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CROMATOGRAFA PLANA
Los mtodos de cromatografa plana incluyen la cromatografa en capa fina, TLC, cromatografa en papel,
PC, y la electrocromatografa, EC.
En todos se emplea una capa horizontal y delgada de un material que es a la vez soporte, o que se coloca
sobre una superficie de vidrio, plstico o metlica.
La fase mvil se mueve a travs de la fase estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o
con un potencial elctrico.
La cromatografa plana en algunas ocasiones se denomina cromatografa bidimensional, lo que no es
estrictamente correcto puesto que la fase estacionaria tiene un grosor definido.
En general, la cromatografa plana se basa en la tcnica de la capa fina, que es rpida, tiene una mejor
resolucin y es ms sensible que la cromatografa en papel.
APUNTES DE CROMATOGRAFA
Aplicacin de la muestra
Es el aspecto ms crtico de esta cromatografa, especialmente en medidas cuantitativas.
Se aplica una disolucin del 0,01 al 0,1 % de la muestra como una mancha a 1 o 2 cm del extremo de la
placa.
La mancha debera tener un dimetro mnimo, 5 mm, para una aplicacin cualitativa y menor para anlisis
cuantitativo.
Para disoluciones diluidas se realizan 3 o 4 aplicaciones superpuestas secando la zona entre las
aplicaciones.
La aplicacin se hace por contacto entre la placa y un capilar que contiene la muestra.
Desarrollo de la placa
Es un proceso anlogo a la elucin en la cromatografa de lquidos, en el cual la muestra es transportada
por la fase mvil a travs de la fase estacionaria.
Una vez depositada la muestra, marcada su posicin y evaporado el disolvente, se coloca la placa en un
recipiente cerrado y saturado con los vapores del disolvente con el que se efectuar el desarrollo,
cuidando que ste no se ponga en contacto directo con la muestra.
Despus que el disolvente ha recorrido las partes de la longitud de la placa se retira sta del recipiente
y se seca.
APUNTES DE CROMATOGRAFA
APUNTES DE CROMATOGRAFA
RF
dR
dM
donde dR y dM son las distancias lineales medidas desde la lnea de aplicacin. Los valores de RF varan de
cero a uno.
Factor de capacidad
Los parmetros de la cromatografa ya vistos se adaptan con facilidad a la cromatografa en capa fina.
Slo se debe relacionar dR y dM con tR y tM, que aqu corresponden a los tiempos necesarios para que la fase
mvil y el soluto recorran una distancia determinada, en este caso dR.
El tiempo de residencia del soluto en la fase mvil es igual a la distancia que recorre dividido por la velocidad
lineal del disolvente u,
tM = dR / u
pero, el soluto no alcanza este punto hasta que la fase mvil ha recorrido la distancia d M.
tR = dM / u
sustituyendo estas ecuaciones en k = (tR - tM) / tM , se obtiene
dM dR
dR
1 dR / dM
dR / dM
1 RF
RF
APUNTES DE CROMATOGRAFA
Alturas de plato
Alturas de plato aproximadas para un tipo de de relleno tambin se pueden deducir en cromatografa en capa
fina.
El nmero de platos tericos viene dado por la ecuacin:
d
N 16 R
w
APUNTES DE CROMATOGRAFA
Mtodos de elucin
La identificacin de los analitos separados tambin se puede confirmar raspando y disolviendo las manchas
en disolvente adecuado, se separa de la fase estacionaria por filtracin y se identifica por E.M., RMN o IR.
Anlisis cuantitativo
Comparando el rea de la mancha de patrones con el analito (semicuantitativo)
Raspar la mancha de la placa, extraer el analito de la fase estacionaria y determinarlo por mtodo fsico o
qumico adecuado.