Observacin directa

Microscopia ptica
Microscopia electrnica
Microscopia de fuerza atmica

Microscopia
Campo claro
Campo oscuro
Microscopio ptico

Contraste de fase
Polarizada
Fluorescencia

Microscopio Electrnica

Microscopio de barrido
por sondeo

De transmisin (MET o TEM)

De Barrido (MEB o SEM)

De fuerza atmica (AFM)

De efecto tunel (STM)

La observacin con el microscopio puede proporcionar informacin cuantitativa,

especialmente cuando se utilizan tcnicas como las de polarizacin, interferencia y
uorescencia.

Microscopia

Teora de microscopia

La teora de la formacin de la imagen por una lente puede

explicarse por dos trminos los cuales se complementan:
ptica geomtrica:
ptica Fsica

Teora de microscopia
ptica geomtrica
Existen dos reglas:
1.

La luz se transmite en lnea recta

2.

La trayectoria se desva (REFRACTA) al atravesar la interfase

entre dos medios transparentes
objetivo

Teora de microscopia
ptica geomtrica
Existen dos reglas:
1.

La luz se transmite en lnea recta

2.

La trayectoria se desva (refracta) al atravesar la interfase

entre dos medios transparentes
objetivo

El aumento de
la imagen es:

Foco

Lente ideal

-(f/a)
aa=f f

El signo negativo
solo indica que
la imagen esta
invertida

Teora de microscopia
ptica geomtrica
Aberraciones
En las lentes reales, no todos los rayos procedentes de un punto dado de
un objeto convergen en el mismo foco. A este fenmeno se le denomina
aberracin.
Aberracin
cromtica

Los rayos que parten de

un nico punto, situado
sobre el eje de la lente,
son refractados por partes
diferentes de la lentey,
por lo tanto, no se
enfocan en el mismo
punto del

Aberracin
esfrica

objetivo

Ya que el de cada
sustancia depende de la
, la posicin de los
puntos focales depende
tambin de la . Por lo
tanto, las imgenes
obtenidas con luz blanca
sern borrosas, siendo el
resultado de la
superposicin de un gran
nmero de imgenes.

Teora de microscopia
ptica fsica

Toda la luz que atraviesa a

una lente se difracta, ya que
una lente se puede considerar
en cierto modo como una
apertura

Explica la formacin y resolucin de la imagen

La luz no se concibe como un rayo, si no como una REM que se DIFRACTA (desva) en
los mrgenes y aperturas y puede interferir de forma constructiva o destructiva.
Un punto iluminado en el plano del objeto, aparece en el plano de la imagen como un
circulo de luz rodeado de una serie de anillos brillantes concntricos, producidos por
interferencias constructivas. Fenmeno denominado como disco de Airy.

Teora de microscopia
ptica fsica
Se puede demostrar que el radio del primer anillo
oscuro que rodea al disco central es 0.61 /( Sen U)
Dos puntos objetos que estn muy juntos aparecern
en el plano imagen como dos discos diminutos y la
resolucin de dichos puntos, vendr determinada no
solo por la separacin de dichos puntos, si no tambin
por el tamao de los puntos
n

Lmite de resolucin
U

0.61 /( Sen U)

Teora de microscopia
ptica fsica
Se puede aumentar el poder de resolucin disminuyendo la ,
incrementando e incrementando U.
El incremento de U se logra disminuyendo la distancia del objeto a
la lente o bien aumentando el dimetro de la lente.

Lmite de resolucin
U

0.61 /( Sen U)

Teora de microscopia
ptica fsica
Se puede aumentar el poder de resolucin disminuyendo la ,
incrementando e incrementando U.
El incremento de U se logra disminuyendo la distancia del objeto a
la lente o bien aumentando el dimetro de la lente.
Al valor de Sen U se le denomina apertura numrica o AN y
viene siempre grabado en los objetivos del microscopio.

Lmite de resolucin
U

0.61 /( Sen U)

Teora de microscopia
Partes del microscopio
Un microscopio bsico est constituido slo por tres componentes:
1.

Una fuente de luz de brillo uniforme

2.

Un soporte del objeto

3.

Y una lente de aumento corregida para las diferentes aberraciones.

Sin embargo , si se quieren obtener grandes aumentos, la distancia focan tiene

que ser muy pequea y, por lo tanto, el ojo deber colocarse prcticamente
sobre la superficie de la lente.
Para evitar esto, se introduce un nuevo sistema de lentes denominado ocular

Teora de microscopia
Partes del microscopio
Los objetivos de los microscpios estn completamente
estandarizados con respecto al aumento y a la AN
Utilizando un aceite cuyo
ndice de refraccin sea
igual al del vidrio del
cubreobjetos que se coloca
sobre el objeto, y al de la
lente frontal, de tal manera
que con el aceite puede
considerarse que el objeto
se encuentra dentro de una
lente esfrica. Ello da lugar
a la captacin de toda la lus
difractada.

Teora de microscopia
Partes del microscopio
La gama de aumentos de los oculares varia entre 5 y 20. Sin
embrago, es preciso recordar que sirve de muy poco incrementar el
aumento sin incrementar a su vez, la resolucin y por ello la gama de
aumentos de los oculares est orientada a obtener una observacin
lo ms perfecta posible.

El poder de resolucin viene determinado exclusivamente por

el objetivo.

Teora de microscopia
Partes del microscopio
Lentes condensadoras (condensador):
Juego de lentes cuya funcin es la de proporcionar un haz
de luz que diverja hacia el plano de la muestra, iluminar
uniformemente toda la muestra, controlar la intensidad y eliminar la
luz dispersada.

Teora de microscopia
Contraste
Para que la imagen de un objeto pueda ser observada debe tener diferente
intensidad que la del medio que la rodea.
Se denomina contraste a la diferencia de intensidad entre el medio y el objeto.
Desafortunadamente, la mayora de las muestras biolgicas (clulas y sus
componentes) son transparentes, por lo que el contraste es casi nulo.
Una solucin es la tincin de las muestras. La cual puede ser tediosa y
engaosa. 1) Microscopia de campo claro
Sin embargo, se han desarrollado al menos 6 mtodos especiales para conseguir
contraste y obtener informacin cuantitativa de la microscopa.
2) Microscopia de campo oscuro
3) Microscopia de contraste de fases
4) Microscopia de interferencia
5) Microscopia de polarizacin
6) Microscopia de fluorescenia
7) Microscopia confocal

Microscopia ptica
1) Microscopia de campo claro
La muestra debe ser delgada (casi transparente)

Fijada

Tincin

Microscopia ptica
2) Microscopia de campo oscuro
Se coloca un disco opaco que
contenga un anillo transparente, justo
debajo o dentro del condensador
El plano del objeto ser iluminado por
un cono hueco de luz que atravesar
el plano del objeto y saldr en forma
de un segundo cono hueco.
Si el tamao del anillo es lo
suficientemente grande, el cono hueco
rodeara el objeto y el objetivo no
recibir luz. El campo aparecer
oscuro.
Si en el plano del objeto hay una
muestra, difractara la luz y algunos de
los grados de difraccin tendrn un
ngulo tal que podrn entrar en el
objetivo

Microscopia ptica
2) Microscopia de campo oscuro
No es necesario fijar la muestra
Se obtiene una imagen con
fondo oscuro y la muestra
iluminada
Es de gran utilidad para el
recuento de partculas
pequeas
Presenta poco poder resolutivo

Microscopia ptica
2) Microscopia de campo oscuro

Microscopia ptica
3) Microscopia de Contraste de fases
Se basa en el retraso de las ondas de luz al
atravesar objetos de distintos ndices de
refraccin (densidades), aprovechando y
amplificando dichos retrasos.
Convierte pequeas diferencias en ndices de
refraccin variables y detectables por el ojo.
Aprovecha las pequeas diferencias de los
ndices de refraccin en las distintas partes de
una clula y en distintas partes de una
muestra de tejido. La luz que pasa por
regiones de mayor ndice de refraccin
experimenta una deflexin y queda fuera de
fase con respecto al haz principal de ondas de
luz que pasaron la muestra.

Microscopia ptica
3) Microscopia de Contraste de fases

Por medio del condensador, se logran separar los rayos luminosos que no son difractados por el
objeto de los que no lo hacen, al pasar por la muestra, los rayos que atraviesan objetos ms
densos, experimentan un retraso de un cuarto de lambda, y al pasar por el anillo de fase estos
rayos (debido a la forma del anillo de fase), se retrasan un cuarto de lambda ms, en cambio, las
que no se han retrasado, pasan por una parte ms delgada del anillo de fase y no se siguen
retrasando. El MCF, mediante el condensador anular y el anillo de fase, acenta dichos retrasos,
haciendo que zonas con distintos ndices de refraccin se traduzcan en una variacin de
contraste la cual puede ser observada

Microscopia ptica
3) Microscopia de Contraste de fases

Microscopia ptica
3) Microscopia de Contraste de fases
LA MCF es de gran valor para poner de manifiesto los
orgnelos de las clulas vivas. El ncleo contrasta
fuertemente con el citoplasma y se distinguen con facilidad
componentes citoplasmticos, tales como mitocondrias,
vacuolas y gotas de grasa.
La nica desventaja reside en que los objetos aparecen
rodeados de un halo inevitable, producido por la difraccin
que causa la placa de fases, por lo que objetos pequeos
como las bacterias, son muy difciles de observar detalles.
Otras aplicaciones del microscopio de contraste de fases
En estudios de diversas disciplinas como por ejemplo fisiologa, parasitologa, farmacologa (procesos
celulares, identificacin y cuantificacin de microorganismos y parsitos en fluidos y tejidos, efecto de
medicamentos y otras sustancias en las clulas, entre otros).
Estudio de alimentos y medicinas.
Anlisis de materiales industriales (metales, cristales, fibras sintticas, plsticos, pigmentos, emulsiones y
suspensiones minerales).

Microscopia ptica
4) Microscopia de interferencia
Microscopio sofisticado de contraste, tambin
denominado microscopio Nomarski, ideal para
visualizar especmenes no coloreados y
transparentes. Permite obtener informacin sobre la
densidad ptica de la muestra y observar detalles
que de ordinario son invisibles.
Los objetos se ven oscuros o claros en un fondo
gris, de manera semejante a las imgenes del MCF,
pero sin halos de difraccin.
Emplea luz polarizada la cual pasa por dos prismas
birrefringentes (Nomarski, Wollaston) que la
fraccionan en dos rayos cuyos trayectos e ndices
de refraccin son diferentes, dando como resultado
una imagen del espcimen en 3D o relieves que
corresponden a las variaciones de la densidad
ptica de la muestra con nfasis en lneas y bordes,
como si la clula proyectara sombras hacia un lado.

Microscopia ptica
4) Microscopia de interferencia
Se pueden hacer mediciones cuantitativas que no eran
posibles con el MCF. Se puede medir la variacin de la
trayectoria ptica entre una partcula y el medio circundante.
Al ser la trayectoria ptica producto del ndice de refraccin y
el espesor, si se conoce uno, se puede medir el otro.

Adems, se puede determinar la concentracin de un material conocido, si se conoce el

ndice de refraccin y el incremento especfico de refraccin (cambio del ndice de refraccin
por unidad de cantidad de soluto). Si p y s son, los ndices de refraccin de una protena y
del disolvente.
Donde es el incremento especfico de difraccin y c es la
concentracin.

!! !! = !!

Al no variar considerablemente p y de una protena a otra, se puede

efectuar fcilmente un clculo aproximado de la concentracin de
protena dentro de una clula, los ndices de refraccin de una protena y
del disolvente.

Microscopia ptica
5) Microscopia de polarizacin
Comparada con las
contraste, el uso de la
estudio de muestras
puesto que mejora de
imagen.

otras tcnicas de incremento de

luz polarizada es la ms efectiva en el
ricas en materiales birrefringentes,
manera incomparable la calidad de la

Las estructuras compuestas por partculas alargadas con una disposicin paralela o en discos
apilados, que se encuentran embebidas en un medio cuyo ndice de refraccin difiere al de las
partculas, presentan una birrefringencia estructural.
Esto significa que dichas estructuras podrn ser atravesadas por luz polarizada segn su
plano (si el plano de polarizacin es paralelo a las partculas).
Utilizando el MP es fcil la observacin de birrefringencia en materiales celulares que
presentan orientacin. En algunas ocasiones (por la baja concentracin) es la nica propiedad
que puede utilizarse para que una estructura sea visible.

Microscopia ptica
5) Microscopia de polarizacin
Los componentes esenciales de un MP son: Un primer filtro

polarizador colocado entre la fuente de luz y el

condensador que se puede rotar 360 y un analizador o
segundo polarizador, colocado por encima del objetivo,
entre su lente posterior y el tubo de observacin o
cmara fotogrfica. Tambin puede rotarse 90 o 360 de
tal manera que pueda colocarse perpendicular al eje del
polarizador. Una platina rotatoria, soporte para la
muestra.
Si no hay espcimen en la platina el campo se observar
completamente oscuro. Al colocar un portaobjeto con
alguna muestra, los elementos anistropos cambian la
direccin de la vibracin de la luz polarizada y el
contraste se evidencia en la imagen con algunos colores.

Microscopia ptica
5) Microscopia de polarizacin
Si no hay espcimen en la platina el campo se observar
completamente oscuro. Al colocar un portaobjeto con alguna
muestra, los elementos anistropos cambian la direccin de
la vibracin de la luz polarizada y el contraste se evidencia en
la imagen con algunos colores.

Aplicaciones:

Micrografa de cartlago hialino visto con

luz polarizada

Identificar sustancias cristalinas o fibrosas intracelulares

(como el citoesqueleto) y extracelulares (sustancia amiloide,
asbesto, colgeno.
Las cadenas de ADN orientadas, tambin presentan las
estructuras de discos apilados.
La capa de mielina de las clulas nerviosas muestran
birrefringencia.
Micrografa de luz polarizada de
fibroclulas musculares estriadas en la
cual se aprecia el patrn de bandas y
estriaciones transversales

Microscopia ptica
6) Microscopia de Fluorescencia
La fluorescencia es un fenmeno en el que un electrn de
una molcula absorbe energa de la luz y se mueve a un nivel
de energa superior o estado excitado. La energa de la luz
est contenida en una unidad llamada fotn. Despus de una
estancia muy breve en el estado excitado, el electrn vuelve
a su nivel de energa anterior, o estado fundamental,
mediante la emisin de un nuevo fotn. La energa de los
fotones liberados se descarga en longitudes de onda de luz
visible, detectables slo duran unas pocas millonsimas de
segundo. Esta propiedad se denomina fluorescencia.
Siendo escasas las molculas autofluorecentes, su aplicacin ms difundida es para revelar
una fluorescencia agregada, como en la deteccin de antgenos o anticuerpos. Tambin se
puede inyectar molculas fluorescentes especficas en un animal o directamente en clulas y
usarlas como marcadores.
El anaranjado de acridina (para cidos nucleicos), la fluorescena y la crinaquina, son
compuestos fluorescentes comunes.

Microscopia ptica
6) Microscopia de Fluorescencia
Fluorocromos
Longitud de onda de
absorcin (nm)
374-403

Longitud de onda de
emisin (nm)
422-430

Fluorescena (FITC)

494

520

Rodamina (TRITC)
Naranja de acridina
Yoduro de propidio

540
460-502
536

570
526-650
617

Fluorocromo
Cascade blue

Microscopia ptica
6) Microscopia de Fluorescencia
Componentes de un MF
Fuente de luz: Se necesita una intensa fuente de luz para excitar la
fluorescencia en el espectro especfico de cada fluorocromo. La luz debe ser de
una longitud de onda corta. Se emplean lmparas de mercurio a alta presin que
funcionan de un modo diferente a las lmparas de filamentos incandescentes.
Tambin se utiliza luz ultravioleta y rayos laser.
Filtros: Son los que permiten el paso de luz de una determinada longitud de
onda, la del intervalo y color necesario para excitar al fluorocromo y bloquean las
longitudes no deseadas. Una vez filtrada, la luz incide sobre el espcimen por
reflexin de un espejo dicroico.
Objetivos: Deben tener gran capacidad para transmitir la luz y proveer una
imagen de alta calidad. De igual manera deben poseer una gran apertura
numrica.

Microscopia ptica
6) Microscopia de Fluorescencia

Micrografias de clulas en divisin, tomadas con un microscopio de

fluorescencia. Se emplearon tres fluorocromos: DAPI (emite luz azul)
para marcar cromosomas, GFP (protena verde fluorescente
intracelular que emite luz verde) y rodamina (luz roja) para marcar
microtbulos. Cada fluorocromo amerita el uso de filtros especficos,
dependiendo de la longitud de onda necesaria para su excitacin,
sealada arriba y a la izquierda en cada imagen y expresada en nm.

Microscopia ptica
6) Microscopia de Fluorescencia
Aplicaciones del microscopio de fluorescencia
Marcaje de molculas en clulas y tejidos para su caracterizacin e identificacin.
Estudio de clulas normales y patolgicas.
Estudios inmunolgicos.
Mineraloga.

Microscopia ptica
7) Microscopia Confocal
El microscopio confocal combina fundamentalmente la microscopa de fluorescencia con la
captura y digitalizacin de imgenes con un ordenador. La obtencin de imgenes digitalizadas
en diferentes planos de profundidad de la muestra y su ulterior recombinacin permiten la
reconstruccin y anlisis tridimensional de las estructuras.
Permite realizar cortes pticos finos a muestras de tejidos ms o menos gruesos y realizar
reconstrucciones en tres dimensiones a partir de cortes seriados.
El microscopio confocal aade el principio de
iluminar el espcimen punto por punto y elimina
la luz proveniente de los planos no enfocados.
Para ello se necesita una fuente de luz muy
potente, as como tambin un filtro con un
agujero que se coloca en el trayecto del rayo
de luz. En los microscopios modernos se
emplea un rayo laser, cuya longitud de onda
puede estar disponible en un amplio rango de
frecuencias.

Comparacin entre dos micrografas de una clula en mitosis,

contrastada con un doble marcaje fluorescente, tanto para los
cromosomas (verde) y la actina (rojo).

Microscopia ptica
7) Microscopia Confocal
El rayo laser (luz azul) es filtrado por un
agujero y un espejo dicroico; luego es
enfocado mediante un lente objetivo sobre el
espcimen y estimula la fluorescencia
presente en el mismo (luz verde). La
fluorescencia es recolectada por el objetivo y
dirigida al espejo dicroico que la refleja y
dirige hacia un detector. Un segundo filtro con
agujero se coloca frente al detector y slo
deja pasar la luz proveniente del plano de
enfoque (lnea continua). La fluorescencia
fuera de foco de las zonas que estn por
encima y por debajo del plano de enfoque (en
lneas discontinuas) no pasa por el agujero y
por lo tanto no formar parte de la imagen.
Modificado de Olschewski F. (2000). Software in confocal microscopy.

Microscopia ptica
7) Microscopia Confocal
Reconstrucciones tridimensionales a
partir de cortes pticos obtenidos con
el microscopio confocal. (a) grano de
polen, (b) muestra de hgado de ratn,
(c) corte grueso de corteza cerebral de
rata. Se emplearon varios marcadores
fluorescentes. (d) auto fluorescencia
de una porcin de raz de helecho. Las
reconstrucciones fueron realizadas a
partir de series de 30-45 cortes
pticos. Tomado de Claxton N, Fellers T, Davidson M.
(2008). Laser Scanning Confocal Microscopy.

Microscopia ptica
7) Microscopia Confocal
Aplicaciones del microscopio confocal

En comparacin a los otros tipos de microscopios, el microscopio confocal proporciona

un mtodo altamente sofisticado y mejorado para obtener imgenes.

Procesos celulares: Para medir actividades enzimticas, reacciones de oxidacin, pH

intracelular, fagocitosis, apoptosis, comunicaciones intercelulares.

Estudios de ADN y ARN.

Morfologa de organoides citoplasmticos.

Ciruga y otros mtodos clnicos.

Otras aplicaciones en el campo de la fsica, la qumica y en tecnologa alimentaria

Microscopia Electrnica
Dos principales tcnicas

Microscopa electrnica de
transmisin:

Microscopa electrnica
de barrido:

Se observa a travs del espcimen (trans- iluminacin). El

espcimen se corta en lminas ultrafinas (en el orden de
nanmetros) que se colocan en una rejilla de cobre, la cual es
bombardeada con un haz de electrones enfocado. Una silueta
del espcimen se proyecta en una pantalla fluorescente o
placa fotogrfica situada por debajo del mismo. La resolucin
puede ser de 0,2nm.

Se observa la superficie de un espcimen slido (epiiluminacin). Se puede lograr una resolucin de 10nm y un
aumento hasta de 20.000x. Se producen imgenes muy
interesantes en 3D (tridimensionales) gracias a una mayor
profundidad de campo. Se escanea la superficie del espcimen
con un haz de electrones (primarios) y los electrones que
rebotan (secundarios) son recogidos por un detector. La seal se
observa en un monitor de televisin. Los tomos del espcimen
producen rayos X que tambin son detectados.

Microscopia Electrnica
Microscopio electrnico de transmisin (TEM)

Utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la

potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la
longitud de onda de la luz visible. Lo caracterstico de este microscopio es
el uso de una muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los
electrones que atraviesan la muestra.

Las partes principales de un microscopio

electrnico de transmisin son:
Can de electrones.
Lentes magnticas.
Sistema de vaco.
Los microscopios electrnicos de
transmisin pueden aumentar un objeto
hasta un milln de veces.

Placa fotogrfica o pantalla fluorescente

Sistema de registro.

Microscopia Electrnica
Microscopio electrnico de barrido (SEM)
En el SEM es necesario acelerar los electrones en un campo elctrico,
para aprovechar de esta manera su comportamiento ondulatorio, lo cual
se lleva a cabo en la columna del microscopio, donde se aceleran
mediante una diferencia de potencial de 1000 a 30000 voltios.
Los electrones acelerados salen del can,
y se enfocan mediante las lentes
condensadora y objetiva, cuya funcin es
reducir la imagen del filamento, de manera
que incida en la muestra un haz de
electrones lo ms pequeo posible (para as
tener una mejor resolucin). Con las bobinas
deflectoras se barre este fino haz de
electrones sobre la muestra, punto por punto
y lnea por lnea, de forma parecida al
barrido de una haz de electrones por la
pantalla de una televisin
Se utilizan ampliamente en la biologa celular. Aunque permite una menor
capacidad de aumento que el microscopio electrnico de transmisin, ste
permite apreciar con mayor facilidad texturas y objetos en tres dimensiones
que se hayan pulverizado metlicamente antes de su observacin

Microscopia Electrnica
Microscopio electrnico de barrido (SEM)
Las partes principales de SEM son:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Haz de elctrones
Lente condensador
Deflector del haz de luz
Lente objetivo
Brazo de soporte de la muestra
Detector
Pantalla fluorescente
Generador de barrido

Microscopia Electrnica
Preparacin de muestras y produccin de contraste
1. Se requiere que las muestras sean muy delgadas (de lo contrario el haz de electrones
no podr atravesarlas y formar una imagen). En la prctica, el espesor mximo es de
aprox 0.1 um para una resolucin de 10 nm y de 5 a 10 nm para resoluciones de 1 nm.
2. El soporte de la muestra o rejilla, est formada por un disco cortado de una malla rgida
de cobre o platino, cuyos agujeros tienen unos 75 um de lado.
3. El mtodo ms comn para generar contraste es por medio de la deposicin de metales
pesados con un alto poder de dispersin. Los metales ms utilizados son el osmio,
platino, vanadio, plomo, cromo, tungsteno y oro.

Microscopia Electrnica
Preparacin de muestras y produccin de contraste
4. Inclusin, corte y tincin
1. Inclusin: procedimiento que consiste en el reemplazamiento gradual del material
acuoso de la muestra por un monmero orgnico (metacrilato de metilo).
2. Corte: una vez slida la muestra, se corta con un ultramicrtomo( cuchilla) en capas
de grosor de 5 a 100 nm.
3. Tincin: Por exposicin por disoluciones de sales de los metales pesados. La
palabra tincin alude a la deposicin de un metal por una reaccin qumica o por
formacin de un complejo con algunos de los componentes de la muestra, con el fin
de elevar la densidad electrnica

Microscopia Electrnica
Tincin
Formacin de rplicas carbn-platino.

Microscopia Electrnica
Tincin
Sombreado: Las partculas (en
disolucin o en suspensin) se depositan
por pulverizacin sobre una rejilla
cubierta por una pelcula de muestra. El
lquido se evapora con rapidez, la
muestra se coloca en condiciones de
vaco y se aplica un metal pesado por
evaporacin. Ello requiere hervir el metal
mediante el uso de tungsteno
incandescente al rojo blanco. Los
tomos de metal son proyectados en
todas direcciones.

Microscopia Electrnica
Tincin
Contraste negativo: Permite
contrastar las muestras mediante una
sustancia opaca a los los electrones.
Se emplean sustancias de alto
nmero atmico que, por tanto,
resultan opacas a los electrones
transmitidos. Tpicamente, estas
sustancias son acetato de uranilo,
citrato de plomo o molibdato de
amonio.
El tinte con el metal pesado penetra
en los intersticios de la partcula, pero
no en la partcula propiamente. La
imagen es el resultado de la
intensidad relativa del haz electrnico
con cada punto, que es proporcional
al grosor del material opaco en ese
punto

La partcula produce una reduccin del grosor real

de la pelcula opaca; y esta reduccin es la causa
que produce el contraste.

Microscopia Electrnica
Tincin
Contraste positiva: esta tcnica no
es de uso general con la mayor parte
de las macromolculas, porque por lo
general no es posible fijar en las
muestras un nmero elevado de
tomos pesados como para obtener
un buen contraste.
Aunque ha dado buenos resultados
con grandes molculas y estructuras
tales como ribosomas, ADN y RNA
polimerasa y colgeno.

Microscopia Electrnica
Tincin
Kleinschmidt: Tcnicas ms
utilizada en la ultima dcada para la
visualizacin del ADN o otras
macromolculas.

Microscopia Electrnica
Tincin
Kleinschmidt: Tcnicas ms
utilizada en la ultima dcada para la
visualizacin del ADN o otras
macromolculas.

Microscopia de barrido por sondeo

Microscopia de fuerza atmica (AFM)

Microscopia de efecto tnel

Microscopia de de barrido por sondeo

Microscopia de fuerza atmica (AFM)
El microscopio de fuerza atmica (AFM, de sus siglas
en ingls Atomic Force Microscope) es un instrumento
mecano-ptico capaz de detectar fuerzas del orden de
los nanonewtons. Al rastrear una muestra, es capaz de
registrar continuamente su topografa mediante una
sonda o punta afilada de forma piramidal o cnica. La
sonda va acoplada a un listn o palanca microscpica
muy flexible de slo unos 200 m. El microscopio de
fuerza atmica ha sido esencial en el desarrollo de la
nanotecnologa, para la caracterizacin y visualizacin
de muestras a dimensiones nanomtricas (1 nm)

Microscopia de de barrido por sondeo

Microscopia de efecto tnel (STM)
El microscopio de efecto tnel (STM) es un instrumento
que permite visualizar regiones de alta o baja densidad
electrnica superficial, y de ah inferir la posicin de
tomos individuales o molculas en la superficie de una
red. La "observacin" atmica se ha vuelto una tarea
comn en muchos laboratorios debido al bajo costo de
este tipo de microscopa en comparacin con la
microscopa electrnica.

Microscopia de de barrido por sondeo

Microscopia de efecto tnel (STM)
El microscopio de efecto tnel (STM) es un instrumento
que permite visualizar regiones de alta o baja densidad
electrnica superficial, y de ah inferir la posicin de
tomos individuales o molculas en la superficie de una
red. La "observacin" atmica se ha vuelto una tarea
comn en muchos laboratorios debido al bajo costo de
este tipo de microscopa en comparacin con la
microscopa electrnica.