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MANUAL DE PRCTICAS
ANLISIS INSTRUMENTAL
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
INTRODUCCION
Con la amplia gama de tcnicas instrumentales de anlisis con las que se cuenta en la
actualidad y a su incesante desarrollo, el dominio de todos ellas es difcil de abordar en
su totalidad en un curso de licenciatura, por lo tanto es necesario adquirir conocimiento
de una manera general, que nos permita interpretar y manejar datos obtenidos con
cualquiera de ellas.
La gran variedad de tcnicas instrumentadas de anlisis se basan en una relacin que
existe entre la propiedad (absorbancia, ndice de refraccin, pH, rea de pico, potencial,
conductancia, intensidad de corriente, etc.) con la composicin del sistema (anlisis
cualitativo) o bien la cantidad de alguno de sus componentes (anlisis cuantitativo).
Generalmente algunas de las tcnicas se utilizan bsicamente para el anlisis
cualitativo, otras ms en el anlisis cuantitativo y un buen grupo de ellas es capaz de
cumplir con ambas funciones.
La propiedad (P) , no es solamente afectada por la composicin del sistema tambin por
variables como temperatura, presin, tiempo, perturbaciones ocasionadas al realizar la
medicin, presencia de sustancias qumicas interferentes, etc. es por esta razn en este
curso se estudia la relacin entre la propiedad y la composicin; relacin en donde es
necesario ejercer un control efectivo sobre las dems variables que adems de la
composicin afectan la propiedad, todo esto a fin de obtener informacin til desde el
punto de vista analtico de esta manera P ser funcin de la composicin. Pudiendo as
proponer mtodos basados en esta relacin para poder conocer la composicin de cierta
sustancia(s) en muestras de inters.
Este enfoque contribuye a la formacin profesional en anlisis instrumental y al perfil
profesional en su rea.
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
OBJETIVOS
OBJETIVO(S) GENERALES DE LA ASIGNATURA
Que el alumno conozca las tcnicas y mtodos ms utilizados en A. Instrumental al obtener
y utilizar informacin obtenida con estos para en la cuantificacin de sustancias
en
siguientes etapas
1) Realizar una investigacin respecto a un procedimiento base y con ello:
2) Estructurar un diseo experimental (protocolo).
3) Consultar la metodologa propuesta con el asesor con la finalidad de mejora.
4) Desarrollar en laboratorio el diseo propuesto para la cuantificacin de una muestra.
5) Contrastar los resultados obtenidos con el diseo propuesto a fin de identificar fuentes
de error tanto de diseo como experimental a fin de optimizar el protocolo.
6) Desarrollar nuevamente el experimento corregido y cuantificar.
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
Grupo_______
Perodo: 2016Entrega de
productos)
a)Presentacin
b) Informacin sobre el Sistema de Gestin
de Calidad (SGC).
c) Organizacin para trabajo en equipo.
diagnstico,
-Examen diagnstico
evaluado.
-Clculos y soluciones
etiquetadas.
de Anlisis Instrumental.
3
C. Previo 1
C. previo 2
Informe prctica 1
C. previo 3
Informe prctica 2
Informe prctica 3
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
Unidad I /Primer Examen escrito
Asignacin del proyecto para Diseo
Experimental
7
C. previo 4
C. previo 5
Informe prctica 4
C. previo 6
desinfectante
Informe prctica 5
C. previo 7
Informe prctica 6
Informe prctica 7
10
11
Revisin
del
Experimental
Formato
(FDE)
de
Diseo
Avances de diseo
experimentos
preliminares.
13
14
15
Informe de Trabajo
(desocupar gavetas)
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
NMERO Y NOMBRE DE LA
NOMBRE DE LA PRCTICA
PRCTICA
1
UNIDAD TEMATICA EN EL
PROGRAMA DE LA ASIGNATURA
1.1 Concordancia
espectrofotomtrica
de
una
medicin
instrumental
1.2 Preparacin de patrones analticos
espectrofotmetro
Determinacin de Zn por
cromatografa de gases
instrumentacin de
bucal
5
Determinacin de plata en un
4.3
Conocer
desinfectante
potenciometra
instrumentacin
de
en tabletas.
Prctica de Diseo
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
SISTEMA DE EVALUACIN
I.-En Prcticas Convencionales
1) Trabajo de laboratorio (TL) Se evala la calidad de los resultados experimentales, as
como la destreza adquirida en el manejo del equipo y material de laboratorio (10%)
2) Cuestionario previo (CP). Se evala una revisin previa del procedimiento a realizar en
la prctica (10%)
3) Informe de trabajo (IT). Se evala el informe en cuanto a claridad y presentacin as
como la consistencia entre los resultados experimentales y el resultado del anlisis
reportado y estimar si la informacin se proces adecuadamente (80%).
La puntuacin concreta en base 10 para cada punto del informe es:
a) Nombre del experimento, fecha y Datos completos como contenidos del producto
analizado (en caso tenerlo)
concentraciones de estos
(1.0punto).
(5.0 puntos)
(1.5puntos)
e) Referencias consultadas
(0.5puntos)
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
La puntuacin en una escala de 100 puntos se presenta en la siguiente tabla:
TIPO DE ACTIVIDAD
ASPECTO A
EVALUAR
Prctica Convencional
Prctica de Diseo
Examen
# DE ACTIVIDADES
FINAL
REALIZADAS
TL,CP, IT
52
FD, IT
12
destreza
y
3*
habilidades
de
manejo e equipo y (dos escritos y uno oral)
clculos
de
contenido individual
36
100
*Es importante que se acredite al menos uno de los dos exmenes escritos para
considerar el promedio final.
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
las
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
12.- Todas las personas que elaboren disoluciones y/o generen residuos deben etiquetar
correctamente los frascos que se utilicen para este propsito utilizando la etiqueta del
Sistema de Gestin de Calidad.
13.- Los residuos de cada experimento debern tratarse y eliminarse adecuadamente por
los alumnos, previa consulta del diagrama ecolgico incluido en el manual de prcticas y
con el apoyo del asesor.
14.- Cuando el residuo no pueda ser eliminado, el alumno deber resguardarlo, en un
contenedor, debidamente etiquetado y cerrado, y colocarlo en el anaquel destinado para
ello.
15.- Antes de iniciar las actividades experimentales se le solicitar al laboratorista el
material y equipo necesarios, para ello, una persona responsable del equipo dejar su
credencial (nicamente de la UNAM) en depsito y firmar un vale por el material y equipo
recibidos. En caso de que existiera un defecto en el material o equipo recibido, ste deber
ser anotado en el vale.
16.- Es responsabilidad del alumno revisar el estado en que recibe el material, ya que al
trmino de la sesin experimental lo debe regresar en las mismas condiciones en las que
lo recibi y perfectamente limpio.
17.- En caso de extravo o dao del material o equipo de laboratorio, se resguardar el vale
de solicitud de material y la credencial del estudiante responsable del dao o extravo
hasta su reposicin con iguales caractersticas.
18.- Los alumnos que adeuden material de laboratorio, debern reponerlo a la mayor
brevedad posible o a ms tardar el ltimo da de realizacin de prcticas, de lo contrario los
deudores sern reportados al Departamento de Servicios Escolares y no podrn inscribirse
en el siguiente semestre.
19.- El nmero mximo de alumnos que podrn permanecer en el cuarto de balanzas
(L-101-102) ser el mismo que el nmero de balanzas disponibles.
20.- Cuando sea asignada, una gaveta a los alumnos y por razones de olvido o prdida de
la llave, queda prohibido forzarla. En tal situacin los alumnos debern solicitar su
apertura, por escrito, al responsable del laboratorio, previa autorizacin del profesor.
21.- La gaveta podr usarse hasta la semana 15 del semestre por lo que, el grupo de
estudiantes debern desocuparla a ms tardar en la semana 16.
22.- No se permitir el uso de balanzas y equipos a personas ajenas al laboratorio o fuera
del horario de su sesin experimental.
Vo.Bo.: Comit de Calidad del Depto. de Ciencias Qumicas.
Cuautitln Izcalli, Mayo del 2015.
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
PROTECCION PERSONAL
CUANDO EMPIECES A TRABAJAR EN EL LABORATORIO: Te indicarn cmo se
deben utilizar los instrumentos que vayas a usar. Adems, debers saber dnde se
encuentran los extintores, el botiqun, la ducha, los aparatos lavaojos, y las salidas de
emergencia.
ANTES DE EMPEZAR UNA REACCIN: Debers conocer la peligrosidad de los reactivos
que vayas a usar, as como de los productos que se obtienen de la propia reaccin
(toxicidad, inflamabilidad, riesgo de explosin, riesgos biolgicos) y tomars las
precauciones apropiadas (por ejemplo, trabajar en la campana extractora). En cualquier
caso.
AL TERMINAR UNA SESIN: Tendrs que tratar los residuos para eliminar su
peligrosidad o los almacenars adecuadamente clasificados y etiquetados hasta que se
retiren.
AL ABANDONAR EL LABORATORIO: Te asegurars de que no queda encendida la
campana extractora y ningn foco de peligro: gases, agitadores, calentadores, etc.
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
DISEO EXPERIMENTAL
Recomendaciones para realizar el diseo experimental:
Objetivos: Proponer experimentos fundamentados qumica e instrumentalmente
para
experimentos; se debe elaborar un formato que debe considerarse como una gua para
presentarlo a revisin con el asesor en la fecha sealada en el calendario
El formato de diseo experimental debe contener al menos los siguientes puntos:
distribucin equitativa del trabajo para cada integrante del equipo de trabajo.
El
Referencias consultadas
informe
de
Actividades
Final
(despus
de
efectuar
la
experimentacin
correspondiente) debe incluir los puntos anteriores as como el anlisis de resultados y los
clculos de contenido de sustancia en la muestra.
Por ltimo, es necesario hacer una recomendacin. La naturaleza misma del diseo
experimental es dinmica ya que durante su desarrollo se requiere una retroalimentacin
continua y consciente para afinar los aspectos del diseo que se han contemplado. El
hecho de que en esta asignatura se presente una gua para presentarlo a revisin no
niega su dinmica intrnseca, esto es, aunque durante su elaboracin cada estudiante
debe retroalimentarse con la informacin que poco a poco va obteniendo para ir
modificando cada aspecto del diseo en forma lgica y armnica.
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
ACTIVIDADES CONTEMPLADAS PARA LA SEMANA No.1
1. El profesor expondr una introduccin sobre el curso de laboratorio, explicando las
actividades por realizar, el reglamento
y la forma de evaluacin
(ver apartado
POR GRUPO
ESTUDIANTES)
Bata blanca y lentes
Bitcora de trabajo
de proteccin
Libreta y Manual de
Servitoallas
prcticas
8 frascos de plstico de 10 mL
Detergente lquido
1Marcador o
etiquetas pequeas
Franela y escobilln
1 barra magntica
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
ACTIVIDADES CONTEMPLADAS PARA LA SEMANA No.2
1 Se recordar el uso y manejo del material y reactivos que se utilizarn durante el
curso de laboratorio realizando clculos y pesadas en la balanza Analtica de algunas
soluciones de las prcticas que durante el semestre se utilizarn.
2 Recomendar a alumnos con nfasis a leer antes de cada prctica la introduccin y
parte experimental debido a que el cuestionario previo es individual y se aplica antes de
iniciar la sesin experimental.
3 Revisar el material solicitado asignando la gaveta que se ocupar por el grupo,
colocando este material en ella y etiquetando correctamente (Grupo, carrera, profesores,
semestre, etc.)
4 El profesor organizar y repartir el tratamiento, a los equipos de trabajo, de los
residuos generados en cada prctica.
5 Se avisar a los alumnos dnde y cundo se entregar la bitcora calificada cada
semana (de preferencia en un mismo lugar y da aunque la califique un profesor diferente
ya que son dos).
6 Se aplicar y resolver el examen diagnstico.
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
PRCTICA No. 1 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE AZUL DE TIMOL EN UNA MUESTRA DE
RESIDUOS MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIN ESPECTROFOTOMTRICA A pH ALCALINO.
I. OBJETIVOS
II. INTRODUCCIN
El uso de curvas de calibracin para la cuantificacin de analitos es un recurso de gran
importancia en la qumica analtica, sin embargo, existen varios tipos de curvas
dependiendo de las caractersticas particulares del problema a tratar como ejemplo
tenemos a las curvas de calibracin, adiciones patrn, uso de estndar interno, valoracin,
El mtodo o curva de calibracin se utiliza particularmente para analizar mezclas sencillas,
cuando no existen interferencias fsicas o qumicas entre la matriz y el analito de inters
en la muestra problema, en general la respuesta analtica es debida exclusivamente a
dicho analito.
El mtodo consiste en preparar una solucin mediante pesada directa de un patrn
primario, con esta solucin patrn se preparan una serie de soluciones estndar que
cumplan con las siguientes caractersticas:
a) La concentracin del analito se incremente proporcionalmente (por ejemplo 2, 4, 6,
8, 10 ppm).
b) Se deben preparar al menos 5 sistemas (de diferentes concentraciones).
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
c) Los incrementos de concentracin entre los sistemas se recomienda que sean
constantes.
d) Que la matriz qumica donde se preparan los estndares sea semejante a la del
problema (pH, pX, sales, etc.)
Una vez preparados estos estndares, se procede a medir la propiedad o respuesta de los
sistemas en el instrumento adecuado y se obtienen una serie de valores con los que se
construye el grfico de P (propiedad o respuesta) en funcin de Cs (concentracin
estndar). La Figura 1, muestra un ejemplo donde el eje x corresponde a la concentracin
y en el eje y la respuesta o propiedad medida de cada estndar. Se observa que existe
una ecuacin matemtica que relaciona el comportamiento entre las dos variables. En la
mayora de los casos se ajusta a la ecuacin de una recta (y=mX+b) y mediante una
regresin (mnimos cuadrados) se obtiene la dispersin mnima entre los datos y su
ecuacin.
BIOQUIMICO DIAGNSTICO
dispersin de los datos obtenidos, donde una mayor dispersin implica menor precisin.
Para evaluar la dispersin y por lo tanto, la calidad del valor que se reportar, se hace uso
de los parmetros estadsticos como: la desviacin estndar o el coeficiente de variacin
Finalmente, para medir la respuesta de la propiedad P = Absorbancia, en este caso se
utilizar espectrofotometra de ultravioleta-visible (UV/Vis), una tcnica que se revisar
ms a fondo posteriormente y donde la respuesta tiene una relacin
A= K C
Reactivos y Soluciones
6 matraces volumtricos de 10 mL
Agua destilada
vasos de precipitados de 50 mL
2 Pipeta volumtrica de 1 y 2, mL
1 Pipeta volumtrica de 1,2,3,4,5, mL
1 esptula pequea, propipeta
NaOH
Solucin problema
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
2.
Sistemas
BCO
Pdiludo1
Pdiludo2
10
10
10
10
10
10
10
10
timol
40 ppm (mL)
10
10
10
10
10
10
timol
40 ppm (mL)
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BIOQUIMICO DIAGNSTICO
5.-Obtencin de la curva de calibracin: Se mide la absorbancia de los sistemas
preparados para la curva de calibracin (del 1 al 5), a la longitud de onda de mxima
absorcin y graficar A = f (Concentracin de ascrbico).
6. Determinacin de la concentracin de Azul de Timol Problema.
Se mide la absorbancia de los problemas diluidos (1 y 2) y determine la concentracin
Al interpolar en la grfica (recuerde que se realiz una dilucin del problema).
7.- Efectuar la medicin para la prueba de adecuabilidad.- Se mide la absorbancia de
los sistemas preparados para esta prueba y se registran en la tabla correspondiente.
V. RESULTADOS
Tabla - Datos experimentales del espectro de absorcin.
(nm)
500
510
520
530
540
550
560
570
580
590
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
Abs
%T
20
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Tabla . Datos experimentales para la curva de calibracin y el
anlisis estadstico
Concentracin
A1
S
A2
Aprom
Kprom = Aprom/ C
M
Azul
Timol
de
1
2
3
4
5
21
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Tabla.- Prueba de adecuabilidad del sistema permite verificar que el sistema de
medicin funciona apropiadamente, independientemente de las condiciones ambientales)
Sistema
Aprom STD
%RSD
Absorbancia
%RSD un valora bajo (menor al 2%) de este permite afirmar con certeza que el sistema
de medicin funciona apropiadamente a pesar de variaciones ambientales.
BIOQUMICO DIAGNSTICO
reportada en el Manual en caso de estar ya preparada indicar la concentracin
exacta tal como aparece en el frasco.
Preparacin de la muestra; indicando los posibles cambios realizados.
Preparacin de los sistemas de la curva de calibracin; en forma de tabla
incluyendo nmero y nombre. Especificar la concentracin real de la solucin de
NaOH que se emple.
Calibracin del equipo; paso a paso en forma de diagrama de flujo, puede incluir
imgenes o dibujos y ser con base a la explicacin del profesor no a lo
reportado en el Manual.
Realizacin del espectro de absorcin; mismas consideraciones del punto
anterior.
Lectura de los sistemas de calibracin; mismas consideraciones del punto
anterior.
Lectura de los sistemas de adecuabilidad.
Disposicin de residuos; mencionar cmo se dispusieron los residuos en la
sesin experimental.
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla .- Datos experimentales del espectro de absorcin, completa.
Grfico del espectro de absorcin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto de un espectro de absorcin incluye el nombre del analito, la
composicin de la matriz as como las condiciones de amortiguamiento
impuestas, pH por ejemplo, y la concentracin del analito, la cual es bien
conocida ya que se emplea un sistema de la curva de calibracin para su
realizacin), considerar que se incluirn 2 grficos, uno A = f(M) y A= F(mg/L)
Incluir tabla: con nmero y nombre.
No. Sistema
Concentracin (unidades)
Absorbancia promedio
(valor de la
ordenada al origen)
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
No indicar la propiedad y la concentracin del analito como x y y, y tambin
debe incluir Coeficiente de determinacin (r2). Recordar que se tienen que incluir
2 grficos, uno con unidades de concentracin Molar y otro con unidades de
concentracin en ppm, cada uno con las especificaciones citadas anteriormente.
Incluir tabla: con nmero y nombre.
(enfocndose
slo
al
analito
que
se
cuantific
experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cpsula,
por 100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete
[analito]UNIDAD
Abs1
Abs2
AbsPROM
STD
%RSD
Intervalo C.
BIOQUMICO DIAGNSTICO
considerar las diluciones de la muestra (deben coincidir con lo reportado en el
diagrama de flujo en Preparacin de la muestra) y cambio de unidades si se
reporta en otras unidades; al final discutir sobre los resultados obtenidos en
ambas grficas.
Clculo de Factor de respuesta promedio (K prom) y su % RSD.
Tabla de adecuabilidad y datos de % RSD.
DATOS:
pKa(s) de Azul de Timol = 2.0, 8.7 ( color rojo, amarillo, azul respectivamente )
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
PRCTICA No. 2 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE CIDO ASCRBICO (VITAMINA C) EN
TABLETAS EFERVESCENTES MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIN INDIRECTA SIN DILUCIN
BAJO CONDICIONES DE AMORTIGUAMIENTO A pH cido.
I.-OBJETIVOS:
II.- INTRODUCCIN
Los principios de preparacin y trazo de una curva de calibracin ya fueron estudiados en
prcticas anteriores, donde se considera que la respuesta del instrumento es lineal
respecto a la concentracin de la sustancia a cuantificar, sin embargo debe considerarse
que si la curva es indirecta existe una o varias reacciones efectuadas en los sistemas de
preparacin, dado que la sustancia de inters da seal muy pobre o no da seal, este
reactivo que genera la reaccin debe encontrarse en exceso , considerando el siguiente
estado de equilibrio de manera general:
aX
inicio
cZ
Vst Cst
agrega
equilibrio
bY
VyCy
a
VyCy-b/a VstCst
c/a VstCst
[Y] =VyCy - b/aVstCst / Vaforo. Entonces la funcin ser: P = Ky [(VyCy - b/a VstCst )/ Vaforo]
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
Vst, Vy, Vaforo, representan los volmenes de los reactivos utilizados al preparar los
sistemas del estndar, reactivo Y y el aforo utilizado, Cst , Cy
representan las
aforo),
REACTIVOS
Agua destilada
5 matraces volumtricos de 10 mL
2 vasos de precipitados de 40 mL
2 pipeta volumtrica de 0.5 1, 2,3,4,5 mL
pH=4.5
2 pipeta graduadas de 10 mL
1 agitador magntico c/barra
1 embudo con papel filtro
plstico o vidrio.
27
BIOQUMICO DIAGNSTICO
IV.-PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
PREPARACIN DE SOLUCIONES.- Ya se considera la preparacin como viene
indicada para que alcance para todo el grupo, etiquetar para su uso.
1) -- Buffer de acetatos 0.01 M pH = 4.5 (ya est preparado en el anaquel)
2) --Solucin estndar de cido ascrbico: Se pesan 20 mg del reactivo estndar de
cido ascrbico en un vaso de precipitados de 40 mL se disuelven en aproximadamente 5
mL de agua destilada con agitacin magntica, trasvasar al matraz de 10 mL y aforar
con agua destilada.
3) -- solucin stock de cido ascrbico: A 10 mL de Buffer pH= 4.5 se le agrega 2 mL
de la solucin estndar de cido ascrbico y se aforan a 100 mL con agua destilada.
4)--Solucin
de
2,6
diclorofenolindofenol
(DFI):
Pesar
25
mg
de
2,6
destilada.
5) -- Solucin problema: Se pesan 3 tabletas (al menos) de una en una para obtener el
peso promedio y se anota en la bitcora cada peso, se pulverizan finamente en un
mortero.
-- Se pesan 20 mg de
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
2.Tabla Preparacin de Sistemas (curva de calibracin y problema)
Blanco
SP1
SP2
0.5
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Sistema
29
BIOQUMICO DIAGNSTICO
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
Tabla - Datos experimentales del espectro de absorcin.
(nm) 460 470 480 490 500 510 520 530 540 550 560 570 580
A
%T
SP1
SP2
Conc.M del
estndar
Absorbancia
30
BIOQUMICO DIAGNSTICO
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
IV) INTRODUCCIN. Incluir solamente aplicaciones del Mtodo de cuantificacin en las
diferentes reas que contempla su carrera, incluyendo ejemplos (recordar que deben citar
las referencias).
V) DIAGRAMA DE FLUJO. Incluir:
Preparacin del STD; indicando los volmenes, masas y/o concentraciones
reales que se emplearon en caso de una modificacin a la parte experimental
reportada en el Manual. Si se emplean reactivos comerciales incluir la pureza y
densidad (en caso de reactivos lquidos).
Preparacin de la muestra; indicando los posibles cambios realizados. Mencionar
la marca, presentacin y gramaje de la muestra empleada en caso que el alumno
la halla proporcionado.
Preparacin de los sistemas de la curva de calibracin; en forma de tabla
incluyendo nmero y nombre. En el caso del buffer especificar la concentracin y
pH reales con las que se trabajaron, as como del cido ascrbico y DFI.
Calibracin del equipo; paso a paso en forma de diagrama de flujo, puede incluir
imgenes o dibujos y ser con base a la explicacin del profesor no a lo
reportado en el Manual.
Realizacin del espectro de absorcin; mismas consideraciones del punto
anterior.
Lectura de los sistemas de calibracin; mismas consideraciones del punto
anterior.
Disposicin de residuos; mencionar cmo se dispusieron los residuos en la
sesin experimental.
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla .- Datos experimentales del espectro de absorcin, completa.
Grfico del espectro de absorcin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto de un espectro de absorcin incluye el nombre del analito, la
composicin de la matriz as como las condiciones de amortiguamiento
impuestas y la concentracin del analito, la cual es bien conocida ya que se
emplea un sistema de la curva de calibracin para su realizacin), considerar que
se incluirn 2 grficos, uno en funcin de Absorbancia y otro en % Transmitancia.
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
Tabla - Datos experimentales de la Curva de calibracin.
Grfico de la curva de calibracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de calibracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
Adems debe incluir forzosamente: Ecuacin de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/-
(valor de la
ordenada al origen)
No indicar la propiedad y la concentracin del analito como x y y, y tambin
debe incluir Coeficiente de determinacin (r2).
Incluir tabla: con nmero y nombre.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentacin
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete
(enfocndose
slo
al
analito
que
se
cuantific
experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: mg/por
tableta, por 100ml, etc.)
% de contenido (principio activo con respecto al contenido registrado
por el marbete)
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Analizar que cambiara en la respuesta del espectro de absorcin y en la curva
de calibracin si el anlisis se realizara a un pH bsico. Explicar.
Analizar la relacin de las variables involucradas (A y Concentracin) en funcin
de la respuesta grfica y contrastarlas con la Ley de Lambert & Beer.
Calcular el Coeficiente de absortividad molar, incluyendo unidades correctas,
especificando a que sustancia corresponde ese valor.
Incluir los clculos de cuantificacin, en el siguiente orden: Clculo de la
concentracin del STD (debe coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo
en Preparacin del STD), clculo de la concentracin de los sistemas de la
curva, Interpolacin de la propiedad de la muestra en la ecuacin de la curva,
regresin a las diluciones de la muestra (deben coincidir con lo reportado en el
diagrama de flujo en Preparacin de la muestra) y cambio de unidades a las
similares al marbete as como el % de principio activo; esto se debe reportar
con los datos de ambos sistemas problema (Sp1 y SP2), al final discutir sobre los
resultados obtenidos en ambos sistemas.
Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar las posibles
fuentes de error que condujeron a la diferencia con el contenido reportado y las
acciones preventivas que sugieres para la mejora.
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo y a los (particulares).
DATOS
cido ascrbico(C6H8O6) pKas = 4.05, 7.25
2,6 diclorofenolindofenol ( C12H7Cl2NO2 ) pKa= 5.758 (forma cida roja, bsica azul)
C6H7O6 - / C6H6O6 + H+ + 2e- Eo = 0.13 V ( a pH=4.5)
C12H7Cl2NO2 / C12H9Cl2NO2
Eo = 0.43 V ( a pH=4.5)
(roja)
(Incolora)
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
PRCTICA No. 3 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE ZINC EN UN MULTIVITAMNICO
MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIN POR ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN
ATMICA
I. OBJETIVOS
II. INTRODUCCIN
La curva de calibracin se prepara mediante diluciones de una solucin estndar (stock)
de la misma naturaleza del analito a determinar en la muestra, en un intervalo que pueda
ser trabajado en el instrumento y la muestra se prepara de manera tal que la
concentracin del analito en la muestra o en su dilucin se encuentre dentro de dicho
intervalo.
Las soluciones preparadas se llevan al instrumento de medicin y se registra una
respuesta P para cada dilucin de estndar y de muestra. Los resultados se grafican P=
f(concentracin de cada dilucin del estndar). Se debe evaluar la linealidad de la
respuesta en relacin a la concentracin del analito mediante la inspeccin grfica y se
efecta adems la regresin lineal para determinar la mejor ecuacin que exprese el
comportamiento de la misma. La interpolacin de la seal de la muestra (o su dilucin) en
la recta permite conocer la concentracin de esta.
La Espectrometra de Absorcin Atmica (EAA) se utiliza habitualmente en la
determinacin cuantitativa de soluciones de iones metlicos Se ha aplicado a
determinacin de hasta 70 elementos, en concentraciones trazas (ppb) y hasta 1%. Cabe
mencionar que esta tcnica no diferencia estados de oxidacin de los metales, por lo que
solo se mide la cantidad de metal total.
Previo a la cuantificacin por EAA es necesario realizar una digestin cida a fin de
eliminar la presencia de materia orgnica, an en muestras lquidas y adems para
36
BIOQUMICO DIAGNSTICO
solubilizar los metales, sobretodo en muestras slidas. Para ello se utiliza normalmente
cido ntrico concentrado y calor, hasta que no se generen humos amarillos, reflejo de
que todava hay una reaccin redox presente.
El zinc es un nutriente que nos aporta casi todas las enzimas de la piel, incluyendo
aquellas que se encargan de crear el colgeno y producir nuevas clulas, tanto el zinc
como el hierro son fundamentales en la produccin de clulas en los folculos capilares y
en el transporte de oxgeno, etc.
A continuacin, se presenta un esquema de un espectrofotmetro de absorcin atmica
con flama (EAA-F).
37
BIOQUMICO DIAGNSTICO
III. EQUIPO(S), REACTIVO(S) Y MATERIAL(ES)
MATERIAL
1 piseta y 1 esptula
REACTIVOS
Acido ntrico R.A.
2 matraces volumtricos de 10 mL
3
vasos de precipitados de 50 mL
Multivitamnico
Fortimin (o sol. oral
infantil de marca libre)
Nitrato de Zn
1 parrilla con agitador magntico c/barra
Solo un equipo pedirlo
6 tubos de ensaye con gradilla
6 Matraces volumtricos de 10 mL
EQUIPO
Espectrofotmetro de
absorcin atmica
1 Matraces volumtricos de 25 mL
1Pipeta volumtrica de 1, 2, 3, 4, 5 mL
38
BIOQUMICO DIAGNSTICO
*No sobrepasar la temperatura y tener paciencia hasta que la solucin quede lo ms transparente
posible
Pdiludo
0.12
10
10
10
10
10
10
10
3. Obtencin de resultados
a) Optimizar las condiciones de medicin en el equipo (EAA-Fl).
Siguiendo el programa que controla el equipo, revisar que estn las siguientes
condiciones: muestreo manual, mezcla de gases = acetileno /aire, seal absorbancia,
posicin correcta de la lmpara, longitud de onda () 213.9 nm, ancho de banda = 0.7,
voltaje de la lmpara =15 A, etc. (para determinacin de zinc)
b) Optimizacin de la lmpara de ctodo hueco.
El procedimiento se realizar siguiendo las indicaciones del profesor para alinear la
lmpara de ctodo hueco hacia el monocromador y la posicin del quemador.
c) Medicin de la Absorbancia.
Considerando las indicaciones del programa de trabajo del equipo, primero se emplea
agua destilada y despus el blanco reactivo (sistema blanco) para calibrar la seal a cero.
Despus se solicitan las soluciones estndar y problemas, anotar la lectura promedio de
las mediciones que realiza (Tabla 2) y graficar los resultados que se van obteniendo.
39
BIOQUMICO DIAGNSTICO
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
Tabla 1. Medicin a absorbacia de los sistemas para la curva y problema
Sistema
Zn(ppm)
Abs.
estndar
medida
1
2
3
4
5
Pdiludo
40
BIOQUMICO DIAGNSTICO
VI. INSTRUCCIONES PARA EL INFORME DE TRABAJO
ESQUEMA Y PUNTOS MNIMOS A EVALUAR PARA LA REALIZACIN DEL
INFORME DE TRABAJO.
1.- Datos Generales
I) CARTULA. Incluir en ste orden: Nombre de la Universidad, nombre de la Facultad,
nombre de la Seccin, nombre de la asignatura comenzando con Laboratorio de,
Nmero y nombre de la prctica, Nmero de equipo, Nombre de los integrantes
(solamente de aquellos que participaron en su realizacin, se dar por entendido que los
que no aparezcan no recibirn calificacin correspondiente a esa prctica. Nombre de los
profesores (incluir grado: QFB, Q, M en C, Dr., etc.), Fecha de realizacin de la prctica y
Fecha de entrega de reporte.
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
41
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Preparacin de los sistemas de la curva de calibracin; en forma de tabla
incluyendo nmero y nombre. En el caso de la solucin cida indicar la
concentracin molar empleada.
Optimizacin del equipo; paso a paso en forma de diagrama de flujo, puede
incluir imgenes o dibujos y ser con base a la explicacin del profesor no a lo
reportado en el Manual. Recuerde especificar la mezcla de gases, longitud de
onda y voltaje de la lmpara que realmente se emplearon.
Optimizacin de la lmpara de ctodo hueco; mismas consideraciones del punto
anterior.
Calibracin con el sistema blanco y lectura de los sistemas de la curva de
calibracin; mismas consideraciones del punto anterior. No olvidar mencionar qu
se debe hacer una vez que se termin de usar el equipo ya para apagarlo.
Disposicin de residuos; mencionar cmo se dispusieron los residuos en la
sesin experimental.
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla No. 1.- Datos experimentales de la Curva de calibracin. Adicionando una
columna ms donde coloquen la concentracin molar (M) de cada sistema.
Grfico de la curva de calibracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de calibracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
Adems debe incluir forzosamente: Ecuacin de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/-
(valor de la
ordenada al origen)
No indicar la propiedad y la concentracin del analito como x y y, y tambin
debe incluir Coeficiente de determinacin (r2). Recordar que se tienen que incluir
2 grficos, uno con unidades de concentracin Molar y otro con unidades de
concentracin en ppm, cada uno con las especificaciones citadas anteriormente.
Incluir tabla: con nmero y nombre.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentacin, Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete (enfocndose slo al analito que se cuantific)
Resultado experimental (reportado como en el marbete
% de principio activo con respecto al marbete
42
BIOQUMICO DIAGNSTICO
3) ANLISIS DE RESULTADOS:
Incluir la copia de la hoja del Manual del equipo de Absorcin atmica para la
medicin de Zn.
Calcular el pH en los sistemas (es el mismo) en base a la concentracin
utilizada de HNO3 y ver si es una condicin de amortiguamiento.
Establecer que especie de Zn(II) es la representativa que tienen los sistemas
antes de medir, utilice una escala de zonas de predominio para Zn(II).
Justificar en base al clculo de solubilidad molar condicional (SM) que el Zn(II)
no ha precipitado bajo las condiciones de pH amortiguado y por ende es posible
el anlisis sin interferencias.
Analizar los criterios qumicos que se emplearon para elegir la ptima, se
puede apoyar con la curva de calibracin, la hoja para medicin de Zn por
absorcin atmica y al rango de concentraciones que se manejaron
experimentalmente en la curva de calibracin.
Describir brevemente con sus propias palabras como funciona la lmpara de
ctodo hueco y como se lleva a cabo el proceso de nebulizacin y atomizacin.
Mencionar las posibles interferencias que se pueden llevar a cabo y cmo
evitarlas para que no afecten en la medicin del Zn.
Analizar la relacin de las variables involucradas y contrastarlas con la Ley de
Lambert & Beer.
Calcular el Coeficiente de absortividad molar, incluyendo unidades correctas, la
manera de cmo se calcul con la grfica y su interpretacin.
Escribir la reaccin que se lleva a cabo en la Digestin cida con HNO3
concentrado, justificando el nombre de la entidad qumica que se genera en
forma de gas caf rojizo y el por qu se realiz en la prctica.
Incluir los clculos de cuantificacin, en el siguiente orden: Clculo de la
concentracin del STD (debe coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo
en Preparacin del STD), clculo de la concentracin de los sistemas de la
curva, Interpolacin de la propiedad de la muestra en la ecuacin de la curva,
considerar las diluciones de la muestra (deben coincidir con lo reportado en el
diagrama de flujo en Preparacin de la muestra) y cambio de unidades a las
similares al marbete as como el % de principio activo; al final discutir sobre los
resultados obtenidos.
43
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles
errores que condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que
cometi y las acciones preventivas que sugieres para la mejora.
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo y a los redactados por ustedes (particulares).
Datos
Zn(OH)nn-1 = log 1= 4.4 , log 3= 14.4, = log 4= 15.5
Zn(OH)2=15.68
o
HNO3 / NO2 E = 0.79 V
C12H22O11 CO2 (considere un potencial menor al HNO3)
(sacarosa)
44
BIOQUMICO DIAGNSTICO
1 SESION DE EJERCICIOS
1.- El coeficiente de Absortividad Molar de una solucin acuosa de fenol a 211 nm es de
6170 cuando se mide en celdas de 1 cm, calcular el intervalo de concentraciones en el
cual La absorbancia no es menor a 0.15 ni mayor de 0.8.
2.-Trazar la curva de Calibracin espectrofotomtrica de Bi(III) Utilizando Bi(III) 1x10-3 M
como stocK a pH = 1.0 , si el coeficiente de absortividad molar del Bi(III) es 5300 a
=265 nm. Por AA
3.- Para determinar la glucosa en un suero sanguneo* se prepararon los siguientes
Sistema
NaOH 0.1 M
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
Suero sanguneo *
0.1
0.1
0.1
10
10
10
10
10
10
10
10
Absorbancia a 420 nm
1.42
1.07
0.80
0.45
0.05
0.885
0.876
0.895
45
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Sistema
Bromhexina
Ampicilina
0.5698
0.659
0.5841
0.676
0.6113
0.674
0.5817
0.677
0.5852
0.657
0.5398
0.664
Promedio
Desviacin Estndar
CV %
1.95
2.9
3.85
4.6
4.95
28
37.3
48.4
62.7
69.4
ml
Respuesta
14.2
46
BIOQUMICO DIAGNSTICO
PRCTICA No. 4 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE CLORHIDRATO DE FENILEFRINA EN UN
PRODUCTO FARMACUTICO (TABLETAS Y/O GOTAS) MEDIANTE UNA CURVA DE CALIBRACIN
POR CROMATOGRAFA DE LQUIDOS DE ALTA RESOLUCIN (HPLC).
I. OBJETIVOS
II. INTRODUCCIN
La Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin es la tcnica de separacin ms
ampliamente utilizada en la industria, debido a su sensibilidad. Su fcil adaptacin a
determinaciones cuantitativas es idnea para sustancias no voltiles o termolbiles de
aplicacin en la industria, en muchos campos de la ciencia y para la sociedad en general.
En la Cromatografa de Lquidos de Alta Resolucin, se ponen en contacto dos fases
inmiscibles, una mvil y la otra estacionaria. Una muestra que se introduce en la fase
mvil es transportada a lo largo de la columna que contiene a la fase estacionaria
distribuida. Los componentes separados emergen en orden creciente de interacciones
con la fase estacionaria. La migracin depende de la solubilidad de los solutos en fase
mvil o estacionaria.
Los mtodos de evaluacin para las determinaciones cuantitativas por medio de HPLC
son variados. Sin lugar a duda, la calibracin con estndares es el mtodo ms utilizado
El xito de la separacin para un compuesto dado depende de las condiciones de
operacin como son: tipo y longitud de columna, proporcin y tipo de fase mvil, velocidad
de flujo de la fase mvil, etc.
47
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Componentes bsicos que integran un equipo de HPLC
Balanza analtica
1 agitador magntico c/barra
2
Trietanolamina
matraces aforados de 25 mL
1 esptula y piseta
cido actico
6 matraces aforados de 10 mL (grupo)
2 vasos de precipitados de 50 ml
Clorhidrato de Fenilefrina
1 pipeta graduada de 2 y 6 mL
paracetamol)
48
BIOQUMICO DIAGNSTICO
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.- PREPARACIN DE SOLUCIONES (verificar en el anaquel las soluciones ya
preparadas y en su caso solo utilizarlas)
-- FASE MOVIL [c. Actico-Trietanoamina-H2O (1.5:0.5:98)]
Se filtra al vaco a travs de una membrana con dimetro de poro 0.45mm.
Se coloca en un frasco perfectamente limpio y se lleva al ultrasonido 15 minutos.
-- SOLUCIN ESTNDAR DE FENILEFRINA
Se pesa en un vaso de precipitados de 50 mL, con balanza analtica, 20 mg del
estndar de fenilefrina, se disuelve en aproximadamente 20 mL de agua desionizada
con agitacin y se afora a 25 mL con fase mvil (Soln. A).
De la soln. A se toma una alcuota, con pipeta volumtrica, de 1 mL llevando a un
aforo de 25 mL con agua desionizada (Sol. Stock)
--- SOLUCIN PROBLEMA DE FENILEFRINA
Solucin Oftlmica.-Se toma una alcuota de 30 L de la solucin oftlmica*, se
adicionan a aproximadamente
desionizada(Soln.P1).
49
BIOQUMICO DIAGNSTICO
85
BIOQUMICO DIAGNSTICO
2.-TABLA 1 Preparacin sistemas CURVA DE CALIBRACIN Y PROBLEMAS
Sistemas
Pdil.1
Pdil.2
Soln. P (1 )
soln. oftlmica
Soln. P (2)
tabletas
10
10
10
10
10
10
10
Trasvasar
los
sistemas
debidamente
etiquetados
frascos
de
plstico
de
columna
Mvil
C-18
0.8 mL/min
UV/VIS
Longitud
de Volumen
onda
Inyeccin
272nm
20L
de
51
BIOQUMICO DIAGNSTICO
3.-PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
A) Fijar el flujo de la fase mvil en la bomba
B) Ajustar la longitud de onda del detector
C) Iniciar el flujo de la fase mvil por la columna durante 10 min para asegurar la
remocin de posibles compuestos retenidos de la columna.
D) Inyectar 20L de las soluciones estndar, iniciando con el menos concentrado.
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
Llenar la siguiente tabla con los resultados del cromatograma o en su caso efectuar el
clculo (con la frmula pertinente)
(sistemas).
Sistema
Concentracin (ppm)
Tr (min)
rea
Altura
AEPT
1
2
3
4
5
6
7
Tr= tiempo de retencin, W= ancho de pico a la base, N= Nmero de platos tericos,
AEPT= altura equivalente de un plato terico, ppm (partes por milln).
52
BIOQUMICO DIAGNSTICO
53
BIOQUMICO DIAGNSTICO
IV) INTRODUCCIN. Incluir solamente aplicaciones de la Tcnica instrumental en las
diferentes reas que contempla su carrera, incluyendo ejemplos (recordar que deben citar
las referencias).
V) DIAGRAMA DE FLUJO. Incluir:
Preparacin del STD; indicando los volmenes, masas y/o concentraciones
reales que se emplearon en caso de una modificacin a la parte experimental
reportada en el Manual. Si se emplean reactivos comerciales incluir la pureza y
densidad (en caso de reactivos lquidos). ***
Preparacin de la muestra; indicando los posibles cambios realizados. Mencionar
la marca y presentacin de la muestra empleada en caso que el alumno la halla
proporcionado. Si trabajaron con tabletas y gotas se debe describir la preparacin
por separado de cada muestra. Mencionar la composicin y proporcin de la
Fase mvil que se emple y describir brevemente cmo y con qu se llev a
cabo el proceso de filtracin. No olvidar mencionar el proceso de sonicacin.
Incluir tabla:
Peso de polvo de tableta empleada
(unidades) o Volumen medido de gotas
Peso promedio por tableta (unidades):
Preparacin de los sistemas de la curva de calibracin; en forma de tabla
incluyendo nmero y nombre.
Optimizacin y preparacin del equipo; paso a paso en forma de diagrama de
flujo, puede incluir imgenes o dibujos y ser con base a la explicacin del
profesor no a lo reportado en el Manual. Recuerde especificar el lavado previo de
la columna (Fase estacionaria) y con qu Fase mvil, tipo de columna empleada
(Tipo, marca y longitud), Velocidad de flujo impuesto en la bomba, tipo de
detector y longitud de onda empleada. No es necesario mencionar las
condiciones impuestas en el integrador.
Lectura de los sistemas de la curva de calibracin; mismas consideraciones del
punto anterior. Enfatizar cmo se debe cargar la jeringa con la muestra para
inyectar y propiamente el proceso de inyeccin de la muestra al equipo. No
olvidar mencionar qu se debe hacer una vez que se termin de usar el equipo
ya para apagarlo.
54
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Disposicin de residuos; mencionar cmo se dispusieron los residuos en la
sesin experimental.
2) RESULTADOS. Incluir:
Incluir los cromatogramas con nmero y nombre, tanto de TODOS los sistemas
de la Curva de calibracin como de su(s) muestra(s). Recortar y pegar de forma
limpia y ordenada, no solamente engraparlos, y sombrear con marcatextos los
datos del pico de la fenilefrina.
Tabla No. 1.- Datos experimentales de la Curva de calibracin y parmetros
cromatogrficos. Recuerda que la altura ser medido con una regla ya que es un
dato que no da el cromatograma. Incluir el clculo del Intervalo de confianza
para el tiempo de retencin y el nmero de platos toricos.
Grfico de la curva de calibracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de calibracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
Adems debe incluir forzosamente: Ecuacin de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/-
(valor de la
ordenada al origen)
No indicar la propiedad y la concentracin del analito como x y y, y tambin
debe incluir Coeficiente de determinacin (r2). Recordar que se tienen que incluir
2 grficos, uno con rea como propiedad y otro con altura, cada uno con las
especificaciones citadas anteriormente.
Incluir tabla: con nmero y nombre. Si emple 2 muestras, sern 2 tablas, uno
por cada muestra.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentacin
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete
(enfocndose
slo
al
analito
que
se
cuantific
experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cpsula,
por 100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete
55
BIOQUMICO DIAGNSTICO
3) ANLISIS DE RESULTADOS. Incluir:
Calcular el pH y pAcO de la Fase mvil, considerando su preparacin y los
datos de pKas correspondientes.
Trazar el diagrama trivial de zonas de predominio para las especies de
fenilefrina y con base a esta indique la especie representativa presente en la
separacin a las condiciones de amortiguamiento.
Analizar los criterios qumicos que se emplearon para elegir la ptima de
lectura en el equipo.
Analizar qu tipo de cromatografa se emple con base a las polaridades de la
Fase mvil y Fase estacionaria y tambin con base a la proporcin de la Fase
mvil a lo largo de la corrida cromatogrfica, indicando el orden de separacin
de los analitos (que se presentaron en el cromatograma) con base a su
polaridad (quin saldra primero y al ltimo y porqu).
Mencionar que datos del cromatograma usaron para IDENTIFICAR el pico de la
fenilefrina y que datos usaron para CUANTIFICAR, indicando porqu.
Discutir cul es el motivo del porqu se les sugiere muestras farmacuticas sin
paracetamol.
Realizar el anlisis e interpretacin correspondiente al valor del coeficiente de
determinacin para la validez de los resultados de cuantificacin.
Incluir los clculos de N (# de platos tericos) y AEPT (o H) para cada sistema;
adems, calcular el tR promedio, N promedio y AEPT promedio y realizar el
anlisis correspondiente de estos parmetros cromatogrficos para justificar si
la separacin y corrida cromatogrfica fue eficiente.
Incluir los clculos de cuantificacin, en el siguiente orden: Clculo de la
concentracin del STD (debe coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo
en Preparacin del STD), clculo de la concentracin de los sistemas de la
curva, Interpolacin de la propiedad de la muestra en la ecuacin de la curva,
regresin a las diluciones de la muestra (deben coincidir con lo reportado en el
diagrama de flujo en Preparacin de la muestra) y cambio de unidades a las
similares al marbete as como el % de principio activo; esto se debe reportar
para cada una de las muestras que se trabajaron y cada una empleando la
curva con rea y con altura, al final discutir sobre la variabilidad de ambos
resultados.
56
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles
errores que condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que
cometi y las acciones preventivas que sugieres para la mejora.
4) CONCLUSIONES. Con base en los objetivos de la prctica y a los redactados por
ustedes (particulares).
5) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS. Debern ser citadas ya sea en la introduccin o
en el anlisis de resultados en caso que se hallan empleado.
DATOS
57
BIOQUMICO DIAGNSTICO
VII. ORIENTACIONES PARA EL TRATAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS
Procurar generar y guardar la menor cantidad de residuos. Aquellas soluciones que
puedan ser re-utilizadas deben emplearse o bien ser desechadas adecuadamente
58
BIOQUMICO DIAGNSTICO
59
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Los enjuagues bucales llevan la finalidad primordial de corregir el mal aliento de origen
bucal, tornndolo agradable. Para ello, deben controlar el desarrollo bacteriano y dejar la
boca agradablemente fresca, por eso integran en su composicin etanol.
MATERIAL
de ionizacin de
vasos de precipitado de 50 mL
1piseta
Alcohol n-proplico
EQUIPOS
flama
1 jeringa para CG de 10 L
1 micropipeta de 100 a 1000 L
60
BIOQUMICO DIAGNSTICO
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Preparacin de soluciones
Solucin estndar externo. Tomar 200 L de etanol y adicionar 800 L de agua
.
2.- DESARROLLO EXPERIMENTAL
Conectar y verificar las conexiones elctricas del equipo
Abrir las vlvulas de los tanques de gas (nitrgeno e hidrgeno) y las llaves de paso.
Encender el equipo y dejarlo calentar.
a) Seleccionar las condiciones de medicin en el equipo (CG-FID).
Siguiendo la pantalla y el programa que controla el equipo, revisar que estn las
siguientes condiciones.
61
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Tabla 1. Parmetros a emplear para la separacin de alcoholes por CG-FID
PARMETRO
CONDICIONES
Columna
DB-wax 30 m Megabore
Gas acarreador
Nitrgeno, a 5 psi
Presin de aire
7 psi
Presin de hidrgeno
20 psi
200C
250C
62
BIOQUMICO DIAGNSTICO
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
Tabla 2. Resultados obtenidos con los cromatogramas correpondientes.
Inyeccin
Soln. 1
Mezcla estndares
Analito
Etanol
Etanol
Propanol
Solucin Problema
Etanol
Propanol
Conc. % (v/v)
Tiempo
retencin
rea de pico
Ancho de pico
Platos tericos
Resolucin
63
BIOQUMICO DIAGNSTICO
VII. INFORME DE TRABAJO
ESQUEMA Y PUNTOS MNIMOS A EVALUAR PARA LA REALIZACIN DEL
INFORME DE TRABAJO.
1.- Datos Generales
I) CARTULA. Incluir en ste orden: Nombre de la Universidad, nombre de la Facultad,
nombre de la Seccin, nombre de la asignatura comenzando con Laboratorio de,
Nmero y nombre de la prctica, Nmero de equipo, Nombre de los integrantes
(solamente de aquellos que participaron en su realizacin, se dar por entendido que los
que no aparezcan no recibirn calificacin correspondiente a esa prctica. Nombre de los
profesores (incluir grado: QFB, Q, M en C, Dr., etc.), Fecha de realizacin de la prctica y
Fecha de entrega de reporte.
II) NMERO Y NOMBRE DE LA PRCTICA.
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
BIOQUMICO DIAGNSTICO
de ste, temperatura del inyector, tipo de detector y la rampa empleada (en caso
de utilizar una cromatografa por gradiente de temperatura).
Lectura de los sistemas; mismas consideraciones del punto anterior. Enfatizar
cmo se debe cargar la jeringa con la muestra para inyectar y propiamente el
proceso de inyeccin de la muestra al equipo. No olvidar mencionar qu se debe
hacer una vez que se termin de usar el equipo ya para apagarlo.
Disposicin de residuos; mencionar cmo se dispusieron los residuos en la
sesin experimental.
2) RESULTADOS. Incluir:
Incluir los cromatogramas con nmero y nombre, recordar que se debe incluir el
cromatograma de la mezcla de STDs y TODOS los cromatogramas de las
muestras que se hallan empleado en el grupo, ya que se cuantificarn todas las
muestras por cada equipo. Recortar y pegar de forma limpia y ordenada, no
solamente engraparlos, y sombrear con marcatextos los datos del pico del Etanol
de un color y con otro los datos del pico del n-propanol.
Tabla No. 2.- Datos experimentales y parmetros cromatogrficos. Incluir dos
filas adicionales al final una para escribir la altura de pico y otra para el AEPT.
Recuerde que las unidades del tR es en minutos y W (ancho del pico) es en
segundos para que los considere en los clculos, ya que ambos datos deben
estar en las mismas unidades al aplicar las frmulas. Recordar que la resolucin
es el nico parmetro contemplado en la tabla que es compartido por 2 picos
(etanol y n-propanol).
Incluir tabla: con nmero y nombre. Recordar que el Marbete (% de etanol en el
enguaje) hay productos que si lo mencionan y otros no y por ende se tienen que
investigar en la pgina web de la marca comercial.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentacin, Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete
(enfocndose
slo
al
analito
que
se
cuantific
experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete)
% de principio activo con respecto al marbete
65
BIOQUMICO DIAGNSTICO
3) ANLISIS DE RESULTADOS. Incluir:
Analizar y discutir que dato(s) podran emplear para dar validez y confiabilidad
de sus resultados.
Describir brevemente el funcionamiento del detector empleado y que propiedad
es la que se registra.
Analizar qu tipo de cromatografa se emple con base a la polaridad de la
Fase estacionaria, y tambin con base a la variacin de la temperatura a lo
largo de la corrida cromatogrfica, indicando el orden de separacin
Describir la importancia de emplear el mtodo de adicin de estndar interno
cuando se emplea a la cromatografa de gases como tcnica instrumental.
Mencionar la importancia que tiene realizar una rampa de temperatura para
mejorar la eficiencia en la separacin de los analitos.
Mencionar que datos del cromatograma usaron para IDENTIFICAR los picos de
ambos alcoholes y que datos usaron para CUANTIFICAR, indicando porqu.
Incluir los clculos de N (# de platos tericos), AEPT (o H) y R (resolucin) para
cada analito en ambos sistemas; adems, calcular el tR promedio, N promedio,
AEPT promedio y R promedio y realizar el anlisis correspondiente de estos
parmetros cromatogrficos para justificar si la separacin y corrida
cromatogrfica fue eficiente.
Incluir los clculos de cuantificacin, en el siguiente orden: Clculo de la
concentracin de los STDs en la mezcla de STDs (debe coincidir con lo
reportado en el diagrama de flujo en Preparacin de los STDs y mezcla de
STDs), clculo del Factor Respuesta, clculo del % de etanol en el sistema de
muestra + STDINTERNO y considerar las diluciones de la muestra, en caso que
por necesidad se hallan tenido que realizar (deben coincidir con lo reportado en
el diagrama de flujo en Preparacin de la muestra + STDINTERNO) y cambio de
unidades a las similares al marbete as como el % de principio activo; esto se
debe realizar empleando las reas y las alturas como propiedad.
Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles
errores que condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que
cometi y las acciones preventivas que sugieres para la mejora.
66
BIOQUMICO DIAGNSTICO
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
5) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS. Debern ser citadas ya sea en la introduccin o
en el anlisis de resultados en caso que se hallan empleado.
Gases para el Detector de Ionizacin de Flama (FID): Hidrgeno alta pureza - Aire.
67
BIOQUMICO DIAGNSTICO
VI. ORIENTACIONES PARA EL TRATAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS
Los remanentes de la solucin se deben de almacenar para su tratamiento posterior dado
el poco volumen generado.
68
BIOQUMICO DIAGNSTICO
I. OBJETIVO
A) Conocer el funcionamiento de los Electrodos in-especficos mediante su empleo y
aplicacin en un mtodo analtico, y de esta manera recordar la correcta forma de
calibracin del potencimetro y su manejo adecuado en la obtencin de resultados
confiables al utilizar este tipo de instrumentos.
B) Cuantificar la cantidad de plata en un desinfectante por medio de una Curva de
calibracin potenciomtrica con uso de un Electrodo especfico a plata, para
analizar la aplicacin de este tipo de mtodos analticos en el rea.
II. INTRODUCCIN
El mtodo empleado en esta prctica describe el procedimiento a seguir y el equipo
necesario para la determinacin de plata en un producto mediante la Tcnica
potenciomtrica de in selectivo en una Curva de calibracin.
Esta metodologa se fundamenta en el uso de un electrodo de in-especfico sensible a
plata. La diferencia de potencial desarrollada por este electrodo (con el de referencia) y la
concentracin de plata se ajustan a la ecuacin de Nernst, como se muestra a
continuacin:
E= E 0.059 pAg
E= E 59 pAg
69
BIOQUMICO DIAGNSTICO
La plata se ha utilizado como conservador ya que impide el crecimiento de hongos y
bacterias en frutas, verduras, agua y el organismo as como sanitizacin de redes
hidrulicas y uso mdico aunque su uso es restringido por provocar una condicin
llamada argiria. Tambin, evidencia clnica seala su eficacia para erradicar infecciones
vaginales por levaduras de hongos con aplicacin tpica y duchas vaginales.
SOLUCIONES
2 vasos de precipitados de 50 ml
A) LIMPIEZA DE MATERIAL
1.- Lavar perfectamente el material y enjuagar por varios minutos con HNO 3 al 10%,
posteriormente enjuagar con agua de la llave y finalmente con agua destilada.
70
BIOQUMICO DIAGNSTICO
B) ESTANDARIZACIN DEL STOCK DE NITRATO DE PLATA (puede realizarlo
un solo equipo y compartir los datos, seguir instrucciones del asesor)
Medir 3 mL de KCl 0.01M (patrn primario) con pipeta volumtrica y verter en un vaso de
volumen pequeo, 2 mL de agua destilada y agregar 5 gotas de K2CrO4 al 5%, mezclar.
(Ver la figura del montaje para esta valoracin al final de la pgina).
Llenar la bureta con la Solucin de Nitrato de plata de concentracin aproximada 0.01M
(stock) y agregar poco a poco esta solucin hasta el cambio de amarillo (turbio) a caf
rojizo.
Realizar por triplicado y obtener el volumen promedio para calcular exactamente la
concentracin de la Solucin de Nitrato de plata 0.01M (stock), as como el promedio,
desviacin estndar y el % RSD*
Al finalizar la valoracin, medir el pH de slo uno de los sistemas resultantes con tiras de
papel pH.
*Conocido tambin como coeficiente de variacin (C.V.), se calcula con la frmula:
No debe ser mayor al 5% en el caso de mtodos volumtricos. Esto ayudar a que los
alumnos evalen la calidad de su trabajo experimental, adems de que el profesor pueda
ver avances con respecto al inicio del curso y al final de ste.
71
BIOQUMICO DIAGNSTICO
TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Se mide 1 mL del desinfectante (verificar que el marbete indique contener plata) en un
vaso de precipitados de 50 mL, se agregan 5 mL de Tampn de fuerza inica (nitrato de
sodio) 1.0 M y dos gotas de cido ntrico, reactivo analtico, mantener en agitacin
magntica y calentar a 100 C por 5 minutos, transcurrido el tiempo, permitir que se
enfre, en caso de ser necesario filtrar y trasvasar al matraz volumtrico para as llevar al
aforo de 10 mL. (Solucin problema)
C) PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRACIN
Preparar en matraces volumtricos cada uno de los sistemas para
trazar la curva de calibracin, segn la siguiente tabla, se trasvasar
despus cada sistema a un vaso de volumen pequeo (copas tequileras) para su
posterior medicin de potencial (E).
SISTEMAS
Solucin de Nitrato de plata
0.01M
(stock)
Pdiludo
0.25
0.5
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
10
10
10
10
10
10
10
(mL)
(mL)
72
BIOQUMICO DIAGNSTICO
NOTA: En caso de registrar una lectura alta, en la muestra problema, preparar otro
sistema con mayor volumen de problema. Por el contrario, en caso de una lectura baja
colocar menor volumen de solucin problema.
BIOQUMICO DIAGNSTICO
NOTA Una vez realizada la medicin, no desechar nada hasta asegurarse de que los
resultados obtenidos son los adecuados. Almacenar las soluciones de trabajo restantes
debidamente etiquetadas. NO DESECHARLAS. Para los sistemas de la curva una vez
concluida la prctica, seguir el procedimiento indicado en la disposicin de residuos.
IV.- RESULTADOS
Tabla No. 1 Estandarizacin de Solucin de Nitrato de plata 0.01M (stock)
Alcuota
Concentracin
Volumen (mL)
Volumen de AgNO3
Molar exacta
exacto de KCl
de KCl
medido
punto de equivalencia
V1 =
V2 =
V3 =
pH del sistema
Promedio
_____________
=_______________
74
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Tabla No.2.- Curva de Calibracin
Sistemas
Concentracin Molar de de Ag
Pdiludo
---------
BIOQUMICO DIAGNSTICO
II) NMERO Y NOMBRE DE LA PRCTICA.
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
76
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Disposicin de residuos; mencionar cmo se dispusieron los residuos en la
sesin experimental.
2) RESULTADOS. Incluir:
Tabla No. 1.- Datos experimentales de la estandarizacin del estndar de Nitrato
de plata. No olvidar colocar en una fila adicional al final de la tabla los datos de
Promedio, STD y %RSD para los 3 volmenes gastados de KCl obtenidos en
este paso.
Tabla No. 2.- Datos experimentales de la Curva de calibracin. Considere que la
concentracin que debe reportar es de Plata no de Nitrato de plata. si realiz
varias muestras o de una misma hizo varios sistemas coloque una columna en la
tabla de resultados para cada sistema.
Grfico de la curva de calibracin indicando nmero y nombre CORRECTO (el
nombre correcto del grfico de una curva de calibracin se puede indicar bajo el
modelo: PROPIEDAD=f[analito]UNIDADES).
Adems debe incluir: Ecuacin de la recta bajo el modelo:
PROPIEDAD = (valor de la pendiente) [analito]UNIDADES +/-
(valor de la
ordenada al origen)
No indicar la propiedad y la concentracin del analito como x y y, y tambin
debe incluir Coeficiente de determinacin (r2). No olvidar que la propiedad la
debe graficar en funcin de -log[Plata]MOLAR.
Incluir tabla: con nmero y nombre.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentacin, Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete (enfocndose slo al contenido de plata inica)
Resultado experimental (reportado como en el marbete % p/v)
% de principio activo con respecto al marbete
77
BIOQUMICO DIAGNSTICO
3) ANLISIS DE RESULTADOS. Incluir:
Realizar el anlisis e interpretacin correspondiente del %RSD para determinar
si tiene validez los resultados de la estandarizacin para el clculo de la
concentracin del estndar de Nitrato de plata.
Plantear la reaccin generalizada de estandarizacin y la reaccin generalizada
de deteccin del punto final de valoracin.
Trazar la escala de zonas de predominio para las especies de plata en funcin
del pH.
Plantear la reaccin representativa de estandarizacin y representativa de
deteccin del punto final de valoracin, calcular para cada una el valor de Keq.
Justificar el uso de K2CrO4 5% como indicador del punto final de
estandarizacin con base al clculo de las solubilidades molares condicionales.
Justificar el por qu se realiz el lavado con HNO3 10% del material empleado.
Realizar el anlisis e interpretacin correspondiente al valor del coeficiente de
determinacin para la validez de los resultados de cuantificacin.
Investigar y describir qu es la fuerza inica y porqu hay que controlarla
justificando la funcin que tiene el tampn de fuerza inica en la matriz para la
lectura de los sistemas de la curva, as como la justificacin del uso de un
puente de agar entre los sistemas de la curva y la solucin de KNO3.
Mencionar brevemente el funcionamiento del electrodo in selectivo de plata.
Analizar la relacin de las variables involucradas y contrastarlas con la
Ecuacin de Nernst, justificando el signo y el valor de la pendiente obtenida.
Incluir los clculos de cuantificacin, en el siguiente orden: Clculo de la
concentracin del Stock (debe coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo
en Estandarizacin del STD de Nitrato de plata), clculo de la concentracin de
los sistemas de la curva, clculo del -log[Plata], interpolacin de la propiedad de
la muestra en la ecuacin de la curva, considerar las diluciones de la muestra
(deben coincidir con lo reportado en el diagrama de flujo en Preparacin de la
muestra) y cambio de unidades a las similares al marbete as como el % de
principio activo.
Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles
errores que condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que
cometi y las acciones preventivas que sugieres para la mejora.
78
BIOQUMICO DIAGNSTICO
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
5) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS. Debern ser citadas ya sea en la introduccin o
en el anlisis de resultados en caso que se hayan empleado.
DATOS
Ag+/ Ag E = 0.79 v
79
BIOQUMICO DIAGNSTICO
PRCTICA No. 7 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE SULFATO FERROSO EN TABLETAS
MEDIANTE UNA CURVA DE VALORACIN POTENCIOMTRICA BAJO CONDICIONES DE
AMORTIGUAMIENTO.
I. OBJETIVOS
Identificar las partes bsicas del potencimetro para reconocer su manejo a fin
de obtener resultados confiables.
II. INTRODUCCIN
El mtodo de titulacin potenciomtrica consiste en medir el potencial (voltaje) en una
solucin por medio de un electrodo como funcin de volumen de agente titulante. El
potencial que se mide se puede transformar a unidades de concentracin de una especie
en solucin. La ventaja de medir potencial es que ste se mide por medio de un electrodo
que es selectivo a la especie o analito que se quiere determinar. Por lo tanto, el voltaje
que se mide en la solucin es representativo de la concentracin de la especie en
solucin. Este alto grado de selectividad (seal analtica que puede mostrar un pequeo
grupo de analitos en una solucin que contiene mltiples especies qumicas) se debe a la
propiedad fsica del electrodo con que se mide el voltaje. La medida del potencial se
puede emplear para poner de manifiesto el punto final en reacciones cido-base, redox,
precipitacin y formacin de complejos; para ello se selecciona el electrodo indicador
adecuado y un electrodo de referencia que cierra la celda.
Para determinar el punto final se pueden utilizar varios mtodos; el ms directo se basa en
representar el potencial en funcin del volumen de valorante. Otro procedimiento ms
exacto consiste en representar el (E= f(V)).
80
BIOQUMICO DIAGNSTICO
En esta prctica el hierro presente se disuelve en cido se valora con dicromato de
potasio y las variaciones del potencial durante el proceso se siguen con un potencimetro,
para obtener una grfica de E = f(mL de valorante) mediante la cual se determinara el
volumen gastado para llegar al punto de equivalencia y as poder cuantificar el contenido
de hierro.
El grado en que ocurre la reaccin (y por tanto del cambio de pendiente en el punto de
equivalencia) depende de la constante condicional de formacin, el efecto del pH en la
titulacin es un parmetro a considerar en el amortiguamiento del medio de reaccin.
REACTIVOS
cido fosfrico R.A.
EQUIPOS
1 agitador magntico
Potencimetro con
cido Ntrico R. A.
electrodo de platino y
de calomel ( o
convinado)
1 probeta de 25 ml
2 vasos de precipitados de 50 mL
Soln. de Dicromato de
potasio 0.01M
81
BIOQUMICO DIAGNSTICO
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.-Preparacin de soluciones
-Solucin de cido fosfrico 1 M.(solucin cida)
-Solucin problema
Se pesan tres tabletas y se obtiene el peso promedio, se muelen y se pesa el polvo
equivalente a 25 mg de sulfato ferroso en un vaso de precipitados (considerar el peso
promedio y el contenido segn el marbete del producto) y se agregan 10 mL de solucin
cida con agitacin mecnica.(soln. problema)
82
BIOQUMICO DIAGNSTICO
V. RESULTADOS EXPERIMENTALES
Tabla 1: Datos experimentales de la valoracin potenciomtrica del Fe(II) en las
tabletas
K2Cr2O7 0.01 M 0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
(mL)
EECS(mV)
E ECS(mV)
83
BIOQUMICO DIAGNSTICO
1.-DATOS GENERALES
III) OBJETIVOS PARTICULARES. Con base al objetivo general del Manual y a las
actividades realizadas en la prctica redactar 2-3 objetivos particulares recordando que
deben responder el Qu?, Cmo? y Para qu?.
84
BIOQUMICO DIAGNSTICO
BIOQUMICO DIAGNSTICO
esta grfica es con la que trabajarn para la cuantificacin y otros datos que se
piden en el anlisis de resultados.
Incluir tabla: con nmero y nombre.
Muestra empleada (nombre comercial)
Presentacin
Lote y fecha de caducidad (u origen)
Marbete
(enfocndose
slo
al
analito
que
se
cuantific
experimentalmente)
Resultado experimental (reportado como en el marbete: por cpsula,
por 100ml, etc.)
% de principio activo con respecto al marbete
de
valoracin;
adems,
proponer
la
reaccin
de
valoracin
BIOQUMICO DIAGNSTICO
marbete as como el % de principio activo; recordar que aunque hallan
justificado que VPE es ms confiable, deben realizar la cuantificacin con
ambos, y al final compararlos.
Con base al % de principio activo (recordar que es el comparativo entre el
resultado experimental y el reportado en el marbete) analizar los posibles
errores que condujeron a ese resultado, mencionando el tipo de error que
cometi y las acciones preventivas que sugieres para la mejora.
4) CONCLUSIONES. Con base al objetivo general del Manual y a los redactados por
ustedes (particulares).
5) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS. Debern ser citadas ya sea en la introduccin o
en el anlisis de resultados en caso que se hallan empleado.
Complejos de Fe(III)
Fe(OH)n3-n Log 1= 11.0 , Log 2= 21.7
Fe3+ + H2PO4- Fe H2PO42+ log K = 3.47
Fe3+ + HPO42- Fe HPO4+ log K = 8.3
Complejos de Cr(III)
Cr(OH)n3-n Log 1= 10.2, Log 2= 18.3
3+
Cr + H2PO4- Cr H2PO42+ log K = 2.56
Cr(OH)3 pKs = 30.3
87
BIOQUMICO DIAGNSTICO
DIAGRAMA pPO4 como funcin del pH para Fe(III)
88
BIOQUMICO DIAGNSTICO
DIAGRAMA pPO4 como funcin del pH para Cr(III)
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
VIII. ORIENTACIONES PARA EL TRATAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS
Deber disponer de un frasco debidamente etiquetado como residuos de K2Cr2O7 y
deber mantenerse bien tapado, alejado de materiales combustibles y protegidos de
calor, dao fsico y flamas y en lugares secos (se almacena para su tratamiento)
El tratamiento posterior se realizar como sigue
90
BIOQUMICO DIAGNSTICO
91
BIOQUMICO DIAGNSTICO
2 SERIE DE EJERCICIOS
1.- Completar la tabla, calculando los parmetros que se piden y explicar si esta
separacin es eficiente, dibujando el cromatograma correspondiente.
componente
Tr
21.5
0.96
22.1
0.95
25.3
0.99
siguientes resultados
sistema mL
del mL de
Tiempo
de
rea
(min)
(UA)
estndar
fase mvil
retencin (min)
18
2.510
0.196
1168
16
2.505
0.197
2170
14
2.521
0.198
3214
12
2.513
0.197
4079
10
10
2.518
0.196
5392
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
i ( mA)
2.0
3.4
4.8
6.4
7.6
93
BIOQUMICO DIAGNSTICO
5.- Explique el tipo de sustancias que pueden ser analizadas en Cromatografia de Gases
y especficamente que compuestos dan seal utilizando un detector FID (ionizacin de
flama)
94
BIOQUMICO DIAGNSTICO
ANEXOS
INSTRUCTIVO PARA EL MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETRO
BAUSCH & LOMB SPECTRONIC 20
Este instrumento se utiliza para medir la radiacin absorbida por las molculas. Cuando
una onda electromagntica de longitud de onda definida incide sobre una sustancia dada,
la cual es una funcin de la concentracin de la sustancia en la trayectoria de la luz y del
espesor de la muestra. Este instrumento solo posee lmpara para el espectro visible, por
lo que si se desean hacer lecturas en el espectro ultravioleta o infrarrojo, es necesario
cambiar la lmpara.
95
BIOQUMICO DIAGNSTICO
96
BIOQUMICO DIAGNSTICO
verificando
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
CUIDADOS GENERALES
CELDAS
Manipularlas solo por la parte superior.
Limpiarlas solo si se requiere, con papel suave
Llenarlas hasta la marca para asegurar lectura representativa
Introducirlas verificando que la marca de stas coincida con la muesca del equipo, para
que siempre entre en la misma posicin
No utilizar tubos de ensayo como sustitutos de celda, pues no estn hechos del vidrio
adecuado.
SOLUCIONES
Solo se realizan mediciones de soluciones translcidas en el instrumento, la presencia de
partculas suspendidas causara error muy grave.
Los valores de absorbancia que presentan un error relativo muy pequeo se encuentran
dentro de 0.2 y 0.8 (63 y 16% T, respectivamente), por lo que debe realizarse
procedimiento correcto para que las lecturas estn dentro de ese rango.
LAMPARAS
No trabajar a longitudes de onda mayores a 600nm o menores a 400 estn fuera del
alcance de la lmpara de espectro visible que es la que generalmente tiene este tipo de
instrumento, solo utilizar soluciones coloridas. Para trabajar en regin infrarrojo o
ultravioleta, se tiene que conseguir la lmpara adecuada.
98
BIOQUMICO DIAGNSTICO
I)
columna de trabajo
B) PROGRAMACIN DEL FLUJO Y LA COMPOSICIN Al encender aparece en la pantalla
electrnica
de
la
bomba
STP
MIN
FLW
%A
CURV
Etapa
Tiempo
Flujo
Gradiente
canal A
fase mvil
o paso
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
Estos parmetros aparecen con algn nmero dado por la memoria del anlisis anterior
Para efectuar algn cambio en ellos
1) Presionar PROGRAM y Seleccionar del 1-9 en el teclado adjunto a la pantalla,
2) Presionar nuevamente el botn de PROGRAM y aparecer STP remarcado por
negro lo que indica que el cursor se encuentra all localizado,
3) Presionar ENTER y el cursor se localizar en el siguiente evento de la pantalla es
decir Min si desea cambiarlo teclear de 1 a 999.
4) Presionar ENTER nuevamente y el cursor pasara a Flw si desea cambiar el flujo
teclee el valor deseado( normalmente los flujos de Fase Mvil van de 0- 5 ml/ min,
aunque los de trabajo comn son de 0-2 ).
5) Si desea cambiar e % de disolvente en canal A presione ENTER y teclee la
proporcin ya que si es menor a 100 el restante para completar este lo tomar la
bomba del canal B por default ( esto se realiza solo si el anlisis es por gradiente
de Fase Mvil ya que es una bomba binaria ).
Cuando se termina el programa aparecer el paso o etapa 1 en la pantalla, el cual se
programar al igual que el paso 0 .
6) Para Ejecutar el programa presione las teclas RUN METHOD y EXIT METHOD
7) Presione la tecla START BOMB y la bomba comienza a trabajar con el flujo
programado, espere unos 10 minutos para estabilizar el flujo y limpiar la columna con el
solvente utilizado como Fase mvil.
85
BIOQUMICO DIAGNSTICO
se
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
1) Ajustar parmetros a fin de mejorar presentacin de la respuesta
Zero(lnea base) nmeros enteros.
Attn2 (nmeros enteros no mayores a 10.
Ch sp velocidad del papel
Thrsh lmite de ruido ( nmeros enteros del 1-4.)
Wd pk ancho de pico
AR REJ rea mnima del pico 8 valores desde 1000 a 1000000)
Estos tres ltimos valores permiten tener respuesta que no se considere ruido.
Un cambio en estos valores se oprime la tecla correspondiente, se teclea con los
valores numricos el valor deseado y se oprime la tecla enter.
II)
PROCEDIMIENTO DE INYECCIN
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
III)
103
BIOQUMICO DIAGNSTICO
USO Y CUIDADO DE ELECTRODOS
MANIPULACIN
Los electrodos debern enjuagarse entre muestras con agua destilada o desionizada.
Seque con cuidado el extremo del electrodo con un papel que no deje residuos para
eliminar el exceso de agua.
Electrodos rellenables
La solucin para relleno en los electrodos deber aadirse hasta el orificio de rellenado,
pero no sobrepasarlo. Asegrese de dejar el orificio de rellenado abierto cuando est
midiendo para asegurar que la solucin de relleno fluya adecuadamente a travs de la
unin de referencia.
ALMACENAMIENTO
Siempre mantenga su electrodo de pH hmedo. Recomendamos que almacene su
electrodo en una solucin para almacenamiento de electrodos de 4 M KCl . Si no dispone
de 4 M KCl, utilice una solucin buffer a pH 4 7. NO almacene el electrodo en agua
destilada o desionizadaesto ocasionar que los iones se filtren a travs de ampolla de
vidrio y el electrolito de referencia, haciendo que su electrodo pierda su utilidad.
Los electrodos que se envan con una botella protectora de almacenamiento para ayudar
a prevenir las grietas o araazos y mantener el bulbo hmero. Remueva la botella de
almacenamiento del electrodo antes de utilizar el mismo Mantenga su electrodo en la
botella para el almancenamiento a largo plazosolo llene la botella con suficiente
solucin 4 M KCl para cubrir el bulbo de vidrio y rellnela.
Si existen impurezas visibles adheridas, sumergir el electrodo en una disolucin de
detergente diluda al dcimo en agua caliente, con vigorosa agitacin durante 15 min. Si
las impurezas son de origen proteico, sumergir el electrodo en una disolucin al 1% de
pepsina en HCl 0.1 M por 15 min. Si las impurezas son inorgnicas, sumergir el electrodo
104
BIOQUMICO DIAGNSTICO
en una disolucin 0.1 M de EDTA tetrasdico por 15 min. Si las impurezas son de grasas
o aceites, enjuagar con un detergente suave o en una disolucin metanlica.
REFERENCIAS.
1) Ramette, A. 1988.
105
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Inhalacin
Ingestin
Contacto
con ojos
FUGAS Y
DERRAMES
DESECHOS
Frmula CH3CH2OH
Trasladar al aire fresco. Si no respira administrar respiracin artificial. Si respira con dificultad
suministrar oxgeno. Mantener la vctima abrigada y en reposo. Buscar atencin mdica
inmediatamente.
Lavar la boca con agua. Inducir al vmito. No administrar emticos, carbn animal ni leche.
Buscar atencin mdica inmediatamente (puede tratarse de alcohol desnaturalizado).
Lavar con abundante agua, mnimo durante 15 minutos. Levantar y separar los prpados para
asegurar la remocin del qumico. Si la irritacin persiste repetir el lavado. Buscar atencin
mdica.
Lavar la piel con abundante agua. Retirar la ropa contaminada y lvela con abundante agua y
jabn.
Contacto
con piel
Mantener alejadas fuentes de ignicin. Cubrir el rea de derrame con roco de agua para diluir el
producto y eliminar vapores. En caso de pequeos derrames utilizar material inerte absorbente.
Evitar que el producto sea conducido al drenaje.
Se puede realizar una incineracin controlada del material una vez ha sido absorbido o se puede dejar
evaporar.
Hidrxido de sodio
NaOH
Nombre
Frmula
Inhalacin Trasladar al aire fresco. Si no respira administrar respiracin artificial. Si
PRIMEROS
AUXILIOS
respira con dificultad suministrar oxgeno. Mantener a la persona abrigada
y en reposo.
Ingestin
Lavar la boca con agua. Si est consciente, suministrar abundante agua.
No inducir el vmito. Buscar atencin mdica inmediatamente.
Contacto
Lavar con abundante agua, mnimo durante 15 minutos. Levantar y separar
con ojos
los prpados para asegurar la remocin del qumico. Colocar una venda
esterilizada. Buscar atencin mdica.
Contacto
Retirar la ropa y calzado contaminado. Lavar la zona afectada con
con piel
abundante agua y jabn, mnimo durante 15 minutos. Si la irritacin
persiste repetir el lavado. Buscar atencin mdica.
FUGAS Y
Evacuar o aislar el rea de peligro. Restringir el acceso a personas innecesarias y sin la
DERRAMES debida proteccin. Ubicarse a favor del viento. Usar equipo de proteccin personal.
Ventilar el rea. No permitir que caiga en fuentes de agua y alcantarillas. Los residuos
deben recogerse con medios mecnicos no metlicos y colocados en contenedores
apropiados para su posterior disposicin.
DESECHOS Debe tenerse presente la legislacin ambiental local vigente relacionada con la
disposicin de residuos para su adecuada eliminacin. Los residuos de este material
pueden ser llevados a un relleno sanitario legalmente autorizado para residuos qumicos
para su debida neutralizacin.
cido actico
CH3COOH
Nombre
Frmula
Inhalacin Trasladar al aire fresco. Si no respira administrar respiracin artificial.
PRIMEROS
AUXILIOS
Evitar la reanimacin boca a boca. Si respira con dificultad suministrar
oxgeno. Mantener a la persona abrigada y en reposo. Buscar atencin
mdica inmediatamente
106
BIOQUMICO DIAGNSTICO
Ingestin
FUGAS Y
DERRAMES
DESECHOS
cido clorhdrico
HCl
Nombre
Frmula
Inhalacin Trasladar al aire fresco. Si no respira administrar respiracin artificial
PRIMEROS
AUXILIOS
(evitar el mtodo boca a boca). Si respira con dificultad suministrar
oxgeno. Mantener a la persona abrigada y en reposo. Buscar atencin
mdica inmediatamente.
Ingestin
Lavar la boca con agua. Si est consciente, suministrar abundante
agua. No inducir el vmito. Si ste se produce de manera natural,
inclinar la persona hacia el frente para evitar la broncoaspiracin.
Suministrar ms agua. Buscar atencin mdica.
Contacto
Lavar con abundante agua, mnimo durante 15 minutos. Levantar y
con ojos
separar los prpados para asegurar la remocin del qumico. Si la
irritacin persiste repetir el lavado. Buscar atencin mdica.
Contacto
Retirar la ropa y calzado contaminados. Lavar la zona afectada con
con piel
abundante agua y jabn, mnimo durante 15 minutos. Si la irritacin
persiste repetir el lavado. Buscar atencin mdica.
FUGAS Y
Evacuar o aislar el rea de peligro. Restringir el acceso a personas innecesarias y sin
DERRAMES debida proteccin. Eliminar toda fuente de calor. Evitar que la sustancia caiga en
alcantarillas, zonas bajas y confinadas, para ello construya diques con arena, tierra u
otro material inerte. Mezclar con sosa o cal para neutralizar. Lavar la zona con agua.
DESECHOS Debe tenerse presente la legislacin ambiental local vigente relacionada con la
disposicin de residuos para su adecuada eliminacin. Considerar el uso del cido
diluido para neutralizar residuos alcalinos. Adicionar cuidadosamente ceniza de sosa o
cal, los productos de la reaccin se pueden conducir a un lugar seguro, la disposicin
en tierra es aceptable.
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BIOQUMICO DIAGNSTICO
cido ntrico
Nombre
Inhalacin
PRIMEROS
AUXILIOS
FUGAS Y
DERRAMES
DESECHOS
HNO3
Frmula
Evaluar los signos vitales: pulso y velocidad de respiracin; detectar
cualquier trauma. En caso de que la persona no tenga pulso,
proporcionar rehabilitacin cardiopulmonar; si no hay respiracin, dar
respiracin artificial y si sta es dificultosa, suministrar oxgeno y
sentarla.
Ingestin
Proceder como en el caso de inhalacin en caso de inconciencia. Si
la persona est conciente, lavar la boca con agua corriente, sin que
sea ingerida. No inducir el vomito ni tratar de neutralizarlo. El carbn
activado no tiene efecto. Dar a la persona 1 taza de agua o leche,
solo si se encuentra conciente. Continuar tomando agua,
aproximadamente una cucharada cada 10 minutos.
Contacto
Lavarlos con agua tibia corriente de manera abundante, hasta su
con ojos
eliminacin total.
Contacto
Lavar cuidadosamente el rea afectada con agua corriente de
con piel
manera abundante.
Ventilar el rea dependiendo de la magnitud del siniestro. Mantener el material
alejado de agua, para lo cual construir diques, en caso necesario, con sacos de
arena, tierra o espuma de poliuretano. Para absorber el derrame puede utilizarse
mezcla de bicarbonato de sodio-cal sodada o hidrxido de calcio en relacin 50:50,
mezclando lenta y cuidadosamente, pues se desprende calor. Una vez
neutralizado, lavar con agua. Tanto el material derramado, el utilizado para
absorber, contener y el generado al bajar vapores, debe ser neutralizado con cal,
cal sodada o hidrxido de calcio, antes de desecharlos.
Con cuidado (se genera calor y vapores) diluya con agua-hielo y ajuste el pH a
neutro con bicarbonato de sodio o hidrxido de calcio. El residuo neutro puede
tirarse al drenaje con agua en abundancia.
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