Professional Documents
Culture Documents
Figura 1
|
La evolucin de descubrimiento de la enzima
y las estrategias de ingeniera de protenas utilizan para
identificar catalizadores deseados. Diseo racional
(B) identifica mutaciones puntuales distintas basado en
estructuras de protenas (A) o modelos de homologa,
mientras que la mutagnesis al azar (c) en combinacin con
cribado o seleccin es la base para dirigido
experimentos de evolucin. La combinacin de estos mtodos
hace que sea posible crear ms pequeo, pero ms inteligente,
bibliotecas (d). La proyeccin clsica de enzimas por
cultivos de enriquecimiento (e) ahora se sustituye por clave
bsquedas de bases de datos con motivos (f) para guiar la identificacin
de nuevas enzimas o aquellos con propiedades deseadas.
Todava en su infancia es la ab initio computacional (o
de novo) el diseo de enzimas (g). Las estructuras en
el fondo se refieren a productos de qumica fina accesibles
a travs de las diferentes oleadas de biocatlisis. (R) mandelonitrilo (izquierda) ya poda obtenerse
Hace 100yr de un extracto de la planta; (1 S, 3 S) -3aminociclohexanol (centro) es hecho por Novartis
utilizando una lipasa inmovilizada; y 6-cloro-2,4,6trideoxyD
-erythrohexapyranoside (derecha) se hace
por DSM en un proceso que requiere una ingeniera
aldolasa para soportar altas concentraciones de
acetaldehdo y para lograr una alta selectividad.
REVISIN DE INVESTIGACIN
odificar biocatalizadores travs de una versin in vitro de la evolucin darwiniana. Los
mtodos se denominan ahora comnmente evolucin dirigida, aunque esto
trmino ha estado en uso desde los experimentos de clulas enteras en 1972
14
. La inicial
versiones de esta tecnologa implican ciclos iterativos de amino- aleatoria
cambios de cidos en una protena, seguido por la seleccin o screening de la
resultante bibliotecas para las variantes con estabilidad mejorada de la enzima,
especificidad de sustrato y enantioselectividad. Los acontecimientos posteriores,
discutido aqu, se han centrado en la mejora de la eficiencia de las indicaciones
la evolucin para crear bibliotecas 'ms inteligentes'. Biocatlisis escala industrial
centrado principalmente en hidrolasas, unos ketoreductases (KREDs), y
regeneracin cofactor y estabilidad de la protena en disolventes orgnicos. En algunos
casos, las vas metablicas fueron optimizados; por ejemplo, combinando
genes de diferentes cepas naturales para producir 1,3-propanodiol (una
monmero de polisteres) en un nuevo husped que permiti pasar de
glicerol a la glucosa ms conveniente como materia prima
15
.
Como resultado de los avances logrados durante la actual ola de biocatlisis, nuevas capacidades notables ahora pueden ser diseados en
enzimas, tales como la capacidad de aceptar sustratos previamente inertes
(un KRED de montelukast
16
o una transaminasa para sitagliptina
17,18
) o para
cambiar la naturaleza del producto que se forma (variantes terpeno ciclasa
que favorecen diferentes terpenos
19
o el metabolismo de amino-cido que hace
alcoholes para biocombustibles
20
). Se necesitan enzimas Novel hoy para convertir
biomasa en biocombustibles de segunda y tercera generacin
21,22
, Materiales
23
y productos qumicos
24
. Las principales novedades que permitieron a esta tercera ola son
ingeniera de protenas avanzada
25-27
(incluyendo la evolucin dirigida), el gen
sntesis, anlisis de secuencias, herramientas bioinformticas
28
y el ordenador
modelado, y el avance conceptual que las mejoras en las enzimas
puede ser ms pronunciada de lo esperado. Enzimas Engineered
puede permanecer estable a 60 UC en soluciones que contienen disolventes orgnicos, puede
aceptar nuevos sustratos y puede catalizar nuevas reacciones no naturales. Esta
ingeniera puede ahora tomar slo unos pocos meses, por lo tanto en gran medida la expansin
las aplicaciones potenciales. En el pasado, un proceso a base de enzimas era
diseado en torno a las limitaciones de la enzima; Hoy en da, la enzima es
diseado para adaptarse a las especificaciones del proceso.