PRCTICANo.1:CromatografaenPapel1.

AnlisisCualitativodeColorantesArtificialesenProductosAlimenticios

Palabras Clave: Cromatografa en Papel, Factor de Retencin, Factor de Retencin Relativo, Colorantes Artificiales,
FaseEstacionaria,FaseMvil,PatrnInterno.

Introduccin.
La industria alimenticia adopt por la utilizacin de colorantes para hacer mas
presentables al pblico muchos de sus productos, sin embargo, a travs de los aos se
determinquealgunoscolorantes(muchosdeellossintticos)tenanelpotencialdeperjudicar
la salud, por este motivo algunos de estos colorantes fueron completamente prohibidos.
Eventualmente se desarrollaron otros colorantes sintticos para reemplazarlos y algunos de
ellosseincluyennormalmentetantoenalimentoscomoenproductosfarmacuticoseldade
hoy.
La tartrazina es solo un ejemplo de este tipo de sustancias, es referido tambin como
amarillo # 5, y tiene el potencial de causar reacciones alrgicas en algunas personas y por lo
tantosupresenciadebedeserindicadaenlosalimentosenlosqueesincorporadatalescomo
bebidascarbonatadasycaramelosporcitaralgunos.Esprobableencontrartatrazinamezclada
conrojooazulparaformarotroscolorescomoelanaranjadoyelverde.

Fundamento.

La cromatografa, es la tcnica de anlisis qumico utilizada para separar sustancias

purasdemezclascomplejas.Estatcnicadependedelprincipiodeadsorcinselectiva,adems
esnecesarioaclararquetodoslosprocesoscromatogrficosposeen:unaFaseEstacionaria,que
funciona como soporte mecnico y participa activamente en los procesos de separacin (sta
defineeltipoyprincipiodelacromatografa).YunaFaseMvil,queenlamayoradeloscasos
es lquida, con las propiedades fsicas y qumicas que permiten el desplazamiento del analito
sobrelafaseestacionaria.Lafasemvilpuedeserdenaturalezaorgnica(solventesvoltiles),
oinorgnica(cidosdiluidosoagua),yhastaunacombinacindeambas.Enlacromatografade
gaseslafasemvilesunacombinacindegasesinertescomoelnitrgeno.
LaCromatografaenPapelesunmtodosencilloyrpido,lasfibrasdecelulosadelpapelfiltro
ordinarioretienenagua,queesvitalparaelproceso,ambosconformanlafaseestacionaria.La
fasemvilconsisteenestecaso,deunamezcladesolventesquetrepanlafaseestacionariapor
efecto de capilaridad dentro de un recipiente en donde se introduce el papel. Estos solventes
tienennecesariamentequeposeerlapolaridadrequeridaparaafectareldesplazamientodelos
analitos,delocontrarioestosnosemoverndelpuntodeaplicacin.

En la cromatografa en dos dimensiones es preciso llevar a cabo una medida del

desplazamiento del analito a lo largo del papel o placa que se utiliza, se denomina Factor de
Retencinysedefinecomo:

Rf=[distanciarecorridaporelanalito][distanciarecorridaporelfrentedelsolvente]

DebidoaquelosvaloresdefactorderetencinRfcasinopuedenreproducirsecondos
cifras significativas debido principalmente a que el valor del Rf es sensible a variables como el
grosordelafaseestacionaria,lahumedadquecontienelafasemvil,seacudeaunvalorque

Actualizada por Marvin Zacarias y Jorge Reyes.

resultemsrepresentativoconocidocomoFactordeRetencinRelativoRx.ElRxestdefinido
delasiguientemanera:

Rx=[distanciarecorridaporelanalito][distanciarecorridaporunasustanciadereferencia]

UnasustanciadereferenciaesporloregularunPatrnInternoelcualsedefinecomo
unasustanciadeidentidadconocidaydealtapurezaempleadaparafinescomparativos.UnRx
idealesiguala1,conlocualseconfirmalaidentidaddeunanalitoconrespectoalasustancia
referencia.

DebedetenerseencuentaqueelfactorderetencinRfpuedebrindarinformacinacercadela
afinidaddelamuestratantoalafasemvilcomoalafaseestacionaria.

Finalmente,lacromatografasepuedeclasificarenfuncindelascaractersticaspolares
o apolares de la fase estacionaria, de sta manera, la existe la cromatografa en Fase Normal
(cuandolafaseestacionariaespolar)yenFaseReversa(cuandoesapolar),lanaturalezadelos
solventesdebedeserinversaaladelafaseestacionariaparaefectuarlaseparacin.

Este tipo de cromatografa en dos dimensiones se suele llevar a cabo en una cmara
cromatogrficalaquepreferiblementedebedeestarsaturadaconlosvaporesdelafasemvila
emplearantesdecolocarenelinteriorelpapeloplaca.Lasfasesmvilestienenunavidacorta
principalmente si se emplean solventes orgnicos voltiles, estas deben ser reemplazadas
diariamente.

Objetivos:
1. Determinar la presencia de tartrazina y otros colorantes artificiales en productos
alimenticios.
2. Determinarseelcolorantesintticoamarillo#5seencuentrapresenteenotroscolores
utilizadosenalimentos.
3. Aplicarelfactorderetencinrelativoenlaidentificacindeloscolorantes.

Materiales.
PapelfiltroparacromatografaWhatmanNo.1oNo.3(Qualitative)dedimensiones7x8
cm.
Lananaturaldesgrasada.
CmaraCromatogrficadevidrio.
Estufa.
Capilares.
Beakerde10,50,100y250ml.
Variasdevidrio.
Erlenmeyerde125ml.
Embudos.
Probetasde100y10mL
Vialesdevidrio.
Papeldealuminio.
Maskingtape.
Tapemgico.
Materialusualdelaboratorio.

Reactivos.
Aguadesmineralizada
AcidoacticoglacialGR.J.T.Baker
AcetatodesodioGRMerck
AlcoholAnhidroGRJ.T.Baker
HidrxidodeamonioGRMallinckrodtAr.
nButanolGRMerck
CitratodesodioGRMerck
Estndaresdecolorantesartificiales
Rojo#3(Eritrosina)
Amarillo#6(Crepsculo)
Amarillo#5(Tartrazina)
Rojo#40(Allura)
Rojo#2

Procedimiento:
PreparacindelEstndardeColoranteArtificial(Cualitativo):
Pesar 0.05 g de estndar y disolverlo con 8 ml de agua desmineralizada, agregar esta
solucindentrodeunvial,perfectamenteidentificado.

PreparacindeFaseMvil.
1. FaseMvilA:secombinan50mLdenButanol,25mLdeEtanol,10mLdehidrxidode
amonioy15mLAguadesmineralizada.
2. Fase Mvil B: 2 g Acetato de sodio, 20 mL de Hidrxido de amonio y 80 mL de Agua
desmineralizada.
3. Ejecute inmediatamente la Preparacin de Cmara de Desarrollo que se describe ms
adelante.

PreparacindeFaseEstacionaria.
1. Sobre un trozo de papel Watman No. 3 de 14 x 9 cm se traza con un lpiz una recta
paralelaaunodelosbordesyaunadistanciadestede1cm.
2. Sobre esta lnea se ponen los puntos necesarios los cuales tienen que tener la misma
distanciaentresi.

PreparacindelaMuestra(ProcedimientodeExtraccin):
1. Enunbeakerde50mLpesaraproximadamente5gramosdemuestra(utilizarbotonetas
oclorets).
2. Alimentosconaltocontenidodeazcary/ograsa,debendeserprocesadosparaaislar
elcolorante,porloqueseprocedeaagregaretanolal70%hastacubrirbienlamuestra
ydebendepermanecerenreposodurante4horasmedianteagitacin.
3. Seguidamentefiltrarlamuestra.
4. Concentrarelextracto,colocarelbeakerenunaestufayevaporareletanolhasta
aproximadamente1mL.

ProcedimientodeSembradoenCromatografaenpapel:

1. Llevar a cabo la tcnica correspondiente al sembrado en la pgina de la seccin de

tcnicascomplementariasaliniciodeestemanual.
2. PidaasuinstructorlamuestradesconocidaMDC01ysimbrelaenelpapel.

PreparacindeCmaradeDesarrollo.
1. Coloque10mldeFaseMvildentrodelacmara(beacker100mL)ytpelopormedio
deunapiezadepapelaluminioquenopermitalasalidadelosvapores.
2. Deje reposar la cmara durante 15 minutos antes de proceder al Desarrollo
Cromatogrficoquesedescribemsadelante.

DesarrolloCromatogrfico:
1. Colocarelpapelcuidadosamentedentrodelacmaradedesarrolloamaneratalquese
sumerjauniformementedentrodelsolventeynounextremoprimero.
2. Dejarquelafasemviltrepeporelpapelhastaquealcanceaunclculoestimadode1
cmdelbordedelpapel.

3. Cuandoloanteriorsucedasaqueelpapelymarqueelfrentedelsolventeconunlpiz.
Luego seque el papel y efecte las marcas pertinentes para el clculo de los factores
correspondientes.

Resultados:
1. Calcularelfactorderetencindecadacompuesto.
2. Calcularelfactorderetencinrelativoparaaquellasmuestrasalasqueselecompare
conunpatrndereferencia.

AnlisisdeResultados:
Explicarlapresenciaoausenciadelcolorantetatrazinaenbasealosresultadosgenerados,
adems establezca los principios fsicos (capilaridad) y qumicos (desplazamiento de los
analitos)paraesteexperimento.

Cuestionario:
1. Para la separacin de pigmentos (sustancias que dan color a las plantas) como
carotenoides y xantofilas que tambin son colorantes utilizados en alimentos, puede
aplicarselatcnicadecromatografaenpapel?
2. Cmopodrahacerseunanlisiscuantitativodelatartrazinaydelosdemscolorantes
separadosporestatcnica?

3. Quotroscolorantesestnpresentesenlosalimentos?
4. Segndiferenciasenlaestructuramoleculardeloscolorantessonmsafinesomenosa
la fase mvil que colorantes presentan la caracterstica de tener un menor factor de
retardosobreelpapelutilizadocomofaseestacionaria?

Bibliografa:
1. KandelM.ChromatographyofM&Mcandies.JournalofChemicalEducation,1992(69):
988989
2. Tyson, J. Analysis , What Analytical Chemist Do. The Royal Society of Chemisty,
Cambridge,1988.vii+186p.(pp146)

3. Skoog,D.A.;Holler,F.J.&Nieman,T.A.PrincipiosdeAnlisisInstrumental.5taEdicin
McGrawHill/InteramericanadeEspaa,S.A.Espaa,2001,xxv+1028
4. Pavia, D.L., Lampman, G.M., Kriz, G.S. and Engel, R.G. "Introduction to Organic
Laboratory Techniques a Microscale Approach", 2nd Ed., Saunders Publishers (1995).
Pasto,D.,Johnson,C.andMiller,M."ExperimentsandTechniquesinOrganicChemistry,
1stEd.,PrenticeHall(1992).

Internet:Paramsinformacinpuedevisitar:
1. Chromatography:InSearchofYellowDye#5Autor:AnnVanBlaricum.ltimaActualizacin:1997.
[http://www.doggedresearch.com/chromo/]
2. CellulosechromatographyPapers.Autor:Watman.ltimaActualizacin:2007.
[http://www.whatman.com/CelluloseChromatographyPapers.aspx]