de tratamiento y determinacin de frecuencia.
Las infecciones intestinales por helmintos y protozoos estn entre las ms
comunes a nivel mundial, pues se distribuyen en todas las regiones tropicales y
templadas del planeta; sin embargo, al ser ms prevalentes en los pases en
desarrollo y en las comunidades ms pobres, han sido consideradas como el
resultado de las condiciones de vida y fueron subestimadas por los servicios de
salud pblica. A pesar de esta situacin, algunas parasitosis han cobrado
importancia an en pases desarrollados (EEUU), asociadas con brotes de
transmisin hdrica, tal es el caso de Cryptosporidium spp. y Giardia lamblia.
En Argentina, las parasitosis intestinales constituyen un importante problema de
salud pblica, y son especialmente prevalentes en nios y adultos de poblaciones
con necesidades bsicas insatisfechas. Su distribucin se encuentra influenciada
por factores biticos, abiticos y culturales.

39
Una de las maneras de diagnosticar las parasitosis de localizacin gastrointestinal

y glndulas anexas, es mediante la aplicacin de tcnicas coproparasitolgicas de
enriquecimiento (de sedimentacin y flotacin), que permiten concentrar huevos,
quistes y larvas en el menor volumen de materia fecal, determinar su presencia e
identificarlos correctamente.
La recuperacin de estas formas parasitarias plantea un problema de difcil

solucin a todo microscopista. Si bien es posible preparar frotis fecales a partir de
heces frescas o material fecal conservado en SAF o formol, los mtodos de
concentracin permiten que los quistes de protozoos y huevos de helmintos no
pasen inadvertidos cuando estn presentes en escaso nmero.
Las tcnicas de sedimentacin, se utilizan para la observacin de quistes de
protozoos, huevos y larvas de helmintos, pero la desventaja de estas tcnicas
consiste en que los preparados contienen ms residuos que los procesados por
flotacin. En este caso, el acetato de etilo se usa para extraer los residuos y las
grasas de las heces y llevar los parsitos al fondo de la suspensin. Estas
tcnicas entonces son recomendadas por ser fciles de realizar, tener baja
probabilidad de errores tcnicos y recuperar un amplio rango de organismos.
Las tcnicas de flotacin permiten la separacin de quistes de protozoos y huevos
de ciertos helmintos del exceso de residuos mediante el uso de soluciones con
elevada gravedad especfica. Los elementos parasitarios son recuperados de la
capa superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo. Con estas
tcnicas los preparados son ms limpios que los obtenidos por sedimentacin. Sin
embargo, algunos huevos (como los operculados, o los densos como los estriles
de Ascaris lumbricoides) no se concentran bien en las flotaciones; en estos casos
se recomienda el uso de tcnicas de sedimentacin.
De todas maneras, en las flotaciones se observa tambin el fondo del tubo para
asegurar la recuperacin de todos los posibles organismos. Con el fin de
maximizar la eficacia en la deteccin de parsitos intestinales se recomienda el
uso de ambos mtodos diagnsticos de manera conjunta

40
MATERIAL y EQUIPO
Centrfuga
Tubos de ensaye cnicos de 15 ml
Gasa cortada en cuadros de 15 cm
por lado
Embudos de polietileno
Vasos de precipitado de 50 ml
METODO
a) Con el aplicador de madera se
Pipetas Pasteur con bulbo
coloca aproximadamente 1 gr.
de la materia fecal en el vaso
de precipitado, se aaden 10
Solucin salina isotnica
ml de solucin salina y se
Solucin de formaldehido al 10%
homogeniza.
Microscopio
b) Se filtra la suspensin a travs
de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cnico.
c) Se centrfuga la suspensin durante 1 min a 2000 rpm.
d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solucin
salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias
hasta que el sobrenadante sea claro.
e) Al ltimo sedimento se agregan 10 ml de solucin de formaldehdo al 10%,
se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
f) 6.- Se aaden despus 5 ml de ter, se tapan los tubos con tapones de
caucho y se agitan enrgicamente durante 30 segundos.
g) Se centrfuga durante 2 minutos a 1500 rpm.
h) Despus de centrifugar se observan 4 capas:
ter en la superficial,
un tapn de restos fecales,
formaldehdo,
sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.
i) Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d, se extrae con cuidado una

gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
j) Se le aade una gota de lugol y con uno de los ngulos del cubreobjetos,
se homogeniza, cubrindolo con el mismo.
k) Se observa la preparacin en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.

41
de helmintos)
CUESTIONARIO:
1. Mencione que ventajas y desventajas tiene este mtodo en
comparacin con el de Faust.
2. Mencione la importancia de la identificacin de Giardia lamblia en los
seres humanos.
3. Cules son los protozoos comensales del tubo digestivo de mayor
importancia clnica?
4. Dibuje el ciclo biolgico de la Entamoeba histolytica
5. Cules son las enzimas de mayor importancia clnica que poseen
las amibas?
BIBLIOGRAFIA:

42
PRACTICA No. 6: MTODO DE DILUCION DE STOLL

OBJETIVOS:
Aplicar el diagnstico de laboratorio adecuado a cada parsito.

Identificar y eliminar elementos no parasitarios.
Cuantificar los quistes presentes en las muestras.
FUNDAMENTO: Dentro de las muestras biolgicas para su estudio

parasitoscopico, encontramos la presencia de elementos que son de relevancia
clnica como son los parsitos que se presentan en sus distintas etapas de sus
ciclos biolgicos; pero tambin tenemos la presencia de otros elementos que no0s
interfieren en el diagnostico y que debemos eliminar, pero que tambin a su vez
nos dan indicio de problemas de absorcin o de la funcionalidad del aparato
digestivo.
ELEMENTOS NO PARASITARIOS
En un anlisis parasitolgico los restos o elementos no parasitarios deben
diferenciarse de los parsitos. Hay muchos y diferentes elementos microscpicos
de restos alimenticios o restos no parasitarios, de origen endgeno o exgeno que
estn presentes en las heces.
Podemos citar varios ejemplos:
Tejido conjuntivo: las fibras se entrecruzan en una red muy fina.
43
Carne: las fibras musculares estn unidas por trabculas. Las fibras de carne
Insuficientemente digeridas son de tamao variable, de forma rectangular, de
ngulos bien marcados, de color marrn con una neta estriacin doble,
longitudinal y transversal; las fibras de carne bien digeridas presentan formas ms
redondeadas, de color marrn ms claro a amarillo plido y sin estras.
Grasas: grasas neutras se ven como gotas muy refringentes y los cidos
grasos con aspecto de finas agujas a veces agrupadas.
Elementos vegetales: los grnulos de almidn estn agrupados en masas
celulsicas. El grado de digestin del almidn se determina por la coloracin
que toma con el lugol, violeta oscura cuando el almidn est intacto, rosa
plido cuando est totalmente digerido y tonos de marrn para los distintos
grados de degradacin.
Celulosa no digerible: los vasos espiralados de legumbres verdes aparecen
como resortes cuando estn de perfil y de frente se presentan como elementos
redondeados de doble contorno cuyo interior puede estar lleno o vaco, los
pelos vegetales, alargados, que tienen un polo irregular y el otro aguzado,
muy refringentes y en el medio un canal que puede confundirse con el
intestino, restos de plenes y esporas de hongos con Clulas endgenas:
leucocitos, que pueden estar aislados o en grupos denominados piocitos,
hemates, clulas epiteliales, clulas rectales, bacterias, etc.
Existen muchsimas figuras microscpicas de restos que no pueden ser
identificadas con precisin y sera una tarea intil tratar de reconocerlas. Lo ms
importante es poder diagnosticar correctamente a los diferentes parsitos que
pueden hallarse en el intestino humano.
Los parsitos no constituyen flora normal en el ser humano. Teniendo en cuenta
que puede darse un estado de latencia que no se traduce ni exterioriza
sintomticamente y que slo es posible descubrirlo por el anlisis parasitolgico
de rutina, debemos realizar siempre un correcto estudio parasitolgico y ejecutar
un tratamiento adecuado, para eludir el peligro de la diseminacin parasitaria y
liberar a los pacientes de los parsitos como agentes potencialmente patgenos y
agresivos y evitar su propagacin en la naturaleza.
Este mtodo se basa en los principios de saponificacin, homogenizacin y
aclaracin. El NaOH 0.1 N al ponerse en contacto con las grasas de las heces se
saponifica, hace que los huevos de los parsitos sean menos pegajosos,
desinfecta y deodoriza la muestra.
44
MATERIAL y EQUIPO
Probeta graduada de 100 ml con
tapn esmerilado
Pipetas de Stoll o graduadas de 2 ml
en 0.01 ml.
Varilla de vidrio de 20 cm de longitud
Perlas de vidrio
NaOH 0.1 N
Microscopio
METODO:
a)
b)
c)
d)
Se coloca en la probeta Hidrxido de Sodio 0.1 N hasta la marca de 56 ml.

Con la varilla de vidrio, se aade materia fecal hasta aforar a 60 ml.
Si las heces son duras, se espera un tiempo a que se reblandezcan.
Se aaden 15 perlas de vidrio, se tapa la probeta, se agita fuertemente, de
arriba abajo, durante 1 minuto, hasta formarse una suspensin homognea.
e) Los huevos y restos empiezan a precipitar en cuanto cesa la agitacin. Con
la pipeta se toma inmediatamente 0.075 o 0.15 ml del centro de la
suspensin. Se recomienda el segundo volumen, que da una muestra
mayor para el recuento. Llevando la punta de la pipeta al centro del matraz,
el error debido a la precipitacin de los huevos disminuye.
f) Se pasa la totalidad del contenido de la pipeta a un portaobjetos y se cubre
la gota con el cubreobjetos.
g) Se examina la preparacin sistemticamente con el objetivo seco dbil y se
cuentan todos los huevos y larvas presentes cuidando no contar dos veces
la misma estructura.
CALCULOS:
45
El nmero de huevos y larvas contados se multiplica por:

100, si la materia fecal es dura.
200, si la materia fecal es pastosa.
400, si la materia fecal es lquida.
NOTA:
Estos factores dependen de la cantidad de agua que las muestras
contengan.
El resultado se expresa en huevos o larvas por ml de heces ( H.ml.H)
Los quistes nicamente se reportan, sin cuantificarse.
de helmintos)
CUESTIONARIO:
1. Mencione la importancia de eliminar las interferencias en las muestras
fecales.
2. Qu es el proceso de saponificacin, explquelo?
3. Por qu pueden ser importantes al diagnostico, la presencia de elementos
no parasitarios?
4. El aumento excesivo de grasas en las heces, a que se puede deber, a
nivel fisiolgico?
5. Qu parsitos tienen huevecillos de mayor relevancia clnica?
6. Por qu es importante la cuantificacin de quistes en las muestras?

46
BIBLIOGRAFIA:
PRACTICA No. 7: METODO CUANTITATIVO DE FROTIS GRUESO KATO

OBJETIVOS:
Aprender la tcnica de Kato-Katz para el recuento de huevos de helmintos.

Comprender la importancia de la tincin de los huevos helmnticos para una
mejor identificacin
FUNDAMENTO: Tcnica de Kato-Katz

47
El mtodo es til para el recuento de huevos de helmintos, pero es poco sensible

para infecciones leves. Se coloca 1 gramo de heces sobre un trozo de papel de
aluminio. Sobre la muestra se dispone una malla metlica o plstica fina, y se
raspa sobre el tamiz con una jeringa de tuberculina sin punta hasta que la
deposicin llegue a una marca hecha previamente y que corresponde a un
volumen de 35 mm3 (aproximadamente 50 gramos de heces) La deposicin se
coloca sobre un portaobjeto y se cubre con papel celofn empapado en solucin
de verde de malaquita (verde de malaquita al 3%, glicerina 50 ml y agua destilada
100 ml) El portaobjeto se invierte y sobre una superficie dura se presiona
suavemente para extender la muestra.
Posteriormente se deja clarificar la preparacin durante una hora a temperatura
ambiente. Los huevos se cuentan recorriendo toda la preparacin. El nmero de
huevos se calcula con la siguiente frmula:
Huevos/ g de heces = Nmero huevos contados x 20x Factor de
consistencia
El factor de consistencia es 1 para deposicin slida; 2 para semislida y 3 para la
lquida.
Tcnicas para el recuento de huevos de helmintos
Se basan en la cuantificacin del nmero de huevos por gramo o miligramo de
heces. Existen varios mtodos para el recuento de huevos:
Tcnica de Beaver de recuento directo de huevos
Tcnica de recuento de huevos por dilucin de Stoll- Hausheer
Tcnica de Kato- Katz
Es un mtodo cuantitativo de helmintos. El cual se basa en la accin que tiene la
glicerina como aclarador de los huevos de helmintos y el verde de malaquita como
colorante de contraste.
MATERIAL y EQUIPO
Malla de alambre
Papel celofn de grosor medio, no
resistente a la humedad
recortado en cuadros de 22 X 40 22
X 30 mm
Recipiente
conteniendo
4to. SEMESTRE
DE LAglicerol
LIC. EN QUIM. FARMACEUTICA BIOLOGICA
Verde de malaquita al 3%
Microscopio
48
METODO:
a) Con un abatelenguas, pasar 50- 60 mg de materia fecal a un portaobjetos a
travs de la malla metlica.
b) Cubrir la muestra con el cubreobjetos de celofn embebido en la solucin
de verde de malaquita y glicerol. Invertir la preparacin, presionar sobre una
hoja de papel filtro contra la superficie de la mesa de trabajo, para lograr la
extensin de la muestra hasta cubrir un rea de 20 a 25 mm de dimetro.
c) Dejar reposar la preparacin con el cubreobjetos de papel celofn hacia
arriba durante una hora a temperatura ambiente o 30 minutos a 34-40C.
Esto motivar el aclaracin de las heces, sin que se aclaren los huevos de
helmintos.
d) Observar al microscopio, hacer el conteo de los huevos que se encuentren
en la preparacin. Para obtener la cifre total, cada cuenta alcanzada,
multiplicarla por el factor correspondiente para expresarla en huevos por
gramo de heces (h.g.h) Si se pesaron 50 mg , multiplicar por 20 que es un
factor constante y el producto ser la cifra a reportar.
e) Debe evitarse exceder el tiempo de aclaracin porque esto dificultara la
observacin de los huevos de helmintos. Si fuese necesario demorar la
observacin puede detenerse el proceso de aclaracin invirtiendo la
preparacin es decir colocarla con el papel celofn hacia abajo hasta el
momento que se vaya a observar.
deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su
estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva
en caso de helmintos)
CUESTIONARIO:
49
1. Qu otros mtodos sirven para el conteo e identificacin de huevos de

helmintos?
2. Qu es el verde de malaquita y para que otras cosas sirve adems de
teir los huevecillos?
3. Por qu cree que se debe observar al microscopio?
4. Por qu cree que se debe pasar la muestra por una malla?
BIBLIOGRAFIA:

50
PRACTICA No. 8: METODO DE GRAHAM (RASPADO PERIANAL)

OBJETIVOS:
Aprender la tcnica del raspado perianal.
Que el alumno sea capaz de diagnosticar la enterobiasis.
Diferenciar al Enterobius de otros parsitos ocasionales en la misma regin.
FUNDAMENTO: Esta tcnica se basa en que la hembra adulta de Enterobius
vermicularis habitualmente no deposita sus huevos en el interior del intestino, sino
que por lo general emigra durante la noche, hacia las mrgenes del ano,
depositando los huevos en los pliegues perianales.
La tcnica de Graham es una impronta que permite obtener los huevecillos
directamente, los cuales quedan adosados (adheridos) a la cinta adhesiva
transparente que se utiliza para la obtencin de la muestra para el diagnostico. Es
por esto que la toma debe efectuarse en la maana indicando que debe ir a
defecar y no debe baarse.
Ocasionalmente se pueden encontrar huevos de Ascaris lumbricoides, Trichuris
trichura, Hymenolepis nana, Taenia sp.
MATERIAL y EQUIPO
Portaobjetos De 26 X 76 mm
Abatelenguas
Cinta de celulosa Scotch
Microscopio
METODO:
a) Sobre un extremo del abatelenguas se coloca la cinta Scotch con la parte
adherente hacia fuera, sujetndola con los dedos pulgar e ndice.
b) Se presiona la superficie sobre la regin perianal hacia uno y otro lado,
finalmente se hace un frote perianal.

51
c) Separar cuidadosamente la cinta del abatelenguas y adherirlo sobre un

portaobjetos.
d) Observar con objetivo de 10X.
de helmintos)
CUESTIONARIO:
1. Cul es la importancia de la Enterobiasis?
2. Qu parsitos tienen importancia en su fase larvaria?
3. Desde cuando se utiliza la tcnica de Graham.
4. Porque es importante que sea una cinta adhesiva transparente?
5. Por qu debemos tener cuidado de no tocar la cinta adhesiva con
nuestros dedos?
BIBLIOGRAFIA:

52
PRACTICA No. 9: MTODO DE HARADA MORI

OBJETIVOS:
Conocer la tcnica de Harada Mori.
Que el alumno sea capaz de identificar al gnero Strongyloides.
Que aprenda a comparar a esta tcnica con otras.
FUNDAMENTO: Del gnero Strongyloides pueden infectar al hombre dos
especies: stercolaris y fuelleborni. El primero es especfico del hombre y el
segundo es propio de primates africanos pero se ha visto en seres humanos de
Oceana. El Strongyloides presenta varios estados: la hembra adulta, larva
rabditiforme, larva filariforme, y adultos hembras y machos de vida libre.
La hembra adulta. Es de aspecto filiforme, transparente, de 2.2 mm de longitud por
50 m de dimetro6. Tiene un esfago cilndrico ubicado en el tercio anterior del
cuerpo, que se contina con el intestino y termina en el orificio anal, cerca al
extremo posterior del cuerpo7. Posee un tero que permanece con huevos y se
abre a la vulva, ubicada entre el tercio posterior y el tercio medio del parsito8.
Normalmente vive en el duodeno y el yeyuno, ubicada entre los enterocitos y se
abre a la luz intestinal. En condiciones normales no sobrepasa la muscularis
mucosae.
Por las razones mencionadas las hembras adultas, normalmente no se encuentran
en la materia fecal y slo se ven durante el estudio de aspirados duodenales o

53
exmenes histopatolgicos. Por estudios en animales, se calcula que la tasa de

mortalidad anual de las hembras adultas es de 10%.
En el ser humano no se identifican parsitos machos, y la hembra se reproduce
por partenognesis. Una vez salen los huevos, se ubican dentro de los tejidos y
rpidamente dan origen a la primera forma larvaria, la larva rabditiforme. Algunos
han calculado el tiempo entre el ingreso del parsito por la piel y la produccin de
los primeros huevos en 12 das y otros en 28 das, con una produccin
aproximada de 15 huevos diarios por hembra y en otros estudios de 60 huevos
diarios. No es posible recuperar huevos en la materia fecal, excepto en casos de
diarrea severa.
Factores de riesgo. La infeccin se adquiere al caminar descalzo, lo cual permite
que la larva filariforme pueda penetrar la piel. Esto explica porqu algunas
personas se pueden contaminar en zonas donde es raro el parsito.
A las tasas de prevalencia las influyen las condiciones socioeconmicas y el
mtodo de demostracin que se utilice. Los perros y los gatos se pueden infectar,
pero la transmisin de animales a humanos o de animal al medio ambiente al
humano se considera rara.
Evolucin de los huevos. Los huevos rpidamente eclosionan para dar origen a
la larva rabditiforme. Por esta razn los huevos no se encuentran en la materia
fecal, a no ser que se presenten cuadros diarreicos severos30.
FORMAS CLNICAS EN ESTRONGILOIDIASIS
Infeccin. Define el paciente con Strongyloides slo en duodeno y yeyuno, sin
evidencia de aumento en el nmero de helmintos.
Autoinfeccin. Es la capacidad de este nematodo de iniciar un nuevo ciclo sin salir
al exterior. Esto explica porqu puede persistir tantos aos la infeccin en el
intestino delgado. Algunos autores hablan de autoinfeccin externa cuando la
regin perianal es la puerta de entrada y de autoinfeccin interna cuando lo es la
mucosa intestinal.
Hiperinfeccin. Es el sobre crecimiento de parsitos con el consecuente aumento
en la maduracin de larvas rabditiformes a filariformes, lo que puede ocurrir a lo

54
largo de los sitios por donde realiza su ciclo de vida. Generalmente se asocia con
algn tipo de inmunodeficiencia.
Diseminada. Se refiere a la invasin de la larva filariforme de sitios fuera del tracto
gastrointestinal o el pulmn.
Sexual: Se produce por dos clases de gametos distintos, masculinos y femeninos.
Que se unen en el momento de la fecundacin, para constituir el huevo (cigoto).
Las hembras, tras ser fecundadas por los machos, ponen huevos. El desarrollo, a
partir
del
huevo,
puede
ser:
1. Desarrollo directo nace un individuo similar al adulto de menor tamao
2. Desarrollo indirecto nace una larva que implica una serie de cambios
profundos denominados metamorfosis.
Este mtodo permite Realizar un cultivo de huevos para obtener desarrollo de
larvas y as poder precisar la especie.
MATERIAL Y EQUIPO:
Agua Destilada
Tubos de ensaye de punta cnica de 15 ml
Gradilla
Abatelenguas o aplicadores de madera
Tiras de papel filtro de 13 X 120 mm
Pipetas Pasteur con bulbo
Sol. De lugol o cido actico al 20%
Microscopio
METODO:
a) Se extiende una fina pelcula de heces (de 1 a 2 mm) en un lado del tercio
medio de una tira de papel filtro.

55
b) Se coloca el papel en un tubo de ensaye con 3 ml de agua destilada forzando

la tira hasta aproximadamente el nivel de 1 cm y presionando el lado limpio
contra la pared del tubo.
c) Se conserva el cultivo a temperatura ambiente (24-28C) en la oscuridad
durante un periodo de 1-5 das aadiendo agua segn se vaya necesitando
para mantener el nivel bastante por encima del extremo inferior del papel
filtro.
d) El flujo capilar del agua que sube a travs del papel y la pelcula fecal
mantiene hmedas las heces y transporta sus elementos solubles hacia la
parte superior del papel, donde se evaporan o acumulan en un depsito
oscuro.
e) Al alcanzar la fase infecciosa, las larvas migran hacia abajo contra la
corriente del flujo del agua, y al alcanzar el nivel de sta se sumergen hacia
el fondo, donde pueden verse con una lupa y tomarse con una pipeta para su
examen microscpico.
f) La tira de papel filtro puede transferirse a un tubo limpio lleno de agua para
recoger las larvas que hayan podido quedar en la pelcula fecal.
g) Algunas especies de larvas tienen tendencia a no migrar hacia abajo. Antes
de retirarlas, las larvas pueden inmovilizarse introduciendo el tubo a bao
Mara (50-60C) o aadiendo una cantidad de cido Actico al 20%.
de helmintos)
CUESTIONARIO:
Cmo se alimentan las hembras adultas y las larvas rabditiformes?
Cuntos parsitos pueden vivir normalmente en el intestino delgado?
Cules son los mecanismos que hacen que el parsito llegue a causar
hiperinfeccin o enfermedad diseminada?
4. Cmo evade la larva filariforme la respuesta humoral y celular durante su
viaje por el torrente sanguneo?
5. Existen casos de erradicacin espontnea? Con qu frecuencia?
1.
2.
3.

56
BIBLIOGRAFIA:
PRACTICA No. 10: METODO DE BAERMAN

OBJETIVOS:
Identificar huevos y larvas de nematodos parsitos.
Realizar el mtodo de Baermann.
57
Conocer y Discutir otras tcnicas especiales para el estudio de nematodos

parsitos.
Fundamento: El diagnstico parasitolgico se fundamenta en el conocimiento de

la biologa del parsito y la identificacin del mismo a travs de las tcnicas de
laboratorio que nos permita su visualizacin para identificar su estructura
observada, como perteneciente a una determinada especie.
Existen mtodos especiales para la recogida de larvas de helmintos, tales como
el mtodo de Baermann, que permite una buena concentracin de las larvas de
Strongyloides, el mtodo de Rugai, las tcnicas de coprocultivo. Otros mtodos
utilizados en el diagnstico parasitolgico son las tcnicas para medir la intensidad
de un parasitismo por helmintos. Adems de la biologa del parsito es
fundamental el conocimiento y dominio de la tcnica. El objetivo de la prctica es
realizar nuevas otras tcnicas coproparasitoscopicas, comprender sus
fundamentos y aplicaciones y otras tcnicas especiales.
Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termotropismo e hidrotropismo
de los trofozoitos de protozoos y larvas de helmintos. Es til principalmente para
Balantidium coli y larvas de Strongyloides stercolaris.
MATERIAL Y EQUIPO:
Embudo de vidrio
Gasa
Coladera metalica
Pipeta Pasteur
Portaobjetos
Solucin salina
Microscopio
Estufa
METODO:

58
a)
b)
c)
d)
e)
Colocar la coladera metlica con la gasa doblada dentro del embudo

Colocar dentro de la gasa de 3 a 4 grs de heces
Verter solucin salina a 370C en cantidad suficiente
Dejar a temperatura o en la estufa a 280C 370C de 30 a 50 minutos.
Sacar la coladera o rejilla y con ayuda de una pipeta Pasteur, obtener un
mililitro de sedimento.
f) Colocar dicho sedimento en un portaobjetos y observar al microscopio.
g) Se debern reportar los estadios evolutivos de los parsitos encontrados.
de helmintos)
CUESTIONARIO:
Existe autorregulacin de la poblacin de parsitos en el husped normal?
Definir cules son las verdaderas relaciones entre la infeccin por el virus
HTLV-I y la infeccin por Strongyloides.
3. Estudiar si la infeccin se puede definir de acuerdo con el nmero de larvas
por gramo de materia fecal.
4. Cul debe ser el tratamiento de la hiperinfeccin y de la estrongiloidiasis
diseminada?
5. Diga cul es la mejor forma para identificar al Strongyloides stercolaris.
1.
2.
BIBLIOGRAFIA:

59
PRACTICA No. 11: ESTUDIO DE AMIBAS DE VIDA LIBRE

OBJETIVOS:
Identificar la existencia de las amibas de vida libre.
Identificar y conocer las formas para establecer un diagnostico clnico de
las amibas.
Introduccin.
Durante la primera mitad del siglo XX, las amibas de vida libre eran conocidas
como amibas del suelo, protozoos no patgenos, ubicuos en suelos y agua,
utilizados como modelos por los bilogos celulares. En 1958, Culbertson demostr
el potencial patgeno de Acanthamoeba spp., y en 1965 Fowler y Carter
reportaron el primer caso de meningoencefalitis amibiana primaria (MEAP)
causado por Naegleria fowleri en Australia; posteriormente, en Checoeslovaquia
se identific, de manera retrospectiva, un brote de 16 casos de MEAP adquirida en
una
alberca
(1962
1965).
En 1972 se hizo evidente que Acanthamoeba spp., produca enfermedad en el
humano; varios genotipos de Acanthamoeba son agentes causales de encefalitis
granulomatosa (en sujetos inmunocomprometidos, casi exclusivamente) y
queratitis en personas aparentemente sanas. Balamuthia mandrillaris, aislada de
un mandril (Visvesvara G, et al., 1990) fue reconocida como agente etiolgico de
encefalitis granulomatosa en pacientes inmunocomprometidos y ms
recientemente en personas inmunocompetentes, sobre todo en los extremos de la
vida; asimismo, se ha identificado en forma creciente en individuos de origen
latinoamericano.
Entre cientos de amibas de vida libre (AVL), Naegleria fowleri, especies de
Acanthamoeba y Balamuthia mandrillaris, son considerados organismos
emergentes, de alta patogenicidad, causantes de enfermedad a nivel de SNC, con
una mortalidad >95%. Presentan formas de trofozoito y quiste, y ambas pueden
ser
infectantes.
Sappinia diploidea, otra amiba de vida libre, se report como agente etiolgico en
un solo caso de encefalitis en 2001 y su ultra estructura se dio a conocer en 2003.

60
Recientemente, se ha considerado el posible papel de estas amibas como

reservorios de bacterias y virus patgenos.
Las amebas de vida libre son numerosas y se encuentran en la naturaleza, en
medios como: agua, suelos y vegetacin. Los gneros Naegleria y Acanthamoeba
tienen importancia en salud pblica ya que pueden producir enfermedades de tipo
mortal como la meningoencefalitis.
La puerta de entrada para estas amebas al ser humano es a travs de la piel o de
las mucosas, as como tambin la inhalacin de agua o aire contaminados con
estos patgenos. Una vez en el organismo, aparece una lesin y a travs del
sistema circulatorio, las amebas pueden alcanzan el sistema nervioso central. En
este tipo de infeccin las lesiones se caracterizan por formar grnulos o
tumoraciones en los tejidos.
Naegleria fowleri; causa una infeccin llamada meningoencefalitis amebiana
primaria (MEAP). Esta infeccin se adquiere por la inhalacin de agua con
amebas. Una vez en las fosas nasales las amebas viajan rpidamente a travs de
los tejidos olfatorios llegando al cerebro y concentrndose en el encfalo. Dado
que la invasin es muy rpida y las amebas se reproducen aceleradamente,
comienza la destruccin masiva del cerebro y ocurren numerosas hemorragias en
gran parte del sistema nervioso central, y la muerte sobreviene en el lapso de tres
y siete das, dependiendo del manejo y resistencia del paciente, as como de la
virulencia del microorganismo invasor. Infeccin se adquiere por la inhalacin de
agua con amebas.
Las amebas del gnero Acanthamoeba son capaces de producir un
padecimiento llamado encefalitis amebiana granulomatosa (EAG) o
acantamebiosis, adems de otras enfermedades en ojo, odos, piel, pulmn,
hgado, prstata y tero entre otros rganos.
DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO
Para identificar las amebas de Naegleria fowleri; se debern realizar frotes de
LCR y teir con Wright o Giemsa. Es importante decir, que en estas
61
preparaciones, las amibas muestran abundante citoplasma azulado y un ncleo

pequeo y delicado de color rosa. El LCR en estos casos es purulento o
sanguinolento, con leucocitos, principalmente neutrofilos hasta ms de
20,0007mm3, la glucosa es baja y el contenido de protenas alto.
Para la identificacin de Acanthamoeba en LCR se deben Observar de manera
directa de la formas trofozoiticas. En tejido nervioso se deben observar las
formas qusticas.
CUESTIONARIO:
1.
2.
3.
4.
Considera usted que es importante la identificacin de este tipo de

parsitos?
Dibuje el ciclo de vida de Naegleria fowleri y Acanthamoeba.
Aparte del ser humano a que otros huspedes pueden afectar estos
parsitos.
Bajo qu condiciones del husped se podra presentar la
meningoencefalitis.
BIBLIOGRAFIA:

62
PRCTICA No 12: ESTUDIO DE PROTOZOARIOS CILIADOS INTESTINALES

OBJETIVOS:
Conocer la existencia de los protozoos y las diferencias entre los suphylum
correspondientes
Identificar la presencia de trofozoitos y quistes de Balantidium coli en las
heces.
FUNDAMENTO: Los protozoos son un grupo heterogneo de animales
unicelulares con estructura eucaritica. Se han descrito ms de 20000 especies de
protozoos, aunque se conocen menos de 35 especies bien definidas que parasiten
al hombre.
Constituyen un grupo sumamente heterogneo de organismos, con tamao
complejidad estructural, ciclo de vida, tipo de reproduccin y huspedes muy
distintos.
Al hablar de protozoos nos referiremos a dos formas: la vegetativa y la qustica. La
primera es la forma adulta, tambin llamada trofozoito, y la qustica es la forma de
resistencia. Los protozoos son generalmente aerbicos. Viven en zonas con
abundante agua. La reproduccin es asexual, por fisin simple, mltiple
(esquizogonia) o gemacin o. Algunos protozoos (ciliados) se reproducen
sexualmente por conjugacin de ncleos.
La sistemtica de los protozoos es compleja y no se acepta uniformemente un
nico esquema de clasificacin. La divisin del phylum Protozoa en cuatro
subphylum constituye la organizacin de los protozoos que parasitan al hombre:
63
Grupo de protozoos Subphylum

Amebas o Rizpodos Sarcodina
Ciliados Ciliata
Flagelados Mastigophora
Esporozoos Sporozoa
Subphylum Ciliofora (CILIADOS)

Dentro de este grupo solo existe una forma, el Balantidium coli, considerado como
autntico parsito humano. Es un organismo ciliado, muy grande, de 30 a 150 m
de longitud. Posee dos ncleos: macro y micro ncleo. Se multiplica por fisin
simple, aunque a veces lo hace por conjugacin. Puede observarse como
trofozoito o como quiste.
Este infusorio es un parsito del intestino grueso del cerdo, que es su husped
normal. El hombre se infesta al estar en contacto con cerdos o por comer
embutidos poco cocidos. Tambin se puede producir la contaminacin de hombre
a hombre. El cuadro clnico est caracterizado por una diarrea acuosa o
mucosanguinolenta que conviene diferenciar de la disentera amebiana.
Es posible el cultivo de Balantidium, aunque poco habitual. En la fase aguda de
la balantidiosis se observan trofozoitos, y en las crnicas quistes.
Este mtodo permite hacer la identificacin por medio de un examen
coproparasitoscpico directo del trofozoito en heces diarreicas y el quiste en
heces formadas del parsito Balantidium coli.

64
MATERIAL Y EQUIPO
Solucin Salina isotnica
Lugol
Agua destilada
Microscopio
Materia fecal porcina
METODO
a) Colocar en un lado del portaobjetos una gota de solucin salina y del otro
extremo una gota de lugol.
b) Agregar una porcin de materia fecal porcina y homogeneizar.
c) Colocar el cubreobjetos procurando no hacer vacos.
d) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X.
e) Hacer los dibujos y anotar resultados.
de helmintos)
CUESTIONARIO:
65
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Esquematice el ciclo vital del Balantidium coli.

Diga Por qu para el diagnostico de Balantidium es necesario que las
heces sean frescas?
Mencione las caractersticas principales de los protozoos.
Porque dentro de sus fases los protozoos deben pasar por la forma de
quiste?
Cul es la razn de la alta patogenia de los protozoos?
Qu medicamentos antiparasitarios son los ms usados contra los
protozoos?
BIBLIOGRAFIA:
PRACTICA No. 13: ESTUDIO DE PROTOZOARIOS CILIADOS EN CAVIDADES

OBJETIVOS:
Analizar la morfologa en fresco de los trofozoitos de Trichomonas vaginalis,

por examen en fresco.
Comprender la importancia de los protozoarios que se encuentran en otras
cavidades diferentes a la intestinal.
Entender la importancia de los parsitos en enfermedades o padecimientos
fuera del aparato digestivo.
FUNDAMENTO: La tricomoniasis urogenital es causada en el ser humano por el

protozoario Trichomonas vaginalis. Aunque se transmite por contacto sexual, no se
66
ha descartado que se transmita raramente por fmites. El parsito se localiza en el

tracto genital y urinario de la mujer o del hombre, en donde puede causar vaginitis
o uretritis. La tricomoniasis es la enfermedad de transmisin sexual no viral ms
importante en el mundo. A nivel mundial, la tricomoniasis es una de las
enfermedades de mayor morbilidad y se ha asociado su presencia a otros
patgenos tales como el virus del VIH y el del papiloma humano. Las Trichomonas
pueden presentar forma piriforme, amiboideo, esferoidal, elipsoidal, u ovoidal,
asocindose la forma ameboide con la expresin de la virulencia del parsito.
A nivel nacional, la tricomoniasis ha ocupado un lugar preponderante entre las
primeras causas de morbilidad.
El diagnstico de la tricomoniasis en la mujer se realiza por examen directo y en
fresco de la secrecin vaginal observada al microscopio, obtenida de los fondos
del saco vaginal lateral y posterior. En el hombre, la infeccin usualmente es
asintomtica y el examen debe realizarse de la secrecin obtenida por la maana
antes de la primera miccin. La identificacin y diagnstico de las Trichomonas se
realiza usualmente por medio del anlisis microscpico en campo claro,
identificando las formas mviles del parsito. Una dificultad de tal anlisis es que
Las formas poco mviles del parsito pasan inadvertidas. Sin embargo, cuando se
observan muestras en las cuales el nmero de parsitos es escaso y el resultado
parece negativo, se puede recurrir al cultivo en medios especiales.
Tambin es posible recurrir
inmunofluorescencia o al PCR.
tcnicas
inmunolgicas,
como
la
Protozoos del tracto genitourinario

Trichomonas vaginalis: Amplia distribucin, protozoo flagelado, causa frecuente de
enfermedad de transmisin sexual. Ms frecuente en mujeres, en hombres suele
ser asintomtico. Importante como factor de riesgo en el embarazo.
Morfologa: Slo estado de trofozoito. Cinco flagelos, membrana ondulante que
Mide la mitad del trofozoito.

67
Clnica: Ubicacin tpica vagina y prstata (no puede vivir fuera del aparato
urogenital). Produce inflamacin con exudado vaginal, prurito vulvar, cistitis y
disuria.
Este mtodo permite demostrar la presencia de protozoarios flagelados en
exudados vaginales y uretrales y en orina por medio de examen directo. El
parasito ms comnmente encontrado es Trichomonas vaginalis.
MATERIAL Y EQUIPO
Microscopio
Hisopo
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubo de ensaye con sol. Isotnica estril
Espejo vaginal
Puente de tincin
Pipeta Pasteur con bulbo
Aceite de inmersin
Colorante de Wright
Secrecin vaginal, uretral u orina
Pizeta con agua destilada
METODO:
a) Se coloca a la paciente en posicin ginecolgica.
b) Introducir con cuidado el espejo vaginal.
c) Con un hisopo tomar la muestra del fondo de saco posterior.
d) Depositar la primera toma en un portaobjetos limpio y hacer un extendido.
e) La segunda toma depositarla en un tubo de ensaye con solucin salina
conservando a 37C.
f) Una vez seco el extendido se procede a teir con el colorante de Wright de
1 a 3 min.
g) Se observa al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a
ste ltimo aceite de inmersin.

68
h) Con una pipeta Pasteur se toma una gota del fondo del tubo de ensaye y se
deposita en un portaobjetos y se cubre.
i) Examinar con objetivos de 10X y 40X.
de helmintos).
CUESTIONARIO:
Cul es la importancia clnica diagnostica de Trichomonas vaginalis?
Mencione la diferencia entre vaginitis y vaginosis.
Aparte de Trichomonas que otro parsito causa infeccin a nivel vaginal y
uretral.
4. Por qu Trichomonas no puede vivir fuera del aparato genital del ser
humano?
5. Dibuje el esquema del ciclo vital de Trichomonas vaginalis.
6. A que debe su capacidad antignica Trichomonas?
1.
2.
3.
BIBLIOGRAFIA:
Snchez, J. y Zavala J. Fundamentos de microbiologa y parasitologa
mdica. Mndez Editores, Segunda edicin. Mxico, 2003.

69
PRACTICA No. 14: ESTUDIO DE EXPECTORACION PARA LA BUSQUEDA DE

PARASITOS PULMONARES
OBJETIVOS:
Identificar la presencia de parsitos en las secreciones pulmonares.

Conocer los parsitos que frecuentemente se pueden encontrar en
secreciones pulmonares.
FUNDAMENTO: Las secreciones traqueo bronquiales son una mezcla de plasma,

agua, electrolitos y mucina (moco).
A medida que dichas secreciones atraviesan las vas inferiores y superiores se
contaminan con exfoliaciones celulares, secreciones nasales, y de las glndulas
salivales y flora bacteriana normal de la cavidad oral. Esta mezcla de secreciones
y partculas reciben el nombre de esputo.
Las glndulas mucosas y el epitelio de superficie constituyen las fuentes
principales de las secreciones traque-bronquiales. Las propiedades fsicas del
esputo revelan que las secreciones son viscosas y elsticas, es decir, que poseen
las propiedades de los lquidos y los slidos. Su consistencia depende
principalmente de la estructura molecular de las gluco-protenas y del grado de
hidratacin. El cido silico es el que contribuye de forma ms importante a la
viscosidad del esputo.
Existen ocasiones en que se pueden encontrar la presencia de parsitos en las
secreciones pulmonares ya sea por la existencia de los parsitos a ese nivel o
bien porque estos migren hacia esos rganos y luego sean expulsados al tener
tos o porque se adhieran a clulas que salgan en las secreciones bronquiales y
pulmonares.
Dentro de estas enfermedades podemos encontrar a la
Toxoplasmosis, ascariasis, Paragonimus, entre otras.
La toxoplasmosis es una zoonosis de distribucin mundial. Se infectan animales
herbvoros, omnvoros o carnvoros, incluyendo casi todos los mamferos. En la
carne destinada a consumo humano es frecuente la presencia de quistes tisulares.
Los invertebrados como moscas y cucarachas pueden contribuir a la difusin de

70
los ooquistes. Estos pueden mantenerse infecciosos durante mucho tiempo en la

tierra hmeda.
Los humanos sufren la transmisin del parsito fundamentalmente por

va oral a travs de la ingesta de carnes, verduras, aguas, huevos, leche,
etc. contaminados por ooquistes o que contienen quistes tisulares: hasta un
25% de las muestras de carnes de cordero y cerdo y ms raro en la carne
de
vaca.
Los gatos, sobre todo si se manipulan sus excretas, pueden infectar si se
ingieren ooquistes.
La segunda va de transmisin es la materno-fetal o congnita dando origen
a la toxoplasmosis congnita;
ms raras son la transmisin por transfusiones o por recepcin de rganos.
Aunque se ha postulado el contagio interhumano, ste no se ha podido
demostrar.
La ascariosis intestinal es considerada como una de las diez infecciones
parasitarias ms comunes en el mundo, calculndose que existen entre 800 y mil
millones de individuos infectados con Ascaris lumbricoides; aunque la mortalidad
es relativamente baja, las complicaciones frecuentemente requieren de atencin
hospitalaria. La ascariosis pulmonar en el husped humano est relacionada con
la ruptura de los capilares y de las paredes en el husped humano est
relacionada con la ruptura de los capilares y de las paredes de los tabiques
alveolares causada por las larvas L3 y L4 de A. lumbricoides y por las larvas de
Ascaris suum, habindose demostrado la existencia de infeccin cruzada, aunque
las larvas de origen porcino no llegan al estado adulto en el humano.
La paragonimiasis es una enfermedad causada por parsitos llamados gusanos, el
gusano ms comn es el Paragonimus westermani. Tambin, hay otras especies
de Paragonimus que pueden causar enfermedad. Las formas principales en que
se manifiesta la enfermedad son la pulmonar (pulmn) y la extra-pulmonar (fuera
del pulmn, como en el abdomen el cerebro).
Estos parsitos tienen un ciclo de vida complicado con muchas etapas en las
cuales pasan de husped a husped, stos pueden incluir caracoles de agua
dulce, crustceos de agua dulce (cangrejos y langostinos), y seres humanos u
otros mamferos. La nica etapa que es infecciosa para los seres humanos es la
71
que ocurre cuando el parsito est hospedado en forma de quiste en los

crustceos de agua dulce. Es ms comn que los seres humanos se infecten al
comer cangrejos de agua dulce crudos, semi-cocinados, salados, en escabeche
(curtidos) al comer langostinos que contienen el quiste del parsito. Despus de
que el crustceo es consumido, los parsitos salen del quiste en el intestino, lo
penetran, entran a la cavidad abdominal y luego viajan a los pulmones. En los
pulmones, los parsitos maduran y comienzan a producir huevecillos.
Los huevecillos son expulsados al exterior cuando la persona tose se ingieren y

son desechados en el excremento.
Este mtodo consiste en investigar en secreciones pulmonares, presencia de
protozoarios.
MATERIAL Y EQUIPO
Microscopio
Portaobjetos 25 X 76 mm
Aplicador de madera
Mechero
Puente de tincin
Colorante de Giemsa
Sol. Buffer ph 7.0-7.2
Aceite de inmersin
Frasco con expectoracin o material de aspiracin
bronquial
METODO:
a) En un portaobjetos limpio y desengrasado hacer un frotis de la
expectoracin.
b) Dejar secar 5 minutos.
c) Proceder a teir cubriendo el frotis con sol. colorante de Giemsa por 30
minutos, escurrir y lavar con sol. buffer, escurrir y dejar secar.
d) Observar al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a
esta ltima observacin aceite de inmersin.

72
de helmintos).
CUESTIONARIO:
Cul es la importancia mdica de la Toxoplasmosis?
Por qu ocurre la migracin de Ascaris a otros rganos en el ser humano?
En que otros mamferos podemos encontrar la presencia de
Paragonimus?
4. Aparte del pulmn en que otros rganos podemos encontrar a estos
parsitos.
5. De los tres parsitos (Ascaris, Toxoplasma y Paragonimus) Cul es el que
ms mortalidad causa? A quin se considera como de mayor relevancia
en la salud pblica?
1.
2.
3.
BIBLIOGRAFIA:
Snchez, J. y Zavala J. Fundamentos de microbiologa y parasitologa
mdica. Mndez Editores, Segunda edicin. Mxico, 2003.

73
PRACTICA No. 15 ESTUDIO DE PLASMODIUM

OBJETIVOS:
Conocer la tcnica de gota gruesa para la identificacin de Plasmodium.
Aprender a diferenciar la presencia de formas parasitarias de las clulas

sanguneas.
Aprender a identificar los parsitos sanguneos.
INTRODUCCION:
El procedimiento para el diagnstico de protozoos en sangre circulante es el
estudio al microscopio de preparaciones en portaobjetos las cuales son la
extensin fina y la gruesa. La extensin fina ideal es la que tiene el grosor de una
clula y en la que los elementos celulares aparecen algo aplanados. La extensin
fina es til para estudiar detalles de los hemates y de los parsitos de la sangre,
su principal limitacin es que la cantidad de sangre presente en la muestra es
pequea. La extensin gruesa contiene 6-20 veces ms sangre por unidad de
superficie que la extensin fina. Es fundamental que no se fije antes de la tincin
ya que los hemates tienen que deshemoglobinizarse durante el procedimiento.
La rotura de los hemates y la prdida de su hemoglobina permite la visin
microscpica de las dems estructuras, incluidos los parsitos sanguneos,
aunque se encuentren en la parte ms profunda de la extensin. La extensin
gruesa resulta til para el diagnstico rpido de las parasitemias demasiado leves
para apreciarse en la extensin fina, pero no sirve para estudios anatmicos finos.
74
La toma de sangre perifrica para Plasmodium vivax y P. Malarie deben

efectuarse cuando el paciente presenta escalofros para la bsqueda de
esquizontes maduros. Para P. Falciparum se debe tomar la muestra despus del
acceso febril para observar los eritrocitos con varios trofozoitos antes que estos
desaparezcan en capilares de rganos internos.
Con el colorante Giemsa las estructuras se tien de la siguiente manera:
Plasmodium: Citoplasma azul o azul grisceo.
Eritrocitos: Azulosos, grisceos y en ocasiones rosados.
Ncleo de los Leucocitos: Violeta o morado.
Plaquetas: Violeta ligero o rosa plido.
CUESTIONARIO:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Cuntos tipos de Plasmodium existen y cuales son considerados de

mayor relevancia clnica?
A que otros huspedes afecta la infeccin por Plasmodium?
Dibuje el ciclo vital de Plasmodium Falciparum
Qu otras pruebas diagnosticas existen?
Por qu requiere de un mosquito como husped en el ciclo vital
este parasito?
Chiapas se considera zona endmica a Plasmodium Por qu?
Qu tipos del gnero habitan en el estado?
BIBLIOGRAFIA:

75
PRACTICA No.
HEIDENHAIN
16
COLORACION
DE
HEMATOXILINA FERRICA DE
OBJETIVOS:
Identificar la importancia de las tcnicas de coloracin de parsitos.

Identificar las estructuras parasitarias internas.
Aprender a diferenciar los parsitos en genero gracias a la tincin.
FUNDAMENTO:
El trmino mordiente se refiere a cualquier compuesto, aadido antes o despus
de la tincin, que realza las propiedades de tincin de un colorante. Los
mordientes son generalmente metales como el manganeso, crmico, alumnico.
Sin embargo, un mordiente tambin debe ser un compuesto tal como el cido
actico o el pcrico que es aadido para lavar la solucin para realzar el brillo de
una tincin como la eosina o el eritrosin (cido actico) o colorantes violeta (cido
pcrico). Los tomos metlicos (ligandos) pueden formar un complejo multitomo
con molculas de agua in situ. Durante la tincin, algunas de estas molculas de
agua pueden ser intercambiadas por los grupos ligando de la molcula colorante

76
formando un quelato entre el colorante y el metal, al que se refieren algunas veces

como lago.
Tradicionalmente, los metales quelantes se han denominado mordientes, y han
sido usados para facilitar la tincin principalmente de cidos nucleicos. Los do
complejos colorante/mordiente ms comunes son las tinciones nucleares
Hematoxilina y Gallocianina, y el metal quelante usado puede ser Al 3+, Fe3+/2+ o
Cr3+. El agente quelante puede determinar la selectividad del colorante. La
Hematoxilina-crmica es especfica para cidos nucleicos, pero tie ms bien
poco. La Hematoxilina Frrica tie rpidamente, pero puede producir una tincin
de fondo mayor.
Esta tcnica ha sido clsica para la tincin de protozoos intestinales,
principalmente de las amibas, pues hace resaltar la morfologa nuclear,
caracterstica muy importante para el gnero y especie
Esta tincin permite colorear estructuras internas de especmenes adultos o

fragmentadas del mismo. Se usa en casos de cestodos y trematodos.
MATERIAL Y EQUIPO:
portaobjetos
Cubreobjetos
Frasco coplin o placas Petri
Colorante de hematoxilina
Cytoseal o blsamo de Canad
Alcoholes 50%, 70%, 85%, 95%
Solucin Schaudinn
Solucin mordiente de sulfato de fierro y amonio
Tintura de yodo
Solucin fisiolgica
Microscopio binocular
METODO:

77
a) Preparar un set de placas Petri 100 x 150 mm o el frasco Coplin con los
reactivos correspondientes y con ayuda de un estilete o pinza curva hacer
un frotis fino en la lmina o la laminilla, esta ltima sujeta al porta-laminilla.
b) Si la muestra es dura, hacer una emulsin previa en solucin fisiolgica,
realizar el frotis y pasaren solucin Schaudinn por 3 a 5 minutos.
c) Pasar por alcohol 70% ms 1 a 2 gotas de tintura de yodo por 5 minutos
d) Pasar por alcohol 70% y 50% de 5 a 10 minutos cada vez.-Pasar por agua
corriente por 5 a 10 minutos
e) Pasar por la solucin mordiente 2% de 5 a 10 minutos y enjuagar con agua
corriente.
f) Pasar por colorante por 5 a 10 minutos (1 mL de solucin colorante
hematoxilina y 9 mL de agua)
g) Lavar con agua y pasar por una segunda solucin de mordiente al 2% para
decolorar, observando la intensidad de la coloracin
h) Lavar con agua corriente a chorro continuo de 10 a 15 minutos
i) Deshidratar pasando por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 10 a 15
minutos cada uno
j) Aclarar con xilol agitando el frotis, montar con cytoseal o blsamo de
Canad y observar al microscopio.
k) Informar el nombre del parsito y el estadio evolutivo
NOTA:
Observar con objetivo de inmersin 100x. El citoplasma de los parsitos se
observan de color azul oscuro y los ncleos de color morado intenso a negruzco.
INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algn parasito en la
tincin se deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como
su estadio evolutivo.
CUESTIONARIO:
1. Cul es la importancia de este mtodo?
2. Por qu es de relevancia teir las estructuras internas?
78
3. Qu otros colorantes hacen lo mismo que la hematoxilina?

4. Diga que parsitos se pueden identificar con esta tcnica.
BIBLIOGRAFIA:
PRACTICA No. 17: TCNICA DE ZIEHL NEELSEN

(MODIFICADA PARA OBSERVAR COCCIDIAS: CRIPTOSPORIDIUM)
OBJETIVOS:
Conocer el fundamento de la tcnica de Ziehl Neelsen.

Aprender las caractersticas del genero Cryptosporidium.
Observar los ooquistes del genero Cryptosporidium.

79
FUNDAMENTO: Este mtodo se basa en que las paredes celulares de ciertos

parsitos y bacterias contienen cidos grasos (por ejemplo, el cido miclico) de
cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de
resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes
bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistencia bacilos cido-alcohol
resistentes o BAAR. Las Mycobacterium micobacterias como Mycobacterium
tuberculosis M. tuberculosis y Mycobacterium marinum M. marinum y los parsitos
cocos. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el
colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.
Se basa en el comportamiento acido-resistente de la cubierta de estos parsitos,
los cuales se tien de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul, dependiendo
del colorante de contraste usado.
El Cryptosporidium es un parsito; desde su descripcin a principios del presente
siglo slo en los ltimos aos, dentro del contexto de la epidemia del SIDA, se ha
reconocido su importancia como causa de enfermedad en humanos; hasta 1995
fue considerado un comensal y en 1976 se comunic la criptosporidiasis humana
como causa grave de enteritis.
Aunque el nmero de especies y cepas de este protozoo no se conoce con
exactitud se consideran, basndose en el tamao de los ooquistes, dos especies
que afectan a los mamferos: C. parvum y C. muris; el primero se cree que es el
que causa enfermedad diarreica en los humanos. Como caracterstica tintorial sus
ooquistes tienen propiedades de cido-alcohol resistencia
El Cryptosporidium se desarrolla por completo en el interior de un solo husped.
La infeccin se inicia por ingestin, tal vez tambin por inhalacin, de ooquistes
que completan su ciclo vital en el interior del organismo que han infectado.
El Cryptosporidium puede transmitirse de humanos a humanos, de humanos a

animales y de animales a humanos. Adems de la contaminacin fecal del medio
ambiente puede producirse la diseminacin a travs del agua, de los alimentos e
incluso del aire, a travs de las manos o de los objetos contaminados.

80
La diseminacin interpersonal es ms fcil entre los nios asistentes a guarderas,

entre los contactos intrafamiliares del caso ndice y entre pacientes hospitalizados
y el personal sanitario
MATERIAL Y EQUIPO:
Portaobjetos
Cubreobjetos
Puente para tincin
Fucsina fenicada
Verde de malaquita o azul de metileno
acuoso
Metanol
Hidrxido de sodio al 4%
Alcohol acido
METODO:
a) Realizar un frote de heces en el portaobjetos y dejar secar.
b) Colocar las laminas sobre el puente de tincin
c) Fijar la lamina con alcohol metlico de 2 a 3 minutos y dejar secar
d) Agregar hidrxido de sodio, sobre el preparado por un minuto y eliminar el
exceso con agua de la llave.
e) Cubrir la lamina con fucsina fenicada (previa agitacin del frasco que
contiene dicho reactivo). Por 5 minutos. Es importante recordar que la
fucsina debe ser diluida previamente con agua al tercio (1 ml de colorante
mas 2 ml de agua)
f) Lavar suavemente la lamina con agua corriente
g) Cubrir el portaobjetos con alcohol acido por unos segundos hasta quitar el
colorante.
h) Lavar suavemente la lamina con agua corriente
i) Colocar el colorante de contraste a la lamina que puede ser verde de
malaquita al 1% o azul de metileno al 1.4%, durante 5 minutos( diluidas
previamente al tercio)
j) Lavar suavemente la lamina con agua corriente y secar a temperatura
ambiente.
k) Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount, cubrir
con un portaobjetos.
l) Observar al microscopio.
81
NOTA:
Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora, aparecen de un color
rojo fucsina, sobre un fondo verdoso (verde de malaquita). En algunos no se
colorean bien, pero la refringencia caracterstica permite diferenciarlos.
En caso de encontrar algn parasito acido alcohol resistente en la tincin se
evolutivo.
CUESTIONARIO:
1. Diga cules son las manifestaciones clnicas por la infeccin con
Cryptosporidium?
2. Cules son las medidas que se deben de tener para evitar la infeccin por
este parsito?
3. Cul es el tratamiento ms usado para combatirlo?
4. Para la deteccin de que otros organismos sirve la tcnica de Ziehl
Neelsen?
BIBLIOGRAFIA:

82
ANEXOS

83
PROTOZOOARIOS INTESTINALES:
ENTAMOEBAS:
QUISTE
TROFOZOITO
Entamoeba:

84
AMIBAS DE VIDA LIBRE:
AMEBA
TROFOZOITO
FLAGELADO
TRANSITORIO
QUISTE
Naegleria fowleri
Acanthamoeba sp..

85
Balamuthia
mandrillaris..
PROTOZOOARIOS FLAGELADOS :
*PROTOZOOARIOS INTESTINALES CILIADOS , COCCIDIOS Y
BLASTOCYISTIS:
HELMINTOS :
HUEVOS DE NEMATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :

86
PROTOZOOARIOS INTESTINALES CILIADOS, COCCIDIOS Y

BLASTOCYISTIS:

87
HELMINTOS:
HUEVOS DE NEMATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :

88
HUEVOS DE TREMATODOS PRESENTES EN LAS HECES

89

90

91
PROGLOTIDOS GRAVIDOS Y ESCOLICES DE CSTODOS.
ETAPAS RABDITOIDES Y FILARIFORMES DE UNCINARIAS Y

92
STRONGYLOIDES:
NOTA :
LARVA RABDITOIDE : Larva de vida libre (viven en el ambiente )

93
LARVA FILARIFORME : Tipo de forma larvaria en la cual se transforma una

larva rabditoide al encontrar un hospedero a quien parasitar

94
TAMAO COMPARATIVO DE HUEVOS DE HELMINTOS :

HEMOFLAGELADOS :

95

96
Plasmodium
FASE ERITROCITARIA :
JOVEN

INMADURO
VIEJO
MADURO
MASCULINO
TROFOZOITOS
EZQUIZONTES
97
FEMENINO
GAMETOCITOS
FIJADORES y/o CONSERVADORES

Los fijadores sirven para preservar protozoarios, sin que se modifiquen las
estructuras internas, sobre todo cuando las muestras no pueden ser procesadas
inmediatamente.
El conservador ms utilizado en el laboratorio por econmico y eficaz es la
Solucin de formalina al 10 % tambin conocido como formol, aldehdo frmico o
formaldehido.
Sin embargo a continuacin se har referencia a diversos conservadores que
tambin se utilizan ampliamente dentro del laboratorio de Parasitologa:
I.
PAF (phenol-alcohol-formol):
UTILIDAD:
Conserva las estructuras de los parsitos (trofozoitos, quistes, huevos y larvas),
pudindose incluso observarse en semanas o meses (6) sin que haya ocurrido
deterioro alguno. Es recomendable mantener el fijador preparado en frascos color
mbar. Adems, permite observar el material al microscopio.
MATERIAL:
Fijador PAF
Tionina o azure A
Agua destilada.
Hisopo.
Tubos de centrfuga de 15 mL.
Aplicadores.
Tritn NE. ter.
Embudo de vidrio.
Solucin fisiolgica
QFB. ERIKA PATRICIA CULEBRO CRUZ

98
PROCEDIMIENTO:
a) La muestra de heces se mezcla con el fijador en un recipiente en la
proporcin 1:1.
b) Para la observacin microscpica. Mezclar bien la muestra fijada en PAF y
con ayuda de un embudo y una gasa doblada en un tubo de 15 mL, colar
de 3 a 4 mL del material fijado
c) Agregar solucin salina hasta un volumen de 12 mL y centrifugar a 1800
r.p.m. por 3 minutos.
d) Decantar el sobrenadante y obtener un sedimento de 0,5 mL; si es menor,
agregar de la muestra filtrada una cantidad suficiente y volver a centrifugar
para obtener el volumen del sedimento deseado.
e) Decantar el sobrenadante y completar 12 mL con solucin fisiolgica,
emulsionar con el aplicador centrifugar a 1800 r.p.m. por 3 minutos.
f) Repetir el centrifugado y lavar de 2 a 3 veces ms.
g) Agregar 2 mL de solucin fisiolgica al sedimento final, emulsionar y
obtener una gota del sedimento con una pipeta Pasteur y colocarla en una
lmina portaobjetos
h) Agregar una gota del colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla
cubreobjetos y examinar al microscopio.
i) Al sedimento emulsionado y sobrante del procedimiento anterior, agregar
10 mL de solucin fisiolgica y una gota de Triton NE.
j) Mezclar, agregar 2 mL de ter, tapar con un tapn de jebe o de corcho,
agitar suavemente y destapar.
k) Centrifugar a 2 000 r.p.m. por 3 minutos, decantar y eliminar los detritus de
las paredes del tubo mediante un aplicador cubierto de algodn.
l) Agregar al sedimento 1 2 gotas de solucin fisiolgica, mezclar y obtener
del fondo del tubo con una pipeta Pasteur una gota que se colocar en una
lmina portaobjeto.
m) Agregar una gota de colorante tionina o azure A, cubrir con una laminilla y
observar al microscopio
NOTA:
99
II.
Se debern observar los elementos parasitarios: el citoplasma se ve de

color azul y el ncleo azul oscuro.
PVA (alcohol polivinlico):
UTILIDAD:
Fija y preserva, principalmente los trofozoitos y quistes de protozoarios, por
tiempo muy prolongado sin modificacin importante de su morfologa.
MATERIAL:
Solucin fijadora
Conservador de PVA
Aplicador
Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
Portaobjetos
PROCEDIMIENTO:
a) Colocar en una lmina portaobjetos 1 2 mg de muestra,
b) Secar el frotis, agregar 2 3 gotas de PVA y secar o guardar hasta por 3
meses para colorearlos,
c) Agregar al frasco que contiene la muestra v/v 1 a 4 mL. Generalmente se
puede preservar por meses y cuando se considere conveniente se realizar
la coloracin con Trichrome Gomori Wheatley.

100
III.
MIF (merthiolate - yodo - formol):
UTILIDAD:
Fija y colorea simultneamente los quistes y huevos de parsitos, permitiendo la
observacin inmediata de la muestra.
MATERIAL:
Solucin MIF
Viales de vidrio de 3 a 4 mL.
Aplicador
PROCEDIMIENTO:
a) Colocar 1 2 mL de la solucin MIF en el vial con ayuda del una pipeta.
b) Para la observacin microscpica, colocar 1 2 mL o su equivalente de la
muestra fresca de heces.
c) Mezclar y observar al microscopio.
NOTA:
101
IV.
Se debern observar los parsitos teidos de color amarillo oro.
FIJADORES PARA PRESERVAR HELMINTOS ADULTOS:
UTILIDAD:
Conserva ejemplares adultos para su estudio morfolgico, su preservacin en
museos o para contar con muestras de referencia.
Los ms usados suelen ser formol al 10%, AFA (cido actico - Formol- Alcohol) o
SAF (Acetato sodio - cido actico - formol)
.
MATERIAL:
Formol 10%
Solucin AFA
Alcohol 70%
Glicerina 5%
Lminas portaobjetos.
Pabilo o pesas de metal segn modelo
Frascos boca ancha 150 200 mL.
Placas petri 150 x 100 mm y 240 x 200 mm.
102
PROCEDIMIENTO:
Coleccin y lavado de los helmintos:
a) Todo espcimen aislado del hospedero debe mantenerse fresco (agua o
suero fisiolgico) en un frasco con tapa.
b) Los adultos colectados son lavados varias veces con solucin fisiolgica,
para eliminar la mucosidad y otras sustancias adheridas al cuerpo del
helminto.
c) Finalmente, se lava con agua para permitir el relajamiento del parsitoCalentar a 55C de temperatura, alcohol de 70%, formol 10% AFA, para
que con la fijacin los ejemplares queden estirados y pueda observarse sus
estructuras internas.
Fijacin:
d) Para una conservacin apropiada usar formol 10% (para cestodos y
trematodos) o una mezcla de alcohol 70% (para nematodos), ambos con
glicerina 5%.
e) Todos los frascos deben ser rotulados, indicando el nombre del parsito,
procedencia, localizacin y fecha de coleccin.
f) Para la identificacin, en ocasiones se requiere hacer el aclara miento con
lacto fenol.
Aplanamiento:
g) til para cestodos y trematodos, los cuales se colocan entre lminas y se
les ajusta con el pabilo para favorecer su aplanamiento
h) Se sumerge en formol 10% o AFA de 1 a 3 das, luego del cual se puede
colorear o conservar como pieza de museo en formol 10% y glicerina 5%.
i) Los trematodos como Fasciola y/o Paragonimus pueden prepararse y
conservarse siguiendo los pasos dados para los cestodos.

103
AFA: Fijador conteniendo alcohol, formol y cido actico.

CPSULA OVGERA: Vescula que contiene huevos.
CESTODO: Gusano o helminto platelminto de forma acintada.
COLORANTE VITAL: Colorante que permite ver la estructura interna del
parsito vivo.
COPRO-ANTGENO: Antgeno presente en las heces.
CRISTAL DE CHARCOT - LEYDEN: Cristales de protenas provenientes
de los grnulos de eosinfilos, que se destruyen en el intestino.

DIAFANIZAR: Aclarar para facilitar la visualizacin microscpica
104
DIAGNSTICO PARASITOLGICO: Demostracin directa o indirecta de
alguna forma o estadio evolutivo del parsito.

ENTEROPARSITO: Parsito que tiene por hbitat el tubo digestivo,
especialmente el intestino.
ESPORA: Esporoquiste aislado.
ESPOROQUISTE: Quiste con cubierta definida que contiene esporozoitos.
ESTRBILA: Porcin del cuerpo de las tenias o cestodos formadas por
una cadena de progltidos.

FIJACIN: Conservacin de la estructura del parsito.
HECES: Mezcla de productos de excrecin y secrecin que se eliminan por
el intestino.
HELMINTO: Ser pluricelular con exoesqueleto flexible, ausencia de
apndices y con movimientos reptantes.

HPG: Nmero de huevos por gramo de heces.
HUEVO: Producto de la fecundacin con potencialidad de desarrollar un
nuevo ser.
LARVA: Estadio evolutivo de algunos seres vivos como los helmintos y los
artrpodos en quienes an no se han desarrollado los aparatos genitales.

MIF: Fijador que contiene merthiolate, yodo y formol.
MONTAR: Colocar el espcimen entre lmina y laminilla con blsamo de
Canad para su conservacin permanente.

NEMATODO: Gusano o helminto de forma cilndrica.
OOQUISTE: Quiste que contiene el huevo o cigoto.
PAF: Fijador y/o conservador conteniendo fenol, alcohol y formol para
muestras con parsitos, sobretodo protozoario.

PVA: Alcohol polivinlico, fijador para conservar los parsitos en muestras
fecales.
PARSITO: Ser vivo de escala zoolgica inferior que vive a expensas de
otro de escala superior.

PATOGENICIDAD: Capacidad de producir dao.
PROTOZOARIO: Ser unicelular.

105
PROGLTIDE: Segmento o anillo de la estrbila de las tenias o cestodos y

que puede ser inmaduro, maduro o grvido, segn el estadio de desarrollo
de sus aparatos genitales.

QUISTE: Forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de
una membrana dura e impermeable.

SOLUCIN SOBRESATURADA: Solucin en la cual el soluto est en su
mxima concentracin.
TROFOZOTO: Forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
TREMTODE: Gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo
indivisible.

106

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LIC. EN QUIMICA FARMACEUTICA

MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA

PRACTICA No. 5: METODO DE CONCENTRACION

PRACTICA No. 6: MTODO DE DILUCION DE STOLL.39

PRACTICA No. 10: METODO DE BAERMAN....52

MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA

PRACTICA No. 16 COLORACION DE HEMATOXILINA

MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA

PERFIL DEL EGRESADO

proactivo y con conciencia social. Adems de tener una slida preparacin

Es importante resaltar los principales sntomas y el diagnstico diferencial de las

El endoparsito: es el que penetra en el husped. Por el lugar o localizacin en

MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA

Neisseria gonorrhoeae, Histoplasma Capsulatum, Plasmodium vivax, etc.) o fuera

Parsito Monognico: Es aquel que presenta alteraciones en su

En cuando al nmero de huspedes el parsito puede ser monoxeno o

Parsito estenoxeno: Es aquel cuya selectividad de husped es tan

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En algunos parsitos, la especificidad del husped les obliga a no aceptar

Husped Especfico: Es aquel que rene las condiciones ptimas para el

Cuando la relacin husped parsito presenta variantes, debe considerarse a la

Nosodeme: Hay variantes clnicas en las manifestaciones patolgicas

Los Serodemes; Son variantes inmunolgicas (sexolgicas) que pueden

Cuando existen diferencias anatmicas, fisiolgicas o sexolgicas de una especie

MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA

REGLAMENTO DEL LABORATORIO MULTIDISCIPLINARIO

El laboratorista permanecer en el laboratorio en el horario que le

Mantendr el equipo en su sitio procurando su correcta utilizacin y bajo

MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA

Cualquier material que resulte daado durante la realizacin de la prctica

porcentaje correspondiente al Laboratorio para la calificacin final de la

5. Se deben evitar desplazamientos innecesarios de las muestras por otras

PRACTICA No.1: TOMA DE MUESTRA PARA EXAMEN PARASITOSCOPICO

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Cantidad de muestra requerida: 3-6 grs.

NOTA: Evite la contaminacin de la muestra con orina, papel higinico. Jabn,

Finalmente lleve la muestra al laboratorio lo ms pronto

HECES FECALES DIARREICAS

Cantidad de muestra requerida: 10 ml (un volumen similar al de un cuchara

Se toma un abatelenguas cubierto de cinta

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JUGO DUODENAL Y YEYUNAL

Condiciones del paciente :

El paciente deber recolectar la muestra de esputo en ayunas a primera hora de

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Frasco estril de boca ancha, con tapa de rosca.

NOTA: Si el paciente no puede expectorar,

ENVIO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

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TIEMPO QUE DEMORA

Formalina 10 % Trofozoito de Balantidium coli etc.

10 Giardia, Strongyloides, Paragonimus, Fasciola,

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Naegleria, Acanthamoeba y Balamuthia

Tripanosoma, Plasmodium, Leishmania

Trichinella spiralis (triquinoscopia)

Romero Cabello R. 2007. Microbiologa y parasitologa humana. 3. Edicin.

PRACTICA No. 2 PROCEDIMIENTOS DE

demostracin morfolgica de los parsitos o la respuesta inmune a ellos. El

EXAMEN DIRECTO MACROSCOPICO

FUNDAMENTO: Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas

Deber ser pastosa y dura