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Universidad Autnoma
Metropolitana
Prctica No. 4
Fundamentos de la cromatografa en
columna y en capa delgada
Laboratorio de Qumica
Orgnica
Profesor: Negrn Silva Guillermo
Enrique
Rojas Sandoval Maria Sarai
Ayudante: Rodrguez Romn Viridiana
Rojas Sandoval Maria Sarai
Martes 10:00 13:00 hrs.
MARCO TERICO
La cromatografa es un mtodo que permite la separacin,
identificacin y determinacin de los componentes qumicos en
mezclas complejas.
Los mtodos cromatgraficos hacen uso de una fase estacionaria y
una fase mvil. En todas las separaciones cromatografcas, la
muestra se desplaza con una fase mvil, que puede ser un gas, un
lquido o un fluido. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase
estacionaria con la que es inmiscible, y que se fija a una columna o a
una superficie slida. Las dos fases se eligen de tal forma, que los
componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la
fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son
fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente
con el flujo de la fase mvil; por el contrario, los componentes que se
unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como
consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra
se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse
cualitativa y/o cuantitativamente.
En esta prctica de laboratorio se realizara 2 tipos de cromatografa,
en placa fina y en columna.
Placa fina
La cromatografa en capa fina (TLC) es una tcnica analtica rpida
y sencilla, muy utilizada en un laboratorio. Esta permite determinar el
grado de pureza deun compuesto, determinar as la efectividad de un
a etapa de purificacin,
comparar muestras (si dos muestras corren igual en placa podran se
r idnticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la mis
ma sustancia), realizar el seguimiento de una reaccin, estudiar cmo
desaparecen los reactivos y cmo
aparecen los productos finales o saber cundo la reaccin ha acabado
.
Determinacin del Rf
La retencin y la selectividad en la separacin dependen de los
valores respectivos de las constantes de los diferentes equilibrios
qumicos que tienen lugar, que estn en funcin de:
Adsobentes y eluyentes
Los dos adsorbentes (fase estacionaria) ms ampliamente utilizados s
on la gel de slice (SiO2) y la almina (Al2O3), ambas de carcter pola
r.. El
adsorbente debe ser inerte con las sustancias a analizar y no actuar c
omo catalizador en reacciones de descomposicin. El orden de eluci
n de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase
mvil o eluyente.
Este puede ser un disolventenico o dos miscibles de distinta polarida
d. En el siguiente recuadro se recoge
por orden creciente de fuerza eluyente los disolventes ms comnme
nte empleados.
Hexano < tetraclorometano < cloroformo < diclorometano < acetato
de etilo < acetona < 2propanol < metanol < agua
En general, estos disolventes se caracterizan por tener bajos puntos d
e ebullicin y viscosidad, lo que les permite moverse con rpidamente
. Usualmente se emplea una mezcla de dos disolventes en
proporcin variable.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
Cromatogr
afia en
placa fina
Para el reactivo A, B,
C, D, E y F, Buscar la
fase ideal
mezclar una
combinacion en
proporcion diferente
o igual de acetato de
etilo y eter de
petroleo como fase
En cada placa de
silica poner una 4
gota s de A,B, C, D, E,
y F respectivamente
mediante un capilar
si no aparece una
mancha cerca del
cento seguir
probando con una
diferente propotcion
de fase.
Cromatogra
fia en
columna
hasta 10 cm
drenar parcialmnte
la fase movil
verter nuestra
solucin a separar
abrir valvula
agregar de 1 a 3 ml
de fase movil
ir llenando tubos de
ensayo con lo que
salga de la bureta
colocralos en
matraces esfericos y
llevralos a
concentrar al
rotavapor.
verter suavemente la
mezcla de silica gel
MATERIAL Y REACTIVOS
Material
Diclorometano
ter de petrleo
Reactivos
Hexano
Acetato de etilo
Acetona
OBSERVACIONES
Cromatografa en placa fina
Reactivos ocupados: A, B, C, D, E y F
Para reactivo A, B y C
Para reactivo D, E y F
Para esta
encuentran
ideal para
etilo/ter de
Co
mp
ues
to
A
Com
D
pon
ente
E
A
FB
C
D
E
F
Fase
Acetato de
petrleo
Acetato de
petrleo
Acetato de
petrleo
DT
Acetato
de
(m
petrleo
m)
Acetato
de
34
petrleo
38
Acetato
de
37.
petrleo
5
35
35
38
etilo/ ter de
Pro
por
cin
1:1
etilo/ ter de
0:2
etilo/ ter de
1:2
Di ter de
etilo/
(m
m) ter de
etilo/
1:1
1:1
2:1
13
25 ter de
etilo/
16
20
15
14
Tabla 2.
Cromatografa en columna
X
Y
Tubo 1
Tubo 2, 3, 4 Y 5
Tubo 6, 7, 8 y 9
No
.
tu
bo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
Cont
enid
o
nada
X
X
X
X
nada
nada
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Imagen 1. Placa
cromatografica revelada
Imagen 2. Matraz
compuesto menos polar
Imagen 3. Matraz
compuesto ms polar.
CALCULOS
B
C
D
E
F
DT
(m
m)
34
38
37.
5
35
35
38
Di
(m
m)
13
25
16
20
15
14
Rfi =
Di
DT
Tabla 5. RFi
Rfi
Di
DT
RfA
RfB
RfC
RfD
RfE
RfF
RfA =
13 mm
=0.382
34 mm
RfB =
25 mm
=0.658
38 mm
0.382
0.658
RfC =
16 mm
=0.427
37.5 mm
0.427
RfD =
20 mm
=0.571
35 mm
RfE =
15 mm
=0.429
35 mm
RfF =
14 mm
=0.368
38 mm
0.571
0.429
0.368
ANALISIS DE RESULTADOS
CONCLUSION
BIBLIOGRAFIA
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/cromatografa (25-febrero2016)
http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm (25-FEBRERO-2016
Alicia Lamarque. (2000). Fundamentos terico-prcticos