1. DEFINICIN DE ANTIBITICO.

Un antibitico es una sustancia qumica producida por un organismo viviente que posee una
actividad inhibitoria o germicida frente a ciertos microorganismos in vivo o in vitro, o de ambas
formas. La mayor parte de los antibiticos aislados los origina hongos y bacterias; entre los hongos,
las ms importantes son los penicilios, actinomicetos, aspergilios y hongos superiores.
2. PROPIEDADES DE LA PENICILINA.
Es activa frente a ciertas bacterias Gram-positivas en presencia de sangre, pus y fluidos
orgnicos.
Puede ser considerada atxica, ya que es posible administrar dosis muy grandes durante un gran
periodo de tiempo sin efectos perjudiciales.
Es soluble en agua, muy soluble en acetona, acetato de amilo, ciclohexano, dioxano, acetato de
etilo, etanol y ter, y poco soluble en benceno, cloroformo y tetracloruro de carbono.
La descomponen los cidos y los lcalis fuertes. Se inactiva por agentes oxidantes; el contacto
con ciertos metales pesados (cobre, plata, plomo y mercurio) debe ser evitado, ya que tienden a
destruirla; tambin lo hacen los alcoholes (especialmente metanol), los compuestos sulfhidrlicos, el
calor y por repetida congelacin y descongelacin [1].
3. PRODUCCIN DE PENICILINAS.
La penicilina se puede producir por cultivos superficial o sumergido. En los mtodos de cultivo
superficial, el moho crece en la superficie de capas poco profundas del medio de fermentacin o
produccin, en escala de laboratorio, instalaciones piloto o comercial. En los mtodos de cultivo
sumergido el moho se desarrolla sumergido en el medio de fermentacin en frascos agitados,
tambores rotatorios o tanques profundos.
La penicilina G y la penicilina V son producidas utilizando procesos sumergidos en
fermentadores de 40.000-200.000 litros (debido a las dificultades en el suministro de oxgeno no
pueden ser empleados tanques mayores). La fermentacin de penicilina es un proceso aerbico con
una velocidad de absorcin volumtrica de oxgeno de 0,4-0,8 mM/L min. Para el mezclado se
suelen utilizar varios impulsores de tipo turbina (120-150 rpm). El rango de temperatura ptima es
de 25-27C.
En un esquema tpico de produccin de penicilina el inoculo se inicia utilizando esporas
liofilizadas. Debido a la gran variabilidad de las cepas de alta produccin, es necesario el
mantenimiento cuidadoso de las cepas. La concentracin de esporas (ptima 5x103/ ml) y la
formacin de agregados son cruciales para el rendimiento subsecuente. Si se quiere conseguir una
velocidad ptima de formacin de penicilina, los agregados (pellets) no deben crecer como bolas
compactas sino de una forma suelta.
Despus de varias etapas de crecimiento est preparado el cultivo de produccin. En la
fermentacin tpica de penicilina existe una fase de crecimiento de unas 40h con un tiempo de
duplicacin de 6h, durante la cual se forma la mayor parte de la masa celular. El suministro de
oxgeno es crtico en el cultivo en crecimiento ya que el aumento de la viscosidad dificulta la
transferencia de oxgeno. Despus de la fase de crecimiento, el cultivo llega a la fase real de
produccin de penicilina. Debido al aporte de distintos componentes al medio, la fase de produccin
puede extenderse hasta 120-160h.

Figura1. Esquema de produccin de la penicilina.

Actualmente la extraccin con solventes es la base para la separacin y purificacin de la
penicilina. El primer paso consiste en separar el micelio del medio de cultivo empleando un filtro
rotatorio a vaco tipo cilndrico. El filtrado rico en penicilina es luego enfriado en un intercambiador
de calor a 0 - 4 C con el objeto de disminuir la degradacin enzimtica y qumica durante las
etapas de extraccin posteriores.
Las penicilinas G y V son cidos fuertes (pKa entre 2,5 3,1). Las formas cidas son solubles en
muchos solventes orgnicos y se pueden extraer con un alto rendimiento en acetato de amilo o de
butilo a pH 2.5 - 3.0. La extraccin se puede realizar en operaciones continuas, a contracorriente en
extractores centrfugos en etapas mltiples, a temperaturas de 0 - 3 C. Otra posibilidad es el
empleo de mezcladores estticos o decantadores, los cuales tienen en menor costo de inversin.
Se debe tener en cuenta que tanto la penicilina G como la V se degradan en medio cido con una
cintica de primer orden a una velocidad proporcional a la temperatura y recproca con respecto al
pH. Esto hace que la vida media en condiciones de eficiente extraccin en medio cido sea muy
reducida. Sin embargo como la forma V en tales condiciones es ms estable que la G, si el objetivo
es obtener 6-amino penicilnico (6-APA) la produccin de penicilina V es ms aconsejable.
La extraccin de penicilina se puede realizar en una o ms etapas sucesivas, con una
acidificacin del caldo filtrado con H 2SO4 o H3PO4 al 10% P/V y con el agregado de un agente
surfactante (0,003 - 0,1% P/P, en el solvente), realizndose la extraccin y concentracin en
extractores centrfugos.
Dependiendo de las especificaciones de uso final, el solvente conteniendo penicilina se puede
tratar con carbn para separar pigmentos y otras impurezas. Esta etapa actualmente no se realiza
debido a las bajas impurezas de los caldos y a los altos rendimientos obtenidos.
La cristalizacin se puede realizar desde la fase acuosa si se desea, siendo los valores crticos las
concentraciones de sodio o potasio, la temperatura, la concentracin de penicilina y el pH. En caso
de hacerse la cristalizacin a partir de un solvente se requiere tambin un exceso de Na + o K+,
siendo los cristales recuperados en un filtro rotatorio a vaco. Estos cristales son lavados y presecados con un solvente voltil que tambin separa impurezas coloreadas. El secado definitivo se
puede realizar con aire caliente, vaco o calor radiante.

La penicilina cristalina G o V as obtenida puede ser empleada como tal o como intermediario
que es convertido a 6-APA para obtener nuevas penicilinas semisintticas, cuidando en todos los
casos que los productos debern tener un grado farmacutico. El cido 6-APA puede ser obtenido
por va enzimtica (penicilinacilasa) o qumica; sin embargo todas estas etapas escapan al alcance
de esta monografa, por lo tanto se remite al lector interesado a la bibliografa.
El medio de un cultivo tpico alimentado puede variar dependiendo de la cepa, y generalmente
consiste en:
Lquido de maceracin de maiz (4-5% peso seco, fuente de nitrgeno y otros factores de
crecimiento).
Una fuente de Nitrgeno adicional, harina de soja, extracto de levadura o suero.
Una fuente de carbono, lactosa.
Varios tampones
El pH se mantiene constante a 6,5.
El cido fenilactico o el fenoxiactico se alimentan continuamente como precursores (0,50,8% del total).
Los procesos con alimentacin de glucosa o melazas tambin tienen xito. En estos casos las
velocidades de alimentacin son de 1,0 - 2,5 kg/(m 3. h), con una concentracin de glucosa de 500
kg /m3.
Aproximadamente el 65% de la fuente de carbono metabolizada se utiliza para el mantenimiento
energtico, el 25% para el crecimiento y slo el 10% para la produccin de penicilina.
4. ENZIMAS QUE PARTICIPAN EN LA BIOSNTESIS.
La mayora de los estudios reportados para el establecimiento y caracterizacin de las enzaimas
que participan en la formacin de penicilina se han llevado a cabo con extractos acelulares. Las
enzimas que intervienen en la sntesis de penicilina G son: la L--aminoadipil-L-cisteinil-D-valina
sintetasa, la isopenicilina N-aciltransferasa, la isopenicilina N-amidasa y la 6-aminopenicilnico
aciltransferasa [2].
5. BIOSNTESIS EN Penicillium chrysogenum
La ruta biosinttica de penicilinas, cefalosporinas y cefamicinas, comienza con la condensacin
no ribosmica de tres aminocidos (cido L--aminoadpico, L-cistena y L-valina) para sintetizar
el tripptido (-L--aminoadipil)-L-cisteinil-D-valina (abreviado ACV) [2]. La enzima que cataliza
esta reaccin, es la ACV sintetasa (dicha enzima, es caracterstica de todos los microorganismos
productores de penicilinas y cefalosporinas). La ACV sintetasa, es una enzima multifuncional que
lleva a cabo la activacin con ATP de los tres aminocidos precursores, la isomerizacin de la valina
del enantimero L a su enantimero D, y la formacin de enlaces peptdicos entre los tres
aminocidos sintetizando la ACV. Esta enzima est codificada por el gen pcbAB.
En un segundo paso, el tripptido ACV se cicla formando un enlace tiazolidnico, dando lugar a
la formacin de la isopenicilina N. Este intermediario de la ruta es el primero que tiene actividad
antibitica y, en l, est presente el anillo -lactmico y el anillo tiazolidnico, caractersticos de las
penicilinas. La enzima responsable de su sntesis es la isopenicilina N sintasa codificada por el gen
pcbC. Las rutas de sntesis de cefalosporinas y cefamicinas comparten los dos primeros pasos con la
ruta de sntesis de penicilina [3].
En este punto, las rutas divergen para los dos microorganismos: en el caso del Penicillium (y
otros hongos productores de penicilina), la cadena lateral de la -aminoadipyl es intercambiada por
una cadena hidrofbica lateral, mientras para el Acremonium, la isopenicillina N es convertida a
penicilina N por medio de dos sistemas enzimticos: acil CoA sintetasa y acil CoA racemasa;
aunque la transformacin final en penicilina N tambin requiere la hidrlisis del tioster CoA, por
medio de diferentes tioesterasas. En el caso de la ruta biosinttica de la cefalosporina, la penicilina
N es transformada subsecuentemente a desacetoxicefalosporina C, expandiendo el anillo

tiazolidnico de cinco tomos en un anillo dihidrotiazdico de seis anillos (tpico de cefalosporinas

y cefamicinas). La enzima responsable de este pasa, llamada DAOC sintasa/DAC hidroxilasa, est
tambin a cargo de la hidroxilacin de la desacetoxicefalosporina C, conduciendo a la formacin de
desacetilcefalosporina C [4].
A partir de la isopenicilina N, la cadena lateral hidroflica de cido L--aminoadpico puede
remplazarse por una cadena lateral hidrofbica, tal como ocurre en la biosntesis de penicilinas o
conservarse como ocurre en la biosntesis de cefalosporinas y de cefamicinas.
En P. chrysogenum, la isopenicilina N sufre la sustitucin de la cadena lateral de aminoadipato por cido fenilactico o cido fenoxiactico activando como CoA dando lugar a la
formacin de la penicilina G o la penicilina V, respectivamente. Este ltimo paso es especfico de
especies productoras de penicilinas hidrfobas [3].

Figura 2. Rutas biosintticas para la penicilina y la cefalosporina. Campos et al Penicillin and

cephalosporin production.

6. ESTRUCTURA QUMICA.
La estructura bsica de las penicilinas es el cido 6-aminopenicilnico (6-APA), que consiste en
un anillo tiazolidnico con un anillo -lactmico condensado. El 6-APA lleva una parte variable
acilada en la posicin 6.

Figura 3. Estructura de la penicilina.

7. REGULACIN DE LA SNTESIS DE PENICILINA.
Existen muchos factores que estimulan o inhiben la produccin de antibiticos -lactmicos en
los diferentes microorganismos productores. Entre estos factores se incluye la fuente de carbono,
nitrgeno o azufre, el pH del medio de produccin o la presencia de ciertos aminocidos. En P.
chrysogenum, son la fuente de carbono y de nitrgeno, as como la lisina, algunos de los elementos
ms importantes que regulan la sntesis de penicilina.
a. Regulacin por la fuente de carbono
La fuente de carbono presente en el medio de produccin es una de las variables que afecta de
manera ms determinante a la produccin de -lactamas en varios microorganismos, como P.
chrysogenum, A. chrysogenum y S. clavuligerus.
En P. chrysogenum, se conoce desde hace tiempo que la presencia de glucosa, fructosa, galactosa
y sacarosa en los caldos de cultivo provoca la inhibicin de la sntesis de penicilina. Esta
disminucin en la produccin de penicilina se debe a la represin de los genes de biosntesis de
penicilina pcbAB y pcbC.
b. Regulacin por la fuente de nitrgeno.
Algunos de los compuestos qumicos que P. chrysogenum puede utilizar como fuente de
nitrgeno han demostrado interferir en la capacidad de producir penicilina de este microorganismo.
Una de las fuentes de nitrgeno que tiene un efecto ms drstico sobre la sntesis de penicilina es el
amonio. En los ltimos aos se han clonado y caracterizado genes de P. chrysogenum que codifican
protenas reguladoras de la transcripcin gnica dependientes de la fuente de nitrgeno. Uno de
estos genes, denominado nre y homlogo a los genes nit-2 de Neurospora crassa y areA de A.

nidulans (Kudla et al., 1990), reconoce una secuencia diana que est presente en la regin
intergnica pcbAB-pcbC de P. chrysogenum.
Algunos aminocidos, que pueden ser utilizados como fuente de nitrgeno por P. chrysogenum,
tambin han demostrado inhibir la sntesis de penicilina. Sin embargo, en este caso el mecanismo de
inhibicin parece deberse a que estos aminocidos (tirosina, triptfano, fenilalanina y metionina)
interfieren en el transporte de cido fenilactico, necesario para su incorporacin como cadena
lateral de la penicilina G.
c. Regulacin por lisina.
En P. chrysogenum la sntesis de penicilina es fuertemente inhibida cuando se aade lisina al
medio de produccin. Este efecto se debe a la retrorregulacin de la primera enzima de la ruta de
sntesis de lisina. Dado que el -aminoadipato, precursor de la sntesis de penicilina, es un
intermediario de la ruta de la lisina, la reduccin en el flujo de metabolitos a travs de esta ruta
limita el suministro de -aminoadipato para la sntesis de penicilina.
En Aspergillus nidulans, se ha descrito que la lisina reprime la transcripcin de los genes de la
ACV sintetasa e isopenicilina N sintasa, lo que puede constituir la causa de la disminucin de la
sntesis de penicilina por lisina en este microorganismo. En P. chrysogenum, sin embargo, la sntesis
de las enzimas de la ruta de formacin de penicilina en P. chrysogenum no se ve afectada por lisina.
Los estudios sobre la inhibicin de la homocitrato sintasa por lisina, junto con el hecho de que la
adicin de homocitrato o -aminoadipato a los caldos de fermentacin reverta la inhibicin por
lisina de la produccin de penicilina, demostraron que la regulacin negativa de la sntesis de
penicilina es debida a la inhibicin de la homocitrato sintasa, lo que induce un descenso en la
concentracin intracelular de -aminoadipato.

Bibliografa
[1] Microbiologa Industrial
[2] Biosntesis de los antibiticos B-lactmicos.
[3] Caracterizacin bioqumica y molecular del metabolismo del cido Pipeclico en Penicillium
chrysogenum
[4] Penicillin and cephalosporin production: A historical perspective.