Gua de Trabajos

Prcticos para Anlisis

Instrumental
Espectroscopia-AA-HPLC-GCProfesores:
Claudia Gimenez
Eduardo Aprigliano

Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Trabajo Prctico N1
Anlisis Espectrofotomtrica de una solucin de Nitrato de Cobalto
OBJETIVO
Utilizacin del Espectrofotmetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm).
Realizacin de curva de calibracin (Abs.vs.), (Abs. vs. Conc.).
Medicin de muestras problemas.
MATERIALES
Matraces aforados de 100 ml.
Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml.
1 vaso de precipitado de 500 ml.
Pipetas de vidrio.
Frasco lavador (pisetas).
REACTIVOS
Solucione de nitrato de Co de 40000 mg /L (ppm) (40 gr/l)
Equipo:
Espectrofotmetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm).
MODO DE USO
1. Encender el equipo.
2. Precalentar por 15 minutos, para estabilizar el equipo.
3. Colocar la longitud de onda con la perilla.
4. Colocar en cada cubeta blanco, estndar 1,2, 3.
5. Abrir la tapa del equipo, insertar blanco + estndar 1, 2,3.
6. Cerrar la tapa.
7. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posicin de medicin (blanco).
8. Presionar el botn 100% transmitancia (T 100 %).
9. Presionar la tecla Modo, donde la pantalla exhibe la Absorbancia (A 0.000).
10. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posicin de medicin muestra
de referencia 40 g/L (40000 mg/L o ppm). La pantalla exhibe la absorcin de la
muestra.
11. Presionar la tecla Modo, donde la pantalla exhibe Concentracin.
12. Presionar el botn Arriba y Abajo, a los efectos de ingresar la concentracin de
la muestra de referencia. Presionar Enter.- (C 40).
13. Pantalla exhibe F (factor) -F 62-.
14. Presionar Modo hasta C.
15. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posicin de medicin. M1
16. Medir la concentracin de M1.
17. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posicin de medicin M2
18. Medir la concentracin de M2.
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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

19. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posicin de medicin M3.
20. Medir la concentracin de M3.
21. Retirar las cubetas, limpiar restos de solucin.
22. Poner el porta cubeta en su posicin de inicio.
23. Cerrar el cobertor.
24. Apagar el equipo.
Se puede medir en modo Absorbancia para realizar la curva de calibracin.
CURVA DE CALIBRACIN
A partir de solucin de Co (NO3)2. 40000 mg/L (ppm) se preparan, tres soluciones de
10000 ppm, 20000 ppm y 30000 ppm. Utilizo 40000 ppm como STD para obtener el
factor.
Diluciones: a partir de la solucin madre (40000 ppm) preparar muestras incgnitas de:
M1=10/25 (por duplicado), M2=10/50 (por duplicado), M3= 20/50 (por duplicado),
M4=15/50.

Determinar en forma terica la concentracin esperada. Informar.

Usando la frmula siguiente:
VI.CI = VF. CF
Podemos calcular, cuanto hay que medir de la solucin inicial (dato en lnea punteada).
Tener en cuenta que esto slo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley
Lambert Beer.
SOLUCIONES A UTILIZAR
10000 ppm. =ml
20000 ppm. =.ml
30000 ppm. =.ml
Se procede a medir cada patrn para obtener la curva de calibracin (Abs.vs.Conc.)
MEDIDA

mg./L

BLANCO
SOL 1
SOL 2
SOL 3
SOL 4
M1
M2
M3
M4

0
10000
20000
30000
40000
10/25
10/50
20/50
15/50

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ABSORBANCIA
(U.A)
0

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

M1=10/25 (por duplicado), M2=10/50 (por duplicado), M3= 20/50 (por duplicado),
M4=15/50.

REALIZAR CURVA DE CALIBRACION: ABSORBANCIA VS. LONGITUD DE

ONDA.

Realizamos esta mediciones sucesivas desde los 460 nm hasta 600 nm para observar a qu longitud de onda se produce la mayor absorbancia (Co (NO 3)2: 510 nm).

Concentracin (mg/L)
0
10000
20000
30000
40000

Absorbancia
0
0,169
0,341
0,44
0,666

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

X= (y+0,157)/0,160

ppm

ANALISIS DE LA MUESTRA
Se proceder la medicin de las muestras problema.
Muestra Problema N 1=.. (g/L)
Muestra Problema N 2=.. (g/L)

Se expresar el dato en mg/L (ppm).

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Trabajo Prctico N2
Anlisis Espectrofotomtrico de una solucin de Sulfato de Cobre
OBJETIVO
Utilizacin del Espectrofotmetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm).
Realizacin de curva de calibracin (Abs.vs.), (Abs. vs. Conc.).
Medicin de muestras problemas.
MATERIALES
Matraces aforados de 100 ml.
Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml.
1 vaso de precipitado de 500 ml.
Pipetas de vidrio.
Frasco lavador (pisetas).
REACTIVOS
Solucin de Sulfato de Cobre de 40000 mg /L (ppm) (40 gr/l)
Equipo:
Espectrofotmetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm).
CURVA DE CALIBRACIN
A partir de solucin de CuSO4 40000 mg/L (ppm) se preparan, tres soluciones de 10000
ppm, 20000 ppm y 30000 ppm. Utilizo 40000 ppm como STD para obtener el factor.
Diluciones: a partir de la solucin madre (40000 ppm) preparar muestras incgnitas de:
M1=10/25 (por duplicado), M2=10/50 (por duplicado), M3= 20/50 (por duplicado),
M4=15/50Determinar en forma terica la concentracin esperada.

Informar
Usando la frmula siguiente:
VI.CI = VF. CF
Podemos calcular, cuanto hay que medir de la solucin inicial (dato en lnea punteada).
Tener en cuenta que esto slo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley
Lambert Beer.
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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

SOLUCIONES A UTILIZAR
10000 ppm. =ml
20000 ppm. =.ml
30000 ppm. =.ml
Se procede a medir en 640 nm cada patrn para obtener la curva de calibracin
(Abs.vs.Conc.)
MEDIDA

mg./L

BLANCO
SOL 1
SOL 2
SOL 3
SOL 4
M1
M2
M3
M4

0
10000
20000
30000
40000
10/25
10/50
20/50
15/50

ABSORBANCIA
(U.A)
0

M1=10/25 (por duplicado), M2=10/50 (por duplicado), M3= 20/50 (por duplicado),
M4=15/50.

ANALISIS DE LA MUESTRA
Se proceder la medicin de las muestras problema.
Muestra Problema N 1=.. (g/L)
Muestra Problema N 2=.. (g/L)

Se expresar el dato en mg/L (ppm).

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Trabajo Prctico N3

Anlisis Espectrofotomtrico de cido saliclico

OBJETIVO
Cuantificar cido saliclico a partir de la sntesis de cido acetil saliclico obtenido en el
laboratorio de qumica orgnica II
MATERIALES
Matraces aforados de 50 ml.
Vasos de precipitado de 100 ml.
Probetas de 50ml
Pipetas de vidrio.
Tubos de Hemlisis
Micro pipetas
Frasco lavador (picetas).
REACTIVOS
Solucin de

0,5 % m/v ligeramente cido

Equipo:
Espectrofotmetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm).
Se puede medir en modo Absorbancia para realizar la curva de calibracin.

CURVA DE CALIBRACIN
A partir de una solucin de cido acetil Saliclico de 1.0g/l, preparar cuatro soluciones
de 20 PPM, 30PPM, 40PPM y 60 PPM.
Usar la frmula siguiente:
VI.CI = VF1. CF
Podemos calcular, cuanto volumen hay que medir de las soluciones iniciales.
Tener en cuenta que esto slo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley
Lambert Beer. (0.1 a 0.8 de absorbancia)

El volumen final sern tubos de 5ml.

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Tcnica a realizar:
Estndar
Muestra
Reactivo FeCl3

Tubo Bco.
--------------------2 ml

Tubo estndar
2 ml
----------0.22 ml

Tubo Mtra.
----------2 ml
0.22 ml

Dejar de 2 a 5 minutos a temperatura ambiente y leer en espectrofotmetro a 560 nm

Se procede a medir cada patrn para obtener la curva de calibracin.
MEDIDA

PPM

BLANCO
estndar 1
estndar 2
estndar 3
estndar 4
Muestra1
Muestra 2

0
20
30
40
60

ABSORBANCIA
(U.A)
0

Muestra 1: Pipetear 1 ml de sc 20PPM ms 2 ml sc de 30 PPM

Muestra 2: Pipetear 1 ml de sc 60 PPM ms 2 ml de sc de 40PPM
Calcular la concentracin terica y comparar el resultado obtenido en forma prctica
ANALISIS DE LA MUESTRA
Una vez realizada la curva de calibracin por Excel se proceder la medicin de las
muestras problema utilizando la frmula lineal de dicha grfica.
Muestra Problema N 1=.. (PPM)
Muestra Problema N 2=.. (PPM)

Por ejemplo:
concentracin
g/l

Absorbancia

Muestra problema

0,25
0,3
0,282214208

0,444
0,518
0,493

1 ml sc ,,,,,,,0,25g/l
2ml sc..0,3 g/l

blanco
Estndar 1
Estndar 2
Muestra

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

1000 ml,,,,,,,,,0,25 g Aas

1 ml 0,00025gr
1000ml,,,,,,,0,3 gr Aas
2 ml ,,,,,,,,,0,0006 gr Aas

Soluto total 0,0006 +0,00025= 0,00085 gr Aas

Valor Terico 0,283 gr /l

Valor prctico 0,2822 gr/l

3 ml,,,,,,,,,0,00085 gr Aas
1000 ml ,,,,,,,0,283 gr /l

Curva de Calibracin de Ac Saliclico

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Trabajo Prctico N4

Anlisis Espectrofotomtrico de Nitritos en Agua

OBJETIVO
Cuantificar Nitritos a partir de una muestra de agua recolectada de una pecera del laboratorio de Biologa.
MATERIALES
Vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de vidrio.
Tubos de Hemlisis
Micro pipetas
Frasco lavador (picetas).
REACTIVOS
Solucin de Acido Sulfanilico:
Se pesan 3.3gramos de Acido Sulfanilico y se diluye con 800 ml de agua destilada caliente y se le agregan 200 ml de Acido Actico Glaciar.
Solucin de Acetato de Alfa Naftilamina:
Se pesan 0.5 gr. de Alfa Naftilamina y se diluyen con 100 ml de agua destilada, se pone
a hervir durante 5 minutos y se filtra atraves de un algodn , luego se agregan 200 ml
deAcido Actico Glaciar y se lleva a 1 litro con agua destilada , se debe guardar en una
botella color caramelo.

Equipo:
Espectrofotmetro Biotraza UV visible (Rango 195 a 1000 nm).
Se puede medir en modo Absorbancia para realizar la curva de calibracin.

CURVA DE CALIBRACIN
Dilucin del patrn de 1000 PPM:
Realizar diluciones obteniendo concentraciones de 0.4 ppm, 0.6ppm, 0.8 y 1,0 ppm
Usar la frmula siguiente:
VI.CI = VF2. CF
2

El volumen final ser de matraces de 100ml.

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Podemos calcular, cuanto volumen hay que medir de las soluciones iniciales.
Tener en cuenta que esto slo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley
Lambert Beer. (0.1 a 0.8 de absorbancia)

Tcnica a realizar:
Estndar 0.4 ppm
Estndar 0.6 ppm
Estndar 0.8 ppm
Estndar 1.0 ppm
Muestra
Reactivo A
Reactivo B

Tubo Bco.
--------------------------------------------------0.5 ml
0.5 ml

Tubo estndar
5 ml
5 ml
5 ml
5 ml
----------0.5 ml
0.5 ml

Tubo Mtra.
----------------------------------------5 ml
0.5 ml
0.5 ml

Dejar 15 minutos a temperatura ambiente y leer en espectrofotmetro a 540 nm

Se procede a medir cada patrn para obtener la curva de calibracin.

MEDIDA

PPM

BLANCO
estndar 1
estndar 2
estndar 3
estndar 4
Muestra1
Muestra 2

0
0.40
0.60
0.80
1.00

ABSORBANCIA
(U.A)
0

ANALISIS DE LA MUESTRA
Una vez realizada la curva de calibracin por Excel se proceder la medicin de las
muestras problema utilizando la frmula lineal de dicha grfica.
Muestra Problema N 1=.. (PPM)
Muestra Problema N 2=.. (PPM)

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Por ejemplo:
concentracin
PPm

Absorbancia

0
0,4
0,6
0.8
1.0

0
0,273
0,366
0.451
0.530
0,493

blanco
Estndar 1
Estndar 2
Estndar 3
Estndar 4
Muestra

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Espectroscopia de Absorcin Atmica

Pasos a seguir en el encendido del equipo
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Elegir la opcin a la que se va a trabajar (absorcin o generador de hidruros)

En este caso absorcin; y va haber dos opciones por absorcin o emisin.
Si tenemos lmpara del elemento trabajamos por absorcin.
Calibrar lmpara del elemento a medir.
Si esta seleccionada emisin de llama , se debe comprobar lo siguiente:
Contiene la solucin aspirada, una elevada concentracin del elemento que se
est determinando (normalmente, el estndar ms concentrado).
7. Establecer las condiciones recomendadas (alineacin del nebulizador, optimizado del quemador en altura y posicin lateral, de manera de obtener la mayor
concentracin de tomos en estado fundamental. (normalmente en modo AA
antes de las mediciones de emisiones). NO SE USA LAMPARA.
8. Ir a herramientas- condiciones recomendadas y ver cul es el rango en la concentracin caracterstica para realizar mi curva de calibracin.
9. Ir a herramientas- Crear un mtodo
10. Parmetros-Cargar los valores de estndar elegidos y el modo de lectura (en
concentracin o absorbancia)
11. Pasar a la pestaa Lmpara, seleccionar el elemento a trabajar.
12. Y por ltimo ir a la pestaa Analizar.

Como ajustar la velocidad de aspiracin

Antes de realizar cualquier medicin en el equipo se debe chequear el ajuste del nebulizador:
Aspirar una solucin de Cobre 4PPM (Con su respectiva lmpara) .Entonces paso el
blanco con agua y luego ajusto la medicin con el nebulizador (perilla roja) hasta llevarlo
a su mxima absorbancia
Esto se realiza porque si la muestra pasa muy rpido no le da tiempo a absorber la
luz.

Tratamiento de la muestra
Como habamos dicho anteriormente la muestra debe ser atomizada pero para que esto suceda
los minerales deben estar en solucin
Mostramos aqu dos tipos de digestin

Digestin en base hmeda Hidrlisis cida, sistema abierto.

Se toma 1 gramo de la muestra a procesar (ej. Harina, para la medicin de hierro)
7 ml de
+4 ml
Mechero suave o Manta elctrica e ir subiendo la temperatura gradualmente va a liberar humo marrn (se libera el xido nitroso) y sacarlo antes de que se seque. Si tiene mucha materia grasa se puede filtrar.

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Digestin en base seca-Sistema cerrado
Ej. Tomo 1 gr de galletita de agua light o salchicha para medir el contenido de sodio.
En mechero carbonizo de 5 a 6 hs
Luego en Mufla 0-500 C gradualmente /12 hs Mnimo
Una vez que tengo las cenizas blancas le coloco unas gotas de ntrico concentrado con
piceta, luego lo llevo a un volumen de 100 ml con agua bidestilada.
Nota: El tiempo de mechero y mufla va a depender del material que quiero procesar.

Cmo realizar una curva de calibracin?

Tengo un testigo de Cobre con una concentracin de 1000 ppm
Mis condiciones recomendadas que me marca el equipo para Cobre, me indican
un parmetro lineal que va desde 0.5 a 2 ppm
Tengo matraz de 100 ml.
Ahora bien; si ya conocemos el parmetro de concentracin que respeta la ley de BeerLambert.
Sabemos que los estndares a preparar tienen que estar dentro de ese rango.
Por ej.
ST.1 0.5 ppm
ST.2 1.0 ppm
ST.3 2.0 ppm
Con la frmula ya conocida vamos a calcular que volumen de testigo tenemos que tomar.
Pasemos a los clculos:

Entonces mi primer estndar de calibracin lo voy a preparar tomando 0.05 ml del testigo, con 100 ml de
bidestilada.
Logrando una concentracin de 0.5 ppm.
Realizamos lo mismo para el ST.2 y ST. 3Sabiendo los pasos a seguir en el encendido del equipo; Como se realiza una curva de
calibracin y teniendo las tcnicas de digestin. Estamos en condiciones de realizar mediciones de algunos minerales en distintos productos.

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Trabajo Prctico N5

Anlisis del Cu por Absorcin Atmica

OBJETIVO
Determinacin de una muestra de Cobre, por mtodo de Absorcin Atmica.
MATERIALES Y REACTIVOS
Matraces aforados de 100 ml.
Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml.
1 vaso de precipitado de 500 ml.
Pipetas de vidrio y Micro pipetas.
Frasco lavador (pisetas).
REACTIVOS
Soluciones de patrones de Cu. De 1000 mg. /L. (ppm.)
cido Ntrico HNO3
H20 Destilada.

Equipo:
Absorcin Atmica Perkin Elmer AA200.
Lmpara de Ctodo Hueco de Cu.
Establecer las condiciones recomendadas (ajuste de lmpara, corriente de lmpara, ajuste del nebulizador, ajuste del quemador en altura y posicin lateral, de manera de obtener
la mayor concentracin de tomos en estado fundamental.
Longitud de Onda
(nm)
324.75

Ranura (nm)

Lineal (mg/L)

2.7/0.8

Sensibilidad
(mg/L)
1.3

327.40

2.7/0.8

2.6

1.6

216.51

1.8/1.35

6.5

6.5

249.22

2.7/1.35

100

30

1.6

Oxidante

Aire

Flujo oxidante (l/min)

10

Flujo de acetileno (l/min)

2.5

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

CURVA DE CALIBRACIN
A partir de soluciones de Cu de 1000 mg/l. (ppm) se preparan en matraces de 100 ml. +
solucin de HNO3 AL 1% P/V. (permite que sea estable la solucin).
Segn las condiciones recomendadas por el software del equipo, deben estar en el rango
de la linealidad (Ley de Lambert Beer).
VI.CI = VF. CF
Podemos calcular, con esta frmula, cuanto hay que utilizar de la solucin inicial.
PATRONES A UTILIZAR
0.5 ppm.= 5 mg. /L.= 0.05 ml. De solucin (50 L)
1 ppm. = ..
2 ppm. =...
3 ppm. =
4 ppm. =
5 ppm. =....
Para preparar el estndar de 0.5 ppm., debemos hacer una dilucin si no contamos con
una Micro pipeta (de 20 L- 200 L). Tomar 10 mL. de la solucin inicial (1000 ppm.)
colocar la sustancia en el matraz aforado de 100 mL. Llevar a volumen, obtendremos una
solucin de 100 mg. /L.
Luego usando la Formula VI.CI = VF. CF
VI= VF.CF/CI= 0.100 mL. 0.5 mg. /L / 100 mg. /L = Vi= 0.0005 L= 0.5 ml.
Tambin podemos partir de una solucin de 5 ppm. Hacer el clculo.??

Se procede a medir cada patrn para obtener la curva de calibracin.

MEDIDA

mg./L

1
2
3
4
5

0
0.5
1
2
5

ABSORBANCIA
(U.A)

ANALISIS DE LA MUESTRA
Se proceder la medicin de las muestras problema.
Muestra N 3=..
Muestra N 4=..
Se expresara el dato en mg/L.
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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Trabajo Prctico N6

Anlisis de Na por Emisin Atmica

Objetivo
Determinacin de SODIO, por mtodo de EMISION, en aguas minerales
DATO TEORICO (EN ETIQUETA): SIERRA DE LOS PADRES:
Na. 219 ppm.
DATO TEORICO (EN ETIQUETA): VILLAVICENCIO:
Na: 128 ppm.
MATERIALES Y REACTIVOS
Matraces aforados de 100 ml.
Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml.
1 vaso de precipitado de 500 ml.
Pipetas de vidrio y Micro pipetas
Frasco lavador (picetas)
REACTIVOS
Soluciones de patrones de Na. De 1000 mg. /L. (ppm.)
H20 Bidestilada.
Equipo:

Absorcin Atmica/ emisin Perkin Elmer AA200

Si esta seleccionada emisin de llama, se debe comprobar lo siguiente:

Contiene la solucin aspirada, una elevada concentracin del elemento que se est determinando (normalmente, el estndar ms concentrado).
Establecer las condiciones recomendadas (alineacin del nebulizador, optimizado del
quemador en altura y posicin lateral, de manera de obtener la mayor concentracin de
tomos en estado fundamental. (normalmente en modo AA antes de las mediciones de
emisiones). NO SE USA LAMPARA.

Longitud de Onda (nm)

Ranura (nm)

Sensibilidad (mg/L)

Lineal (mg/L)

589.00

1.8/06

0.3

0.5

Oxidante

Aire

Flujo oxidante (l/min)

10

Flujo de acetileno (l/min)

2.5

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

CURVA DE CALIBRACIN
A partir de soluciones de Na de 1000 mg/l. (ppm) se preparan en matraces de 100 ml.
Segn las condiciones recomendadas por el software del equipo, deben estar en el rango
de la linealidad (Ley de Lambert Beer).

Podemos calcular, con esta frmula, cuanto hay que utilizar de la solucin inicial.
PATRONES A UTILIZAR
0.3 ppm.= 0.3 mg. /L.= 0.03 ml de patrn/100 ml de solucin (30 L de Patrn /100 ml)
1 ppm. =...
3 ppm. =
5 ppm. =
Para preparar el estndar de 0.3 ppm., debemos hacer una dilucin si no contamos con
una Micro pipeta (de 20 L- 200 L). Tomar 10 mL. de la solucin 3 ppm colocar la
sustancia en el matraz aforado de 100 mL. Llevar a volumen, obtendremos una solucin
de 0.3 mg. /L.
Se procede a medir cada patrn para obtener la curva de calibracin.
ANALISIS DE LA MUESTRA
Se proceder la medicin de las muestras problema.
MEDIDA

mg./L

1
2
3
4
5

0
0.3
1
3
5

UNIDAD DE
INTENSIDAD
BLANCO

REALIZAR CLCULO PARA QUE ENTRE EN RANGO 4 ppm conociendo los datos
de la etiqueta:

Usar formula

Muestra N SIERRA DE LOS PADRES=..

Muestra N VILLAVICENCIO=
Se expresara el dato en mg/L.

Realizar el informe de los datos obtenidos.

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Pgina 19

Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Trabajo Prctico N7

Anlisis de Fe y Na por Absorcin- Emisin Atmica.

OBJETIVO
Determinacin de Hierro en una Harina 000, por mtodo de Absorcin Atmica.
Determinacin de Sodio en una galletita light, por mtodo de Emisin Atmica.
Determinacin de Sodio en salchichas, por mtodo de Emisin Atmica.
MATERIALES
Matraces aforados de 25 ml. 50 ml. 100 ml.
Vaso de precipitados 20, 50, 100 ml.
Pipetas.
Piceta.
Crisoles,
Triangulo de tierras pipas.
Mechero.
Tela metlica.
Mufla.
REACTIVOS
Acido ntrico.
Acido clorhdrico.
Agua destilada.
Equipo:
Absorcin Atmica Perkin Elmer AA200
Lmpara de Ctodo Hueco de Fe.
AA 200 en modo Emisin Atmica.

Anlisis de Hierro por Absorcin Atmica en Harinas.

Seguimos los mismos pasos que con el Cobre; seleccionamos Hierro en el equipo
Herramientas Condiciones recomendadas, y conocemos con que rango lineal trabajar.
Sabiendo estos datos elegimos cuntos estndar de calibracin y que concentraciones
queremos realizar. (El equipo me permite cargar hasta ocho estndares).
La concentracin del testigo tambin es de 1000 ppm.

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Pgina 20

Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Tratamiento de la muestra:
Tomamos 1 gramo de harina y realizamos la digestin en base hmeda, como vimos
anteriormente.
Si nos fijamos en la informacin nutricional en el paquete de la muestra que vamos a
trabajar; nos indica la concentracin de hierro, en base a ese dato calculamos:
Por ej. El paquete me da una conc. de Hierro de 30 mg/ Kg.
1000 gr. mtra.-------- 30 mg. Fe
1 gr. mtra. ----------- 0.03 mg. Fe
Como lo voy a llevar a un volumen 25 ml de

bidestilada.

25 ml sc ---------- 0.03mg Fe
1000 ml sc ------- 1.2 mg / lt Fe

Es decir que el valor que me tendra que dar en mi equipo es de 1.2 ppm.
Y de esta manera estaramos corroborando que la informacin que nos da el envase es la
correcta.

Trabajo Prctico N8
Anlisis de Sodio en salchichas por mtodo por Emisin Atmica.
Una vez realizada la curva de calibracin3 conociendo los rangos de conc. a trabajar,
dem a tcnicas anteriores; pasamos a la preparacin de la muestra:
Por ej.
Tomamos 1 gramo de salchicha y realizamos una digestin en base seca y pasamos a los
clculos:
El paquete me informa que tiene una concentracin de sodio de 640mg/ 50 gr de mtra.
Entonces:

50gr.mtra
1.0 gr mtra.

640mgr Na
12.8 mg Na

Como lo voy a llevar a un volumen de 100 ml.

100ml sc.
1000ml sc

12.8 mg Na
128 mg Na / lt sc.

Las curvas de calibracin a realizar pueden ser altas o bajas; en este caso es una curva alta.
Por ej. No es lo mismo medir sodio en panceta que en zapallo, para este ltimo deberamos realizar una
curva de baja concentracin.

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Como mi curva va hacer; segn indican las condiciones recomendadas hasta 45 ppm,
voy a tener que hacer una dilucin para que me entre en la curva de calibracin. Es decir
en este caso diluir la muestra 1/5 (128ppm/ 5=25.6ppm) Entra bien, siempre hay que
buscar un valor que este centrado en mi curva de calibracin.
Ahora bien, tenemos dos opciones de realizar la lectura:
Pasar la muestra y el valor que me da multiplicarlo por la dilucin, en este caso por 5.
O decirle al equipo que le realic esa dilucin y el automticamente me da el resultado
final.
Si elijo la ltima opcin me tendra que dar como resultado aproximadamente 128 ppm,
de lo contrario 25.6 ppm.
Si es as podra confirmar que tiene 640mg/50g de muestra como indica el envase.

Trabajo Prctico N9
Anlisis de Sodio en una galletita light por mtodo de Emisin Atmica.
El envase dice por ej. 530mg/100gr mtra.
Realizar la prctica como hicimos anteriormente yendo previamente a condiciones recomendadas, realizar los clculos para verificar que el resultado entre en la curva de
calibracin de lo contrario realizar una dilucin a la muestra.
Con el objetivo de afianzar los conocimientos adquiridos en los pasos a seguir en una
curva de calibracin, realizar la misma por Excel tomando como dato las absorbancias e
intensidades (en el caso de emisin) y calcular la concentracin de las muestras desconocidas.

Trabajo Prctico N10

Anlisis de Hierro en zapallo por mtodo de Absorcin Atmica.
Investigar qu cantidad de hierro contiene el zapallo. Una vez obtenido el dato
Realizar la prctica como hicimos anteriormente4, yendo previamente a condiciones
recomendadas, realizar los clculos para verificar que el resultado entre en la curva de
calibracin de lo contrario realizar una dilucin a la muestra.
PATRONES A UTILIZAR
1 ppm. = ..
2 ppm. =...
5 ppm. =
10 ppm. =

En este caso la hidrolisis cida se realiza tomando 1 gr de pulpa de zapallo, con 8 ml de HNO3 ms 2 ml
de H2O2 100 volmenes en manta.

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Cromatografa lquida HPLC

Trabajo Prctico N11

Preparar patrones de tolueno y benceno de 5000ppm, 10000ppm, 15000ppm, y 20000

ppm, conociendo los datos que figuran en las botellas de dichos reactivos:
Por ej.
Benceno 0.88kg/lt =880.000 ppm
Tolueno 0.86kg/lt = 860.000ppm
Tengo matraz de 25 ml y conociendo la frmula

Calculamos que volumen tomar para realizar dichas concentraciones.

Una vez realizadas, hacemos las inyecciones en el HPLC con dichas variables:

mv

Caudal: 0.8
Presin: 3000 PSI
Columna:
Solvente: MeOH/
(70:30)
Temperatura: 30 C

rea (mv.s)

4
T

(seg)

En las inyecciones realizadas nos quedara un grfico de este tipo; va a estar dado en
funcin de tiempo en unidad de segundos y seal de respuesta en mili voltios, a mayor
concentracin, mayor seal en mv.
Donde el tiempo de retencin va a cambiar modificando algunas de las variables (ej.la
conc. del solvente en la fase mvil).
Una vez obtenidos los valores de rea para cada concentracin, por el programa Excel o
el software clarity realizamos la curva de calibracin para cada sustancia (tolueno y
benceno).
Nos aseguramos que cumpla la ley de beer-lamber.

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Gua Orientativa para Anlisis Instrumental

Por ej.

TOLUENO

Conc.
PPM
0

rea(mv.s)

5000

11054,1

10000

21447,1

15000

30541,8

Donde el eje de la abscisa representa los valores de la concentracin en PPM y el eje de

las ordenadas representa a los valores obtenidos de dicha rea. Recordemos la gua anterior cmo hacer para sacar la frmula y el coef. R que me marca la linealidad de la funcin.
Hacer lo mismo para el benceno y luego se les dar una muestra problema de concentracin desconocida.
Sabiendo que dicha muestra se encuentra el tolueno y el benceno
Calcular en que concentracin se hallan e identificar cual de los picos encontrados en
distinto tiempo de retencin, representan a cada una de las sustancias.
Para calcular ambas concentraciones el rea obtenida llevarla a la formula que nos da
Excel; en este ejemplo sera y=2,079x.
Donde y= rea muestra problema, X=??? nuestra concentracin desconocida. Entonces
despejamos X de dicha frmula y nos da la conc. a saber.
Por ltimo cambiar la concentracin del solvente (fase mvil) a 50:50 e inyectar cualquiera de las muestras anteriores, observar que pasa y sacar sus conclusiones.

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