EXPERIMENTACIN 4

SEPARACIN DE UNA MEZCLA DE PIGMENTOS POR MEDIO DE

CROMATOGRAFA DE PAPEL
Objetivo
Separar los pigmentos en una muestra de cloroplastos, identificndolos por medio de
su color y su factor de retraso.
Fundamentos
La cromatografa comprende un conjunto de tcnicas que tienen como finalidad la
separacin de mezclas basndose en la diferente capacidad de interaccin de cada
componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase mvil
(una muestra constituida por una mezcla que contiene el compuesto deseado en el
disolvente) a travs de una fase estacionaria fija slida. La fase estacionaria retrasa
el paso de los componentes de la muestra, de forma que los componentes la
atraviesan a diferentes velocidades y se separan en el tiempo. Cada uno de los
componentes de la mezcla presenta un tiempo caracterstico de paso por el sistema,
denominado tiempo de retencin. Cuando el tiempo de retencin del compuesto
deseado difiere del de los otros componentes de la mezcla, ste se puede separar
mediante la separacin cromatogrfica.
La separacin de los diferentes componentes de una mezcla que se encuentran en
un lquido o gas es el resultado de las diferentes interacciones de los solutos a
medida que se desplazan alrededor o sobre una sustancia lquida o slida (la fase
estacionaria). Las diversas tcnicas para la separacin de mezclas complejas se
fundamentan en la diversidad de afinidades de las substancias por un medio mvil
gas o lquido y un medio absorbente estacionario (papel, gelatina, almina o slice).
La cromatografa en papel, es una tcnica en la que se aplica un pequeo volumen
de la muestra cerca de uno de los extremos de una hoja de papel filtro. Este tipo de
cromatografa puede ser ascendente, en la que se sujeta a la parte superior de la
cmara y se sumerge en el solvente, que se encuentra en el fondo, entonces el
solvente se mueve hacia arriba por capilaridad. Al realizarse la separacin, los
solutos de la mezcla original migran a lo largo del papel con diferentes velocidades,
dependiendo de la solubilidad en el solvente. La relacin de migracin de una
sustancia ( Rf ) se expresa con la siguiente frmula:
distanciarecorrida por la muestra (soluto)
Rf =
distanciarecorrida por la mezcla eluyente ( fase mvil )

Proceso experimental
Jaime Alejandro Montao Carrillo
Cdigo 212672012
Laboratorio de Qumica para Ingenieros. Seccin D06
Octubre 16, 2015

EXPERIMENTACIN 4

1. Marcamos con un lpiz una lnea a 1 cm de la orilla y colocamos una gota de

clorofila, dejamos secar y agregamos otras 2 gotas en el mismo punto.
2. Agregamos algunas gotas de metanol en un tubo e introducimos la tira de
papel filtro sin que el metanol tocara al punto de clorofila.
3. Retiramos la tira de papel y dejamos secar para observar la separacin de los
pigmentos y determinar su Rf .
4. Identificamos por el color de que sustancia se trataba.
5. Repetimos los pasos siguientes pero con tinta roja en lugar de la clorofila.
Resultados y clculos
Con la clorofila se obtuvieron los siguientes resultados:
Rf clorofilaa = 0.6
Rf clorofilab = 0.72
Rf carotenos = 0.2
Con la tinta se obtuvieron los siguientes resultados:
Rf rojo claro= 0.3636
Rf rojo intenso= 0.5909
Rf rojo= 0.7272

Conclusiones
Pudimos observar la separacin de cloroplastos de nuestra sustancia gracias a la
capilaridad que hace que el eluyente los conduzca por el papel filtro hacia arriba y
observar su diferente solubilidad, igual con la tinta, para despus sacar su Rf
dividiendo la distancia recorrida por la muestra entre la distancia del eluyente.
Referencias bibliogrficas
Fundamentos de Cromatografa, Carol H. Collins, Gilberto L. Braga, Pierina S.
Bonato, 2006, UNICAMP.

Jaime Alejandro Montao Carrillo

Cdigo 212672012
Laboratorio de Qumica para Ingenieros. Seccin D06
Octubre 16, 2015