Plsticos Bacterianos?

Dr. Jorge Martnez Silva

Profesor Investigador
Facultad de Ciencias Qumicas, UANL

Algunos usos de los Plsticos

Bolsas para compras y empaques de
alimentos
Estructuras mecnicas y de soporte de
todo tipo
Pinturas
Materiales impresos de todo tipo
Piezas de motores de autos
Armas

nfasis Packaging N3 mayo/junio 2007

Requerimientos para el Envasado

Efectivo de Alimentos

No Txico
Proteger de contaminacin microbiolgica
Proteger del ingreso de olores ambientales
Barrera a la humedad y O2
Transparente
Compatible con el alimento
Fcil de abrir
Bajo costo
Deposicin luego del uso: Fcil

Polmeros: Clasificacin
Basada en
Fuentes
Renovables

PLA

Sntesis
Microbiana

obtenido de

maz o almidn
Plsticos

Celulsicos

Plsticos

obtenidos

de Soya
Plsticos

de almidn

Fuentes Petro-Bio
(Mixed)

Sintticas
Petro-basadas

Polisteres

Polihidroxialcanoatos (PHAs)

Polihidoxibutiratoco-valerato (PHBV)

Alifticos

Sorona

Poliuretano
Biobasado

Epxidos
Biobasados

Blendas, etc

Polisteres

Alifticoaromticos

Poliesteramidas
Alcoholes

polivinlicos

Sntesis bacteriana de poli-HAs

Grnulos en el microorganismo

PHB
Luz solar

Cosecha

Direct route

Biodegradacin
Carbohidrato

Proceso
fermentativo

Courtesy: Metabolix & Biomer

Polmero

Producto
plstico

Sntesis bacteriana de poli-HAs

R

Estructura del PHA

H
O

OH

x
n

PHA

PHB
PHV
PHBV (Biopol)
PHBHx
PHBO

- CH3
- CH2CH3
- CH3 & CH2CH3
- CH3 & - (CH2)2CH3
- CH3 & - (CH2)4CH3

R = Hidrocarburo
(hasta C13)

x = 1 a 3 o ms

Courtesy: Metabolix & Biomer

Bioplsticos Bacterianos
Ventajas
Biodegradable
Sntesis amigable al ambiente
Excelente procesabilidad
De fuentes renovables
Excelentes propiedades mecnicas
Termoplstico

Desventajas

Variedad de estructuras

Alto costo de produccin

Estrecha ventana de procesamiento
Ausencia de grupos reactivos
Fragilidad

Propiedades de los polihidroxialcanoatos

Proteccin:
Barrera a la luz
Barrera a gases (O2, CO2, C2H4)
Barrera al vapor de agua
Barrera a la prdida de aromas y sabores

nfasis Packaging N3 mayo/junio 2007

Aplicaciones

Empaquetamiento de
alimentos: recipientes,
filmes, bolsas,
recubrimientos de papel

Matrices liberadoras de
sustancias: frmacos,
insecticidas, herbicidas o
fertilizantes

Aplicaciones

Otros dispositivos como: cuchillas, utensilios,

paales, productos de higiene femenina,
recipientes para cosmticos, shampoo y otros.

Aplicaciones

Otras aplicaciones mdicas: hilos quirrgicos, vendas para heridas,

uso en ortopedia donde se conjuga tambin con propiedades
piezo-elctricas que estimulan el crecimiento del hueso.

Costo de Produccin
Nuevas bacterias
Organismos
recombinantes

Procesos de
fermentacin y
extraccin de PHAs

AMBIENTES DE LAS BACTERIAS

PRODUCTORAS DE PHAs

Aislamiento y Purificacin de Microorganismos

48 aislados
bacterianos

MEDIO BASE
Glucosa-Manitol
Peptona
Extracto de levadura
Nilo rojo
Agar

5,0 g
2,5 g
2,5 g
0,01%
1,2 g

Esquema de Produccin de PHAs por Bacterias Silvestres

120 r.min-1, 30 OC,

24 h.

8000 r.min-1 x 5 min

Lisis: Hipoclorito de Na,

37 OC, 2 h.

8000 r.min-1 /5 min

Cultivo por estras de las cepas en

medio NR (placa), 36 h.

Observacin bajo luz ultravioleta

de las cepas NR positivas.

A. Identificacin de los Aislados Seleccionados

Caractersticas del cultivo
Caractersticas microscpicas
Perfil de oxidacin de azcares (Api 50 CHB)

B. Caracterizacin del Polmero

FTIR

CG-MASAS

43

2000e3

1750e3

1500e3

1250e3

1000e3

750e3

74
42

500e3
57

85

250e3

103
117

0e3

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

105

110

115

120

Seleccin e Identificacin de un
Aislado Productor de Copolmero
48 Morfotipos RN +
3 Morfotipos CG
13 Morfotipos Copolmero

Seleccin de Aislados Bacterianos

Productores de PHA

MORFOTIPOS
NR positivos

Copolmero
Bacillus mycoides FLB2
Homopolmero

Rhizobium tropici 3A

Cromatograma de Gases de steres de Metilo

y Espectro FTIR del PHA de la cepa FLB2

Optimizacin de los Medios de Cultivo

(Agitadora)
SUSTRATOS
Melaza
Extracto

de carne
Extracto de levadura
Sacarosa
Manitol

CONDICIONES
Inculo
18 horas
Concentracin

10%

Agitacin

120 rpm

Temperatura

30 OC

METODO (Box y col., 1988)

Exploratorio
Diseo Factorial 23
Mxima pendiente Bloques al azar
Optimizacin
Diseo factorial 23 con
puntas de estrella
Variable

de respuesta

PHA en mg.L-1

Perfil tpico de una fermentacin

10000

4.5

9000

8000

3.5

7000

6000

2.5

5000

4000

1.5

3000

2000

0.5

1000

PHB mg/L

Abs (600 nm)

0
0

10

20

30

40

50

60

70

80

t (h)
Abs

PHB

Perfil de fermentacin tpica de Rhizobium tropici-3, en

fermentador Inforst HT con vaso de 7,5 L y volumen efectivo
de 5 L de medio optimizado (Lasala, 2000), 500 rpm y 1
v.v.m., 30 2,5C y pH inicial de 6,6 0,3, =0.031 h-1.

Perfil de Fermentacin de
Bacillus mycoides Cepa FLB2
12

20
18

Azucar g/L

14

12
6

10
8

6
4

2
0

0
0

10 12 14 16
Tiempo horas
Biomasa
Azucar

18

20

PHA

22

24

PHA-Biomasa g/L

10

16

Estudio de aplicacin de la tecnologa Fed-Batch.

Estudios de algunos parmetros cinticos de la cepa
Rhizobium tropici-3.
1/ (h)

(h-1)
0.2

0.16

0.12

0.08

0.04

0
0

12

15

18

21

S (g/L)

1/S (g-1/L)
0

0.1

0.2

0.3

0.4

Relacin entre y la concentracin inicial de sacarosa en el medio

de fermentacin y relacin de los inversos de estas mismas
variables.Cultivo en agitadora, 10 h a 70 r.min-1 con regulacin de
la temperatura 322 C, pH inicial= 6.73.

dC/dt(g.h-1)
8

dC/dt (g/h)
8

1
C (g.L-1)

10

12

0
0

t(h)
10

Comportamiento de la velocidad de consumo de sacarosa en funcin

de la concentracin de la misma en el medio optimizado y en funcin
del tiempo. Cultivo en zaranda de 10 horas a 70 rpm con regulacin
de la temperatura 32 2 C, pH inicial= 6.73.

PHB(g/L)
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0

Variante 1

8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30

Variante 2

Variante 3

t(horas)

Variante 4

Perfiles de la produccin de PHB de las cuatro variantes de cultivo por

lote incrementado realizada en frascos de 2L, con 1L de medio
optimizado, agitacin neumtica de 0.5vvm, temperatura 30 2,5 C y
pH inicial de 6,58.
Productividad: Agitadora P= 0.084 g.L-1.h-1
Fermentador de 5L P= 0.90 g.L-1.h-1

Banco de
cepa

Preinculo
1 L con 250 mL de
medio de cultivo
optimizado, 12 h de
cultivo, 100 rpm, 30 0C

Escalado:
Cultivo en 50 L, 500
r.min-1, 1vvm, 30C

Cultivo en
Fermentador
de 5L
Cultivo de 20 h,
500 rpm, 1 wm,
30 0C.

Centrifugacin (Recuperacin
de la biomasa)

Extraccin del polmero (leja de

cloro + EDTA , 37 C, 1.5 h)

Purificacin
Filtracin y destilacin

(Cloroformo,
2h, 45C,
agitacin)

Centrifugacin

Esquema del proceso de escalado de la produccin de

PHB en 50 L.

Conclusiones Generales
Fue elaborado un mtodo de seleccin en
placa
de
cepas
productoras
de
polihidroxialcanoatos .
Coleccin de cepas productoras de niveles
hasta de 8 g.L-1 de polihidroxialcanoatos
empleando sacarosa como fuente de C.
Elaboracin de un esquema de obtencin
del polmero con la reduccin de solventes.

Conclusiones (cont.)

La homogeneidad del sistema es ms

importante que la aireacin.

Los microorganismos empleados son

resistentes a altos esfuerzos cortantes.

El mejor criterio de escalado es el de la

velocidad tangencial.

El pH ptimo inicial es de 6,58 0,32 sin

ajuste posterior.

Conclusiones (cont.)

Las condiciones de fermentacin son:

2224h; inculo de 10 % en fase
exponencial media.

Es posible sustituir el Hipoclorito de sodio

en la primera fase de extraccin por
hidrxido de amonio.

RECOMENDACIONES

Realizar estudios que permitan confirmar la

ruta metablica propuesta que conduce a la
sntesis del copolmero P(3-HB-co-HV)
producido por la cepa de B. mycoides FLB2.

Optimizar las condiciones de agitacin y

aireacin en fermentador de 5 L para
desarrollar una estrategia de produccin del
copolmero sintetizado por la cepa B.
mycoides FLB2

Estudios Fundamentales para la

Aplicacin

Materiales compuestos con hidroxiapatita, de

uso en ortopedia.

Mezclas de PHA con otros polmeros

biodegradables, con el objetivo de disminuir
su costo y tambin variar sus propiedades.

Estudio de los procesos de difusin y

permeacin en membranas densas de PHA,
de vapores de agua, alcohol, etc.

Participantes
Dr. Jorge Martnez, Profesor Titular, Responsable del Laboratorio
de Fisiologa Microbiana, Facultad de Biologa, Universidad de La
Habana, Cuba.
MC Maria Elena Carballo, Profesor Asistente
MC Rubn Solano, Tcnico
Estudiantes de Licenciatura:
Ileana Paneque, Zhenia Banchicova, Maylen Lpez
Estudiantes de Maestra:
Ftima Lasala, Gretel Gmez, Julyet Marrero,
Otros Colaboradores (Instituto de Oceanologa):
MC Roberto Nez
MC Eudalys Ortiz
Ing. Osmar Barbn